AKT3與NCAPH在乳腺癌中的表達(dá)及臨床病理意義

【摘要】 目的：探討AKT3與NCAPH在非特殊類型乳腺癌中的表達(dá)及臨床病理意義。方法：以贛州市婦幼保健院2016年1月—2022年3月收治的非特殊類型乳腺癌患者233例為研究對象，采用免疫組化方法分為5種不同分子亞型乳腺癌，其中：管腔A型36例，管腔B型98例，HER2陽性[激素受體（hormone receptor，HR）陽性]型32例，HER2陽性（HR陰性）型45例，三陰性22例。有乳腺腫瘤組織患者納為試驗組（n=233），癌旁是正常乳腺組織患者納為對照組（n=52）。檢測AKT3與NCAPH表達(dá)情況，并結(jié)合臨床病理參數(shù)進(jìn)行分析。結(jié)果：AKT3與NCAPH在乳腺癌腫瘤組織的細(xì)胞質(zhì)和/或細(xì)胞核中陽性表達(dá)。AKT3和NCAPH陽性率分別為31.8%（74/233）和79.0%（184/233），明顯高于癌旁正常乳腺組織AKT3的陽性率3.8%（2/52）和NCAPH的陽性率5.8%（3/52），差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（Plt;0.01）。不同分子亞型乳腺癌AKT3陽性率比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（Plt;0.05）。AKT3陽性率和NCAPH陽性率在不同組織學(xué)分級、病理分期、Ki67、腫瘤直徑、脈管轉(zhuǎn)移和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（Pgt;0.05）；有神經(jīng)侵犯患者的AKT3陽性率及NCAPH陽性率均高于無神經(jīng)侵犯，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（Plt;0.05）。結(jié)論：AKT3與NCAPH在乳腺癌中高表達(dá)，提示其可能與腫瘤的發(fā)生發(fā)展有關(guān)，可為乳腺癌的診斷及治療提供新的依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】 乳腺癌 AKT3 NCAPH

Expression and Clinicopathological Significance of AKT3 and NCAPH in Breast Cancer/LIAO Linhong， ZENG Fansheng， XIAO Dequan. //Medical Innovation of China， 2023， 20（24）： 0-072

[Abstract] Objective： To investigate the expression and clinicopathological significance of AKT3 and NCAPH in non-specific breast cancer. Method： A total of 233 patients with non-special types of breast cancer admitted to Ganzhou Women and Children's Health Care Hospital from January 2016 to March 2022 were selected as the study objects. By immunohistochemical method， breast cancer was divided into five different molecular subtypes， including 36 cases of luminal A type， 98 cases of luminal B type， 32 cases of HER2 positive [hormone receptor （HR） positive] type， 45 cases of HER2 positive （HR negative） type and 22 cases of triple-negative type. Patients with breast tumor tissue were included in the experimental group （n=233）， and patients with normal breast tissue adjacent to cancer were included in the control group （n=52）. The expressions of AKT3 and NCAPH were detected and analyzed according to clinicopathological parameters. Result： AKT3 and NCAPH were positively expressed in cytoplasm and/or nucleus of breast cancer tumor tissue. The positive rates of AKT3 and NCAPH respectively was [31.8% （74/233）] and [79.0% （184/233）]， which were significantly higher than the positive rates of AKT3 3.8% （2/52） and NCAPH 5.8%（3/52） in normal breast tissue adjacent to cancer， the differences were statistically significant （Plt;0.01）. The positive rate of AKT3 in different molecular subtypes of breast cancer was significantly different （Plt;0.05）. There were no significant differences in the positive rate of AKT3 and NCAPH among different histological grade， pathological stage， Ki67， tumor diameter， vascular metastasis and lymph node metastasis （Pgt;0.05）. The positive rates of AKT3 and NCAPH in patients with neuroaggression were higher than those without neuroaggression， the differences were statistically significant （Plt;0.05）. Conclusion： The high expression of AKT3 and NCAPH in breast cancer suggests that AKT3 and NCAPH may be related to the occurrence and development of tumor， which can provide a new basis for the diagnosis and treatment of breast cancer.

[Key words] Breast cancer AKT3 NCAPH

First-author's address： Ganzhou Women and Children's Health Care Hospital， Jiangxi Province， Ganzhou 341000， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2023.24.016

乳腺癌是目前女性最常見的惡性腫瘤，嚴(yán)重威脅著全世界婦女的生命。據(jù)統(tǒng)計，在所有新發(fā)癌癥診斷中，乳腺癌占11.7%，在女性所有癌癥相關(guān)性死亡中占6.9%[1-2]。40歲以下乳腺癌女性研究中發(fā)現(xiàn)，在20～29歲乳腺癌女性中，年死亡率每年遞增2.8%[3]。乳腺癌病因多種，機(jī)制不清且十分復(fù)雜，與個人的生活習(xí)慣、環(huán)境狀況、基因遺傳等密切相關(guān)，因此，研究發(fā)現(xiàn)有效的生物標(biāo)志物對預(yù)防乳腺癌或確定新的治療靶點(diǎn)顯得至關(guān)重要。我們采用免疫組化方法檢測233例乳腺癌患者AKT3與NCAPH的表達(dá)，分析AKT3與NCAPH的表達(dá)情況及與不同亞型乳腺癌臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系，為乳腺癌早期診斷和治療提供進(jìn)一步的依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取贛州市婦幼保健院2016年1月—2022年3月233例非特殊型乳腺癌患者為研究對象。納入標(biāo)準(zhǔn)：首發(fā)，術(shù)前均未接受任何治療，標(biāo)本為粗針穿刺或手術(shù)切除獲?。灰罁?jù)文獻(xiàn)[4]進(jìn)行乳腺癌分子分型?；颊吣挲g24～85歲，平均（48.06±10.83）歲；分子分型：管腔A型36例，管腔B型98例，HER2陽性（HR陽性）型32例，HER2陽性（HR陰性）型45例，三陰性22例；組織學(xué)分級：Ⅰ級34例，Ⅱ級91例，Ⅲ級108例。有乳腺腫瘤組織患者納為試驗組（n=233），癌旁是正常乳腺組織患者納為對照組（n=52）。研究經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會審批，患者均知情同意。

1.2 方法

1.2.1 試劑 濃縮型兔抗AKT3多克隆抗體、濃縮型兔抗NCAPH多克隆抗體均購自Proteintech公司，抗體稀釋液、二抗試劑盒和DAB顯色液均系北京中杉金橋產(chǎn)品。

1.2.2 AKT3與NCAPH表達(dá)的檢測 選取經(jīng)10%福爾馬林固定液常規(guī)固定后的腫瘤組織，取材后置于包埋盒內(nèi)，經(jīng)脫水、透明、浸蠟和包埋，制作成石蠟標(biāo)本。石蠟標(biāo)本切片厚4 μm，濃縮型兔抗AKT3多克隆抗體、濃縮型兔抗NCAPH多克隆抗體均按1∶100稀釋成工作液，免疫組織化學(xué)染色采用Envision法，具體步驟按說明書操作。用PBS代替一抗作陰性對照，用已知陽性組織切片作陽性對照。

1.2.3 結(jié)果判定 計數(shù)細(xì)胞質(zhì)上和/或細(xì)胞核內(nèi)黃色或棕黃色顆粒狀物的陽性染色細(xì)胞數(shù)，計算腫瘤細(xì)胞陽性細(xì)胞數(shù)在所有腫瘤細(xì)胞數(shù)中的占比，對表達(dá)進(jìn)行分析，結(jié)果判斷：lt;10%為陰性，10%～100%為陽性。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

所有數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS 20.0統(tǒng)計軟件處理。計數(shù)資料以率（%）表示，比較采用字²檢驗或Fisher確切概率法。Plt;0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 AKT3與NCAPH在乳腺腫瘤組織和癌旁正常乳腺組織中的表達(dá)

AKT3與NCAPH在癌旁正常乳腺組織中弱表達(dá)或不表達(dá)，在大部分乳腺腫瘤組織的細(xì)胞質(zhì)和/或細(xì)胞核中陽性表達(dá)，呈棕黃色。AKT3在乳腺腫瘤組織中陽性率為31.8%（74/233），顯著高于癌旁正常乳腺組織陽性率3.8%（2/52），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（字²=16.938，Plt;0.01）；NCAPH在乳腺腫瘤組織中陽性率為79.0%（184/233），顯著高于癌旁正常乳腺組織陽性率5.8%（3/52），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（字²=121.713，Plt;0.01）。見圖1。

注：a，乳腺腫瘤組織HE染色，×400；b，AKT3在乳腺腫瘤組織中陽性表達(dá)，EnVision法，×400；c，NCAPH在乳腺腫瘤組織中陽性表達(dá)，EnVision法，×400；d，癌旁正常乳腺組織HE染色，×400；e，AKT3在癌旁正常乳腺組織中陰性表達(dá)，EnVision法，×400；f，NCAPH在癌旁正常乳腺組織中陰性表達(dá)，EnVision法，×400。

2.2 AKT3、NCAPH在不同分子亞型乳腺癌腫瘤組織中的表達(dá)

AKT3在36例管腔A型、98例管腔B型、32例HER2陽性（HR陽性）、45例HER2陽性（HR陰性）和22例三陰性乳腺癌患者腫瘤組織中的陽性率分別為16.7%、29.6%、9.4%、46.7%和68.2%，AKT3在不同分子亞型乳腺癌腫瘤組織中的陽性率比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（Plt;0.01）。管腔A型AKT3陽性率與HER2陽性（HR陰性）、三陰性AKT3陽性率比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（Plt;0.01）。NCAPH在36例管腔A型、98例管腔B型、32例HER2陽性（HR陽性）、45例HER2陽性（HR陰性）和22例三陰性乳腺癌患者腫瘤組織中陽性率分別為77.8%、74.5%、84.4%、86.7%和77.3%，NCAPH在不同分子亞型乳腺癌患者腫瘤組織中的陽性率比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.489）。見表1。

2.3 AKT3、NCAPH在不同臨床病理參數(shù)乳腺癌腫瘤組織中的表達(dá)

AKT3陽性率和NCAPH陽性率在不同組織學(xué)分級、病理分期、Ki67、腫瘤直徑、脈管轉(zhuǎn)移和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（Pgt;0.05）；有神經(jīng)侵犯患者的AKT3陽性率及NCAPH陽性率均高于無神經(jīng)侵犯，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（Plt;0.05）。見表2。

3 討論

乳腺癌是導(dǎo)致女性癌癥相關(guān)死亡的主要原因。依據(jù)乳腺癌中雌激素受體（ER）、孕酮受體（PR）及人表皮生長因子受體2（HER2）的存在，2021年CSCO《乳腺癌診療指南》指出乳腺癌主要分為5種分子亞型：管腔A型、管腔B型、HER2陽性（HR陽性）型、HER2陽性（HR陰性）型和三陰性[4-5]，其中約90%的乳腺癌患者在明確診斷時尚未發(fā)生轉(zhuǎn)移，臨床對非轉(zhuǎn)移性乳腺癌治療目的是根治腫瘤并預(yù)防腫瘤復(fù)發(fā)[6]。乳腺癌進(jìn)行腫瘤切除后，隨后依據(jù)乳腺癌不同亞型進(jìn)行內(nèi)分泌治療、化療和聯(lián)合化療[7]，但三陰性乳腺癌易復(fù)發(fā)，不過Ⅰ期的5年生存率可達(dá)85%[6]。尋找到一個能早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷、特異性強(qiáng)、靈敏度高的腫瘤分子標(biāo)志物對于改善乳腺癌患者的預(yù)后具有重要的臨床和現(xiàn)實(shí)意義，同時也能為新型靶向治療技術(shù)提供新的依據(jù)。

AKT是一種絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，稱之為蛋白激酶B（protein kinase B，PKB）。目前發(fā)現(xiàn)AKT家族主要包括AKT1、AKT2和AKT3三種亞型。PI3K/AKT信號通路是調(diào)控人類腫瘤細(xì)胞增殖及侵襲轉(zhuǎn)移的重要機(jī)制之一，它參與人類多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程。研究發(fā)現(xiàn)AKT3激酶分子在基底樣三陰性乳腺癌中發(fā)揮重要作用，下調(diào)AKT3的表達(dá)后，三陰性乳腺癌細(xì)胞的生長增殖能力受到顯著抑制[8]。AKT3可能通過特定分子的介導(dǎo)參與ErbB2陽性乳腺癌發(fā)生發(fā)展的過程，使用抗ErbB2藥物治療不敏感的乳腺癌患者中常伴有AKT3的突變[9-10]。本研究發(fā)現(xiàn)AKT3在乳腺癌腫瘤組織中陽性表達(dá)高于癌旁正常乳腺組織，提示AKT3上調(diào)與腫瘤的發(fā)生關(guān)系密切。AKT3的表達(dá)與乳腺癌的組織學(xué)分級、病理分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均無相關(guān)性，但與神經(jīng)侵犯密切相關(guān)，提示AKT3可能參與腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移過程。這與先前研究報道不完全相同，郝鑫等[11]研究發(fā)現(xiàn)乳腺浸潤性導(dǎo)管癌中，AKT表達(dá)水平與臨床分期有關(guān)，與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織分級、年齡和腫瘤直徑無關(guān)。本研究結(jié)果還顯示AKT3在不同亞型乳腺癌腫瘤組織中存在表達(dá)差異。AKT3在HER2陽性（HR陰性）和三陰性乳腺癌中明顯高表達(dá)，與先前研究報道AKT3在ER陰性ErbB2+乳腺癌和三陰性乳腺癌明顯高表達(dá)[9]結(jié)果相似，提示AKT3增高可能是ER陰性乳腺癌更具侵襲性的臨床表現(xiàn)，其治療靶向性可能為這類腫瘤亞型提供新的治療選擇。

非SMC凝聚素Ⅰ復(fù)合物亞基H（NCAPH）是有絲分裂期間染色體的結(jié)構(gòu)成分[12]。NCAPH屬于Barr家族的一員，和其他亞基形成復(fù)合凝聚素Ⅰ與染色體中SMC2和SMC4相結(jié)合以調(diào)節(jié)染色體基因組。SMC2和SMC4具有維持結(jié)構(gòu)功能，在維持細(xì)胞的正常生存中起著重要作用，也起著調(diào)控和維持有絲分裂過程中染色體的結(jié)構(gòu)正常的聚合和分離[13]。此外，NCAPH可能還參與人類腫瘤的發(fā)生發(fā)展和侵襲轉(zhuǎn)移的過程。在子宮內(nèi)膜癌中NCAPH表達(dá)顯著上調(diào)，作為癌基因促進(jìn)腫瘤進(jìn)展[14]。在乳腺癌細(xì)胞MCF-7中NCAPH高表達(dá)能促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲[15]。敲低NCAPH可抑制非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)細(xì)胞周期停滯，并阻止細(xì)胞遷移和侵襲[16]。Oncomine和GOBO數(shù)據(jù)庫中的總結(jié)性分析顯示，NCAPH在乳腺癌中高表達(dá)；NCAPH可能在PI3K/AKT/SGK信號通路的激活中起關(guān)鍵作用，通過促進(jìn)AKT的表達(dá)，調(diào)控參與腫瘤的發(fā)生[17]。本研究發(fā)現(xiàn)NCAPH在乳腺癌中的表達(dá)明顯高于癌旁正常乳腺組織，NCAPH的表達(dá)與神經(jīng)侵犯密切相關(guān)，與乳腺癌的組織學(xué)分級、病理分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均無相關(guān)性，與文獻(xiàn)[9，17]報道基本一致，提示NCAPH表達(dá)增強(qiáng)可能導(dǎo)致腫瘤免疫逃逸從而促進(jìn)乳腺癌的發(fā)生，在乳腺癌的發(fā)生發(fā)展中可能起著重要作用。我們的研究結(jié)果顯示NCAPH的表達(dá)水平在乳腺癌不同亞型中無明顯差異，這與之前的研究報道不完全相同，Lu等[17]研究發(fā)現(xiàn)NCAPH在三陰性乳腺癌中的表達(dá)明顯高于ER陽性和HER2陽性亞型乳腺癌。NCAPH表達(dá)差異可能是由于抗體選擇及檢測方法不同所造成，我們擬進(jìn)一步對更多樣本進(jìn)行相關(guān)研究結(jié)果分析。

PI3K/AKT是一條重要的信號通路，參與調(diào)控人類腫瘤細(xì)胞增殖及侵襲轉(zhuǎn)移和人類多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程[18]。通過PI3K/AKT通路能促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞競爭性生長、轉(zhuǎn)移和耐藥性[19]。NCAPH參與PI3K/AKT信號通路的激活，沉默NCAPH能顯著降低AKT的磷酸化水平，針對NCAPH的治療可能具有同時抑制AKT的潛力[20]。

總之，AKT3和NCAPH在乳腺癌中高表達(dá)，與腫瘤的神經(jīng)侵犯密切相關(guān)，AKT3和NCAPH在乳腺癌的發(fā)生發(fā)展中起著重要作用，為乳腺癌的診斷和靶向治療提供了新的策略。

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