寬葉金粟蘭的化學(xué)成分及其抗腫瘤活性研究

DOI： 10.11931/guihaia.gxzw202303035

張衛(wèi)青， 朱成光， 梁偉， 等， 2024.

寬葉金粟蘭的化學(xué)成分及其抗腫瘤活性研究 ［Ｊ］.

廣西植物， 44（6）： 1159-1169.

ZHANG WQ， ZHU CG， LIANG W， et al.， 2024.

Chemical constituents from Chloranthus henryi and their antitumor activities in vitro" ［J］.

Guihaia， 44（6）： 1159-1169.

摘" 要：" 為探尋寬葉金粟蘭（Chloranthus henryi）的化學(xué)成分及抗腫瘤活性，該研究采用硅膠柱層析、反相柱色譜、Sephadex LH-20凝膠和半制備高效液相等色譜技術(shù)對寬葉金粟蘭95%乙醇提取物的乙酸乙酯部位進(jìn)行分離純化，根據(jù)理化性質(zhì)與波譜數(shù)據(jù)并結(jié)合參考文獻(xiàn)鑒定所得化合物的結(jié)構(gòu)，并采用MTT法評價化合物細(xì)胞毒活性。結(jié)果表明：（1）從該植物的95%乙醇提取物的乙酸乙酯部位分離并鑒定了12個化合物，分別為pipercyclobutanamide C（1）、chololactone A（2）、sarcanolide B（3）、環(huán)銀線草醇A（4）、chloramultiol D（5）、chlorasessilifol B（6）、chlorajaponol（7）、tianmushanol（8）、spicachlorantins B（9）、spicachlorantins A（10）、及已靈素A（11）、chloramultiols A（12）?；衔?為新化合物，除化合物8外，其余化合物均為首次從寬葉金粟蘭中分離得到。（2）細(xì)胞毒活性測試結(jié)果顯示，僅化合物2和化合物7對人宮頸癌細(xì)胞HeLa有抑制作用，IC50值分別為（4.50±0.27） μmol·L-1和（4.25±0.08） μmol·L-1，其他化合物對其均無抑制作用。該研究結(jié)果為進(jìn)一步深度研究與開發(fā)利用金粟蘭屬草本植物提供了一定的科學(xué)依據(jù)。

關(guān)鍵詞： 寬葉金粟蘭， 化學(xué)成分， 分離純化， 結(jié)構(gòu)鑒定， 細(xì)胞毒活性， 抑制作用

中圖分類號：" Q946

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：" A

文章編號：" 1000-3142（2024）06-1159-11

收稿日期： 2023-07-06

接受日期： 2023-08-07

基金項(xiàng)目：" 貴州省科技計(jì)劃項(xiàng)目（黔科合支撐 ［2022］一般189）。

第一作者： 張衛(wèi)青（1992—），主管藥師，主要從事藥物化學(xué)研究，（E-mail）740103846@qq.com。

*通信作者：" 晏晨，博士，主任藥師，主要從事天然藥物化學(xué)研究，（E-mail）nazi3647@sina.com。

Chemical constituents from Chloranthus henryi

and their antitumor activities in vitro

ZHANG Weiqing1， ZHU Chengguang1， 2， LIANG Wei1， YAN Chen1*

（ 1. Anshun Peoples Hospital， Anshun 561000， Guizhou， China; 2." Guizhou University of Traditional Chinese Medicine， Guiyang 550025， China ）

Abstract：" In order to study the chemical constituents from Chloranthus henryi and their antitumor activities in vitro. The chemical constituents of ethyl acetate fraction， extracted with 95% ethanol from C. henryi were isolated and purified by silica gel column chromatography， reversed phase column chromatography， Sephadex LH-20 column chromatography and preparation liquid chromatography， and their structures were identified by the physicochemical properties， spectral data combined with relevant literatures. The cytotoxic activities of these compounds were evaluated by MTT method. The results were as follows： （1） Twelve compounds were isolated and identified as pipercyclobutanamide C （1）， chololactone A （2）， sarcanolide B （3）， oxacol A （4）， chloramultiol D （5）， chlorasessilifol B （6）， chlorajaponol （7）， tianmushanol （8）， spicachlorantins B （9）， spicachlorantins A （10）， serrachlorin A （11）， chloramultiols A （12）. Among them， Compound 1 was identified as a new compound， and except for Compound 8， all the other compounds were isolated from the C. henryi for the first time. （2） The cytotoxic activity test results showed that only compounds 2 and 7 had good inhibitory effects on HeLa cells in vitro， while the other compounds showed no inhibition effects. The IC50 of the two compounds were （4.50±0.27） μmol·L-1 and （4.25±0.08） μmol·L-1 respectively. In conclusion， the study enriches the chemical constituents of C. henryi， and provides a reference for the further exploration and utilization of this Chloranthus herb plants.

Key words： Chloranthus henryi， chemical constituents， isolation and purification， structural identification， cytotoxic activity， inhibitory effects

寬葉金粟蘭（Chloranthus henryi）是金粟蘭科（Chloranthaceae）金粟蘭屬（Chloranthus）多年生草本植物，又名大葉及已、紅四塊瓦、四葉對、四大天王和四大金剛等，主要分布于我國貴州、四川、廣西、安徽等地。寬葉金粟蘭的根、根狀莖和全草均可做藥用，在《全國中草藥匯編》《中藥大辭典》《中華本草》中均有收載，其性辛、苦、溫、有毒，具有散寒止咳，活血止痛，散瘀解毒等功效。民間多用于風(fēng)寒咳嗽、風(fēng)濕骨痛、四肢麻木、月經(jīng)不調(diào)、閉經(jīng)和小兒驚風(fēng)等。外用治跌打損傷，淤血腫痛，毒蛇咬傷（曹聰梅等，2008）?，F(xiàn)代藥理研究表明，金粟蘭屬植物含有倍半萜類、倍半萜二聚體類、苯丙素類和酰胺類等化學(xué)成分，具有抗菌、抗炎、抗腫瘤、抗HIV-1、增強(qiáng)免疫、神經(jīng)保護(hù)、利膽和收縮子宮等生物活性（羅杠等，2014；楊秀偉，2017）。

目前，關(guān)于寬葉金粟蘭倍半萜二聚體類單體化合物的研究報道較少，僅張珊珊等（2017）從寬葉金粟蘭中分離得到5個倍半萜二聚體類化合物。本文進(jìn)一步對寬葉金粟蘭的化學(xué)成分及細(xì)胞毒活性進(jìn)行研究，以期發(fā)現(xiàn)結(jié)構(gòu)新穎的倍半萜二聚體類化合物，有助于該植物的開發(fā)及利用。

本研究以寬葉金粟蘭為研究對象，依托現(xiàn)代先進(jìn)的儀器設(shè)備，采用硅膠柱層析、反相柱色譜、Sephadex LH-20凝膠和半制備高效液相等色譜技術(shù)對寬葉金粟蘭95%乙醇提取物的乙酸乙酯部位進(jìn)行分離純化，并采用MTT法評價所得化合物的細(xì)胞毒活性，通過理化性質(zhì)與波譜數(shù)據(jù)并結(jié)合參考文獻(xiàn)鑒定所得化合物的結(jié)構(gòu)及細(xì)胞毒活性測試結(jié)果，擬探討以下問題：（1）寬葉金粟蘭95%乙醇提取物的乙酸乙酯部位的化學(xué)成分；（2）所分離得到的化合物的細(xì)胞毒活性。

1" 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 藥材來源

實(shí)驗(yàn)所用寬葉金粟蘭藥材（100.0 kg）采集于貴州安龍，經(jīng)中國科學(xué)院昆明植物研究所劉海洋研究員鑒定為寬葉金粟蘭（Chloranthus henryi）藥材全草，標(biāo)本（Assrmyy20180819-2）存放于安順市人民醫(yī)院藥劑科藥學(xué)實(shí)驗(yàn)室。

1.2 實(shí)驗(yàn)儀器及試劑

INOVA-600 MHz超導(dǎo)核磁共振波譜儀（美國瓦里安公司），TMS為內(nèi)標(biāo)；Waters 1525 EF高效液相色譜儀（美國 Waters 公司），Waters 2998檢測器，Waters sunfire色譜柱為 C18（10 mm × 250 mm，4.6 mm × 150 mm）；JASCO P-1020旋光儀（日本 JASCO 公司）；Shimadzu UV-2401A紫外光譜儀（日本 Shimadzu 公司）；Bruker Tensor-27紅外光譜儀（德國 Bruker 公司）；Bruker HCT/Esquire和Waters Autospec Premier P776質(zhì)譜儀（德國 Bruker 公司，美國 Waters 公司）；Sephadex LH-20（美國 GE Healthcare Bio-sicence AB 公司）；MCI GEL CHP20（日本三菱化學(xué)公司）；柱層析硅膠（40～80目和300～400目，青島海洋化工廠）；硅膠GF254薄層板（50 mm × 100 mm，0.20 ～0.25 mm，青島海洋化工廠）；分析純?nèi)燃淄?、丙酮（重慶川東化工集團(tuán)有限公司）；其余試劑均從工業(yè)級蒸餾中獲得；10%硫酸乙醇顯色劑。

2" 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 提取與分離

將干燥的寬葉金粟蘭全草（100.0 kg）粉碎后，用95%乙醇在90 ℃下加熱回流提取3次，每次3.5 h，將提取液合并，減壓濃縮回收乙醇，得到寬葉金粟蘭濃縮液。取少量浸膏留樣，其余濃縮液經(jīng)乙酸乙酯萃取，得到乙酸乙酯萃取物7.4 kg。將萃取物用溶劑溶解，利用粗硅膠（40～80目）拌樣，待樣品干燥后，采用經(jīng)硅膠（300～400目）柱色譜（石油醚-丙酮50∶1→1∶1， V/V）進(jìn)行梯度洗脫，洗脫部分用TLC薄層板展開，在紫外分析儀下觀察TLC薄層板熒光顯色情況，并用10%硫酸乙醇溶液顯色，合并相似部分，最后用甲醇處理硅膠柱，得到18個餾分（Fr.1-Fr.18）。

Fr.13經(jīng)D-101大孔樹脂柱層析（EtOH∶H2O 20∶80 → 95∶5， V/V）進(jìn)行梯度洗脫，得到5個組分（Fr.13.1-Fr.13.5）。Fr.13.2經(jīng)硅膠柱色譜（石油醚-丙酮 10∶1→1∶1， V/V）進(jìn)行梯度洗脫，并用葡聚糖凝膠Sephadex LH-20柱色譜（MeOH）和半制備液相色譜（CH3CN∶H2O 45∶55， V/V）進(jìn)一步純化，分離得到化合物4（tR= 12.0 min， 13.2 mg）。Fr.13.3經(jīng)硅膠柱色譜（石油醚-丙酮10∶1→1∶1， V/V）進(jìn)行梯度洗脫，得到4個組分（Fr.13.3.1-Fr.13.3.4）。Fr.13.3.2經(jīng)葡聚糖凝膠Sephadex LH-20柱色譜（CHCl3∶MeOH 1∶1， V/V）洗脫，分離得到化合物1 （22.2 mg）。Fr.13.3.4經(jīng)葡聚糖凝膠Sephadex LH-20柱色譜（MeOH）洗脫，得到3個組分（Fr.13.3.4.1-Fr.13.3.4.3）。Fr.13.3.4.3經(jīng)硅膠柱色譜（石油醚-丙酮10∶1→1∶1， V/V）進(jìn)行梯度洗脫，分離得到化合物5（10.2 mg）。

Fr.14經(jīng)硅膠柱色譜（石油醚-乙酸乙酯2∶1→1∶1， V/V）進(jìn)行梯度洗脫，分離得到5個組分（Fr.14.1-Fr.14.5）。Fr.14.5經(jīng)葡聚糖凝膠Sephadex LH-20柱色譜（CHCl3∶MeOH 1∶1， V/V）洗脫，得到3個組分（Fr.14.5.1-Fr.14.5.3）。Fr.14.5.3經(jīng)硅膠柱色譜（石油醚-丙酮5∶1→1∶1， V/V）進(jìn)行梯度洗脫，分離得到5個組分（Fr.14.5.3.1-Fr.14.5.3.5）。Fr.14.5.3.4經(jīng)硅膠柱色譜（石油醚-丙酮5∶1→1∶1， V/V）進(jìn)行梯度洗脫，分離得到11個組分（Fr.14.5.3.4.1-Fr.14.5.3.4.11）。Fr.14.5.3.4.10經(jīng)硅膠柱色譜（石油醚-丙酮4∶1→1∶1， V/V）進(jìn)行梯度洗脫，分離得到化合物12（31.7 mg）。Fr.14.5.3.4.5經(jīng)葡聚糖凝膠Sephadex LH-20柱色譜（MeOH）洗脫，得到4個組分（Fr.14.5.3.4.5.1-Fr.14.5.3.4.5.4）。Fr.14.5.3.4.5.2經(jīng)反相硅膠（MeOH∶H2O 40∶60 → 90∶10， V/V）進(jìn)行梯度洗脫，得到5個組分（Fr.14.5.3.4.5.2.1-Fr.14.5.3.4.5.2.5）。Fr.14.5.3.4.5.2.1經(jīng)硅膠柱色譜（氯仿-甲醇150∶1→50∶1， V/V）進(jìn)行梯度洗脫并重結(jié)晶得到化合物11（41.9 mg）。Fr.14.5.3.4.5.2.5經(jīng)硅膠柱色譜（氯仿-甲醇 100∶1→50∶1， V/V）進(jìn)行梯度洗脫和半制備液相色譜（CH3CN∶H2O 35∶65， V/V）進(jìn)一步純化，分離得到化合物6（tR= 18.5 min， 18.2 mg）。

Fr.15經(jīng)葡聚糖凝膠Sephadex LH-20柱色譜（CHCl3∶MeOH 1∶1， V/V）洗脫，得到4個組分（Fr.15.1-Fr.15.4）。Fr.15.3經(jīng)硅膠柱色譜（石油醚-丙酮5∶1→1∶1， V/V）進(jìn)行梯度洗脫，得到5個組分（Fr.15.3.1-Fr.15.3.5）。Fr.15.3.1經(jīng)MCI（MeOH∶H2O 40∶60 → 90∶10， V/V）進(jìn)行梯度洗脫，得到7個組分（Fr.15.3.1.1-Fr.15.3.1.7）。Fr.15.3.1.6經(jīng)D-101大孔樹脂柱層析（EtOH∶H2O 20∶80 → 95∶5， V/V）進(jìn)行梯度洗脫，分離得到化合物7（1.70 g）并得到9個組分（Fr.15.3.1.6.1-Fr.15.3.1.6.9）。Fr.15.3.1.6.7經(jīng)硅膠柱色譜（石油醚-乙酸乙酯5∶1→1∶1， V/V）進(jìn)行梯度洗脫，得到5個組分（Fr.15.3.1.6.7.1-Fr.15.3.1.6.7.5）。Fr.15.3.1.6.7.4經(jīng)硅膠柱色譜（二氯甲烷-甲醇100∶1→1∶1， V/V）進(jìn)行梯度洗脫，并用半制備液相色譜（CH3CN∶H2O 45∶55， V/V）進(jìn)一步純化，分離得到化合物2（tR= 31.0 min， 12.3 mg）和化合物3（tR= 14.0 min， 9.6 mg）。Fr.15.3.5經(jīng)葡聚糖凝膠Sephadex LH-20柱色譜（MeOH）洗脫，得到6個組分（Fr.15.3.5.1-Fr.15.3.5.6）。Fr.15.3.5.2經(jīng)反相硅膠（MeOH∶H2O 40∶60 → 90∶10， V/V）進(jìn)行梯度洗脫，得到8個組分（Fr.15.3.5.2.1-Fr.15.3.5.2.8）。Fr.15.3.5.2.3經(jīng)硅膠柱色譜（石油醚-丙酮10∶1→1∶1 ， V/V）進(jìn)行梯度洗脫并重結(jié)晶得到化合物9。Fr.15.3.5.3經(jīng)硅膠柱色譜（石油醚-丙酮10∶1→1∶1， V/V）進(jìn)行梯度洗脫，得到5個組分（Fr.15.3.5.3.1-Fr.15.3.5.3.5）。Fr.15.3.5.3.2經(jīng)硅膠柱色譜（二氯甲烷-甲醇100∶1→1∶1， V/V）進(jìn)行梯度洗脫，并用半制備液相色譜（CH3CN∶H2O 60∶40， V/V）進(jìn)一步純化，分離得到化合物10（tR= 9.0 min， 8.3 mg）和化合物8（tR= 16.0 min， 13.1 mg）。

2.2 細(xì)胞毒活性實(shí)驗(yàn)

采用MTT法檢測寬葉金粟蘭的化學(xué)成分對人宮頸癌細(xì)胞HeLa、人乳腺癌細(xì)胞MCF-7、人前列腺癌細(xì)胞DU-145、人肺癌細(xì)胞A549和人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞T98G細(xì)胞毒性作用。稱取一定量的化合物分別用DMSO溶解后配成30 mmol·L-1的儲備液，使用之前稀釋至20 μmol·L-1，在5% CO2、37 ℃孵育72 h后進(jìn)行初篩活性，得到效果顯著的化合物。將腫瘤細(xì)胞分別配制成細(xì)胞懸液接種于96孔板上（每孔100 μL），設(shè)置陽性對照組（紫杉醇）和濃度梯度給藥組，將接種好的細(xì)胞培養(yǎng)板放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h后分別加入0.625、1.25、2.5、5、10 μmol·L-1的含藥樣品溶液各100 μL，在5% CO2、37 ℃孵育72 h后，每孔加入10 μL配制好的 MTT溶液（5 mg·mL-1，即0.5% MTT）繼續(xù)培養(yǎng)4 h，孵育后使用酶標(biāo)儀測量OD值，并計(jì)算IC50。

3" 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1" 白色粉末； ［α］25D-5.22（c 0.1， MeOH），UV光譜（MeOH）顯示在235 nm處有最大吸收；IR譜圖顯示存在羰基（1 736和1 645 cm-1）、氨基（3 256和2 925 cm-1）和苯環(huán)（700 cm-1）等特征吸收峰信號。高分辨分子離子峰HR-ESI-MS為m/z 591.248 9" ［M + H］ +（計(jì)算值：C36H34N2O6H， 591.248 9），確定分子式為C36H34N2O6，結(jié)合該化合物的13C NMR和DEPT的數(shù)據(jù)進(jìn)一步確定不飽和度為21（表1）。然而，從1H NMR譜和13C NMR譜只觀察到17個氫和18個碳的信號，這暗示了化合物1的結(jié)構(gòu)具有對稱性。結(jié)合上述分析，根據(jù)1H NMR譜和13C NMR譜中所有信號可歸屬給2個非共軛羰基、2個亞甲二氧苯基單元、2個苯環(huán)單元、4個亞甲基和4個次甲基（表1）。

通過1H-1H COSY譜中的信號表明，-NH/H-10/H-11存在相關(guān)，H-13/H-14/H-15存在相關(guān)。同時，在HMBC譜中可以觀察到以下關(guān)系：H-10與C-9、C-11和C-12存在相關(guān)；H-2與C-3、C-6和C-7存在相關(guān)；H-6與C-1、C-2、C-4、C-5和C-7存在相關(guān)；H-18與C-3和C-4存在相關(guān)；H-7與C-1、C-2、C-6、C-8和C-9存在相關(guān)；H-11與C-10、C-12和C-13存在相關(guān)。以上1H-1H COSY和HMBC數(shù)據(jù)并結(jié)合文獻(xiàn)推測（Wei et al.， 2005），分子結(jié)構(gòu)中存在1個亞甲二氧苯基和1個9-氧-10，11-亞甲基苯結(jié)構(gòu)片段，它們之間通過一個由2個次甲基組成的二碳單位連接在一起，這些信息給出了化合物分子一半的結(jié)構(gòu)單元。質(zhì)譜片段在m/z 296.128 1" ［C18H17N1O3+H］+處顯示出特征信號，也證實(shí)了上述結(jié)論。通過質(zhì)子H-6與H-7和H-8的NOESY相關(guān)性以及NH與H-7和H-8的NOESY相關(guān)性并結(jié)合文獻(xiàn)（Zhou et al.， 2017）表明H-7和H-8與H-7′和H-8′之間的關(guān)系為順式構(gòu)型，而H-7和H-7′與H-8和H-8′之間的關(guān)系為反式構(gòu)型，這表明化合物1具有頭到頭構(gòu)型的環(huán)丁烷環(huán)（—H-7—H-8—H-8′—H-7′—），并且1個亞甲二氧苯基和1個9-氧-10，11-亞甲基苯結(jié)構(gòu)片段是同向的。因此，可以確定化合物1的結(jié)構(gòu)（圖1）。經(jīng)Scifinder數(shù)據(jù)庫檢索，化合物1為一個未見文獻(xiàn)報道的新化合物，其氫譜和碳譜數(shù)據(jù)見表1。因此，清楚地確定了化合物1的結(jié)構(gòu)，并將化合物1命名為pipercyclobutanamide C。

其他化合物結(jié)構(gòu)式見圖2。

化合物2" 白色粉末，分子式為C36H40O9；1H NMR （600 MHz， CD3OD） δ： 0.67 （1H， m， H-2′α）， 0.70 （1H， m， H-2β）， 0.97 （3H， s， H-14′）， 1.21 （3H， s， H-14）， 1.26 （1H， m， H-2α）， 1.28 （1H， m， H-2′β）， 1.39 （3H， s， H-13）， 1.75 （1H， m， H-1′）， 1.78 （1H， m， H-3′）， 1.78 （1H， m， H-5′）， 1.79 （1H， m， H-6′β）， 1.87 （1H， m， H-4″）， 1.88 （1H， m， H-5″）， 1.90 （1H， m， H-3）， 2.10 （1H， m， H-1）， 2.20 （1H， m， H-15α）， 2.50 （1H， m， H-6′α）， 2.63 （3H， dd， J = 9.0， 7.2 Hz， H-9′）， 3.12 （1H， dd， J = 18.6， 7.2 Hz， H-15β）， 3.47 （3H， s， MeO-12）， 3.95 （1H， s， H-9）， 4.16 （1H， d， J = 10.8 Hz， H-15′α）， 4.25 （1H， d， J = 10.8 Hz， H-15′β）， 5.64 （1H， s， H-13′α）， 6.21 （1H， s， H-13′β）， 6.94 （1H， m， H-3″）; 13C NMR （150 MHz， CD3OD） δ： 28.6 （C-1）， 15.2 （C-2）， 27.6 （C-3）， 151.4 （C-4）， 136.4 （C-5）， 152.9 （C-6）， 129.6 （C-7）， 198.6 （C-8）， 84.6 （C-9）， 58.4 （C-10）， 66.6 （C-11）， 173.7 （C-12）， 19.0 （C-13）， 15.2 （C-14）， 30.1 （C-15）， 27.3 （C-1′）， 10.6 （C-2′）， 30.4 （C-3′）， 79.3 （C-4′）， 55.1 （C-5′）， 29.1 （C-6′）， 60.5 （C-7′）， 97.6 （C-8′）， 53.8 （C-9′）， 43.9 （C-10′）， 148.1 （C-11′）， 168.8 （C-12′）， 123.4 （C-13′）， 24.3 （C-14′）， 68.5 （C-15′）， 170.3 （C-1″）， 131.8 （C-2″）， 139.2 （C-3″）， 14.6 （C-4″）， 12.4 （C-5″）， 52.3 （MeO-12）。以上理化性質(zhì)和波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)（Shen et al.， 2017）報道的chololactone A基本一致，最終判斷化合物2為chololactone A。

化合物3" 白色粉末，分子式為C36H40O10；1H NMR （600 MHz， CDCl3） δ： 0.67 （1H， m， H-2′α）， 0.92 （3H， s， H-14′）， 0.96 （1H， m， H-2α）， 1.10 （3H， s， H-14）， 1.20 （1H， m， H-2′β）， 1.22 （1H， m， H-2β）， 1.32 （3H， s， H-13）， 1.64 （1H， m， H-15′）， 1.77 （1H， m， H-3′）， 1.79 （1H， m， H-6′β）， 1.81 （3H， m， H-4″）， 1.82 （1H， m， H-1′）， 1.84 （3H， m， H-5″）， 1.87 （1H， m， H-6′α）， 2.12 （1H， dd， J = 8.4， 3.6 Hz， H-3）， 2.44 （1H， s， OH-5）， 3.13 （1H， s， H-9′）， 3.41 （1H， s， OH-9）， 3.66 （3H， s， J = 12.0 Hz， MeO-12）， 3.89 （1H， d， J = 11.4 Hz， H-15′β）， 4.03 （1H， m， H-15′α）， 4.05 （1H， m， H-9）， 5.74 （1H， s， H-13′α）， 6.14 （1H， s， H-15α）， 6.55 （1H， s， H-13′β）， 6.86 （1H， d， J = 7.2 Hz， H-3″）; 13C NMR （150 MHz， CDCl3） δ： 28.4 （C-1）， 12.3 （C-2）， 22.1 （C-3）， 148.9 （C-4）， 72.1 （C-5）， 150.7 （C-6）， 137.2 （C-7）， 198.3 （C-8）， 80.9 （C-9）， 56.6 （C-10）， 63.8 （C-11）， 172.6 （C-12）， 25.5 （C-13）， 11.8 （C-14）， 118.3 （C-15）， 28.2 （C-1′）， 10.5 （C-2′）， 29.3 （C-3′）， 78.6 （C-4′）， 53.4 （C-5′）， 32.5 （C-6′）， 57.9 （C-7′）， 95.1 （C-8′）， 54.4 （C-9′）， 42.8 （C-10′）， 143.7 （C-11′）， 167.7 （C-12′）， 125.9 （C-13′）， 23.1 （C-14′）， 68.7 （C-15′）， 167.8 （C-1″）， 128.2 （C-2″）， 138.2 （C-3″）， 14.5 （C-4″）， 12.1 （C-5″）， 52.8 （MeO-12）。以上理化性質(zhì)和波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)（He et al.， 2011）報道的sarcanolide B基本一致，最終判斷化合物3為sarcanolide B。

化合物4" 無定形粉末，分子式為C32H36O8；1H NMR （600 MHz， CDCl3） δ： 0.22 （2H， m， H-2β， H-2′β）， 0.87 （2H， m， H-2α， H-2′α）， 1.00 （6H， s， H-14， H-14′）， 1.51 （6H， s， H-13， H-13′）， 1.84 （2H， m， H-1， H-1′）， 1.98 （2H， s， H-3， H-3′）， 2.60 （2H， d， J = 13.2 Hz， H-15β， H-15′β）， 2.96 （2H， d， J=13.2 Hz， H-15α， H-15′α）， 3.65 （6H， s， MeO-12）， 4.01 （2H， s， H-9， H-9′）， 7.16 （2H， s， H-6， H-6′）; 13C NMR （150 MHz， CDCl3） δ： 24.7 （C-1， C-1′）， 14.0 （C-2， C-2′）， 27.9 （C-3， C-3′）， 147.4 （C-4， C-4′）， 135.8 （C-5， C-5′）， 138.4 （C-6， C-6′）， 137.3 （C-7， C-7′）， 199.0 （C-8， C-8′）， 81.0 （C-9， C-9′）， 58.5 （C-10， C-10′）， 47.8 （C-11， C-11′）， 175.5 （C-12， C-12′）， 28.5 （C-13， C-13′）， 15.9 （C-14， C-14′）， 38.3 （C-15， C-15′）， 52.1 （MeO-12， 12′）。以上理化性質(zhì)和波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)（Kwon et al.， 2006）報道的環(huán)銀線草醇A基本一致，最終判斷化合物4為環(huán)銀線草醇A。

化合物5" 無色無定形粉末，分子式為C35H38O11；1H NMR （600 MHz， CDCl3） δ： 0.63 （1H， m， H-2′α）， 0.95 （1H， m， H-2α）， 1.03 （3H， s， H-14′）， 1.13 （1H， m， H-2β）， 1.16 （3H， s， H-14）， 1.21 （1H， m， H-2′β）， 1.54 （1H， m， H-1′）， 1.63 （3H， m， H-13）， 1.81 （3H， m， H-5″）， 1.82 （1H， m， H-3）， 1.86 （1H， s， H-15α）， 2.19 （1H， m， H-1）， 2.35 （1H， m， H-5′）， 2.45 （1H， m， H-6′α）， 2.63 （1H， m， H-9′）， 2.71 （1H， m， H-1′）， 2.92 （1H， dd， J = 17.4， 12.6 Hz， H-6′β）， 4.05 （1H， d， J = 11.4 Hz， H-15′β）， 4.08 （1H， d， J = 11.4 Hz， H-15′α）， 4.42 （1H， dd， J = 13.2， 10.8 Hz， H-13′β）， 4.48 （1H， dd， J = 13.2， 5.4 Hz， H-13′α）， 6.86 （1H， m， H-3″）; 13C NMR （150 MHz， CDCl3） δ： 24.2 （C-1）， 9.1 （C-2）， 30.4 （C-3）， 77.1 （C-4）， 160.4 （C-5）， 123.2 （C-6）， 150.4 （C-7）， 95.1 （C-8）， 199.9 （C-9）， 56.8 （C-10）， 127.3 （C-11）， 171.4 （C-12）， 10.9 （C-13）， 21.1 （C-14）， 40.1 （C-15）， 26.5 （C-1′）， 10.3 （C-2′）， 29.6 （C-3′）， 77.1 （C-4′）， 52.9 （C-5′）， 21.6 （C-6′）， 168.1 （C-7′）， 85.6 （C-8′）， 50.9 （C-9′）， 44.5 （C-10′）， 127.3 （C-11′）， 172.5 （C-12′）， 54.3 （C-13′）， 24.0 （C-14′）， 71.1 （C-15′）， 169.0 （C-1″）， 128.0 （C-2″）， 139.0 （C-3″）， 14.3 （C-4″）， 11.8 （C-5″）。以上理化性質(zhì)和波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)（Xu et al.， 2007）報道的chloramultiol D基本一致，最終判斷化合物5為chloramultiol D。

化合物6" 無色無定形粉末，分子式為C32H33O5；1H NMR （600 MHz， CDCl3） δ： 0.66 （1H， m， H-2′）， 0.75 （1H， m， H-2′）， 0.88 （3H， s， H-14′）， 1.02 （1H， m， H-2）， 1.14 （3H， s， H-14）， 1.22 （1H， m， H-3′）， 1.23 （1H， m， H-2）， 1.41 （1H， m， H-1′）， 1.62 （1H， m， H-4′）， 1.71 （3H， s， H-13）， 1.81 （1H， m， H-3）， 1.83 （1H， m， H-15）， 1.83 （1H， m， H-3）， 2.07 （3H， s， H-2″）， 2.17 （1H， m， H-5′）， 2.25 （1H， m， H-1α）， 2.29 （1H， m， H-1β）， 2.56 （1H， m， H-6′）， 2.63 （1H， m， H-6′）， 2.70 （1H， m， H-15）， 2.71 （1H， dd， J=15.6， 6.6 Hz， H-9′）， 3.90 （1H， m， H-15′β）， 4.04 （1H， dd， J = 10.8， 4.8 Hz， H-15′α）， 4.41 （1H， d， J = 14.4 Hz， H-13′β）， 4.48 （1H， d， J = 14.4 Hz， H-13′α）; 13C NMR （150 MHz， CDCl3） δ： 24.2 （C-1）， 9.3 （C-2）， 30.1 （C-3）， 77.3 （C-4）， 160.4 （C-5）， 123.2 （C-6）， 149.8 （C-7）， 95.0 （C-8）， 199.4 （C-9）， 57.0 （C-10）， 127.0 （C-11）， 171.2 （C-12）， 11.2 （C-13）， 21.1 （C-14）， 39.7 （C-15）， 25.8 （C-1′）， 16.2 （C-2′）， 23.4 （C-3′）， 44.7 （C-4′）， 51.6 （C-5′）， 25.1 （C-6′）， 166.7 （C-7′）， 85.4 （C-8′）， 50.4 （C-9′）， 43.9 （C-10′）， 127.0 （C-11′）， 171.5 （C-12′）， 55.7 （C-13′）， 22.4 （C-14′）， 67.7 （C-15′）， 172.8 （C-1″）， 21.2 （C-2″）。以上理化性質(zhì)和波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)（Wang et al.， 2015）報道的chlorasessilifol B基本一致，最終判斷化合物6為chlorasessilifol B。

化合物7" 白色粉末，分子式C41H48O13；1H NMR （600 MHz， CD3OD） δ： 0.34 （1H， dd， J=7.8， 4.2 Hz， H-2β）， 0.75 （1H， m， H-2′β）， 0.91 （3H， s， H-14′）， 0.99 （1H， m， H-2α）， 1.06 （3H， s， H-14）， 1.31 （1H， dd， J=9.6， 4.2 Hz， H-2′α）， 1.47 （1H， m， H-3′）， 1.69 （1H， m， H-1′）， 1.77 （1H， m， H-1）， 1.80 （1H， dd， J=6.0 Hz， H-9′）， 1.83 （3H， s， H-13）， 1.85 （1H， m， H-5″）， 1.88 （1H， m， H-4″）， 1.95 （1H， m， H-3）， 2.45 （1H， dd， J=18.6， 6.0 Hz， H-6β）， 2.55 （1H， ddd， J=10.2， 6.0， 4.8 Hz， H-15β）， 2.82 （1H， m， H-6α）， 2.86 （1H， m， H-15α）， 3.32 （3H， s， MeO-1）， 3.70 （3H， s， MeO-12）， 3.79 （1H， d， J=11.4 Hz， H-15′β）， 4.76 （1H， d， J=13.2 Hz， H-13′β）， 4.87 （1H， d， J=9.0 Hz， H-13′α）， 3.90 （1H， s， H-9）， 3.98 （1H， d， J=3.0 Hz， H-6）， 4.23 （1H， d， J=11.4 Hz， H-15′α）， 6.96 （1H， m， H-3″）; 13C NMR （150 MHz， CD3OD） δ： 26.7 （C-1）， 16.1 （C-2）， 25.4 （C-3）， 143.1 （C-4）， 133.7 （C-5）， 41.9 （C-6）， 134.7 （C-7）， 202.1 （C-8）， 80.9 （C-9）， 52.4 （C-10）， 146.6 （C-11）， 172.1 （C-12）， 20.1 （C-13）， 15.8 （C-14）， 26.0 （C-15）， 26.4 （C-1′）， 12.5 （C-2′）， 29.1 （C-3′）， 77.7 （C-4′）， 62.4 （C-5′）， 24.2 （C-6′）， 17.5 （C-7′）， 94.8 （C-8′）， 57.3 （C-9′）， 46.1 （C-10′）， 124.6 （C-11′）， 173.4 （C-12′）， 55.9 （C-13′）， 26.8 （C-14′）， 72.8 （C-15′）， 170.1 （C-1″）， 129.5 （C-2″）， 139.5 （C-3″）， 14.6 （C-4″）， 12.4 （C-5″）， 173.7 （C-1）， 29.1 （C-2）， 29.1 （C-3）， 174.5 （C-4）， 52.9 （MeO-12）， 52.3 （MeO-1）。以上理化性質(zhì)和波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)（Wang et al.， 2011）報道的chlorajaponal基本一致，最終判斷化合物7為chlorajaponal。

化合物8" 白色粉末，分子式為C39H42O14；1H NMR （600 MHz， CDCl3） δ： 0.60 （1H， dt， J = 12.0 Hz， H-2′β）， 0.80 （1H， m， H-2α）， 0.83 （3H， s， H-14）， 0.93 （3H， s， H-14′）， 1.04 （1H， dd， J = 12.0， 6.0 Hz， H-2β）， 1.22 （1H， d， J = 6.0 Hz， H-2′α）， 1.46 （1H， m， H-3′）， 1.62 （3H， s， H-13）， 1.65 （1H， m， H-1′）， 1.80 （1H， m， H-3）， 1.80 （1H， m， H-15β）， 1.83 （1H， m， H-1）， 1.85 （1H， dd， H-5″）， 2.36 （1H， dd， J = 12.0 Hz， H-5′）， 2.53 （1H， m， H-2β）， 2.60 （1H， m， H-3β）， 2.64 （1H， m， H-9′）， 2.66 （1H， m， H-2α）， 2.66 （1H， m， H-3α）， 2.70 （1H， m， H-6′β）， 2.72 （1H， m， H-15α）， 2.97 （1H， dd， J = 18.0， 12.0 Hz， H-6′α）， 3.75 （1H， s， H-9）， 3.87 （1H， d， J = 12.0 Hz， H-15′β）， 4.51 （1H， d， J = 12.0 Hz， H-13′β）， 4.59 （1H， d， J = 12.0 Hz， H-15′α）， 4.64 （1H， dd， J = 12.0， 6.0 Hz， H-4″β）， 4.84 （1H， dd， J = 12.0， 6.0 Hz， H-4″α）， 5.17 （1H， d， J = 12.0 Hz， H-13′α）， 6.72 （1H， m， H-3″）; 13C NMR （150 MHz， CDCl3） δ： 29.9 （C-1）， 9.7 （C-2）， 31.5 （C-3）， 78.2 （C-4）， 164.6 （C-5）， 124.3 （C-6）， 154.5 （C-7）， 105.0 （C-8）， 80.0 （C-9）， 51.1 （C-10）， 125.4 （C-11）， 174.6 （C-12）， 10.8 （C-13）， 14.4 （C-14）， 41.5 （C-15）， 27.8 （C-1′）， 10.8 （C-2′）， 30.3 （C-3′）， 78.2 （C-4′）， 56.2 （C-5′）， 25.0 （C-6′）， 177.4 （C-7′）， 87.4 （C-8′）， 52.0 （C-9′）， 46.6 （C-10′）， 124.0 （C-11′）， 173.4 （C-12′）， 51.0 （C-13′）， 24.4 （C-14′）， 74.8 （C-15′）， 168.9 （C-1″）， 130.3 （C-2″）， 137.7 （C-3″）， 62.8 （C-4″）， 12.8 （C-5″）， 174.2 （C-1）， 29.8 （C-2）， 29.8 （C-3）， 173.9 （C-4）。以上理化性質(zhì)和波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)（Kim et al.， 2009）報道的tianmushanol基本一致，最終判斷化合物8為tianmushanol。

化合物9" 白色粉末，分子式為C40H44O14；1H NMR （600 MHz， CDCl3） δ： 0.65 （1H， m， H-2′）， 0.82 （3H， s， H-14）， 0.92 （3H， s， H-14′）， 0.95 （1H， m， H-2）， 1.16 （1H， m， H-2）， 1.29 （1H， m， H-2′）， 1.46 （1H， m， H-3′）， 1.59 （1H， m， H-1′）， 1.69 （1H， m， H-15）， 1.71 （3H， s， H-13）， 1.82 （1H， m， H-3）， 1.93 （3H， s， H-e）， 1.94 （1H， m， H-1）， 2.14 （1H， dd， J = 12.0， 7.1 Hz， H-5′）， 2.47 （1H， m， H-g）， 2.49 （1H， m， H-15）， 2.54 （1H， m， H-h）， 2.54 （1H， m， H-6′）， 2.62 （1H， s， H-9′）， 2.66 （1H， m， H-h）， 2.68 （1H， m， H-g）， 2.92 （1H， m， H-6′）， 3.44 （3H， s， -OCH3）， 3.73 （1H， d， J = 12.0 Hz， H-15′）， 3.83 （3H， s， H-9）， 4.52 （1H， d， J = 12.0 Hz， H-13′）， 4.66 （1H， dd， J = 12.0 Hz， H-d）， 4.73 （1H， dd， J = 12.0 Hz， H-d）， 4.92 （1H， d， J = 12.0 Hz， H-15′）， 5.23 （1H， d， J = 12.0 Hz， H-13′）， 6.60 （1H， m， H-c）; 13C NMR （150 MHz， CDCl3） δ： 29.2 （C-1）， 9.6 （C-2）， 29.7 （C-3）， 77.5 （C-4）， 164.3 （C-5）， 122.4 （C-6）， 150.8 （C-7）， 105.0 （C-8）， 75.5 （C-9）， 49.7 （C-10）， 125.7 （C-11）， 170.8 （C-12）， 10.7 （C-13）， 14.0 （C-14）， 40.2 （C-15）， 26.4 （C-1′）， 10.3 （C-2′）， 29.0 （C-3′）， 77.5 （C-4′）， 55.8 （C-5′）， 23.5 （C-6′）， 174.0 （C-7′）， 85.3 （C-8′）， 51.1 （C-9′）， 45.0 （C-10′）， 123.3 （C-11′）， 171.3 （C-12′）， 53.7 （C-13′）， 24.1 （C-14′）， 72.8 （C-15′）， 167.6 （C-a）， 130.6 （C-b）， 135.6 （C-c）， 60.8 （C-d）， 12.8 （C-e）， 171.8 （C-f）， 28.8 （C-g）， 29.0 （C-h）， 171.8 （C-i）， 52.2 （MeO-8）。以上理化性質(zhì)和波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)（Ran et al.， 2010）報道的spicachlorantins B基本一致，最終判斷化合物9為spicachlorantins B。

化合物10" 白色粉末，分子式為C39H40O14；1H NMR （600 MHz， CDCl3） δ： 0.64 （1H， dt， J = 12.0， 6.0 Hz， H-2′β）， 0.96 （3H， s， H-14′）， 1.03 （1H， m， H-2β）， 1.16 （3H， s， H-14）， 1.23 （1H， m， H-2α）， 1.28 （1H， m， H-2′α）， 1.46 （1H， m， H-3′）， 1.56 （1H， m， H-1′）， 1.74 （1H， m， H-15β）， 1.80 （1H， m， H-3）， 1.82 （3H， s， H-13）， 1.86 （3H， m， H-5″）， 2.22 （1H， dd， J = 12.0， 6.0 Hz， H-5′）， 2.29 （1H， m， H-1）， 2.40 （1H， dd， J = 18.0， 6.0 Hz， H-6′β）， 2.50 （1H， m， H-3β）， 2.53 （1H， m， H-2β）， 2.59 （1H， dd， J = 12.0， 6.0 Hz， H-9′）， 2.67 （1H， m， H-15α）， 2.73 （1H， m， H-3α）， 2.77 （1H， m， H-2α）， 3.04 （1H， dd， J = 18.0 Hz， H-6′α）， 4.03 （1H， d， J = 12.0 Hz， H-15′β）， 4.33 （1H， d， J = 12.0 Hz， H-15′α）， 4.51 （1H， d， J = 12.0 Hz， H-13′β）， 4.63 （1H， dd， J = 12.0， 6.0 Hz， H-4″β）， 4.75 （1H， dd， J = 12.0 Hz， H-4″α）， 5.40 （1H， d， J = 12.0 Hz， H-13′α）， 6.57 （1H， dd， J = 6.0 Hz， H-3″）; 13C NMR （150 MHz， CDCl3） δ： 24.2 （C-1）， 9.3 （C-2）， 30.1 （C-3）， 77.5 （C-4）， 160.7 （C-5）， 123.7 （C-6）， 136.4 （C-7）， 94.0 （C-8）， 200.1 （C-9）， 56.9 （C-10）， 129.4 （C-11）， 170.2 （C-12）， 11.3 （C-13）， 20.8 （C-14）， 40.0 （C-15）， 26.7 （C-1′）， 9.9 （C-2′）， 29.7 （C-3′）， 77.5 （C-4′）， 54.9 （C-5′）， 24.0 （C-6′）， 173.5 （C-7′）， 85.5 （C-8′）， 51.9 （C-9′）， 45.1 （C-10′）， 123.7 （C-11′）， 170.7 （C-12′）， 53.3 （C-13′）， 24.2 （C-14′）， 74.1 （C-15′）， 167.8 （C-1″）， 129.4 （C-2″）， 136.4 （C-3″）， 61.7 （C-4″）， 12.8 （C-5″）， 172.1 （C-1）， 28.8 （C-2）， 28.8 （C-3）， 172.1 （C-4）。以上理化性質(zhì)和波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)（Wu et al.， 2008）報道的spicachlorantins A基本一致，最終判斷化合物10為spicachlorantins A。

化合物11" 白色粉末，分子式為C41H44O14；1H NMR （600 MHz， CDCl3） δ： 0.67 （1H， ddd， J = 9.2， 8.5， 5.2 Hz， H-2′α）， 0.98 （1H， m， H-2）， 1.00 （3H， s， H-14′）， 1.12 （3H， t， J = 7.2 Hz， -CH3）， 1.20 （3H， s， H-14）， 1.29 （1H， m， H-2）， 1.30 （1H， m， H-2′β）， 1.53 （1H， ddd， J = 9.2， 7.5， 3.5 Hz， H-3′）， 1.74 （1H， ddd， J = 9.2， 8.5， 4.6 Hz， H-1′）， 1.79 （3H， s， H-13）， 1.88 （3H， s， H-e）， 1.90 （1H， m， H-15）， 1.93 （1H， m， H-3）， 2.07 （1H， ddd， J = 7.9， 6.5， 4.0 Hz， H-1）， 2.08 （1H， m， H-6′）， 2.53 （1H， dd， J = 17.8， 7.5 Hz， H-5′）， 2.57 （1H， m， H-h）， 2.58 （1H， m， H-g）， 2.62 （1H， m， H-h）， 2.64 （1H， m， H-g）， 2.73 （1H， m， H-15）， 2.75 （1H， s， H-9′）， 3.10 （1H， m， H-6′）， 3.74 （1H， m， -OCH2-）， 3.97 （1H， t， J = 6.0 Hz， H-c）， 4.02 （1H， m， -OCH2-）， 4.58 （1H， d， J = 12.0 Hz， H-15′）， 4.60 （1H， d， J = 12.3 Hz， H-13′）， 4.69 （1H， m， H-d）， 4.90 （3H， s， H-e）， 5.30 （1H， d， J = 12.3 Hz， H-13′）， 6.68 （1H， t， J = 6.0 Hz， H-c）; 13C NMR （150 MHz， CDCl3） δ： 26.3 （C-1）， 10.9 （C-2）， 32.1 （C-3）， 77.8 （C-4）， 162.5 （C-5）， 118.5 （C-6）， 151.9 （C-7）， 101.5 （C-8）， 205.1 （C-9）， 56.6 （C-10）， 129.4 （C-11）， 172.1 （C-12）， 12.2 （C-13）， 24.0 （C-14）， 41.1 （C-15）， 27.9 （C-1′）， 11.4 （C-2′）， 30.1 （C-3′）， 77.6 （C-4′）， 56.1 （C-5′）， 25.7 （C-6′）， 176.8 （C-7′）， 87.8 （C-8′）， 52.8 （C-9′）， 48.7 （C-10′）， 125.4 （C-11′）， 173.5 （C-12′）， 55.8 （C-13′）， 24.6 （C-14′）， 75.2 （C-15′）， 168.3 （C-a）， 130.7 （C-b）， 137.9 （C-c）， 62.6 （C-d）， 12.8 （C-e）， 173.5 （C-f）， 30.0 （C-g）， 30.0 （C-h）， 173.4 （C-i）， 64.0 （-OCH2-）， 16.6 （MeO-12）。以上理化性質(zhì)和波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)（Zhang et al.， 2012）報道的及已靈素A基本一致，最終判斷化合物11為及已靈素A。

化合物12" 白色粉末，分子式為C40H44O14；1H NMR （600 MHz， CDCl3） δ： 0.41 （1H， m， H-2α）， 0.82 （1H， m， H-2′β）， 0.84 （3H， s， H-14′）， 1.03 （3H， s， H-14）， 1.04 （1H， m， H-2β）， 1.29 （1H， m， H-2′α）， 1.31 （1H， m， H-3′）， 1.43 （1H， m， H-1′）， 1.71 （1H， m， H-5′）， 1.87 （1H， m， H-3）， 1.88 （3H， s， H-5″）， 1.88 （3H， s， H-13）， 1.99 （1H， d， J= 2.2 Hz， H-9′）， 2.04 （1H， m， H-1）， 2.39 （1H， m， H-6″β）， 2.43 （1H， m， H-8″α）， 2.71 （1H， m， H-7″α）， 2.74 （1H， m， H-7″β）， 2.74 （1H， m， H-6′α）， 2.85 （1H， m， H-8″β）， 3.57 （1H， d， J = 11.8 Hz， H-15′β）， 3.64 （3H， s， MeO-12）， 3.81 （1H， s， H-9）， 4.09 （1H， s， H-6）， 4.47 （1H， d， J = 11.8 Hz， H-15′α）， 4.49 （1H， dd， J = 14.7， 4.5 Hz， H-4″α）， 4.49 （1H， d， J = 11.9 Hz， H-13′β）， 4.57 （1H， dd， J = 15.0， 4.6 Hz， H-4″β）， 4.85 （3H， br s， H-15）， 5.04 （1H， d， J = 11.8 Hz， H-13′α）， 6.55 （1H， m， H-3″）; 13C NMR （150 MHz， CDCl3） δ： 25.5 （C-1）， 16.4 （C-2）， 23.5 （C-3）， 144.9 （C-4）， 136.6 （C-5）， 41.0 （C-6），

132.1 （C-7）， 200.3 （C-8）， 79.8 （C-9）， 51.4 （C-10），

147.9 （C-11）， 169.9 （C-12）， 20.1 （C-13）， 15.0 （C-14）， 65.1 （C-15）， 25.1 （C-1′）， 11.6 （C-2′）， 27.8 （C-3′）， 76.6 （C-4′）， 59.2 （C-5′）， 23.1 （C-6′）， 173.4 （C-7′）， 91.9 （C-8′）， 62.2 （C-9′）， 43.9 （C-10′）， 123.7 （C-11′）， 172.0 （C-12′）， 54.2 （C-13′）， 26.2 （C-14′）， 72.0 （C-15′）， 167.0 （C-1″）， 129.1 （C-2″）， 135.5 （C-3″）， 61.6 （C-4″）， 13.0 （C-5″）， 171.9 （C-6″）， 28.6 （C-7″）， 29.1 （C-8″）， 172.0 （C-9″）， 52.4 （MeO-12）。以上理化性質(zhì)和波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)（Ran et al.， 2010）報道的chloramultiols A基本一致，最終判斷化合物12 為chloramultiols A。

4" 藥理活性研究

采用MTT法初步研究化合物1-12對人宮頸癌細(xì)胞HeLa、人乳腺癌細(xì)胞MCF-7、人前列腺癌細(xì)胞DU-145、人肺癌細(xì)胞A549和人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞T98G的細(xì)胞毒活性，以紫杉醇為陽性對照組。細(xì)胞毒活性測試結(jié)果顯示，僅化合物2和7對人宮頸癌細(xì)胞HeLa有抑制作用，其他化合物均無抑制作用（表2）。

5" 討論與結(jié)論

本研究通過用硅膠柱層析、反相柱色譜、Sephadex LH-20凝膠和半制備高效液相等色譜技術(shù)對寬葉金粟蘭95%乙醇提取物的乙酸乙酯部位分離并鑒定，得到12個化合物，包括一個新的環(huán)丁烷酰胺類化合物和11個倍半萜二聚體類化合物。其中，化合物1為新化合物，化合物2-7、9-12首次從寬葉金粟蘭中分離得到。通過MTT法測試化合物細(xì)胞毒活性，結(jié)果表明僅化合物2和7對人宮頸癌細(xì)胞HeLa有抑制作用，IC50分別為（4.50±0.27） μmol·L-1和（4.25±0.08） μmol·L-1，其他化合物均無抑制作用。此外，我們對寬葉金粟蘭中分離的化合物進(jìn)行了體外抗HIV-1細(xì)胞活性篩選，通過對HIV-1的感染性滴定、C8166細(xì)胞毒性和HIV-1ⅢB致細(xì)胞病變（CPE）的抑制實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明化合物7對C8166細(xì)胞的毒性極大，CC50低于1 μmol·L-1。所有化合物對HIV-1ⅢB引起的合胞體形成的抑制作用弱，TI值均低于2，均無明顯的抗HIV-1細(xì)胞活性。

有研究發(fā)現(xiàn)，從金粟蘭植物中分離得到倍半萜二聚體化合物，并采用SYBR-Green抗惡性瘧原蟲Dd2（耐氯喹）檢測法檢測所有化合物的抗瘧原蟲活性（Guo et al.， 2016；Zhou et al.， 2017）。其中，化合物fortunilide A、sarglabolide J和chlorajaponilide C的IC50值分別為（5.2±0.6） nmol·L-1、（7.2±1.3） nmol·L-1 和（1.1±0.2） nmol·L-1，與陽性對照青蒿素［IC50=（4.0±4.2）nmol·L-1］具有相似的效力。從金粟蘭屬植物銀線草（C. japonicus）分離得到的倍半萜二聚體化合物chlojapolide A、shizukaol B、shizukaol G和shizukaol D對RAW 264.7巨噬細(xì)胞脂多糖（LPS）誘導(dǎo)的一氧化氮（NO）產(chǎn)生表現(xiàn)出明顯的抑制作用，IC50值在6.91～15.75 μmol·L-1范圍內(nèi)，比陽性對照槲皮素（IC50=15.90 μmol·L-1）更活躍。因此，在后續(xù)研究中將評價倍半萜二聚體化合物的抗瘧原蟲和抗炎活性，對含量較大的化合物7進(jìn)行部分結(jié)構(gòu)修飾并進(jìn)行抗瘧原蟲和抗炎活性檢測，進(jìn)一步探索倍半萜二聚體成分的構(gòu)效關(guān)系與作用機(jī)制，以期尋找到更多具有生物活性的天然產(chǎn)物，同時也將開展更廣泛的其他生物活性評價，為寬葉金粟蘭的開發(fā)利用奠定基礎(chǔ)。

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（責(zé)任編輯" 周翠鳴）