淮安市嬰幼兒食品腸桿菌檢測(cè)及耐藥性研究

杭 婧，宋呈文，金 華

（1.淮安市食品藥品檢驗(yàn)所，江蘇 淮安 223300；2.淮陰工學(xué)院生命科學(xué)與食品工程學(xué)院，江蘇 淮安 223300）

腸桿菌科細(xì)菌是一大群形態(tài)、生化反應(yīng)結(jié)果互相接近的革蘭氏陰性桿菌。這類細(xì)菌多數(shù)有周身鞭毛、有動(dòng)力，生化反應(yīng)中能夠發(fā)酵葡萄糖，能夠還原硝酸鹽，氧化酶試驗(yàn)陰性（鄰單胞菌屬除外），觸媒試驗(yàn)陽(yáng)性（痢疾志賀菌除外），需要氧氣生長(zhǎng)，部分在厭氧環(huán)境下仍可生長(zhǎng)良好，對(duì)周圍環(huán)境營(yíng)養(yǎng)要求普遍偏低，在普通營(yíng)養(yǎng)平板上生長(zhǎng)良好，在自然界中多種場(chǎng)所均可以生存。絕大部分腸桿菌科細(xì)菌寄居在活體生物的腸道內(nèi)，也可存在于水、土壤或腐敗的物質(zhì)上，多數(shù)為條件致病菌，少數(shù)為致病菌。與人類感染有關(guān)的細(xì)菌有腸桿菌屬、克雷伯菌屬、克羅諾桿菌屬、沙門菌屬和志賀菌屬等[1]。嬰幼兒一般指0～36 個(gè)月齡的孩子[2]，身體機(jī)能尚未發(fā)育完善，對(duì)外界及疾病抵抗力弱。所以檢測(cè)嬰幼兒食品中的腸桿菌具有重要意義。本文在市場(chǎng)隨機(jī)購(gòu)買74 批嬰幼兒食品樣品，對(duì)其中檢出的腸桿菌科細(xì)菌進(jìn)行生化鑒定并進(jìn)行耐藥性分析，以了解淮安市嬰幼兒食品衛(wèi)生情況和菌群的耐藥情況，為淮安市市場(chǎng)嬰幼兒食品監(jiān)管提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 樣品

在淮安市市售嬰幼兒食品中隨機(jī)購(gòu)買樣品，抽樣地點(diǎn)主要在超市、大型連鎖母嬰用品店、個(gè)體戶母嬰店等，共采集74 批嬰幼兒食品樣品。樣品類型主要包括嬰幼兒奶粉、嬰幼兒餅干、溶豆、嬰幼兒肉松、營(yíng)養(yǎng)米粉、營(yíng)養(yǎng)米乳、嬰幼兒小面條等。產(chǎn)品品牌包括中國(guó)、法國(guó)、韓國(guó)、日本等，上述購(gòu)買的試驗(yàn)樣品均為包裝食品且均在保質(zhì)期內(nèi)。

1.2 培養(yǎng)基與試劑

緩沖蛋白胨水BPW（批號(hào)：1115875）、胰蛋白胨大豆培養(yǎng)基（批號(hào)：1114302）、阪崎腸桿菌顯色平板（批號(hào)：CRM006B）、大腸菌群大腸桿菌顯色培養(yǎng)基平板（批號(hào)：M0216Y）、氯化鈉（AR，批號(hào)：20210926）、血瓊脂平板（批號(hào)：M1864Y），均購(gòu)于廣東環(huán)凱公司；革蘭氏陰性細(xì)菌鑒定板（批號(hào)：2242024）、革蘭氏陰性細(xì)菌鑒定/藥敏板（批號(hào)：448505）、藥敏接種培養(yǎng)液（批號(hào)：2174615）、接種培養(yǎng)液（批號(hào)：2203381）、藥敏指示劑（批號(hào)：2178523），均購(gòu)于美國(guó)BD 公司。

1.3 儀器設(shè)備

潔凈工作臺(tái)（BCM-1600A，蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司）；電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（101-3，上海躍進(jìn)有限公司）；SPX-350 型生化培養(yǎng)箱；高壓蒸汽滅菌鍋（MLS-3781L-PC 型，松下）；均質(zhì)器（BagMixer 400CC，法國(guó)interscience）；全自動(dòng)微生物鑒定藥敏分析儀（PhoenixTM M50，美國(guó)BD）；生物顯微鏡（OLYMPUS，日本Olympus）；生物安全柜（BSC-1304IIA2，蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司）；電子天平（PL6001，梅特勒公司）。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 腸桿菌的分離和鑒定

因腸桿菌科無(wú)統(tǒng)一的方法檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，故參照《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 沙門氏菌檢驗(yàn)》（GB 4789.4—2016）[3]進(jìn)行腸桿菌鑒定試驗(yàn)。在生物安全柜內(nèi)無(wú)菌操作，稱取試驗(yàn)樣品至緩沖蛋白胨水稀釋培養(yǎng)液中，經(jīng)36 ℃培養(yǎng)24 h 后劃線于阪崎腸桿菌顯色平板、大腸菌群大腸桿菌培養(yǎng)基顯色平板分離單菌落，菌落經(jīng)純化后用接種環(huán)挑取單菌落至細(xì)菌鑒定培養(yǎng)液，用比濁儀把菌懸液濃度調(diào)整至0.5 麥?zhǔn)蠁挝痪簼舛群蟮谷腙幮澡b定板條，蓋上板條塞，及時(shí)放入細(xì)菌鑒定儀進(jìn)行鑒定，最終鑒定可信值在90%以上為可信結(jié)果。

1.4.2 腸桿菌藥物耐藥試驗(yàn)

采用美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)的微量肉湯稀釋法對(duì)本文檢出的腸桿菌進(jìn)行耐藥試驗(yàn)，主要檢測(cè)樣品中檢出的腸桿菌對(duì)19 種藥物的最小抑菌濃度，依據(jù)臨床和實(shí)驗(yàn)室抗菌藥物敏感性測(cè)試標(biāo)準(zhǔn)CLSIM100-S30-2020[4]進(jìn)行結(jié)果判讀。

2 結(jié)果與分析

2.1 腸桿菌定性檢測(cè)情況

74 批嬰幼兒食品中腸桿菌科菌種檢出4 批次，檢出率為5.4%?；窗彩袐胗變菏称分袡z出腸桿菌的樣品信息以及淮安市嬰幼兒食品中腸桿菌生化反應(yīng)結(jié)果分別見表1 和表2。

表1 淮安市嬰幼兒食品中檢出腸桿菌的樣品信息表

表2 淮安市嬰幼兒食品中腸桿菌生化反應(yīng)表

2.2 腸桿菌耐藥試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果

阿米卡星、慶大霉素、頭孢他啶、頭孢噻肟、頭孢吡肟、氨曲南、哌拉西林、哌拉西林-他佐巴坦鈉、黏菌素、氯霉素、復(fù)方新諾明、環(huán)丙沙星、左氧氟沙星、莫西沙星、四環(huán)素敏感率100%，對(duì)頭孢唑林、氨芐青霉素、氨芐青霉素-舒巴坦、阿莫西林克拉維酸鹽敏感率分別為50.0%、75.0%、50.0%、75.0%?；窗彩袐胗變菏称纺c桿菌最小抑菌濃度檢測(cè)結(jié)果見表3。

表3 淮安市嬰幼兒食品腸桿菌最小抑菌濃度檢測(cè)結(jié)果表

3 結(jié)論與討論

本文檢出3 株菌種均屬于腸桿菌科，阪崎腸桿菌原屬于腸桿菌屬，后來(lái)單獨(dú)分離出來(lái)為克羅諾桿菌屬。肺炎克雷伯桿菌和陰溝腸桿菌是人體腸道中的正常菌群，屬于條件致病菌，在身體機(jī)能下降時(shí)可發(fā)生某種疾病。阪崎腸桿菌（克羅諾桿菌屬）是嬰幼兒疾病的重要病原菌之一，可引起嬰幼兒腦部炎癥、腸炎、神經(jīng)系統(tǒng)病變等。此菌一旦入侵嬰幼兒腦部和腸段，致死率可高達(dá)50%[5-6]。

目前最新的《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 預(yù)包裝食品中致病菌限量》（GB 29921—2021）只對(duì)0～6 月齡嬰兒配方食品和特殊醫(yī)學(xué)用途嬰兒配方食品明確要求檢測(cè)阪崎腸桿菌。本文檢出攜帶腸桿菌的樣品均是適合6 月齡以上嬰幼兒食用，且主要集中在嬰幼兒谷物食品以及嬰幼兒小面條食品兩大類。所以除了對(duì)6 月齡以下的嬰幼兒食品有具體標(biāo)準(zhǔn)限度值外，對(duì)6 月齡以上的稍大嬰兒及幼兒食品也應(yīng)該引起相關(guān)部門的重視。

本文從19 種藥物的耐藥情況結(jié)果可以看出淮安市嬰幼兒食品中腸桿菌的耐藥情況確實(shí)存在。4 株檢出的腸桿菌中有3 株存在耐藥或中介的情況，甚至其中有一株陰溝腸桿菌是多重耐藥菌株，同時(shí)對(duì)4 種藥物耐藥。腸桿菌科耐藥機(jī)制主要是由于細(xì)菌產(chǎn)生染色體或質(zhì)粒介導(dǎo)的β-內(nèi)酰胺酶所引起的[7]。國(guó)外對(duì)于腸桿菌科細(xì)菌耐藥的嚴(yán)重性也有相關(guān)報(bào)道[8]。

本次所有檢出腸桿菌的樣品均為國(guó)內(nèi)廠家和品牌，其中還有人們?nèi)粘Ｉ钪卸炷茉數(shù)乃^的“優(yōu)質(zhì)母嬰品牌”，由此可見“優(yōu)質(zhì)品牌”也并非為“優(yōu)質(zhì)品質(zhì)”。這需要消費(fèi)者在購(gòu)買嬰幼兒食品時(shí)更正此類消費(fèi)觀念，更需要市場(chǎng)加強(qiáng)監(jiān)管。