益氣活血方對(duì)急性心肌梗死大鼠交感神經(jīng)重構(gòu)的影響*

杜天慧，郭書文，張宇沁，王 惠，陳 潔，李宇飛，張?jiān)剖妫钚棱?，盧 洋

（1.北京中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)學(xué)院，北京 102400；2.北京中醫(yī)藥大學(xué)房山醫(yī)院，北京 102400；3.北京中醫(yī)藥大學(xué)針灸推拿學(xué)院，北京 102400；4.北京中醫(yī)藥大學(xué)第三附屬醫(yī)院，北京 100020）

心肌梗死是最嚴(yán)重的心血管疾病之一，嚴(yán)重危害人類健康和生存質(zhì)量。心肌梗死后心臟交感神經(jīng)會(huì)發(fā)生形態(tài)學(xué)和功能學(xué)的不均一性重構(gòu)，進(jìn)一步加重心肌損傷，極易誘發(fā)惡性心律失常甚至心源性猝死[1]。因此減輕心肌梗死后交感神經(jīng)重構(gòu)，以降低各種惡性心律失常事件，成為學(xué)者們關(guān)注的熱點(diǎn)和難點(diǎn)。一方面，心肌梗死后急性期內(nèi)梗死邊緣區(qū)交感神經(jīng)過度再生，分布呈不均一性改變；另一方面交感神經(jīng)過度興奮及支配不對(duì)稱性將進(jìn)一步導(dǎo)致高支配區(qū)與正常區(qū)域和去支配區(qū)域形成神經(jīng)肽等神經(jīng)遞質(zhì)的濃度差異，極易誘發(fā)心律失常[2]。急性心肌梗死發(fā)生后，神經(jīng)營養(yǎng)因子在心肌局部或心臟循環(huán)中表達(dá)增加，在神經(jīng)重構(gòu)中發(fā)揮重要作用，尤以梗死邊緣區(qū)明顯[3]。心肌梗死后交感神經(jīng)系統(tǒng)被激活，釋放大量的神經(jīng)肽Y（neuropeptide Y, NPY），可強(qiáng)烈收縮冠狀動(dòng)脈，增強(qiáng)交感神經(jīng)重構(gòu)，同時(shí)血小板聚集會(huì)加重心肌缺血，誘發(fā)心律失常[4]。酪氨酸羥化酶（tyrosine hydroxylase, TH）陽性表達(dá)可反映交感神經(jīng)再生情況。多項(xiàng)研究表明，生長相關(guān)蛋白43（growth associated protein-43, GAP43）和神經(jīng)生長因子（nerve growth factor, NGF）可促進(jìn)神經(jīng)元的增殖分化，NGF濃度和神經(jīng)再生密度呈正相關(guān)[5]。神經(jīng)抑制因子信號(hào)素3A（semaphorin 3A, Sema-3A）可通過引起神經(jīng)元生長錐塌陷，發(fā)揮避免神經(jīng)過度生長和神經(jīng)纖維在局部聚集的作用[6]。

益氣活血方是郭書文教授的經(jīng)驗(yàn)用方，由李東垣《內(nèi)外傷辨惑論》當(dāng)歸補(bǔ)血湯加減化裁而來，具有補(bǔ)氣生血、益氣活血之效。方中益氣藥劑量高于活血藥。臨床中益氣活血方與西藥聯(lián)合應(yīng)用，可明顯改善心肌缺血患者心肌供血、左心功能及相應(yīng)臨床癥狀[7]。

急性心肌梗死發(fā)生后心臟神經(jīng)的改變于早期即可出現(xiàn)。本研究從神經(jīng)重構(gòu)入手，觀察急性心肌梗死后早期益氣活血方對(duì)心臟神經(jīng)的影響作用，旨在為益氣活血方減輕心肌梗死損傷提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 6～8周齡SPF級(jí)健康雄性SD大鼠92只，體質(zhì)量200～220 g，購自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，許可證編號(hào)：SCXK（京）2020-0033。大鼠飼養(yǎng)于北京中醫(yī)藥大學(xué)SPF級(jí)動(dòng)物房，自由攝食飲水，依晝夜節(jié)律12 h光照/12 h黑暗，室溫24～26 ℃，相對(duì)濕度40%～70%。本實(shí)驗(yàn)通過倫理審查，編號(hào)：BUCM-4-2021110806-4070。

1.2 藥物制備 益氣活血方（專利號(hào)：201610368030.7）組成：黃芪50 g，當(dāng)歸15 g，生曬參10 g，川芎15 g，三七6 g。中藥購于北京中醫(yī)藥大學(xué)東直門醫(yī)院，經(jīng)付鵬（中藥學(xué)專業(yè)，副主任藥師）鑒定審查。根據(jù)課題組前期研究[8]藥物劑量比和煎煮方法制備。煎煮后過濾，濃縮，分裝，滅菌后備用。

酒石酸美托洛爾片（阿斯利康制藥有限公司，25 mg/片，批號(hào)：1805A23）。

1.3 主要儀器與試劑 小動(dòng)物呼吸機(jī)（成都泰盟軟件有限公司，型號(hào)：HW-101E）；高分辨小動(dòng)物超聲影像儀（加拿大Vusual Sonics公司，型號(hào)：Vevo2100）；制冰機(jī)（日本SANYO公司，型號(hào)：SIM-00083）；石蠟冷凍包埋機(jī)（中國金華科迪公司，型號(hào)：KD-BM）；復(fù)式脫色搖床（?？谑衅淞重悹杻x器制造有限公司）；全波長熒光酶標(biāo)儀（瑞士Tecan公司，型號(hào)：Safire2）；精密電子天平（德國Sartorius公司，型號(hào)：BAS223S）；蛋白質(zhì)電泳系統(tǒng)（北京市六一儀器廠）。4%多聚甲醛固定液（賽維爾公司，批號(hào)：G1101-500ML）；戊巴比妥鈉（上海曦耀生物科技有限公司，批號(hào)：Y2019012102）；注射用青霉素鈉（華北制藥股份有限公司，批號(hào)：F6032104）；NGF抗體（批號(hào)：ab52918）、GAP43抗體（批號(hào)：ab75810）、Sema-3A抗體（批號(hào)：ab23393）、TH抗體（批號(hào)：ab112）、Actin內(nèi)參抗體（批號(hào)：ab8226）均購自美國Abcam公司；標(biāo)記山羊抗小鼠辣根過氧化物酶（批號(hào)：Sc-2005）、標(biāo)記山羊抗兔辣根過氧化物酶（批號(hào)：Sc-2004）均購自美國Santa Cruz公司；PVDF膜（德國Millipore公司，批號(hào)：03010040001）；ECL發(fā)光液（賽默飛公司，批號(hào)：34080）；大鼠神經(jīng)肽Y酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒（武漢伊萊瑞特公司，批號(hào)：E-EL-R0655c）。

1.4 模型建立 92只大鼠隨機(jī)選取20只作為假手術(shù)組，余72只行左冠狀動(dòng)脈前降支結(jié)扎術(shù)。1%戊巴比妥鈉腹腔注射（40 mg/kg）麻醉后固定大鼠，備皮。氣管插管成功后連接小動(dòng)物呼吸機(jī)。在嚴(yán)格無菌條件下行左冠狀動(dòng)脈前降支結(jié)扎術(shù)。于左側(cè)第三、四肋間逐層橫向剪開皮膚和肌肉，鈍性分離心包膜，以合適視野充分暴露心臟，于左心耳與肺動(dòng)脈圓錐間下2 mm進(jìn)針結(jié)扎前降支，結(jié)扎完畢后迅速逐層縫合，撤掉呼吸機(jī)后密切關(guān)注大鼠是否恢復(fù)節(jié)律性自主呼吸，同時(shí)注意保暖復(fù)溫。術(shù)后每只大鼠立即注射利多卡因0.1 mL防止心律失常，呋塞米0.1mL減輕心臟負(fù)荷，連續(xù)3 d注射青霉素（20萬U/d）預(yù)防感染。術(shù)后心電圖顯示3個(gè)連續(xù)壞死性q波提示造模成功。假手術(shù)組造模過程同上，僅穿線不結(jié)扎。60只大鼠造模成功，成功率83.33%（60/72）。

1.5 動(dòng)物分組及給藥 將60只造模成功大鼠隨機(jī)分為模型組、益氣活血方組、美托洛爾組，各20只。每組兩個(gè)觀察時(shí)間點(diǎn)各10只。手術(shù)后24 h起每日在同時(shí)間段內(nèi)各組大鼠灌胃1次，連續(xù)給藥7 d。中藥依據(jù)臨床等效生藥劑量按大鼠和人6∶1換算。成人體質(zhì)量70 kg每日生藥量為96 g。96 g/70 kg×6=8.2 g/（kg·d）。給藥劑量為：美托洛爾組0.5 mg/（kg·d），益氣活血方組8.2 g/（kg·d）[9]，假手術(shù)組和模型組給予等體積蒸餾水，1.0 mL/（kg·d）。

1.6 觀察指標(biāo)

1.6.1 心功能 給藥后3、7 d，1%戊巴比妥鈉腹腔注射（40mg/kg）麻醉后固定大鼠，備皮,超聲高頻探頭RMV716取左心室短軸切面，通過M型曲線進(jìn)行超聲檢查。每只取3個(gè)心動(dòng)周期，計(jì)算平均值：左心室短軸率（left ventricular fractional shortening,LVFS）、左心室射血分?jǐn)?shù)（left ventricular ejection fraction,LVEF）、左心室收縮末期內(nèi)徑（left ventricular internal dimension systole, LVIDs）和左心室舒張末期內(nèi)徑（left ventricular end diastolic diameter, LVIDd）均值。

1.6.2 室顫閾值 給藥后3、7 d，大鼠麻醉后固定，備皮，氣管插管，無菌條件下開胸充分暴露心臟，連接電極后將刺激電極的正極插于左心室心尖部組織，負(fù)極插入左室前壁右側(cè)，接近梗死區(qū)位置，正負(fù)極距離約0.3 cm，電極插入組織深度約0.1 cm。將電刺激條件設(shè)定為：方波、串刺激（每串刺激10個(gè)刺激波，脈寬ms），初始電壓1 V，每隔30 s遞增1 V，刺激頻率30 Hz[10]。記錄室顫閾值。

1.6.3 心肌病理變化 心肌取材時(shí)間點(diǎn)為給藥后3、7 d。取材前禁食12h，1%戊巴比妥鈉腹腔注射（40 mg/kg）麻醉。取腹主動(dòng)脈血，于嚴(yán)格無菌條件下取出心臟，置于冷生理鹽水中充分洗去殘留血液，于冰上將組織橫切為上下兩個(gè)部分。上半部固定后用于石蠟包埋、切片、染色；下半部剪取梗死邊緣區(qū)后迅速浸入液氮保存，用于蛋白檢測。上半部組織固定24 h后包埋、切片。將切片脫蠟復(fù)水，Harris蘇木素染核，流水沖洗，梯度乙醇脫水；1%乙醇伊紅染色，乙醇梯度脫水，二甲苯透明，中性樹脂封片，使用顯微鏡觀察拍照。

1.6.4 TH陽性交感神經(jīng)纖維分布 采用免疫組化觀察TH陽性交感神經(jīng)纖維分布情況。石蠟切片脫蠟至水后滴加內(nèi)源性過氧化物酶阻斷液，室溫孵育20 min，PBS緩沖液水洗3次，5 min/次，置于EDTA抗原修復(fù)緩沖液中，蒸鍋內(nèi)進(jìn)行抗原修復(fù)8 min。冷卻至室溫后劃圈，滴加血清封閉37 ℃，30 min后甩去多余血清后加入一抗，將切片平放于濕盒內(nèi)4 ℃孵育過夜；PBS洗滌3次，5 min/次，加入二抗室溫孵育1 h。PBS洗滌3次，5 min/次，滴加DAB液顯色，顯微鏡下觀察控制顯色時(shí)間后置于蒸餾水終止反應(yīng)，水洗后烘干。蘇木素復(fù)染40 s，水洗，返藍(lán)液浸泡1 min，再水洗。乙醇梯度脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片，掃描。

1.6.5 大鼠血漿NPY含量 采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測大鼠血漿NPY含量，觀察心臟交感神經(jīng)被激活情況。根據(jù)試劑盒說明測定OD值檢測血漿NPY含量。

1.6.6 神經(jīng)重構(gòu)相關(guān)因子的蛋白表達(dá) 采用免疫印跡法（Western blotting）檢測大鼠梗死心肌邊緣區(qū)NGF、GAP43、Sema-3A、TH蛋白相對(duì)表達(dá)量。提取樣品蛋白，BCA試劑盒測定樣品濃度后調(diào)整各組蛋白為同等濃度，加入上樣緩沖液后煮沸5 min使蛋白變性。分別制作分離膠和濃縮膠，蛋白上樣，電泳，濃縮膠恒壓100 V 20 min，分離膠恒壓120 V，電泳直至溴酚藍(lán)到凝膠底部后電轉(zhuǎn)，將凝膠上蛋白表達(dá)轉(zhuǎn)膜至聚偏二氟乙烯（PVDF）膜，恒流200 mA，時(shí)間為2 h，轉(zhuǎn)膜后將PVDF膜在封閉液中封閉60 min，加入1∶500稀釋后的一抗，4 ℃孵育過夜?；厥找豢购骉BST洗膜3次，10 min/次，室溫下加入對(duì)應(yīng)二抗，搖床孵育60 min，TBST洗膜5次，5 min/次，最后滴加ECL顯色液，曝光。運(yùn)用Image-J軟件定量蛋白條帶灰度，分析得到蛋白相對(duì)表達(dá)量。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 26.0軟件分析數(shù)據(jù)，計(jì)量資料用“均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”（）表示。經(jīng)檢驗(yàn)所有資料符合正態(tài)分布，進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)。若方差齊，采用單因素方差分析，多重比較采用LSD分析，若方差不齊，采用蓋姆斯-霍威爾（Games-Howell）分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠心功能比較 給藥3、7d，模型組大鼠LVEF、LVFS均低于假手術(shù)組，LVIDd、LVIDs均高于假手術(shù)組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。給藥3 d，益氣活血方組、美托洛爾組大鼠LVEF、LVFS、LVIDd與模型組比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；益氣活血方組大鼠LVIDs低于模型組（P＜0.05）。給藥7 d，益氣活血方組和美托洛爾組大鼠LVEF、LVFS均高于模型組（P＜0.05或P＜0.01），LVIDs均低于模型組（P＜0.05)；益氣活血方組和美托洛爾組大鼠LVIDd與模型組比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。美托洛爾組整體療效優(yōu)于益氣活血方組，但個(gè)體差異較大，美托洛爾組大鼠給藥7 d后的LVIDs低于給藥3 d（P＜0.05）；益氣活血方組個(gè)體差異較小療效更加穩(wěn)定。（見表1）

表1 各組大鼠心功能比較 （）

表1 各組大鼠心功能比較 （）

注：與假手術(shù)比較，aP＜0.01；與模型組比較，bP＜0.05，cP＜0.01；與給藥3 d比較，dP＜0.05。

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2.2 各組大鼠電刺激誘發(fā)室顫閾值比較 給藥3、7 d，模型組大鼠電刺激誘發(fā)室顫閾值低于假手術(shù)組（P＜0.01或P＜0.05）；給藥3 d，益氣活血方組、美托洛爾組大鼠電刺激誘發(fā)室顫閾值與模型組比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。給藥7 d，美托洛爾組大鼠電刺激誘發(fā)室顫閾值高于模型組（P＜0.01）；益氣活血方組大鼠電刺激誘發(fā)室顫閾值與模型組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。美托洛爾組大鼠給藥7 d后電刺激誘發(fā)室顫閾值高于給藥3 d（P＜0.05）。（見表2）

表2 各組大鼠電刺激誘發(fā)室顫閾值比較 （，V）

表2 各組大鼠電刺激誘發(fā)室顫閾值比較 （，V）

注：與假手術(shù)比較，aP＜0.01，bP＜0.05；與模型組比較，cP＜0.01；與給藥3 d比較，dP＜0.05。

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2.3 心肌病理變化 假手術(shù)組大鼠心肌細(xì)胞排列整齊無明顯改變，僅見少量炎癥細(xì)胞；模型組大鼠心肌細(xì)胞斷裂且排列紊亂，細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則，細(xì)胞核發(fā)生固縮，間隙明顯變大，心肌纖維雜亂無序，且明顯存在大量炎癥細(xì)胞浸潤。給藥3 d后，益氣活血方組和美托洛爾組大鼠心肌細(xì)胞結(jié)構(gòu)紊亂，部分壞死，但細(xì)胞間間隙減小，炎癥纖維減少。給藥7 d后，益氣活血方組大鼠較模型組改善明顯，炎癥細(xì)胞浸潤明顯減少，心肌細(xì)胞排列較為整齊；美托洛爾組大鼠心肌細(xì)胞排列有明顯整齊改變，但仍可見炎癥細(xì)胞浸潤和心肌纖維增生。（見圖1）

圖1 心肌組織病理改變 （HE，×50，標(biāo)尺=200 μm）

2.4 TH陽性交感神經(jīng)纖維分布 假手術(shù)組大鼠心肌細(xì)胞走行方向一致，TH陽性神經(jīng)纖維少見。模型組大鼠TH陽性神經(jīng)纖維密度明顯增加，分布紊亂，形態(tài)粗大不一，甚者聚集呈束。給藥3 d，益氣活血方組、美托洛爾組大鼠TH陽性神經(jīng)纖維密度低于模型組，且形態(tài)分布逐漸向正常改變，但仍可見大量炎癥細(xì)胞；給藥7 d，益氣活血方組、美托洛爾組大鼠神經(jīng)形態(tài)及分布趨于正常化，聚集及粗大的神經(jīng)纖維較少見。益氣活血方組大鼠TH陽性神經(jīng)纖維少于美托洛爾組，心肌細(xì)胞走行更均勻一致。（見圖2）

圖2 TH 陽性交感神經(jīng)纖維分布 （免疫組化，×100，標(biāo)尺=100 μm）

2.5 各組大鼠血漿NPY含量比較 給藥3、7 d，模型組大鼠血漿NPY含量高于假手術(shù)組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；益氣活血方組大鼠血漿NPY含量與美托洛爾組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。給藥3 d，益氣活血方組、美托洛爾組大鼠血漿NPY含量與模型組比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。給藥7 d，益氣活血方組、美托洛爾組大鼠血漿NPY含量均低于模型組（P＜0.01）。益氣活血方組、美托洛爾組大鼠給藥7 d后的血漿NPY含量均低于給藥3 d（P＜0.01）。（見表3）

表3 各組大鼠血漿NPY 含量比較 （，pg/mL）

表3 各組大鼠血漿NPY 含量比較 （，pg/mL）

注：與假手術(shù)比較，aP＜0.01；與模型組比較，bP＜0.01；與給藥3 d比較，cP＜0.01。

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2.6 各組大鼠梗死心肌邊緣區(qū)NGF、GAP43、Sema-3A、TH蛋白相對(duì)表達(dá)量比較 給藥3、7 d，模型組大鼠NGF、GAP43、TH蛋白相對(duì)表達(dá)量均高于假手術(shù)組，Sema-3A蛋白相對(duì)表達(dá)量低于假手術(shù)組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；益氣活血方組、美托洛爾組大鼠NGF、GAP43、TH蛋白相對(duì)表達(dá)量均低于模型組，Sema-3A蛋白相對(duì)表達(dá)量均高于模型組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。給藥3 d，益氣活血方組大鼠NGF蛋白相對(duì)表達(dá)量高于美托洛爾組（P＜0.05）。給藥7 d，益氣活血方組大鼠TH蛋白相對(duì)表達(dá)量高于美托洛爾組（P＜0.05）；益氣活血方組大鼠其余指標(biāo)與美托洛爾組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。各組大鼠給藥7 d各指標(biāo)與給藥3 d比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。（見表4、圖3）

圖3 NGF、GAP43、Sema-3A、TH 蛋白表達(dá)Western blotting 圖

表4 各組大鼠梗死心肌邊緣區(qū)NGF、GAP43、Sema-3A、TH 蛋白相對(duì)表達(dá)量比較 （）

表4 各組大鼠梗死心肌邊緣區(qū)NGF、GAP43、Sema-3A、TH 蛋白相對(duì)表達(dá)量比較 （）

注：與假手術(shù)比較，aP＜0.05；與模型組比較，bP＜0.05；與美托洛爾組比較，cP＜0.05；與給藥3 d比較，dP＞0.05。

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3 討論

心肌梗死屬中醫(yī)“胸痹”“心痛”范疇中的“真心痛”。張仲景在《金匱要略》中首次提出其病機(jī)為“陽微陰弦”。心主血脈，心脈痹阻不通則見心煩胸痛、脈急善恐等癥。血脈運(yùn)行賴心陽推動(dòng)。心陽不足，鼓動(dòng)無力，則見氣滯血瘀，血脈不通。益氣活血方是郭書文教授治療心肌梗死的經(jīng)驗(yàn)用方，臨床應(yīng)用收效顯著。方中黃芪、人參益氣固本；當(dāng)歸、川芎、三七行氣活血，促進(jìn)氣血的動(dòng)態(tài)平衡和相互滋養(yǎng)。課題組前期研究[11-14]發(fā)現(xiàn)，益氣活血方可有效恢復(fù)心肌梗死后大鼠的冠脈微循環(huán)障礙，減輕心肌梗死后炎癥和氧化應(yīng)激，抑制心肌細(xì)胞凋亡和壞死，改善左心室功能，降低心肌梗死后心衰、心律失常發(fā)生率。本研究擬通過觀察心肌梗死后交感神經(jīng)重構(gòu)具體情況，探究益氣活血方降低心律失常的作用機(jī)制。

心肌梗死后同區(qū)域交感神經(jīng)損傷、壞死、重構(gòu)及過度再生，會(huì)導(dǎo)致神經(jīng)對(duì)心肌活動(dòng)支配不均一，極易引起心臟電傳導(dǎo)紊亂，是導(dǎo)致心律失常重要機(jī)制之一[15]。機(jī)體損傷后首先會(huì)發(fā)生自我修復(fù)反應(yīng)，即心肌梗死后早期出現(xiàn)交感神經(jīng)適度再生。但隨著疾病進(jìn)展，神經(jīng)過度再生常常刺激交感神經(jīng)系統(tǒng)激活，是造成心源性猝死和惡性心律失常的主要因素之一。研究發(fā)現(xiàn)中藥復(fù)方可通過調(diào)節(jié)神經(jīng)內(nèi)分泌過度激活，延緩心肌細(xì)胞凋亡[16]。

本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)使用益氣活血方和美托洛爾干預(yù)急性心肌梗死大鼠3 d后，LVIDd有回縮趨勢，心功能一定程度恢復(fù)；干預(yù)7 d后，心功能明顯恢復(fù)，室顫閾值明顯升高，心肌細(xì)胞恢復(fù)良好。從時(shí)間跨度上看，益氣活血方組療效變化大于美托洛爾組，且療效均一性良好，個(gè)體差異小于美托洛爾組。以上結(jié)果表明急性期（3 d）美托洛爾對(duì)于心肌梗死后恢復(fù)具有較好優(yōu)勢。美托洛爾可有效降低心律失常，阻斷或延緩心肌重塑[17]。中藥的多靶點(diǎn)綜合治療作用持久，恢復(fù)心功能、降低心律失常發(fā)生率的療效更明顯[18]。

心肌梗死后早期即可出現(xiàn)神經(jīng)重構(gòu)。有研究[19]指出，心肌梗死大鼠再生的神經(jīng)纖維大多呈TH陽性，表明再生神經(jīng)以成熟的交感神經(jīng)為主，且心肌組織中TH陽性交感纖維的分布和密度可反映神經(jīng)重構(gòu)狀態(tài)。本研究結(jié)果表明，心肌梗死后梗死邊緣區(qū)TH陽性神經(jīng)纖維密度明顯增加且分布不規(guī)則，神經(jīng)纖維形態(tài)變形粗大。經(jīng)藥物治療后，TH陽性神經(jīng)分布和密度均減少，形態(tài)走行趨于規(guī)律正常。其中，給藥7 d后，益氣活血方組陽性神經(jīng)纖維明顯少見，心肌細(xì)胞走行均勻一致，表明益氣活血方在心肌梗死早期可有效抑制交感神經(jīng)重構(gòu)。

心臟受多種肽能神經(jīng)支配[20]，益氣活血方可能通過有效抑制去甲腎上腺素釋放發(fā)揮心肌保護(hù)作用[21]。本研究中NPY作為一種非腎上腺素能、非膽堿能神經(jīng)遞質(zhì)，在心肌梗死后能夠很好地反映交感神經(jīng)活性及交感神經(jīng)遞質(zhì)釋放的動(dòng)態(tài)變化[22]。給藥7 d后，益氣活血方和美托洛爾可有效抑制NPY的釋放，且給藥3 d時(shí)益氣活血方組療效比美托洛爾更明顯。NGF可促進(jìn)機(jī)體神經(jīng)元生長、增殖和分化，該水平與神經(jīng)生成呈正相關(guān)[23]。GAP43在成熟或穩(wěn)定神經(jīng)元中以不表達(dá)或低表達(dá)方式存在，但在神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育或再生時(shí)期GAP43與NGF可迅速增高，標(biāo)志著相關(guān)神經(jīng)快速生長[24-25]。在部分神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育中，Sema-3A是協(xié)助改善交感神經(jīng)重構(gòu)的相關(guān)因子。其通過抑制交感神經(jīng)再生從而防止神經(jīng)發(fā)生過度發(fā)育與支配[26]，在心肌梗死后發(fā)揮維持心臟自主神經(jīng)平衡的重要作用。心肌梗死急性期即可發(fā)生神經(jīng)重構(gòu)，而早期益氣活血方療效與美托洛爾相當(dāng)，兩者均可以下調(diào)GAP43、NGF、TH表達(dá)，上調(diào)Sema-3A表達(dá)，尤以給藥7 d后效果更為明顯，提示益氣活血方在心肌梗死急性期可能通過調(diào)節(jié)神經(jīng)因子表達(dá)水平有效改善交感神經(jīng)重構(gòu)狀態(tài)。

綜上所述，益氣活血方可能通過抑制心肌梗死急性期交感神經(jīng)系統(tǒng)激活，進(jìn)而抑制NPY分泌，下調(diào)神經(jīng)因子水平，降低室顫閾值。本研究結(jié)果表明，早期美托洛爾療效更佳但個(gè)體差異明顯，益氣活血方早期可發(fā)揮療效且均一性良好，提示臨床上在急性期可進(jìn)行盡早干預(yù)，中西藥聯(lián)合使用，抑制交感神經(jīng)重構(gòu)，降低惡性心律失常發(fā)病率。