補(bǔ)腎解毒方對輻射小鼠外周血白細(xì)胞及脾臟NF-κBp65的影響

張?jiān)旗o，　楊云霜，　楊利丹，　張簫月，　杜　磊，　張　蓉（.遼寧醫(yī)學(xué)院　醫(yī)學(xué)系，遼寧錦州00；.第二炮兵總醫(yī)院　中醫(yī)與康復(fù)醫(yī)學(xué)科，北京00088）

補(bǔ)腎解毒方對輻射小鼠外周血白細(xì)胞及脾臟NF-κBp65的影響

張?jiān)旗o1，楊云霜2，楊利丹1，張簫月1，杜磊2，張蓉2
（1.遼寧醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)系，遼寧錦州121001；2.第二炮兵總醫(yī)院中醫(yī)與康復(fù)醫(yī)學(xué)科，北京100088）

目的：初步探討中藥方劑補(bǔ)腎解毒方對輻射小鼠外周血白細(xì)胞及脾臟NF-κBp65的影響.方法：將背景為C57BL/10JTLR4＋/＋及TLR－/－小鼠均隨機(jī)分為空白對照組、輻射模型組、補(bǔ)腎解毒方組，除空白對照組外，其余小組小鼠均接受一次性6Gy60Co γ-射線的全身照射，觀察各組小鼠輻射后基本情況；同時在輻射后第1 d、第14 d、第30 d各組取部分存活小鼠眼球采血，應(yīng)用全自動生化儀檢測各組小鼠白細(xì)胞數(shù)；并取其脾臟利用Western Blot檢測蛋白NF-κBp65的含量，觀察蛋白含量差異.結(jié)果：（1）與空白對照組相比，輻射后1 d小鼠白細(xì)胞呈下降趨勢；輻射后14 d，TLR4＋/＋補(bǔ)腎解毒方組白細(xì)胞數(shù)高于其他3組（P＜0.01或P＜0.05）；輻射后30 d，TLR4＋/＋補(bǔ)腎解毒方組白細(xì)胞恢復(fù)最快但與空白對照組比較仍有顯著性差異（P＜0.05）.（2）與TLR4＋/＋空白對照組相比，TLR4＋/＋輻射模型組NF-κBp65蛋白含量增加（P＜0.05），而TLR4＋/＋補(bǔ)腎解毒方組NF-κBp65蛋白含量首先高于TLR4＋/＋空白對照組（P＜0.05），后與TLR4＋/＋空白對照組蛋白含量水平保持基本一致（P＞0.05）.（3）與TLR4－/－空白對照組相比，TLR4－/－輻射模型組和TLR4－/－補(bǔ)腎解毒方組NF-κBp65蛋白含量增加，而TLR4－/－補(bǔ)腎解毒方組NF-κBp65蛋白含量與TLR4－/－輻射模型組無顯著性差異（P＞0.05）.結(jié)論：補(bǔ)腎解毒方通過TLR4信號通路減輕輻射所致的白細(xì)胞損傷，調(diào)節(jié)NF-κBp65蛋白含量，提高機(jī)體免疫力，有較理想的輻射防護(hù)作用.

輻射；TLR4；補(bǔ)腎解毒方

當(dāng)今世界，放射性核素被廣泛應(yīng)用在戰(zhàn)爭、能源、醫(yī)療等方面，如核武器、核能源、輻射治療腫瘤等，它在保障國家安全、促進(jìn)國民經(jīng)濟(jì)發(fā)展、治療疾病的同時，也給人類的健康和生命帶來威脅，核輻射損傷研究需要從個體醫(yī)學(xué)救治向群體防護(hù)轉(zhuǎn)變［1］.

中藥資源豐富，毒副作用小，在改善機(jī)體免疫力、抗輻射方面具有獨(dú)特優(yōu)勢.依據(jù)傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)理論［2－3］，總結(jié)多年的臨床經(jīng)驗(yàn)，在滋陰補(bǔ)腎六味地黃丸基礎(chǔ)上辨證加減具有清熱解毒功效的中藥［4－5］，形成自擬方補(bǔ)腎解毒方.隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，人們對核輻射所致人體損傷的作用機(jī)理的研究越來越深入，國內(nèi)外研究顯示Toll樣受體4（TLR4）信號通路是輻射免疫損傷的重要通路，本實(shí)驗(yàn)將從TLR4信號通路研究補(bǔ)腎解毒方修復(fù)受損白細(xì)胞、減輕炎癥反應(yīng)、提升機(jī)體免疫力及抗輻射的作用機(jī)理.

1　材料與方法

1.1材料

由康仁堂藥業(yè)有限公司顆粒劑調(diào)制成的補(bǔ)腎解毒方，中藥成分為：冬蟲夏草3 g，熟地黃10 g，山藥10 g，山茱萸12 g，茯苓10 g，牡丹皮10 g，白花蛇舌草10 g，澤瀉10 g.由南京生物醫(yī)藥研究院提供SPF 級276只健康雄性小鼠，質(zhì)量（20±2）g，其中敲除TLR4基因（TLR4－/－）小鼠138只，正常小鼠（TLR4＋/＋）138只，合格證號SCXK（蘇）2010－0001.由北京博奧森生物技術(shù)有限公司提供細(xì)胞核因子p65蛋白（NF-κBp65）抗體、內(nèi)參抗體β-肌動蛋白（β-actin）抗體及羊抗兔抗體.

1.2方法

（1）實(shí)驗(yàn)分組及處理方法利用隨機(jī)數(shù)字表法將實(shí)驗(yàn)小鼠隨機(jī)分為TLR4＋/＋空白對照組、TLR4＋/＋輻射模型組、TLR4＋/＋補(bǔ)腎解毒方組、TLR4－/－空白對照組、TLR4－/－輻射模型組、TLR4－/－補(bǔ)腎解毒方組，其中空白對照組各18只，其余每組各60只.每天08：00，用0.2 mL生理鹽水對TLR4＋/＋及TLR－/－空白對照組、輻射模型組小鼠灌胃，用等容積補(bǔ)腎解毒方中藥對TLR4＋/＋及TLR－/－補(bǔ)腎解毒方組小鼠灌胃；連續(xù)灌胃10 d，除空白對照組外，第11 d進(jìn)行6Gy60Co γ-射線照射5 min，劑量率1.2 Gy/min，照射后每組按相應(yīng)條件繼續(xù)灌胃14 d.小鼠給藥劑量是依據(jù)人體給藥量換算成的小鼠等效劑量，隨小鼠體重變化而變化，一般為13.50 g/（kg·d－1）.

（2）取材小鼠分別于輻射后第1、14、30 d取材，眼球采血，應(yīng)用全自動生化儀進(jìn)行血常規(guī)測定，檢測各組小鼠白細(xì)胞數(shù).同時分別將輻射后第1、14、30 d小鼠處死取材，取脾臟，用濾紙吸干血液，將組織置于勻漿器中用組織剪盡量將其剪碎，后加入裂解液于勻漿器中勻漿；組織盡量碾碎；裂解30 min后，將裂解液移至離心管中，4℃12000 r/min，離心5 min，取上清至離心管（EP）中行Western Blot檢測NF-κBp65蛋白含量.加入等量十二烷基硫酸鈉（SDS）后煮沸20min后行聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）.依據(jù)目的蛋白的大小將其電轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜上；用混勻的50g/L脫脂奶粉封閉1～2h；后加入用western一抗稀釋液稀釋至1∶300的NF-κBp65抗體，4℃緩慢輕搖孵育過夜后，用Tris-Hcl緩沖鹽溶液（TBST）洗膜3次，每次7min；加入用脫脂奶粉稀釋至1∶2000的羊抗兔抗體，室溫輕搖1h后，TBST洗膜3次，每次7min；化學(xué)發(fā)光法底物顯色5min，置暗室壓片顯影.顯影后，將纖維素膜用TBST洗膜3次，每次5 min，加入用脫脂奶粉稀釋至1∶2 000的β-actin抗體，室溫孵育1h后，TBST洗膜3次，每次7min；加入用脫脂奶粉稀釋至1∶5 000的羊抗兔抗體，同樣方法洗膜，壓片顯影.

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

運(yùn)用Epson scn掃描western blot條帶；以掃描空白灰度為參照，利用photoshop記錄灰度的平均值，求其差值比較（一般差值越大，蛋白含量越高）.每實(shí)驗(yàn)小組分別計(jì)算NF-κBp65/β-actin比值，利用Graphpad prism進(jìn)行作圖分析.實(shí)驗(yàn)過程中所測數(shù)據(jù)均重復(fù)3次以上，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義.

2　結(jié)果

2.1輻射后各組小鼠基本狀況

TLR4－/－及TLR4＋/＋空白對照組小鼠在實(shí)驗(yàn)階段一般情況好，毛色光亮，體質(zhì)量、飲食均在正常水平.其余各組小鼠輻射后均出現(xiàn)飲食量下降、狂躁、易驚恐等情況；第2d后開始精神萎靡不振，毛色暗淡無光甚至部分塊狀脫毛，飲食量明顯下降，體質(zhì)量普遍減輕.自然死亡的小鼠皮膚見出血跡象，解剖可見部分小鼠有腹水、肝脾腫大、肝結(jié)節(jié)，肝腎表面有成片點(diǎn)狀膿腫，胃腸黏膜損傷，腸梗阻，個別小鼠出現(xiàn)甲狀腺腫大及生殖器淤血等現(xiàn)象，余臟器肉眼未見明顯異常.

2.2輻射后各組小鼠致死情況

TLR4＋/＋組小鼠至輻射前，輻射模型組共57只，補(bǔ)腎解毒方組55只；TLR4－/－組小鼠至輻射前，輻射模型組共58只，補(bǔ)腎解毒方組共58只.在輻射后第2～14 d，TLR4＋/＋輻射模型組小鼠出現(xiàn)死亡，死亡只數(shù)共計(jì)41只；在輻射后第7～10 d，TLR4＋/＋補(bǔ)腎解毒方組小鼠出現(xiàn)死亡，死亡只數(shù)共計(jì)15只；在輻射后第5～13 d，TLR4－/－輻射模型組小鼠出現(xiàn)死亡，死亡只數(shù)共計(jì)39只；在輻射后第4～13 d，TLR4－/－補(bǔ)腎解毒方組小鼠出現(xiàn)死亡，死亡只數(shù)共計(jì)38只.與其他輻射后小組比較，TLR4＋/＋補(bǔ)腎解毒方組小鼠出現(xiàn)死亡時間晚，死亡數(shù)目較少，各組小鼠存活百分比見圖1.

圖1　各組小鼠存活百分比曲線Fig.1　Survival percentage curve of mice in each group

2.3輻射后小鼠白細(xì)胞數(shù)動態(tài)變化

與空白對照組相比，輻射后1 d，各組小鼠白細(xì)胞數(shù)均有不同程度的降低（P＜0.01）.TLR4＋/＋補(bǔ)腎解毒方組白細(xì)胞數(shù)明顯高于TLR4＋/＋輻射模型組、TLR4－/－輻射模型組與TLR4－/－補(bǔ)腎解毒方組，TLR4＋/＋補(bǔ)腎解毒方組白細(xì)胞數(shù)與TLR4＋/＋輻射模型組對比有顯著性差異（P＜0.01），而TLR4－/－補(bǔ)腎解毒方組與TLR4－/－輻射模型組對比則無顯著性差異（P＞0.05）.輻射后14 d，各組小鼠白細(xì)胞數(shù)與空白對照組比較仍有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），與同組第1d比較，TLR4－/－輻射模型組白細(xì)胞數(shù)明顯下降（P＜0.01），其余各組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），TLR4＋/＋補(bǔ)腎解毒方組白細(xì)胞數(shù)明顯高于其他三組（P＜0.01或P＜0.05）；輻射后30 d，各實(shí)驗(yàn)組小鼠白細(xì)胞均明顯回升，但仍未恢復(fù)至正常水平，與空白對照組比較有差異（P＜0.01），與同時間點(diǎn)模型組比較，TLR4＋/＋補(bǔ)腎解毒方組白細(xì)胞恢復(fù)更快，而TLR4－/－補(bǔ)腎解毒方組白細(xì)胞則低于TLR4－/－輻射模型組，見表1.

表1　輻射后各組小鼠白細(xì)胞數(shù)動態(tài)變化Table 1　The dynamic changes of white blood cells in mice after radiation　±s

表1　輻射后各組小鼠白細(xì)胞數(shù)動態(tài)變化Table 1　The dynamic changes of white blood cells in mice after radiation　±s

與同時間點(diǎn)空白對照組比較　1）P＜0.05，2）P＜0.01；與同時間點(diǎn)模型組比較　3）P＜0.05，4）P＜0.01；與同組第1 d比較5）P＜0.05，6）P ＜0.01；與同組第14 d比較 7）P＜0.05，8）P＜0.01

組別　輻射后第1 d　輻射后第14 d　輻射后第30 d TLR＋/＋空白對照組10.27±1.21　9.86±1.66　12.11±1.69 TLR＋/＋輻射模型組　0.48±0.132）　0.60±0.132）　4.48±0.372）6）8）TLR＋/＋補(bǔ)腎解毒方組　1.30±0.292）4）　1.32±0.142）4）　5.80±0.652）6）8）TLR－/－空白對照組　8.90±0.65　7.48±0.97　9.19±0.75 TLR－/－輻射模型組　0.44±0.052）　0.25±0.042）6）　4.35±0.472）6）8）TLR－/－補(bǔ)腎解毒方組　0.54±0.082）　0.65±0.112）4）　3.36±0.662）5）7）

2.4Western Blot檢測NF-κBp65蛋白含量

圖2　TLR4＋/＋組NF-κBp65蛋白含量變化Fig.2　The changes of NF-κBp65 protein content in TLR4＋/＋group

分別將輻射后第1、14、30 d小鼠處死取脾臟，吸凈血液，組織勻漿后行Western Blot檢測NF-κBp65蛋白含量.TLR4＋/＋組結(jié)果顯示：輻射后第1 d，補(bǔ)腎解毒方組、輻射模型組與空白對照組相比，NF-κBp65蛋白含量基本一致，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；輻射后第14 d，輻射模型組、補(bǔ)腎解毒方組與空白對照組相比，NF-κBp65蛋白含量明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），但補(bǔ)腎解毒方組蛋白含量低于輻射模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜ 0.05）；輻射后第30 d，輻射模型組與空白對照組相比，NF-κBp65蛋白含量明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），補(bǔ)腎解毒方組與空白對照組接近，低于輻射模型組（P＜0.05）（見圖2）.TLR4－/－組結(jié)果顯示：輻射后第1 d，補(bǔ)腎解毒方組、輻射模型組與空白對照組相比，NF-κBp65蛋白含量基本一致，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；輻射后第14 d，輻射模型組和補(bǔ)腎解毒方組與空白對照組相比，NF-κBp65蛋白含量升高，補(bǔ)腎解毒方組與輻射模型組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；輻射后第30 d，輻射模型組和補(bǔ)腎解毒方組與空白對照組相比，NF-κBp65蛋白含量升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），輻射模型組與補(bǔ)腎解毒方組對比，差異無顯著性意義（P＞0.05）（見圖3）.TLR4＋/＋組與TLR4－/－組相比，輻射后第1 d，NF-κBp65蛋白含量沒有明顯差異（P＞0.05）；輻射后第14 d，TLR4＋/＋輻射模型組蛋白含量明顯高于TLR4－/－輻射模型組（P＜0.05）；輻射后第30 d，TLR4＋/＋輻射模型組仍高于TLR4－/－輻射模型組（P＜0.05），但TLR4＋/＋補(bǔ)腎解毒方組蛋白含量明顯下降，已接近與空白對照組水平（P＞0.05），明顯低于TLR4－/－補(bǔ)腎解毒方組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）.

圖3　TLR4－/－組NF-κBp65蛋白含量變化Fig.3　The changes of NF-κBp65 protein content in TLR4－/－group

3　討論

隨著經(jīng)濟(jì)發(fā)展、社會進(jìn)步，核能的利用愈來愈廣泛，核輻射的危害也隨之突顯.前蘇聯(lián)切爾諾貝利核電事故、日本福島核泄漏事故等，使人們深刻認(rèn)識到核輻射的巨大危害.藥物治療是核輻射損傷防治的重要方法之一，但目前治療的藥物品種較少、適用性有限、作用機(jī)理不夠清晰.中藥具有低毒、防治結(jié)合、適用人群廣泛等優(yōu)點(diǎn)，成為國內(nèi)外藥物研究抗輻射損傷的熱點(diǎn)［6］.目前，中藥對核輻射損傷的防護(hù)機(jī)制及作用靶點(diǎn)尚不十分明確，限制了中藥抗輻射損傷的推廣應(yīng)用.

近年來，TLR4信號通路在電離輻射損傷機(jī)制研究中備受關(guān)注［7］.Shan YX等［8］發(fā)現(xiàn)巨噬細(xì)胞表面TLR4和細(xì)胞質(zhì)中的髓樣分化因子88（MyD88）表達(dá)含量會隨著輻射劑量的增加而上升，推測電離輻射因激活TLR4 MyD88依賴途徑介導(dǎo)炎癥介質(zhì)釋放而致機(jī)體損傷.傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)將電離輻射歸類為火邪、熱毒［9］，研究證明［4］六味地黃丸可以清熱解毒，驅(qū)邪外出，減輕輻射后免疫器官的損傷，促進(jìn)其功能的恢復(fù).本研究在六味地黃丸方劑基礎(chǔ)上優(yōu)化組合，在原方基礎(chǔ)上加白花蛇舌草10 g、冬蟲夏草3 g，熟地減量至10 g，不僅有效減輕熟地滋膩礙胃造成的輻射后納食減少，還在滋陰補(bǔ)腎的基礎(chǔ)上清熱解毒、補(bǔ)益氣血、固本正氣，以促進(jìn)機(jī)體更好、更快的修復(fù).為進(jìn)一步明確TLR4信號通路在輻射損傷中的機(jī)制及藥物防治作用，本研究應(yīng)用自擬補(bǔ)腎解毒方對基因工程動物模型進(jìn)行處理，觀察實(shí)驗(yàn)動物基本狀況、外周血白細(xì)胞數(shù)及NF-κBp65蛋白含量變化.

輻射可造成機(jī)體免疫器官及免疫系統(tǒng)損傷，引起免疫機(jī)能障礙，甚至是死亡.輻射后小鼠在飲食、體質(zhì)量、精神狀態(tài)等方面發(fā)生明顯改變，與其他組比較，TLR4＋/＋補(bǔ)腎解毒方組小鼠在輻射后出現(xiàn)死亡的時間晚，死亡數(shù)目相對較少，初步說明補(bǔ)腎解毒方通過TLR4信號通路保護(hù)機(jī)體抗輻射損傷.

機(jī)體受到輻射照射后，外周血白細(xì)胞幾乎都經(jīng)歷這樣一個過程：初期迅速下降，極期降到最低值，恢復(fù)期則逐步恢復(fù)［10］.本研究輻射后1 d各組小鼠白細(xì)胞開始下降，輻射后14 d開始回升，輻射后30 d大幅回升，基本符合此變化趨勢.輻射后1 d，TLR4＋/＋補(bǔ)腎解毒方組白細(xì)胞保留最多，表明補(bǔ)腎解毒方能在輻射初期保護(hù)殘存白細(xì)胞的數(shù)量，調(diào)動造血系統(tǒng)產(chǎn)生更多白細(xì)胞來抵抗輻射損害.輻射后14 d，TLR4＋/＋補(bǔ)腎解毒方組白細(xì)胞高于其他三組，表明補(bǔ)腎解毒方在該階段干預(yù)作用最強(qiáng)，其發(fā)揮效應(yīng)的通路為TLR4信號通路，且能有效促進(jìn)輻射后白細(xì)胞的增殖，維持造血微環(huán)境的穩(wěn)定.輻射后30 d，各組小鼠白細(xì)胞明顯回升，TLR4＋/＋補(bǔ)腎解毒方組白細(xì)胞高于TLR4＋/＋輻射模型組，TLR4－/－補(bǔ)腎解毒方組白細(xì)胞則低于TLR4－/－輻射模型組，再次證明補(bǔ)腎解毒方發(fā)揮主要效應(yīng)的通路為TLR4信號通路，補(bǔ)腎解毒方能有效修復(fù)電離輻射引起的白細(xì)胞損傷，促進(jìn)造血微環(huán)境趨向正常，輻射防護(hù)作用明顯.

NF-κB是常見的核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子，正常與IκB蛋白結(jié)合以無活性的形式存在于細(xì)胞質(zhì)中.電離輻射后，脂多糖激活TLR4信號通路使IκB蛋白抑制性激酶活化，IκB蛋白泛素化降解后，NF-κB活化進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)，與炎癥因子相關(guān)的DNA序列結(jié)合誘導(dǎo)基因轉(zhuǎn)錄，最終產(chǎn)生炎癥因子介導(dǎo)免疫反應(yīng)［11］，同時這些物質(zhì)又作為激動劑進(jìn)一步作用于NF-κB，使其活性增強(qiáng)，放大炎癥信號，引起組織進(jìn)一步損傷［12］.在TLR4＋/＋組中，輻射后第1 d，補(bǔ)腎解毒方組、輻射模型組與空白對照組相比，NF-κBp65蛋白含量基本一致，這說明輻射后，機(jī)體應(yīng)激在第1 d不足以激活TLR4下游信號通路，補(bǔ)腎解毒方作用也不明顯；輻射后第14 d，輻射模型組、補(bǔ)腎解毒方組與空白對照組相比，NF-κBp65蛋白含量明顯升高，但補(bǔ)腎解毒方組蛋白含量低于輻射模型組，這說明在輻射第14 d TLR4/NF-κBp65信號通路已被激活，TLR4＋/＋輻射模型組 NF-κBp65蛋白含量升高，補(bǔ)腎解毒方也發(fā)揮作用使TLR4＋/＋補(bǔ)腎解毒方組NF-κBp65蛋白含量有所降低；輻射后第30 d，輻射模型組與空白對照組相比，NF-κBp65蛋白含量明顯升高，但補(bǔ)腎解毒方組與空白對照組相比，蛋白含量基本一致，這說明在輻射第30 d補(bǔ)腎解毒方通過TLR4/NF-κBp65信號通路對免疫系統(tǒng)作用最為明顯.在TLR4－/－組中，輻射后第1 d，補(bǔ)腎解毒方組、輻射模型組與空白對照組相比，NF-κBp65蛋白含量基本一致，說明輻射后各因素未激活TLR4－/－相關(guān)蛋白水平變化；輻射后第14 d和第30 d，輻射模型組和補(bǔ)腎解毒方組NF-κBp65蛋白含量均升高，明顯高于空白對照組，由此可見，TLR4敲除小鼠使用補(bǔ)腎解毒方未發(fā)揮干預(yù)作用；TLR4－/－組與TLR4＋/＋組相比，在輻射后第14 d和第 30 d， TLR4＋/＋輻射模型組高于TLR4－/－輻射模型組，而輻射后第30 d，TLR4＋/＋補(bǔ)腎解毒方組蛋白含量明顯下降已接近空白對照組水平.說明電離輻射后，補(bǔ)腎解毒方主要通過TLR4信號通路下調(diào)NF-κBp65蛋白水平發(fā)揮防護(hù)效應(yīng)，抑制炎癥發(fā)生，增強(qiáng)組織修復(fù)能力，提高機(jī)體免疫力，進(jìn)而防止自身炎性損傷而發(fā)揮免疫抑制作用.

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［責(zé)任編輯：陳詠梅］

Effect of BushenJiedu recipe on peripheral blood leukocytes and spleen NF-κBp65 of mice after radiation

ZHANG Yunjing1，YANG Yunshuang2，YANG Lidan1，ZHANG Xiaoyue1，DU Lei2，ZHANG Rong2
（1.Department of Medicine，Liaoning Medical University，Liaoning Jinzhou 121001，China；
2.Department of Traditional Chinese and Rehabilitation Medicine，the Second Artillery General Hospital，Beijing 100088，China）

Aim：To study the protective effects of BushenJiedurecipe，a hybrid of traditional Chinese medicine，on peripheral blood leukocytes and spleen NF-κBp65 of mice which suffered radiation.Meth-ods：All the mice of C57BL/10J，TLR4＋/＋andTLR4－/－were randomly divided into 3 groups：blank control group，radiation model group，Chinese medicine group.Except the blank control group，the remaining four groups were given the total body radiation of60Co γ-ray with 6 Gy doses.Recording the survival situation，took blood from eyeball and dectected the count of leukocytes in peripheral bloodwith automatic biochemical analyzer，then obtained the spleen of living mice after radiation on 1th day、14th day、30th day，detected the protein level of NF-κBp65 with the technique of Western Blot and ob-serving the differences whin them.Results：（1）Compared with blank control group，leukocyte counts after radiation 1 d are decreased，after radiation 14d，leukocyte counts of TLR4＋/＋Bushenjiedu group are higher than that of the other three groups（P＜0.01 or P＜0.05）；after radiation 30 d，leukocyte counts of TLR4＋/＋Bushenjiedu group recovered fastest，but there are still differences with blank con-trol group（P＜0.05）.（2）Compared with the TLR4＋/＋blank control group，the level of protein NF-κBp65 in TLR4＋/＋radiation model group is increased after radiation（P＜0.05）.However，the level of NF-κBp65 in TLR4＋/＋Chinese medicine group is higher than that of TLR4＋/＋blank control group firstly（P＜0.05），then with one accord（P＞0.05）（3）compared with the TLR4－/－blank control group，bothTLR4－/－radiation model group and TLR4－/－Chinese medicine groupon the level of pro-tein are higher，whereas between of them are parallel（P＞0.05）.Conclusion：The recipe of BushenJiedu can obviously alleviate radiation injury on leukocyte counts，regulate NF-κBp65 protein content by the signal pathway of TLR4，which is relate to immunity and its protective effect is more ideal.

radiation；TLR4；BuShenJieDu recipe

R692.5

A

1000－9965（2015）06－0490－06

10.11778/j.jdxb.2015.06.009

2015－08－11

國家自然基金青年科學(xué)基金項(xiàng)目（81202637）

張?jiān)旗o（1988－），女，研究方向：康復(fù)醫(yī)學(xué)與理療學(xué)

張蓉，副主任醫(yī)師，Mobile：18910883010，E-mail：zhangrongyisheng＠sina.com