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    基于UPLC-Q-TOF-MS/MS 技術(shù)對藏藥寬筋藤中生物堿類成分的快速辨識

    2023-12-25 13:19:24張武崗郎一帆楊武亮楊世林陳海芳馮育林
    中草藥 2023年24期
    關(guān)鍵詞:分子離子巴馬小檗

    張武崗,郎一帆,姚 云,楊武亮,楊世林,陳海芳*,馮育林*

    1. 江西中醫(yī)藥大學 中藥固體制劑制造技術(shù)國家工程研究中心,江西 南昌 330004

    2. 江西中醫(yī)藥大學 現(xiàn)代中藥制劑教育部重點實驗室,江西 南昌 330004

    寬筋藤(譯名勒哲)為防已科植物中華青牛膽Tinosporasinensis(Lour.) Merr.的干燥莖藤,收載于《藏藥標準》,具有舒筋活絡(luò)、祛風止痛等功效,常用于治療跌打損傷、風濕痹痛等[1]?,F(xiàn)代臨床研究表明,寬筋藤對風濕性關(guān)節(jié)炎具有良好的治療效果[2-4],生物堿是其主要的抗炎活性成分,小檗堿[5-6]、藥根堿[7]等能夠明顯改善大鼠類風濕性關(guān)節(jié)炎癥狀。但是,目前對寬筋藤中生物堿類成分的報道僅有非洲防己堿、藥根堿、四氫巴馬汀、小檗堿、巴馬汀等[8-13],未有全面分析,為探尋寬筋藤中更多治療風濕性關(guān)節(jié)炎的生物堿類成分,本研究采用UPLC-Q-TOFMS/MS 技術(shù)分析寬筋藤中生物堿類成分,為寬筋藤的后續(xù)研究開發(fā)提供參考。

    1 儀器與材料

    1.1 儀器與設(shè)備

    Tripie TOF 5600 Plus 型高分辨質(zhì)譜儀、Analyst TF1.6、peakview 1.2 數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)(美國Sciex 公司);LC-30A 型超高效液相色譜儀,包括LC-30AD高壓輸液泵、CBM-20A 系統(tǒng)控制器、SIL-30AC 自動進樣器、DUG-20A5 在線脫氣機、CTO-30A 柱溫箱(日本島津公司)。

    1.2 材料與試劑

    寬筋藤(批號20150329)購自成都荷花中藥材專業(yè)市場,經(jīng)江西中醫(yī)藥大學徐艷琴教授鑒定為防己科植物中華青牛膽T.sinensis(Lour.)Merr.的干燥莖藤。甲醇、乙腈(色譜純)購自美國Thermo Fisher Scientific 公司;蒸餾水由屈臣氏集團提供;其余試劑為分析純。對照品小檗堿(批號19072501)、巴馬?。ㄅ?9022604)、四氫巴馬?。ㄅ?6032710)、黃柏堿(批號17112110)、木蘭花堿(批號18071701)、木蘭箭毒堿(批號20092304),以上對照品質(zhì)量分數(shù)均大于98%,購自成都曼斯特生物科技公司;鹽酸、三氯甲烷、濃氨水、無水乙醇均為分析級,購自成都科隆化學品有限公司;地塞米松(批號C100916501)購自上海麥克林生化科技有限公司;脂多糖(批號017M4112V)購自美國Sigma 公司;胎牛血清(FBS,批號233473CP)、DEME 培養(yǎng)基(批號L110KJ)購自美國Gibco 公司;一氧化氮檢測試劑盒(批號20220312)購自南京建成生物工程研究所。

    2 方法

    2.1 對照品溶液的制備

    分別精密稱定各對照品適量,用甲醇溶解制備對照品儲備液。精密吸取各對照品儲備液適量,于10 mL 量瓶中,加甲醇定容至刻度,搖勻,得小檗堿、巴馬汀、四氫巴馬汀、黃柏堿、木蘭花堿、木蘭箭毒堿質(zhì)量濃度分別為45.76、19.31、31.23、26.18、25.76 μg/mL 的混合對照品溶液。

    2.2 供試品溶液的制備

    將寬筋藤藥材30 g 置于圓底燒瓶中,加入10倍(300 mL)70%乙醇,加熱回流提取2 次,每次1 h,合并提取液,減壓濃縮得到1.92 g 浸膏。取浸膏加20 mL 2%鹽酸水溶液,攪碎攪拌,放置4 h,濾過,濾液加濃氨水調(diào)PH 至9~10,氯仿萃取,回收氯仿,得寬筋藤生物堿0.12 g。

    2.3 液相色譜條件

    采用Waters UPLC C18色譜柱(100 mm×2.1 mm,1.7 μm),流動相為0.1%甲酸水(A)-乙腈(B);梯度洗脫:0.01~5 min,5%~8% B;5~20 min,8%~15% B;20~25 min,15%~30% B;25~38 min,30%~95% B;38~38.01 min,95%~5% B;38.01~40 min,5% B。體積流量0.3 mL/min,柱溫30 ℃,進樣量5 μL。

    2.4 質(zhì)譜條件

    使用電噴霧離子源(ESI),正離子模式,質(zhì)量掃描范圍為m/z100~1250;噴霧電壓4500 V;離子化溫度500 ℃;碰撞能量35 eV;氣簾氣206.85 kPa;霧化器和輔助氣均為344.75 kPa;去簇電壓100 V;數(shù)據(jù)采集時間40 min。

    2.5 數(shù)據(jù)處理

    采用AB Sciex 公司的軟件PeakView 1.6 中的XIC Manager、Mass Calculators 和Formula Finder功能,對UPLC-Q-TOF-MS/MS 采集的數(shù)據(jù)進行處理。

    2.6 抗炎活性研究

    2.6.1 細胞活力實驗 采用CCK-8 法檢測寬筋藤生物堿對RAW264.7 細胞的毒性。取對數(shù)生長期的RAW264.7 細胞用含10% FBS 培養(yǎng)液的DMEM 培養(yǎng)基調(diào)整細胞密度至1×104個/mL,接種于96 孔板中,將含不同藥物濃度寬筋藤生物堿的細胞培養(yǎng)液以100 μL/孔加入96 孔板中,另設(shè)對照組中加入無藥物的細胞培養(yǎng)液,每組6 個復(fù)孔。于37 ℃、5% CO2培養(yǎng)24 h 后,棄去上清液加入10%的CCK-8 溶液,每孔100 μL,于酶標儀450 nm 處測定吸光度(A)值,計算細胞存活率。

    2.6.2 抗炎活性檢測 采用Griess 法測定寬筋藤生物堿對脂多糖誘導(dǎo)的RAW264.7 細胞產(chǎn)生一氧化氮的抑制作用。取對數(shù)生長期的RAW264.7 細胞接種于96 孔板中(5×104個/孔),37 ℃、5% CO2條件下培養(yǎng)24 h,棄去舊培養(yǎng)基,給藥組分別加入100 μL 寬筋藤生物堿(15.63、31.25、62.50、125.00 μg/mL)的DMEM 培養(yǎng)基,同時設(shè)置對照組(僅培養(yǎng)液)、模型組(僅培養(yǎng)液)和地塞米松(40 μmol/L 地塞米松+培養(yǎng)液)組,培養(yǎng)1 h 后,除對照組外,其余各組加入100 μL 的脂多糖(1 μg/mL)溶液,繼續(xù)培養(yǎng)24 h 后,每孔吸取50 μL 上清液于新的96 孔板中,先后加入Griess I 液50 μL 與Griess II 液50 μL,用酶標儀在540 nm 處測其A值,計算一氧化氮抑制率。

    3 結(jié)果

    3.1 生物堿成分的分析鑒別

    為便于對寬筋藤生物堿的化學成分進行分析,首先從CNKI、GoogleScholar、scifinder 等數(shù)據(jù)庫中檢索寬筋藤化學成分,再通過 chemspider、chembook、massbank、Pubmed 數(shù)據(jù)庫等獲取對應(yīng)成分的化學成分信息,包括化合物的名稱、分子式、相對分子質(zhì)量等信息,以此建立寬筋藤的生物堿化合物數(shù)據(jù)庫。在此基礎(chǔ)上,通過 UPLC-QTOF-MS/MS 正離子模式共檢測出89 個化合物,鑒定出73 個生物堿,見表1,包括12 個原小檗堿型生物堿、23 個四氫原小檗堿型生物堿、20 個芐基異喹啉類生物堿、9 個阿樸啡類生物堿、9 個其他類生物堿。寬筋藤提取液基峰圖(BPI)如圖1所示。

    表1 寬筋藤生物堿成分鑒定結(jié)果Table 1 Results of identification of alkaloid constituents of Tinospora sinensis

    續(xù)表1

    續(xù)表1

    圖1 正離子模式下寬筋藤提取物的基峰圖Fig. 1 BPI chromatogram of the Tinospora sinensis extracts in positive mode

    3.2 原小檗堿類生物堿

    原小檗堿類生物堿由于碳碳單鍵的存在,使母核很容易失去2 個氫而形成穩(wěn)定的大π 共軛系統(tǒng),所以原小檗堿類生物堿的母核一般不會發(fā)生裂解,主要碎片離子是由小分子取代基的掉落形成,很少存在低于m/z230 的產(chǎn)物離子。當取代基包含2 個或多個甲氧基時,特征碎片離子為 [M-CH4]+、[M-CH3]+和 [M-2CH3]+,如小檗堿和巴馬汀。結(jié)合碎片離子及文獻,共鑒定出原小檗堿類生物堿共12 個,分別為化合物26、55、60、62、64、70、73、77、79、80、82 和83。

    化合物55 為小檗堿,分子式為C20H18NO4,在正離子模式下,準分子離子峰為m/z336.123 8 [M]+。小檗堿含有鄰二甲氧基,產(chǎn)生了特征碎片離子m/z321.099 6 [M-CH3]+、320.091 6 [M-CH4]+、306.077 6 [M-2CH3]+,在二級質(zhì)譜中還可以觀察到由m/z320.091 6 [M-CH4]+相繼失去CO 和CH3產(chǎn)生的碎片離子m/z292.096 2 [M-CH4-CO]+、277.074 1 [M-CH4-CO-CH3]+和249.078 5 [MCH4-2CO-CH3]+。其裂解途徑見圖2。

    圖2 小檗堿的MS/MS 圖與裂解途徑Fig. 2 MS/MS spectrogram and fragmentation pathway of berberine

    化合物80 為巴馬汀,分子式為C21H22NO4,在正離子模式下,準分子離子峰為m/z352.153 9[M]+。在二級質(zhì)譜中,可以觀察到特征碎片離子m/z336.122 8 [M-CH4]+,以及由碎片離子m/z336.122 8 [M-CH4]+相繼失去CO 和CH4的碎片離子m/z308.128 3 [M-CH4-CO]+、292.097 4 [M-2CH4-CO]+。其裂解途徑見圖3。

    圖3 巴馬丁的MS/MS 圖與裂解途徑Fig. 3 MS/MS spectrogram and fragmentation pathway of palmatine

    化合物70 和73:化合物70,在正離子模式下,準分子離子峰為m/z338.138 0 [M]+,分子式為C20H20NO4。在二級質(zhì)譜中,可以觀察到特征碎片離子m/z323.115 6 [M-CH3]+和m/z322.107 4 [MCH4]+,表明該化合物取代基包含2 個或多個甲氧基。同樣可以觀察到丟失了CH3和CH4的碎片離子m/z307.084 9 [M-CH4-CH3]+以及丟失了CH4、CH3和CO 的碎片離子m/z279.089 3 [M-CH4-CH3-CO]+,結(jié)合文獻報道[18,21,24,26,29]推測化合物70 為非洲防己堿,可能的裂解途徑見圖4。化合物73 的二級碎片為m/z338.138 1, 323.115 7, 322.107 1, 307.084 3, 294.112 2, 279.089 0, 250.086 4,其二級碎片信息與非洲防己堿的二級碎片相同,失去了一系列的CH4、CH3和CO。根據(jù)參考文獻及此類化合物的裂解規(guī)律,推測化合物73 為藥根堿。

    圖4 非洲防己堿的MS/MS 圖與裂解途徑Fig. 4 MS/MS spectrogram and fragmentation pathway of columbamine

    3.3 四氫原小檗堿類生物堿

    該類生物堿與原小檗堿類生物堿類似,但無剛性C 環(huán)結(jié)構(gòu),在質(zhì)譜中易發(fā)生RDA 裂解并繼續(xù)丟失一些取代基,很少存在質(zhì)荷比高于m/z200 的碎片離子。RDA 裂解產(chǎn)生高峰度的含氮碎片可作為四氫小檗堿型生物堿的特征碎片,特征碎片離子與取代基的位置和類型有關(guān)。當在同一環(huán)上分別具有2個甲氧基、亞甲二氧基、1 個甲氧基和1 個羥基時,特征碎片離子分別為m/z192、176、178,如四氫巴馬汀和黃柏堿。結(jié)合碎片離子及文獻,共鑒定出四氫原小檗堿類生物堿23 個,分別為化合物9、10、18、21~23、25、30、31、37、38、41、42、44、49、51、53、56、57、65、67、68 和71。

    化合物67 為四氫巴馬汀,分子式為C21H25NO4,在正離子模式下,準分子離子峰為m/z356.185 6[M+H]+。四氫巴馬汀在同一環(huán)上含有2 個甲氧基,會產(chǎn)生峰度較高的特征碎片離子m/z192.101 5 [MC10H12O2]+,在二級質(zhì)譜中還可以觀察到由碎片離子m/z192.1014 5 [M-C10H12O2]+丟失CH3后的碎片離子m/z177.078 1 [M-C10H12O2-CH3]+。其裂解途徑見圖5。

    化合物38 為黃柏堿,分子式為C20H24NO4,在正離子模式下,準分子離子峰為m/z342.169 9 [M]+。黃柏堿在同一環(huán)上含有2 個甲氧基,會產(chǎn)生峰度較高的特征碎片離子m/z192.102 5 [M-C9H10O2]+,在二級質(zhì)譜中還可以觀測到由碎片離子m/z192.102 5[M-C9H10O2]+相繼失去CH2和CH3的碎片離子m/z178.086 1 [M-C9H10O2-CH2]+和碎片離子m/z163.063 0 [M-C9H10O2-CH2-CH3]+。其裂解途徑見圖6。

    圖6 黃柏堿的MS/MS 圖與裂解途徑Fig. 6 MS/MS spectrogram and fragmentation pathway of phellodendrine

    化合物23 和44:化合物23,在正離子模式下,準分子離子峰為m/z342.170 6 [M]+,分子式為C20H24NO4。在二級質(zhì)譜中,觀察到峰度較高的碎片離子m/z192.102 0,表明該化合物在同一環(huán)上含有2 個甲氧基,且母核發(fā)生了裂解,碎片離子m/z177.085 9 比192.102 0 少15,推斷為碎片離子m/z192.102 0 失去了中性碎片CH3。同時,化合物44的二級碎片為342.170 3, 192.102 3, 177.085 7,與化合物23 的二級碎片離子相同,因此推測化合物23和44 為同分異構(gòu)體,為四氫呋喃非洲防己堿或四氫呋喃藥根堿。

    3.4 阿樸啡類型生物堿

    該類生物堿具有聯(lián)苯型四環(huán)結(jié)構(gòu),與其他生物堿在結(jié)構(gòu)上存在較大的差異,若結(jié)構(gòu)中存在氮甲基,在質(zhì)譜中會產(chǎn)生 [M-NH2CH3]+、[M-NH(CH3)2]+等特征碎片離子,同時也會出現(xiàn)CH3、CH4的分子丟失。阿樸啡類生物堿只有側(cè)鏈的斷裂與重組,不會形成m/z較低、豐度較大的碎片離子,如木蘭花堿。結(jié)合碎片離子及文獻,共鑒定出阿樸啡類生物堿9 個,分別為化合物15、28、35、40、50、58、76、88 和89。

    化合物28 為木蘭花堿,分子式為C20H24NO4,在正離子模式下,準分子離子峰為m/z342.169 9[M]+。木蘭花堿中含有NH(CH3)2結(jié)構(gòu),會產(chǎn)生特征離子碎片m/z297.112 0 [M-NH(CH3)2]+,在二級質(zhì)譜中,在二級質(zhì)譜中還可以觀察到由碎片離子[M-NH(CH3)2]+相繼丟失CH3和OH 產(chǎn)生的碎片離子m/z282.088 9 [M-NH(CH3)2-CH3]+、265.085 5[M-NH(CH3)2-CH3-OH]+,碎片離子m/z265.085 5 在斷裂的過程中會發(fā)生異構(gòu)化,繼續(xù)失去CO 和CH3形成的碎片離子m/z237.091 0 [MNH (CH3)2-CH3-OH-CO]+和m/z222.067 5 [MNH (CH3)2-CH3-OH-CO-CH3]+。其裂解途徑見圖7。

    圖7 木蘭花堿的MS/MS 譜圖與裂解途徑Fig. 7 MS/MS spectrogram and fragmentation pathway of magnoflorine

    化合物40、50 和76:化合物40,在正離子模式下,準分子離子峰為m/z296.166 4 [M]+,分子式為C19H22NO2。在二級質(zhì)譜中,觀察到特征碎片離子m/z251.108 2 [M-NH(CH3)2]+,碎片離子m/z251.108 2, 236.082 6, 219.079 2, 191.084 5,依次降低15、17、28,推測依次掉落CH3、OH 和CO,與木蘭花堿掉落順序一致。同時,化合物50 和76 碎片離子與化合物40 一致,因此推測化合物40、50 和76 為同分異構(gòu)體,為annonamine 或其異構(gòu)體。

    3.5 芐基異喹啉類生物堿

    該類生物堿易出現(xiàn)氮甲基結(jié)構(gòu),同樣在質(zhì)譜中會產(chǎn)生 [M-45]+、[M-31]+等特征碎片離子,如果還存在相鄰的羥基和甲氧基,則還會失去CH3OH從而形成 [M-45-32]+或 [M-31-32]+的碎片。該類生物堿會發(fā)生母核骨架斷裂,根據(jù)芐基所連接基團的不同,形成m/z107、137、151 特征碎片,如木蘭箭毒堿。結(jié)合碎片離子及文獻,共鑒定出芐基異喹啉類生物堿20 個,分別為化合物4、6、7、8、11、13、14、16、17、19、24、27、33、34、43、45、48、52、69 和72。

    化合物11 為木蘭箭毒堿,分子式為C19H24NO3,在正離子模式下,準分子離子峰為m/z314.175 1[M]+。在二級質(zhì)譜中,可以觀察到母核斷裂后的特征碎片離子m/z107.049 1、151.077 1,掉落氮甲基后的特征碎片離子m/z269.111 6 [M-NH(CH3)2]+,木蘭箭毒堿中存在相鄰的羥基和甲氧基結(jié)構(gòu),則還會失去 CH3OH 從而形成m/z237.089 5 [MNH(CH3)2-CH3OH]+。其裂解途徑見圖8。

    圖8 木蘭箭毒堿的MS/MS 圖與裂解途徑Fig. 8 MS/MS spectrogram and fragmentation pathway of magnocurarine

    化合物34:在正離子模式下,準分子離子峰為m/z330.168 9 [M+H]+,分子式為C19H23NO4。在二級質(zhì)譜中,碎片離子m/z192.100 6 為母核斷裂所產(chǎn)生,且比母離子峰度高,碎片離子m/z299.127 5 比m/z330.168 9 少了31,是母核發(fā)生RDA 裂解丟失NH2CH3所產(chǎn)生,可確定是芐基異喹啉類生物堿。二級質(zhì)譜得到m/z267.101 0 碎片,推測為化合物34 在丟失NH2CH3的基礎(chǔ)上丟失CH3OH 所致,其余碎片離子m/z192.100 6,177.077 7 等推測為該化合物的母核裂解及裂解后丟失CH3產(chǎn)生,結(jié)合文獻推測該化合物為番荔枝堿[14,19,21-22,25-27]。其裂解途徑見圖9。

    圖9 番荔枝堿的MS/MS 圖與裂解途徑Fig. 9 The MS/MS spectrogram and fragmentation pathway of reticuline

    3.6 其他類生物堿

    本實驗還鑒定出9 個其他類生物堿,分別為化合物1、2、3、20、78、81、84、85 和87。

    3.7 寬筋藤生物堿的抗炎活性

    3.7.1 寬筋藤生物堿對RAW264.7 細胞活力的影響采用CCK-8 法檢測不同濃度寬筋藤生物堿對RAW264.7 細胞活力的影響,結(jié)果見表2。在寬筋藤生物堿質(zhì)量濃度為7.83~500 μg/mL,RAW264.7細胞的存活率高于80%,表明寬筋藤生物堿對RAW264.7 細胞的生長活性沒有明顯的抑制作用;寬筋藤生物堿在1000 μg/mL 時,對RAW264.7 細胞活力產(chǎn)生顯著的抑制作用(P<0.01)。

    表2 不同濃度給藥組對 RAW 264.7 細胞活力影響(±s, n = 3)Table 2 Effects of different concentrations of drug groups on the viability of RAW264.7 cells (±s, n = 3)

    表2 不同濃度給藥組對 RAW 264.7 細胞活力影響(±s, n = 3)Table 2 Effects of different concentrations of drug groups on the viability of RAW264.7 cells (±s, n = 3)

    與對照組比較:**P<0.01**P < 0.001 vs control group

    組別 劑量/(μg·mL?1) 細胞存活率/%對照 - 100.00寬筋藤生物堿 1 000.00 26.78±7.46**500.00 81.96±2.98 250.00 88.44±10.48 125.00 96.58±18.04 62.50 96.63±6.04 31.25 94.60±6.83 15.63 97.19±14.71 7.83 95.52±18.43

    3.7.2 寬筋藤生物堿對脂多糖誘導(dǎo)的RAW264.7 細胞活力的影響 采用Griess 法測定寬筋藤生物堿對脂多糖誘導(dǎo)的RAW264.7 細胞產(chǎn)生一氧化氮的抑制作用,結(jié)果見表3。與模型組比較,寬筋藤生物堿15.63~125.00 μg/mL 對脂多糖誘導(dǎo)RAW264.7 分泌一氧化氮具有明顯的抑制作用,抑制率為19.10%~97.01%,并呈現(xiàn)出明顯的劑量相關(guān)性,其半數(shù)抑制濃度為22.87 μg/mL。

    表3 不同濃度給藥組對脂多糖誘導(dǎo)的RAW264.7 細胞一氧化氮水平影響 (±s, n = 3)Table 3 Effects of different concentrations of drug groups on lipopolysaccharide induced nitric oxide release in RAW264.7 cells (±s, n = 3)

    表3 不同濃度給藥組對脂多糖誘導(dǎo)的RAW264.7 細胞一氧化氮水平影響 (±s, n = 3)Table 3 Effects of different concentrations of drug groups on lipopolysaccharide induced nitric oxide release in RAW264.7 cells (±s, n = 3)

    組別 劑量 一氧化氮抑制率/%對照 - -模型 - -地塞米松 40.00 μmol·L?1 97.28±0.21寬筋藤生物堿 15.63 μg·mL?1 19.10±3.75 31.25 μg·mL?1 54.33±8.36 62.50 μg·mL?1 82.37±4.15 125.00 μg·mL?1 97.01±0.33

    4 討論

    近年來,隨著人們經(jīng)濟水平的提高,骨質(zhì)疏松癥、關(guān)節(jié)炎類疾病的發(fā)病率呈上升趨勢,且發(fā)病人群呈年輕化趨勢,給患者帶來很大的困擾。藏藥寬筋藤作為藏醫(yī)藥治療此類疾病的臨床常用藥,展現(xiàn)出良好的應(yīng)用價值。

    本研究首次采用UPLC-Q-TOF-MS/MS 技術(shù)對其生物堿類成分進行了全面分析。在實驗過程中為了獲取較好的分離效果,針對有機相:乙腈、甲醇;水相:水、0.1%甲酸水、0.2%甲酸水流動相進行了考察,最終將0.1%甲酸水溶液-乙腈確定為流動相。

    基于化合物的結(jié)構(gòu)多樣性使得在單一質(zhì)譜條件下無法獲得每個化合物的最優(yōu)參數(shù),因此,本實驗以寬筋藤藥材中已知的原小檗堿類生物堿(小檗堿、巴馬?。?、四氫原小檗堿類生物堿(四氫巴馬汀、黃柏堿)、阿樸啡類生物堿(木蘭花堿)和芐基異喹啉類生物堿(木蘭箭毒堿)4 種類型生物堿為參照,通過對碰撞能量、碰撞能量范圍、離子化溫度、氣簾氣等參數(shù)進行優(yōu)化,獲取相應(yīng)結(jié)構(gòu)的最優(yōu)碎片離子。同時結(jié)合保留時間、相對分子質(zhì)量、二級質(zhì)譜的碎片離子、相關(guān)文獻,共推測鑒定出73 個生物堿,包括12 個原小檗堿型生物堿、23 個四氫原小檗堿型生物堿、20 個芐基異喹啉類生物堿、9 個阿樸啡類生物堿和9 個其他類生物堿。

    綜上,本研究運用UPLC-Q-TOF-MS/MS 技術(shù)對藏藥寬筋藤生物堿類成分進行全面系統(tǒng)地解析,為后續(xù)的深入研究提供理論依據(jù)。

    利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突

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