血清絲氨酸蛋白酶抑制劑KazalⅠ型、胸苷激酶1、四跨膜蛋白超家族成員1水平在不同TNM分期老年直腸癌患者預(yù)后的評(píng)估分析

楊夕陽(yáng) 別桂鳳

1)河南原陽(yáng)縣人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 原陽(yáng) 453500; 2)河南原陽(yáng)縣疾病預(yù)防控制中心 原陽(yáng) 453500

直腸癌(rectal cancer,READ)是常見的一種消化道惡性腫瘤,早期癥狀較為隱匿,大部分患者確診時(shí)已進(jìn)展至中晚期,因此早期預(yù)判直腸癌患者的預(yù)后,對(duì)擬定治療方案和提高患者生存率具有重要意義[1-2]。絲氨酸蛋白酶抑制劑KazalⅠ型(SPINK1)是蛋白酶抑制劑家族成員之一,能抑制多種胰腺絲氨酸蛋白酶活性,與細(xì)胞增殖、炎癥及癌癥的發(fā)生、發(fā)展過程有緊密聯(lián)系。其在卵巢癌、胰腺癌、肝細(xì)胞癌、結(jié)直腸癌、前列腺癌等惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展,以及預(yù)后中發(fā)揮重要作用[3]。有報(bào)告稱,SPINK1在結(jié)直腸癌進(jìn)展和轉(zhuǎn)移過程中可能具有重要作用[4]。四跨膜蛋白超家族成員1(TM4SF1)是一種四聯(lián)體跨膜結(jié)構(gòu)域表面蛋白,屬于L6四聚糖超家族成員,可參與腫瘤細(xì)胞新陳代謝、微環(huán)境形成,并在腫瘤細(xì)胞增殖、侵蝕及遷移等過程中起調(diào)控作用[5]。文獻(xiàn)報(bào)道,TM4SF1在結(jié)直腸癌組織及細(xì)胞系中顯著高表達(dá),其水平與腫瘤分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、脈管侵犯呈正相關(guān)[6]。胸苷激酶1(TK1)是基因合成的關(guān)鍵酶類,其表達(dá)與細(xì)胞增殖速度有關(guān),可反映READ患者病情嚴(yán)重程度,為臨床制定、調(diào)整治療方案提供參考。本研究通過分析115例老年READ患者血清SPINK1、TK1及TM4SF1聯(lián)合檢測(cè)的相關(guān)資料,探討其對(duì)READ患者的預(yù)后和病情嚴(yán)重程度評(píng)估的臨床應(yīng)用價(jià)值。

1 資料與方法

1.1一般資料選取我院2019-01—2021-06收治的115例老年READ患者。納入標(biāo)準(zhǔn):(1)均符合直腸癌的診斷和臨床分期標(biāo)準(zhǔn)[7],并經(jīng)術(shù)后病理檢查證實(shí)。(2)認(rèn)知和交流功能正常,治療依從性良好,臨床和隨訪資料齊全。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)伴有嚴(yán)重心、腦、腎等臟器功能不全,以及免疫、血液系統(tǒng)疾病。(2)合并其他部位惡性腫瘤者,存在相關(guān)家族遺傳史者。根據(jù)入院時(shí)臨床TNM分期將患者分為Ⅰ～Ⅱ期組(20例)、Ⅲ期組(53例)、Ⅳ期組(42例),3組患者的性別和年齡差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 3組患者的基線資料比較

1.2方法(1) 治療方法:采用FOLFIRI方案進(jìn)行化療,每2周重復(fù)1次,治療3個(gè)周期后復(fù)查并評(píng)價(jià)療效。(2) 檢測(cè)方法:入院時(shí)清晨抽取空腹靜脈血5 mL,室溫下靜置使血液自然凝固。離心15 min(半徑8 cm、轉(zhuǎn)速3 000 r/min)取上層清液,貯存﹣20℃待測(cè)。采用酶免疫點(diǎn)印跡化學(xué)發(fā)光法測(cè)定血清TK1水平;采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)血清SPINK1、TM4SF1水平。嚴(yán)格參照說明書進(jìn)行操作。

1.3效果評(píng)價(jià)(1)血清SPINK1、TK1、TM4SF1水平與TNM分期的關(guān)系。(2)依據(jù)實(shí)體瘤治療療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)[5]評(píng)估預(yù)后(病灶完全消失或瘤體最大徑之和減少>30%,且維持4周為預(yù)后良好。瘤體最大徑之和減少<30%或直徑增加,或出現(xiàn)新病灶為預(yù)后不良)。預(yù)后良好組72例,預(yù)后不良組43例。比較不同預(yù)后組患者的血清SPINK1、TK1、TM4SF1水平。(3)分析聯(lián)合檢測(cè)血清SPINK1、TK1、TM4SF1對(duì)不同預(yù)后的預(yù)測(cè)價(jià)值。

2 結(jié)果

2.1入院時(shí)不同TNM分期患者血清SPINK1、TK1、TM4SF1的水平Ⅳ期組患者的血清SPINK1、TK1、TM4SF1水平高于Ⅰ～Ⅱ期組和Ⅲ期組,Ⅲ期組患者高于Ⅰ～Ⅱ期組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 3組血清SPINK1、TK1、TM4SF1水平比較

2.2相關(guān)性分析入院時(shí)血清SPINK1、TK1、TM4SF1水平與TNM分期均呈正相關(guān),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

表3 相關(guān)性分析

2.3不同預(yù)后患者血清SPINK1、TK1、TM4SF1水平不同預(yù)后患者入院時(shí)的血清SPINK1、TK1、TM4SF1水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。與預(yù)后良好組患者比較,化療1個(gè)周期后、2個(gè)周期后,預(yù)后不良組患者的血清SPINK1、TK1、TM4SF1水平較高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表4。

表4 不同預(yù)后組患者血清SPINK1、TK1、TM4SF1水平比較

2.4化療后ROC分析以預(yù)后不良組患者為陽(yáng)性標(biāo)本,以預(yù)后良好組患者為陰性樣本,繪制ROC曲線。結(jié)果顯示,化療1個(gè)周期后血清SPINK1、TK1、TM4SF1水平聯(lián)合預(yù)測(cè)老年READ患者預(yù)后不良的AUC為0.762,最佳預(yù)測(cè)敏感度、特異度分別為88.37%、63.89%;化療2個(gè)周期后血清SPINK1、TK1、TM4SF1水平聯(lián)合預(yù)測(cè)老年READ患者預(yù)后不良的AUC為0.832,最佳預(yù)測(cè)敏感度、特異度分別為95.35%、70.83%。見表5。

表5 化療后ROC分析

3 討論

手術(shù)是早期READ的主要治愈方法,但其發(fā)病隱匿,大部分患者就診時(shí)已處于中晚期,導(dǎo)致READ術(shù)后復(fù)發(fā)率和病死率居高不下[2,8]。TNM分期系統(tǒng)是國(guó)際腫瘤病理分期及預(yù)后的判斷標(biāo)準(zhǔn),需獲取組織標(biāo)本通過病理學(xué)檢查確診,且相同病理分期個(gè)體間預(yù)后的差異也較大[9]。因此,尋找區(qū)別于腫瘤分期且能于術(shù)前預(yù)測(cè)READ預(yù)后的標(biāo)志物,盡早明確READ病情嚴(yán)重程度,判斷預(yù)后,并給予針對(duì)性干預(yù),對(duì)提高療效有重要意義。

隨著生物學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展,利用血清學(xué)指標(biāo)評(píng)估惡性腫瘤患者的預(yù)后成為研究熱點(diǎn)[10]。本研究結(jié)果顯示,3組不同TNM分期患者入院時(shí)的血清SPINK1、TK1、TM4SF1水平比較為:Ⅰ～Ⅱ期組<Ⅲ期組<Ⅳ期組,提示血清SPINK1、TK1、TM4SF1水平與READ患者病情嚴(yán)重程度關(guān)系密切。SPINK1結(jié)構(gòu)類似表皮生長(zhǎng)因子(EGF),通過結(jié)合EGF受體(EGFR),啟動(dòng)EGFR/磷脂酰基醇3-激酶/蛋白酶B信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路參與上皮細(xì)胞向間質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化的生物學(xué)過程(EMT),成為惡性腫瘤發(fā)生轉(zhuǎn)移的主要原因。此外,SPINK1與EGFR協(xié)同通過p38絲裂原活化蛋白激酶-ERK-c-Jun氨基末端激酶通路,使上皮鈣黏蛋白受到抑制,導(dǎo)致EMT,癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移。有研究表明,血清SPINK1 水平升高與腫瘤侵襲不良預(yù)后相關(guān)[11]。TK1可通過催化胸苷(dTdR)轉(zhuǎn)化為脫氧胸苷單磷酸(dTMP),利于提高癌基因的激活程度,促進(jìn)癌細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)錄調(diào)控基因的上調(diào)程度,從而參與DNA合成過程[12]。健康人體TK1合成效率低,而READ腫瘤細(xì)胞可無限增殖,TK1大量表達(dá),血清TK1水平升高,并使腫瘤持續(xù)惡變和轉(zhuǎn)移,故TK1可作為評(píng)價(jià)READ嚴(yán)重程度和預(yù)后的指標(biāo)。TM4SF1的主要作用是調(diào)控EMT、參與細(xì)胞生長(zhǎng)。有研究報(bào)道,TM4SF1可通過被募集到TERM區(qū)及相關(guān)的泛素化修飾而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞發(fā)生遷移,其高表達(dá)與結(jié)直腸癌的侵襲轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[13]。本研究結(jié)果顯示,入院時(shí)患者的血清SPINK1、TK1、TM4SF1水平與TNM分期均呈正相關(guān),進(jìn)一步證實(shí)了血清SPINK1、TK1、TM4SF1水平與病情嚴(yán)重程度有緊密聯(lián)系。

本研究中,化療1個(gè)周期后、2個(gè)周期后,預(yù)后良好患者的血清SPINK1、TK1、TM4SF1水平低于預(yù)后不良患者,說明血清SPINK1、TK1、TM4SF1水平可作為臨床評(píng)估預(yù)后的指標(biāo)。通過 ROC分析說明1個(gè)周期后、2個(gè)周期后血清SPINK1、TK1、TM4SF1水平聯(lián)合檢測(cè)均對(duì)不同預(yù)后有較好的預(yù)測(cè)價(jià)值。

綜上所述,血清SPINK1、TK1、TM4SF1水平與老年READ患者的病情嚴(yán)重程度及預(yù)后密切相關(guān),可作為臨床判斷病情、評(píng)估預(yù)后的參考指標(biāo)。本研究納入樣本量不大,受研究條件限制存在系統(tǒng)誤差及隨機(jī)誤差等偏倚可能性大,其確切結(jié)論仍需今后開展大樣本、多中心、前瞻性等高質(zhì)量研究進(jìn)一步驗(yàn)證。