卵巢組織凍存移植技術(shù)規(guī)范團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)

【編者按】 中國(guó)每年新發(fā)惡性腫瘤患者450多萬(wàn)例，其中超過(guò)78%的年輕腫瘤患者有生育需求。2021年，中國(guó)的人口出生率僅為7.52‰，如何保障女性生育力、提高出生人口數(shù)量成為亟待解決的問(wèn)題。卵巢組織凍存與移植技術(shù)是目前國(guó)際上最先進(jìn)、最有前景的生育力保護(hù)方法，即在卵巢遭受損傷前通過(guò)手術(shù)將部分卵巢組織取出、凍存，待條件允許時(shí)再?gòu)?fù)蘇、移植回體內(nèi)，不僅保護(hù)女性生育能力，還可恢復(fù)卵巢的內(nèi)分泌功能。為推動(dòng)該技術(shù)在全國(guó)的推廣應(yīng)用，負(fù)責(zé)人阮祥燕教授2018年?duì)款^組織全國(guó)50多位專(zhuān)家及5位國(guó)際專(zhuān)家制定中國(guó)首部《卵巢組織凍存與移植中國(guó)專(zhuān)家共識(shí)》，同年在國(guó)際婦科內(nèi)分泌學(xué)會(huì)官方期刊發(fā)表中國(guó)首個(gè)《卵巢組織凍存移植指南》，引起本領(lǐng)域強(qiáng)烈反響。然而，國(guó)內(nèi)尚無(wú)卵巢組織凍存技術(shù)操作的規(guī)范化標(biāo)準(zhǔn)，為促進(jìn)卵巢組織凍存技術(shù)在全國(guó)范圍內(nèi)的規(guī)范化開(kāi)展制定本團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)。

【關(guān)鍵詞】 卵巢；卵巢組織凍存；卵巢組織移植；規(guī)范；團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)

【中圖分類(lèi)號(hào)】 R 322.65 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】 S DOI：10.12114/j.issn.1007-9572.2023.0237

【引用本文】 首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京婦產(chǎn)醫(yī)院，中國(guó)人體健康科技促進(jìn)會(huì)生育力保護(hù)與保存專(zhuān)業(yè)委員會(huì). 卵巢組織凍存移植技術(shù)規(guī)范團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)［J］. 中國(guó)全科醫(yī)學(xué)，2023，26（23）：2836-2841. DOI：10.12114/j.issn.1007-9572.2023.0237. ［www.chinagp.net］

1 范圍

本文件規(guī)定了開(kāi)展卵巢組織凍存和移植的醫(yī)療機(jī)構(gòu)、人員管理等要求，以及開(kāi)展卵巢組織凍存、復(fù)蘇、移植、移植風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估與效果評(píng)價(jià)等要求。

本文件適用于開(kāi)展卵巢組織凍存與移植的醫(yī)療機(jī)構(gòu)。

2 規(guī)范性引用文件

下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件；凡不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。

GB/T 5458-1997 液氮生物容器

GB/T 37864-2019 生物樣本庫(kù)質(zhì)量和能力通用要求

3 術(shù)語(yǔ)和定義

下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。

3.1 卵巢組織凍存（ovarian tissue cryopreservation） 將手術(shù)取出的卵巢組織進(jìn)行處理，采用慢速或玻璃化冷凍方法，使其在冷凍保護(hù)劑中降溫，最終在液氮中長(zhǎng)期超低溫保存的一種女性生育力保護(hù)技術(shù)。

3.2 慢速冷凍（slow freezing） 一種采用既定程序逐步降低卵巢組織凍存溶液溫度的方法。

3.3 玻璃化冷凍（vitrification） 一種采用高濃度冷凍保護(hù)劑和超快速冷卻方法，使穩(wěn)定冰核的形成和生長(zhǎng)都沒(méi)有時(shí)間，從而達(dá)到玻璃態(tài)的冷凍固化技術(shù)。

3.4 低溫轉(zhuǎn)運(yùn)（low temperature transport） 將生物材料保存于特定的轉(zhuǎn)移液中，并維持4～8 ℃低溫，從一地轉(zhuǎn)移到另一地。

3.5 卵巢組織移植（ovarian tissue transplantation） 將手術(shù)取出的卵巢組織通過(guò)手術(shù)原位或異位移植回患者體內(nèi)。

3.6 卵巢組織復(fù)蘇（ovarian tissue thawing） 將凍存的卵巢組織凍融復(fù)溫后恢復(fù)生物活性的過(guò)程。

4 開(kāi)展卵巢組織凍存移植醫(yī)療機(jī)構(gòu)的基本要求

4.1 開(kāi)展卵巢組織凍存移植醫(yī)療機(jī)構(gòu)的一般要求

開(kāi)展卵巢組織凍存移植的醫(yī)療機(jī)構(gòu)應(yīng)：

a）有相關(guān)的審查機(jī)構(gòu)，共同批準(zhǔn)卵巢組織凍存技術(shù)開(kāi)展，審查機(jī)構(gòu)包括但不限于新技術(shù)委員會(huì)、學(xué)術(shù)委員會(huì)、倫理委員會(huì)；

b）有衛(wèi)生健康行政部門(mén)核準(zhǔn)登記的婦產(chǎn)科及相關(guān)專(zhuān)業(yè)診療科目；

c）具有相應(yīng)的技術(shù)能力。

4.2 開(kāi)展卵巢組織凍存移植實(shí)驗(yàn)室的要求

4.2.1 實(shí)驗(yàn)室的一般要求

4.2.1.1 醫(yī)療機(jī)構(gòu)在計(jì)劃實(shí)驗(yàn)室時(shí)應(yīng)符合GB/T 37864-2019，其選址、設(shè)計(jì)、布局、建造和維護(hù)應(yīng)符合醫(yī)療場(chǎng)所Ⅰ類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)的要求，應(yīng)考慮冷凍儲(chǔ)存的要求（包括溫度、濕度、通風(fēng)及照明設(shè)施等）、擴(kuò)容調(diào)整及生物安全和生物安保的要求。

4.2.1.2 應(yīng)對(duì)開(kāi)展不相容活動(dòng)的相鄰區(qū)域進(jìn)行有效間隔，如辦公區(qū)與實(shí)驗(yàn)區(qū)之間應(yīng)有墻壁進(jìn)行物理隔開(kāi)，避免交叉污染。各隔離區(qū)域應(yīng)標(biāo)識(shí)明確。

4.2.1.3 當(dāng)環(huán)境影響卵巢組織樣本及相關(guān)數(shù)據(jù)的質(zhì)量和/

或人員健康和安全時(shí)，應(yīng)對(duì)基礎(chǔ)設(shè)施/場(chǎng)地的環(huán)境條件進(jìn)行測(cè)量、監(jiān)測(cè)、控制和記錄。

4.2.1.4 應(yīng)制定應(yīng)急預(yù)案，以確保在有風(fēng)險(xiǎn)的情況下實(shí)驗(yàn)室的基礎(chǔ)設(shè)施/場(chǎng)地內(nèi)的環(huán)境條件符合要求。

4.2.2 實(shí)驗(yàn)設(shè)施與設(shè)備要求

4.2.2.1 一般要求

4.2.2.1.1 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)配備卵巢組織冷凍設(shè)備、液氮儲(chǔ)存系統(tǒng)、百級(jí)超凈工作臺(tái)、顯微鏡、培養(yǎng)箱、制冰機(jī)、天平、醫(yī)用冰箱等儀器設(shè)備。

4.2.2.1.2 應(yīng)對(duì)實(shí)驗(yàn)室設(shè)施設(shè)備建立檔案管理制度，包括儀器名稱(chēng)、編號(hào)、廠家、使用日期、使用說(shuō)明及維修保養(yǎng)記錄等。

4.2.2.1.3 作為質(zhì)控的一部分，每個(gè)儀器應(yīng)定期測(cè)試其功能及運(yùn)轉(zhuǎn)情況，重要儀器設(shè)備應(yīng)獲取正式質(zhì)檢報(bào)告。

4.2.2.2 通風(fēng)系統(tǒng)

4.2.2.2.1 不相容活動(dòng)區(qū)域的通風(fēng)系統(tǒng)應(yīng)獨(dú)立分開(kāi)，以確保其他區(qū)域與實(shí)驗(yàn)室空氣互不影響。

4.2.2.2.2 實(shí)驗(yàn)室內(nèi)應(yīng)保持正壓，保障氣流由“清潔”空間向“污染”空間流動(dòng)，宜最大限度減少室內(nèi)回流與渦流。實(shí)驗(yàn)室空氣應(yīng)經(jīng)過(guò)過(guò)濾并去除揮發(fā)性有機(jī)化合物。

4.2.2.2.3 實(shí)驗(yàn)室溫度應(yīng)控制在20～24℃，濕度應(yīng)控制在40%～60%。

4.2.2.3 監(jiān)控系統(tǒng)

4.2.2.3.1 實(shí)驗(yàn)室各個(gè)通道應(yīng)安裝監(jiān)控設(shè)備，重點(diǎn)區(qū)域應(yīng)安裝溫度、濕度、濃度監(jiān)測(cè)設(shè)備。液氮區(qū)域應(yīng)監(jiān)控氧氣濃度，氧氣濃度應(yīng)符合相關(guān)規(guī)定。

4.2.2.3.2 所有監(jiān)控結(jié)果應(yīng)可實(shí)時(shí)查看并設(shè)置報(bào)警，一旦超出預(yù)警范圍應(yīng)及時(shí)發(fā)出警報(bào)。

4.2.2.4 低溫/超低溫儲(chǔ)存設(shè)備

4.2.2.4.1 液氮容器的管理應(yīng)符合GB/T 5458-1997的要求。

4.2.2.4.2 低溫/超低溫儲(chǔ)存設(shè)備等關(guān)鍵儀器應(yīng)：

a）放置在相對(duì)獨(dú)立的空間，通風(fēng)、照明、電源及溫濕度應(yīng)符合要求；

b）使用人員應(yīng)按照操作說(shuō)明書(shū)規(guī)范操作；

c）應(yīng)指定專(zhuān)人負(fù)責(zé)對(duì)設(shè)備進(jìn)行檢查、維護(hù)、保養(yǎng)及質(zhì)量控制，并做好相應(yīng)記錄。

4.2.2.5 其他設(shè)施設(shè)備的要求

4.2.2.5.1 實(shí)驗(yàn)室的照明系統(tǒng)、備用電源、門(mén)禁系統(tǒng)等應(yīng)符合實(shí)驗(yàn)室正常運(yùn)行的要求。

4.2.2.5.2 應(yīng)安排專(zhuān)人負(fù)責(zé)定期對(duì)以上設(shè)備及設(shè)施進(jìn)行檢查，一旦出現(xiàn)異常應(yīng)停止使用并及時(shí)更換或維護(hù)。

4.2.3 卵巢組織凍存移植實(shí)驗(yàn)室管理要求

4.2.3.1 一般要求

4.2.3.1.1 開(kāi)展卵巢組織凍存移植的實(shí)驗(yàn)室，潔凈度應(yīng)達(dá)到GMP A級(jí)。卵巢組織的處理應(yīng)在獨(dú)立的專(zhuān)用房間百級(jí)超凈工作臺(tái)中進(jìn)行。

4.2.3.1.2 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)具備卵巢組織處理、冷凍、凍存、復(fù)蘇、活性檢測(cè)等技術(shù)操作能力。

4.2.3.1.3 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有嚴(yán)格的數(shù)據(jù)管理制度，數(shù)據(jù)必須由雙人負(fù)責(zé)錄入、專(zhuān)人核對(duì)，必須規(guī)范存檔患者的相關(guān)信息，同時(shí)將患者相關(guān)信息按統(tǒng)一方式錄入數(shù)據(jù)庫(kù)，并統(tǒng)一管理。

4.2.3.2 質(zhì)量管理要求

4.2.3.2.1 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有質(zhì)量管理手冊(cè)、管理性文件、標(biāo)準(zhǔn)操作文件及相關(guān)記錄。

4.2.3.2.2 應(yīng)確保操作規(guī)范，確保卵巢組織完成相關(guān)的檢驗(yàn)。

4.2.3.2.3 應(yīng)對(duì)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行每年抽檢驗(yàn)證。

4.2.3.2.4 應(yīng)對(duì)實(shí)驗(yàn)室每年進(jìn)行質(zhì)量評(píng)估，保證體系的有效性、時(shí)效性。

4.2.3.3 信息管理要求

4.2.3.3.1 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)配備樣本信息管理系統(tǒng)，該系統(tǒng)應(yīng)充分考慮到未來(lái)擴(kuò)容的需要。

4.2.3.3.2 應(yīng)建立相關(guān)程序確保樣本信息的完整性和安全性，每半年備份一次，防止數(shù)據(jù)丟失或損壞。

4.2.3.4 安全要求

4.2.3.4.1 應(yīng)建立完善的安全管理體系，對(duì)樣本、人員、設(shè)施設(shè)備、環(huán)境、操作規(guī)程、應(yīng)急措施等應(yīng)有明確的要求。

4.2.3.4.2 應(yīng)有消防安全、設(shè)備設(shè)施安全、危險(xiǎn)品管理、危險(xiǎn)源辨識(shí)、生物安全、生物安保、信息安全、水電氣事故有應(yīng)急預(yù)案。

4.2.3.5 風(fēng)險(xiǎn)管理 應(yīng)建立風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估機(jī)制，定期進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)辨識(shí)和評(píng)估，依據(jù)評(píng)估結(jié)果及時(shí)進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)控制。

5 人員基本要求

5.1 技術(shù)負(fù)責(zé)人

5.1.1 技術(shù)負(fù)責(zé)人原則上應(yīng)具備副高及以上職稱(chēng)，博士學(xué)位，具有5年以上卵巢組織凍存移植相關(guān)經(jīng)驗(yàn)，具有很強(qiáng)的臨床與卵巢組織凍存技術(shù)，并具有與其他部門(mén)溝通協(xié)調(diào)的能力。

5.1.2 技術(shù)負(fù)責(zé)人應(yīng)承擔(dān)以下職責(zé)：對(duì)卵巢組織凍存移植總體負(fù)責(zé)、組建團(tuán)隊(duì)、制定具體的工作流程和標(biāo)準(zhǔn)流程、考核團(tuán)隊(duì)中所有人員的各項(xiàng)工作質(zhì)量、調(diào)動(dòng)和激勵(lì)工作人員的積極性和主動(dòng)性等。

5.2 主要技術(shù)人員

5.2.1 臨床人員

5.2.1.1 進(jìn)行生育力保護(hù)咨詢(xún)的門(mén)診醫(yī)師應(yīng)熟練掌握卵巢組織凍存的適應(yīng)證、禁忌證，對(duì)患者卵巢功能進(jìn)行評(píng)估，應(yīng)具備中級(jí)及以上職稱(chēng)。

5.2.1.2 負(fù)責(zé)卵巢組織取材手術(shù)的醫(yī)師應(yīng)具備副高及以上職稱(chēng)，能夠熟練開(kāi)展腹腔鏡及開(kāi)腹手術(shù)，具有處理危急重癥的能力，至少接受5次卵巢組織取材手術(shù)培訓(xùn)且培訓(xùn)合格。

5.2.1.3 負(fù)責(zé)移植手術(shù)的醫(yī)師應(yīng)具有豐富的卵巢組織移植經(jīng)驗(yàn)，應(yīng)具備正高級(jí)職稱(chēng)，能夠熟練開(kāi)展腹腔鏡及開(kāi)腹手術(shù)，具有處理危急重癥的能力與經(jīng)驗(yàn)，至少接受5次卵巢組織移植手術(shù)培訓(xùn)且培訓(xùn)合格。

5.2.2 實(shí)驗(yàn)室人員

5.2.2.1 實(shí)驗(yàn)室人員的職責(zé)包括：

a）掌握各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)室日常操作流程及質(zhì)控方法，及時(shí)向臨床人員反饋信息；

b）對(duì)各種儀器設(shè)備進(jìn)行日常維護(hù)和管理，及時(shí)維修、排除故障；

c）掌握學(xué)科發(fā)展動(dòng)態(tài)，協(xié)助負(fù)責(zé)人制定實(shí)驗(yàn)室發(fā)展計(jì)劃；

d）在負(fù)責(zé)人指導(dǎo)下，制定和修改實(shí)驗(yàn)室各項(xiàng)規(guī)章制度和技術(shù)操作規(guī)程；

e）督促輔助技術(shù)人員完成實(shí)驗(yàn)室記錄；

f） 培訓(xùn)和指導(dǎo)輔助技術(shù)人員、研究生及進(jìn)修生等。

5.2.2.2 實(shí)驗(yàn)室主要技術(shù)人員應(yīng)：

a）接受卵巢組織凍存移植相關(guān)專(zhuān)業(yè)培訓(xùn)至少5次以上并考核通過(guò)；

b）掌握卵巢組織凍存移植相關(guān)技術(shù)及卵巢組織凍存實(shí)驗(yàn)室的管理方法；

c）參與卵巢組織凍存移植的主要技術(shù)環(huán)節(jié)操作，完成日常工作記錄。

5.3 輔助技術(shù)人員 輔助技術(shù)人員應(yīng)協(xié)助臨床人員和實(shí)驗(yàn)室人員完成技術(shù)操作，完成實(shí)驗(yàn)室日常數(shù)據(jù)記錄，配合完成耗材、試劑、物資訂購(gòu)與領(lǐng)取，及時(shí)檢查各種記錄的準(zhǔn)確和完整性等。

6 其他管理要求

6.1 倫理要求

6.1.1 知情同意 實(shí)施卵巢組織凍存移植的技術(shù)負(fù)責(zé)人及主要技術(shù)人員應(yīng)對(duì)風(fēng)險(xiǎn)和收益進(jìn)行有效評(píng)估，確?；颊呋虮O(jiān)護(hù)人對(duì)凍存與移植信息充分知情。

6.1.2 保密措施 未經(jīng)許可，任何一方不得將任何保密信息泄露給第三方。無(wú)論協(xié)議是否解除或終止，各方對(duì)獲知的對(duì)方的保密信息負(fù)有保密義務(wù)，保密義務(wù)的有效期是永久的，直至該保密信息被有權(quán)公開(kāi)方主動(dòng)公開(kāi)，或者根據(jù)法規(guī)或有權(quán)機(jī)關(guān)的命令公開(kāi)，或經(jīng)保密信息涉及各方的許可同意公開(kāi)之日止。

6.1.3 安全保護(hù) 應(yīng)在凍存前確定患者的感染狀況為陰性。白血病等高風(fēng)險(xiǎn)患者在卵巢組織凍存前應(yīng)先行接受治療，降低卵巢組織的攜癌風(fēng)險(xiǎn)。如果此類(lèi)患者有強(qiáng)烈意愿進(jìn)行凍存卵巢組織移植，應(yīng)在充分知情的前提下進(jìn)行多學(xué)科聯(lián)合會(huì)診，并采取多維度檢測(cè)手段，謹(jǐn)慎評(píng)估移植風(fēng)險(xiǎn)。

6.2 審查要求 開(kāi)展卵巢組織凍存移植應(yīng)滿(mǎn)足以下要求：

a）獲得倫理委員會(huì)的審查批準(zhǔn)；

b）通過(guò)學(xué)術(shù)委員會(huì)的專(zhuān)家論證科學(xué)性審查批準(zhǔn)；

c）通過(guò)新技術(shù)委員會(huì)的技術(shù)安全性和操作規(guī)范性審查批準(zhǔn)。

7 卵巢組織凍存移植技術(shù)要求

7.1 基本要求 在卵巢組織的凍存和移植各個(gè)環(huán)節(jié)，都應(yīng)保證卵巢組織的活性。復(fù)蘇后卵巢組織中的細(xì)胞存活率應(yīng)達(dá)70%以上。

卵巢組織凍存的方法包括慢速冷凍與玻璃化冷凍。目前國(guó)際上卵巢組織凍存的標(biāo)準(zhǔn)方法是慢速冷凍，本團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)主要按此方法編制。

7.2 卵巢組織凍存

7.2.1 通用要求 卵巢組織凍存應(yīng)嚴(yán)格遵守卵巢組織凍存技術(shù)操作規(guī)范和診療指南，嚴(yán)格掌握卵巢組織凍存技術(shù)適應(yīng)證和禁忌證。

7.2.2 卵巢組織凍存患者要求

7.2.2.1 卵巢組織凍存患者應(yīng)符合以下要求：

a）年齡≤35歲，且卵巢儲(chǔ)備功能較好；也可以根據(jù)卵巢儲(chǔ)備情況和個(gè)人意愿適當(dāng)放寬年齡限制；對(duì)于青春期前女童，可不限定年齡下限；

b）原發(fā)病預(yù)后較好；

c）由原發(fā)病及其治療導(dǎo)致的早發(fā)性卵巢功能不全發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)高；

d）能夠耐受腹腔鏡或開(kāi)腹卵巢組織取材手術(shù)；

e）距放化療開(kāi)始至少3 d。

7.2.2.2 對(duì)于卵巢惡性腫瘤或由于其他惡性腫瘤向卵巢轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)為中風(fēng)險(xiǎn)及以上的腫瘤患者，移植時(shí)應(yīng)謹(jǐn)慎充分討論評(píng)估。惡性腫瘤卵巢轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)見(jiàn)表1。

7.2.2.3 進(jìn)行卵巢組織凍存應(yīng)得到患者本人或其監(jiān)護(hù)人的知情同意。

7.2.3 適應(yīng)證 卵巢組織凍存適用于腫瘤、非腫瘤性疾病患者的生育力與卵巢內(nèi)分泌功能的保護(hù)，最佳適應(yīng)證是青春期前患者、性腺毒性治療無(wú)法延遲的患者以及患有激素依賴(lài)性腫瘤的患者，主要適應(yīng)證包括：

a）惡性疾?。ㄐ杌?、放療或骨髓移植），包括：白血病、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、乳腺癌、肉瘤、神經(jīng)母細(xì)胞瘤、某些盆腔腫瘤等；

b）非惡性疾病，包括：有骨髓移植指征的免疫性、代謝性、血液系統(tǒng)良性疾病，卵巢疾?。ㄈ缃唤缧月殉材[瘤、重度或復(fù)發(fā)性子宮內(nèi)膜異位癥、卵巢扭轉(zhuǎn)等），早發(fā)性卵巢功能不全高危人群（如家族史或基因檢測(cè)顯示有早發(fā)性卵巢功能不全高風(fēng)險(xiǎn)者、尚存卵巢功能的Turner綜合征等）。

7.2.4 禁忌證 卵巢組織凍存的禁忌證包括：

a）臨床檢查已明確有卵巢轉(zhuǎn)移或卵巢惡性腫瘤；

b）疾病晚期或惡病質(zhì)不能耐受手術(shù)；

c）已確定卵巢功能徹底衰退。

7.2.5 取材 可采用腹腔鏡進(jìn)行卵巢組織取材，應(yīng)盡量避開(kāi)黃體，使用冷刀，宜取一側(cè)或雙側(cè)卵巢體積的1/2以上（根據(jù)患者情況個(gè)體化制定取材量），不應(yīng)使用能量器械接觸卵巢，避免熱損傷，應(yīng)盡量保證所取卵巢組織的完整。取材過(guò)程應(yīng)符合附錄A.1的要求。

7.2.6 轉(zhuǎn)運(yùn) 手術(shù)取出的卵巢組織應(yīng)立即放入由卵巢組織凍存中心提供的無(wú)菌轉(zhuǎn)移液，使用專(zhuān)用轉(zhuǎn)運(yùn)箱，應(yīng)保持低溫4～8℃轉(zhuǎn)運(yùn)至卵巢組織凍存中心實(shí)驗(yàn)室，轉(zhuǎn)運(yùn)時(shí)間不應(yīng)超過(guò)24 h。為達(dá)到流程質(zhì)量控制，優(yōu)化患者管理與成本效益，組織的獲取可在當(dāng)?shù)剡M(jìn)行。卵巢組織的冷凍與儲(chǔ)存宜中心化。轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程應(yīng)符合附錄A.2的要求。

7.2.7 處理 卵巢組織的處理與冷凍應(yīng)在符合要求的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行。卵巢組織處理時(shí)，應(yīng)使用無(wú)菌手術(shù)刀、鑷小心去除髓質(zhì)，保存完整皮質(zhì)。處理后的卵巢組織厚度應(yīng)約為1 mm，每片大小約為4 mm×8 mm。處理完成的卵巢組織片應(yīng)立即放入冷凍保護(hù)液中預(yù)冷平衡20 min，后置于含冷凍保護(hù)液的凍存管中，開(kāi)始冷凍。

7.2.8 冷凍 慢速冷凍采用電腦程序化控制，使卵巢組織按照設(shè)定的速率階段性降溫至-140 ℃，后將凍存管置于-196 ℃液氮中儲(chǔ)存。

7.2.9 凍存 每個(gè)凍存管應(yīng)標(biāo)明患者姓名、出生日期及編碼，記錄儲(chǔ)存位置，放入液氮罐中。

7.3 凍存卵巢組織復(fù)蘇與移植

7.3.1 卵巢組織移植的時(shí)機(jī)與指征

7.3.1.1 移植時(shí)間宜根據(jù)患者的原發(fā)疾病治愈與否及臨床康復(fù)情況，并與患者及專(zhuān)科醫(yī)生充分溝通后根據(jù)個(gè)體情況確定。

7.3.1.2 移植指征 移植指征應(yīng)符合下列要求：

a）原發(fā)病緩解，患者出現(xiàn)潮熱、出汗等卵巢功能衰退的絕經(jīng)相關(guān)癥狀后；

b）血清卵泡刺激素≥25 IU/L，抗苗勒氏管激素lt;1.1 ng/mL；

c）距性腺毒性治療結(jié)束至少3～6個(gè)月。

7.3.2 移植前的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估與處理

7.3.2.1 移植前的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估 由于移植存在再次引入原發(fā)病的風(fēng)險(xiǎn)，中風(fēng)險(xiǎn)及以上患者（表1）在卵巢組織凍存前，應(yīng)先行接受治療，降低卵巢組織的攜癌風(fēng)險(xiǎn)。如果此類(lèi)患者有強(qiáng)烈意愿進(jìn)行卵巢組織凍存移植，應(yīng)在充分知情的前提下進(jìn)行多學(xué)科聯(lián)合會(huì)診，并采取多維度檢測(cè)手段，謹(jǐn)慎評(píng)估移植風(fēng)險(xiǎn)。

7.3.2.2 移植前的處理 在卵巢組織移植前后，為緩解絕經(jīng)癥狀，保護(hù)卵巢殘留卵泡功能，可加用某些療效確切的中藥或中成藥；對(duì)于非激素依賴(lài)性腫瘤患者，如宮頸鱗狀細(xì)胞癌，可聯(lián)合性激素治療，采用口服或經(jīng)皮途徑補(bǔ)充天然雌激素，有子宮的患者，需加用孕激素。對(duì)于激素依賴(lài)性腫瘤患者（如乳腺癌），雌激素是禁忌證，可服用不含雌激素的植物藥或中藥緩解癥狀。

7.3.2.3 移植前卵巢組織的活性評(píng)估 卵巢組織凍存移植前應(yīng)進(jìn)行組織存活率及卵泡活性的檢測(cè)。

7.3.3 凍存卵巢組織復(fù)蘇

7.3.3.1 將患者凍存管從液氮罐中取出，雙人核對(duì)患者信息。

7.3.3.2 將凍存管放入37 ℃水浴箱中，肉眼觀察凍存管中的冷凍保護(hù)液融解后立即取出凍存管。

7.3.3.3 取出組織片，依次放入不同梯度濃度的復(fù)蘇液中各15 min，搖勻。

7.3.3.4 復(fù)蘇同時(shí)準(zhǔn)備手術(shù)室，完成復(fù)蘇的卵巢組織片應(yīng)20 min內(nèi)送至手術(shù)室，移回患者體內(nèi)。

7.3.4 卵巢組織移植 卵巢組織移植分為原位移植（盆腔內(nèi)）與異位移植（盆腔外）。卵巢組織移植宜選擇原位移植，因各種原因無(wú)法進(jìn)行原位移植者，可考慮異位移植。原位移植可選擇在原有卵巢、腹膜袋等部位進(jìn)行，宜在卵巢外側(cè)的壁腹膜血供良好處做切口，造腹膜袋，將復(fù)蘇后的卵巢組織片放入，縫合。

7.3.5 移植后隨訪(fǎng)與監(jiān)測(cè)

7.3.5.1 移植后每月跟蹤隨訪(fǎng)、觀察分析患者移植后卵巢生殖內(nèi)分泌功能恢復(fù)情況，卵巢功能恢復(fù)后可每3～6個(gè)月隨訪(fǎng)1次。

7.3.5.2 移植后應(yīng)對(duì)下列指標(biāo)進(jìn)行監(jiān)測(cè)：

a）實(shí)驗(yàn)室內(nèi)分泌指標(biāo)，包括卵泡刺激素、抗苗勒管激素、促黃體生成素、雌二醇、孕酮等；

b）月經(jīng)恢復(fù)情況；

c）超聲監(jiān)測(cè)移植的卵巢中卵泡發(fā)育情況；

d）妊娠情況與結(jié)局。

7.3.5.3 一般在移植后3～6個(gè)月卵巢組織功能恢復(fù)，絕經(jīng)相關(guān)癥狀明顯緩解或消失，卵泡刺激素lt;25 IU/L，認(rèn)為是移植成功，卵巢功能恢復(fù)。

8 卵巢組織凍存移植技術(shù)在疾病中的應(yīng)用

8.1 乳腺癌 對(duì)于需輔助內(nèi)分泌治療的低復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)患者，經(jīng)多學(xué)科評(píng)估，在與患者充分溝通腫瘤風(fēng)險(xiǎn)與生育需求的基礎(chǔ)上，至少接受2～3年內(nèi)分泌治療后，可以慎重選擇卵巢組織移植后妊娠，患者分娩后宜繼續(xù)行內(nèi)分泌治療。

8.2 血液系統(tǒng)疾病

8.2.1 卵巢組織凍存移植技術(shù)可適用于因良惡性血液系統(tǒng)疾病需要緊急放化療的育齡期女性和需要放化療的青春期前女童。

8.2.2 對(duì)于在需要造血干細(xì)胞移植的良惡性血液系統(tǒng)疾病中適用卵巢組織凍存，應(yīng)在進(jìn)行超大劑量化療前進(jìn)行。

8.3 子宮內(nèi)膜異位癥

8.3.1 卵巢組織凍存移植技術(shù)可適用于卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫。

8.3.2 對(duì)于決定采用卵巢組織凍存移植技術(shù)的患者，在其子宮內(nèi)膜異位癥術(shù)前應(yīng)評(píng)估卵巢功能，術(shù)中應(yīng)考慮生育力保護(hù)，尤其是未婚或未育患者。

8.3.3 對(duì)于進(jìn)行了子宮內(nèi)膜異位癥手術(shù)的患者，如對(duì)其進(jìn)行卵巢組織凍存移植，卵巢組織取材時(shí)應(yīng)避開(kāi)子宮內(nèi)膜異位癥病灶及囊腫皮，以免影響凍存質(zhì)量，尤其對(duì)于多發(fā)子宮內(nèi)膜異位癥病灶患者，可能有不被發(fā)現(xiàn)的小病灶，應(yīng)注意甄別。

8.4 宮頸癌 對(duì)于需行盆腔放療的宮頸癌患者，除可采用卵巢移位術(shù)外，還可采用卵巢組織凍存保護(hù)患者的生育力與卵巢內(nèi)分泌功能。

附錄A（規(guī)范性附錄）《卵巢組織取材與轉(zhuǎn)運(yùn)程序和要求》，請(qǐng)掃描正文首頁(yè)二維碼。

主要起草單位：首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京婦產(chǎn)醫(yī)院、中國(guó)人體健康科技促進(jìn)會(huì)生育力保護(hù)與保存專(zhuān)業(yè)委員會(huì)

主要起草人：阮祥燕（首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京婦產(chǎn)醫(yī)院）、陰赪宏（首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京婦產(chǎn)醫(yī)院）、代蔭梅（首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京婦產(chǎn)醫(yī)院）、孔為民（首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京婦產(chǎn)醫(yī)院）、賈嬋維（首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京婦產(chǎn)醫(yī)院）、杜娟（首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京婦產(chǎn)醫(yī)院）、金鳳羽（首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京婦產(chǎn)醫(yī)院）、谷牧青（首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京婦產(chǎn)醫(yī)院）、程姣姣（首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京婦產(chǎn)醫(yī)院）、鞠蕊（首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京婦產(chǎn)醫(yī)院）、張建（首都兒科研究所附屬兒童醫(yī)院）、倪鑫（首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京兒童醫(yī)院）、武玉睿（首都兒科研究所附屬兒童醫(yī)院）、師曉東（首都兒科研究所附屬兒童醫(yī)院）、楊欣（北京大學(xué)人民醫(yī)院）、馮力民（首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京天壇醫(yī)院）、馬飛（中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤醫(yī)院）、張煒（復(fù)旦大學(xué)附屬婦產(chǎn)科醫(yī)院）、李梅（山東大學(xué)第二醫(yī)院）、李曉冬（河北醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院）、翟軍（鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院）、鹿群（首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京朝陽(yáng)醫(yī)院）、胡麗娜（重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院）、楊菁（武漢大學(xué)人民醫(yī)院）、裴秀英（寧夏醫(yī)科大學(xué)）、王彬彬（國(guó)家衛(wèi)生健康委科學(xué)技術(shù)研究所）、滕曉明（同濟(jì)大學(xué)附屬第一婦嬰保健院）、李雷（中國(guó)科學(xué)院理化技術(shù)研究所）、張慧英（天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院）、梁曉雷（北京燕創(chuàng)生物醫(yī)學(xué)工程研究院）

參考文獻(xiàn)

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（收稿日期：2023-04-25）

（本文編輯：趙躍翠）