• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    基于UPLC-MS技術(shù)分析沙棘果肉成熟過程中生物活性成分差異

    2023-12-14 12:45:40阮成江吳立仁
    食品科學 2023年22期
    關(guān)鍵詞:黃酮差異

    丁 健,阮成江,*,楊 紅,關(guān) 瑩,李 賀,陳 葉,唐 克,吳立仁

    (1.大連民族大學資源植物研究所,遼寧 大連 116600;2.西藏農(nóng)牧學院資源與環(huán)境學院,西藏 林芝 860000;3.黑龍江省農(nóng)業(yè)科學院,黑龍江 哈爾濱 150059)

    沙棘(HippophaeL.)屬胡頹子科沙棘屬植物,是水土保持和生態(tài)建設(shè)的重要經(jīng)濟樹種[1]。沙棘果實、葉和莖中富含多種對人體有益、具較高營養(yǎng)和藥用價值的生物活性成分,在食品、日化和醫(yī)藥等行業(yè)被廣泛應(yīng)用,其中,沙棘果汁酸甜可口,是市場認可度較高的產(chǎn)品之一[2-3]。發(fā)育期間的沙棘果肉從綠色經(jīng)黃綠色,逐漸轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色、橙黃色或橘紅色,黃酮類化合物、VC、類胡蘿卜素、5-羥色胺、γ-氨基丁酸、脂肪酸、多糖和有機酸等代謝物含量發(fā)生顯著變化[4-5]。近年來,關(guān)于沙棘果汁、果油具有抗癌功能的報道越來越多,這與沙棘果肉中生物活性成分的高積累密切相關(guān)[6-7]。

    沙棘是雌雄異株,有6 個種13 個亞種,蒙古沙棘(H.mongolia)和中國沙棘(H.sinensis)是中國北方分布最廣泛的2 個亞種[8],不同沙棘種質(zhì)果實之間的生物活性成分及含量均存在明顯差異[1]。甘油三酯(triacylglycerol,TAG)是沙棘油脂的主要成分,其含量直接決定果肉含油率(約5.5%~24.3%)[9],而其結(jié)構(gòu)則決定于脂肪酸組分[10]。沙棘是罕有的在非種子組織(果肉)中高積累棕櫚油酸(C16:1)的植物[11],它具有抗?jié)儭⒖寡趸?、抗癌、降壓和抑菌作用[12-13]。研究發(fā)現(xiàn),C16:1含量與delta-9去飽和酶(delta-9 desaturase,Δ9D)基因的高表達及其與TAGsn-2位的親和性密切相關(guān)[10,12]。除此之外,黃酮類化合物是沙棘果實中重要的次生代謝產(chǎn)物[14]。沙棘黃酮主要包括蘆丁、槲皮素、異鼠李素、兒茶素、山柰酚和柚皮素等,果肉總黃酮含量約為102 μg/g[15]。沙棘黃酮具有抗氧化、抗炎、抗腫瘤和降血壓等作用[16-17]。近年來,已有較多研究對沙棘油脂、脂肪酸、黃酮、5-羥色胺、維生素等生物活性成分和提取純化工藝進行探究,但有關(guān)沙棘果肉(非種子組織)成熟期間主要生物活性成分的合成代謝機理仍不清楚。

    為解析沙棘油脂、黃酮等生物活性成分的合成代謝規(guī)律,以2 個沙棘品系發(fā)育期間(綠色和橙色時期)的果肉為研究對象,采用超高效液相色譜-質(zhì)譜(ultra-high performance liquid chromatography-mass spectrometry,UPLC-MS)技術(shù)對沙棘果肉生物活性成分進行全面解析,從非靶向代謝組學角度闡明沙棘果肉發(fā)育期間的差異代謝輪廓,篩選與沙棘果肉生物活性成分合成相關(guān)的關(guān)鍵代謝物,為揭示木本沙棘果肉中抗癌生物活性成分合成積累機理提供科學依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    以沙棘品系‘Za56’和‘TF2-36’的果實為實驗材料,各品系選擇6 株6 年齡植株為生物學重復,種植環(huán)境和田間管理方式相同?!甖a56’為中國沙棘亞種(♂)和蒙古沙棘亞種(♀)的雜交種,‘TF2-36’為蒙古沙棘亞種的實生子代。分別在2017年7月7日和8月10日,采摘兩個品系的綠色(G)和橙色(O)果實,并命名為56G、56O、36G和36O,立即置于凍存管內(nèi)用液氮速凍,運抵實驗室后在-80 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

    乙醇、乙腈(均為色譜純)美國Merck公司;乙酸銨(純度≥98%)美國Sigma-Aldrich公司;所有分離用化學試劑均為國產(chǎn)分析純。

    1.2 儀器與設(shè)備

    1290 Infinity LC超高壓液相色譜儀 美國Agilent公司;Triple TOF 5600質(zhì)譜儀(配電噴霧離子源(electron spray ionization,ESI))美國AB SCIEX公司。

    1.3 方法

    1.3.1 樣品預處理

    用液氮研磨去除種子后的沙棘果肉樣品,果肉粉末經(jīng)冷凍干燥后[18],稱取20 mg,加入200 μL超純水勻漿,再加入800 μL甲醇-乙腈(1∶1,V/V),旋渦混勻后于低溫下超聲破碎30 min,-20 ℃孵育1 h后再離心15 min(13 000 r/min,4 ℃),取上清液過0.22 μm微孔濾膜后,用于UPLC-MS分析。

    1.3.2 色譜條件

    色譜柱:Waters ACQUIT Y UPLC BEH C18(100 mm×2.1 mm,1.7 μm);柱溫:25 ℃;流動相:A為含25 mmol/L乙酸銨和25 mmol/L氨水的溶液,B為乙腈;梯度洗脫程序:0~1 min,5% A、95% B;1~14 min,5%~35% A、95%~65% B;14~16 min,35%~60% A、65%~40% B;16~18 min,60% A、40% B;18~18.1 min,60%~5% A、40%~95% B;18.1~23 min,5% A、95% B;流速:0.3 mL/min;進樣量:2 μL。分析時樣品一直置于4 ℃自動進樣器中。

    1.3.3 質(zhì)譜條件

    分別采用ESI正離子和負離子模式進行檢測。離子源溫度600 ℃;氣簾氣壓力30 psi;質(zhì)譜電壓5 500 V(正負兩種模式);質(zhì)譜掃描范圍60~1 000 Da;子離子掃描范圍25~1 000 Da;去簇電壓60 V(正負兩種模式);碰撞能量(35±15)eV。

    1.4 數(shù)據(jù)處理與分析

    采用XCMS程序進行峰對齊、保留時間校正和提取峰面積。代謝物鑒定采用精確質(zhì)量數(shù)匹配和二級譜圖匹配的方式,檢索自建數(shù)據(jù)庫。對XCMS提取得到的數(shù)據(jù),刪除組內(nèi)缺失值>50%的離子峰。應(yīng)用軟件SIMCA-P 14.1(Umetrics,瑞典)進行模式識別,數(shù)據(jù)經(jīng)Pareto-scaling預處理后,進行多維統(tǒng)計分析,包括無監(jiān)督主成分分析(principal component analysis,PCA)和正交偏最小二乘判別分析(orthogonal partial least squaresdiscriminant analysis,OPLS-DA)。依據(jù)不同品系發(fā)育期樣品組間變量投影重要度(variable importance in the projection,VIP)>1、t檢驗的P<0.05篩選組間的顯著差異代謝物[19-20],利用京都基因與基因組百科全書(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)(http://www.genome.jp/kegg/pathway.html)數(shù)據(jù)庫對顯著差異代謝物的代謝通路進行分析。聚類熱圖和箱線圖使用生信云平臺分析(http://cloud.aptbiotech.com/#/ main-page)。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 不同沙棘果肉樣品的PCA

    基于XCMS,在沙棘品系‘Za56’和‘TF2-36’發(fā)育期間的果肉樣品(56G、56O、36G和36O)中共檢測到3 385 個(ESI正離子模式)和2 837 個(ESI負離子模式)代謝特征離子信號。利用SIMCA軟件構(gòu)建無監(jiān)督PCA模型,4 組樣品的數(shù)據(jù)點在PCA得分圖上區(qū)分明顯(圖1),在兩兩比較PCA得分圖中也顯著區(qū)分(圖2),所有樣本均落在95%置信區(qū)間內(nèi),說明代謝組組間的分析數(shù)據(jù)可信度較高[21]。

    圖1 沙棘品系‘Za56’和‘TF2-36’綠色(G)和橙色(O)果肉樣品的PCA得分圖Fig.1 PCA score plots of green (G) and orange (O) pulp samples from sea buckthorn strains ‘Za56’ and ‘TF2-36’

    圖2 4 組樣品在正離子模式(A~D)和負離子模式(E~H)下的PCA得分圖Fig.2 PCA score plots of the four pulp groups in positive(A,B,C and D) and negative ion modes (E,F,G and H)

    2.2 不同沙棘果肉樣品的OPLS-DA

    為獲得4 組樣品間的差異信息,建立有監(jiān)督OPLSDA模型。沙棘品系‘Za56’和‘TF2-36’的綠色和橙色果實樣品點分布在不同區(qū)域并且明顯分為不同簇(圖3),表明4 組樣品在代謝物種類、含量上存在差異。經(jīng)7 次循環(huán)交互驗證發(fā)現(xiàn)R2Y、Q2>0.9(越接近1表明模型越穩(wěn)定可靠)(表1);然后,經(jīng)200 次循環(huán)迭代置換驗證發(fā)現(xiàn)(負值表明未發(fā)生過擬合),因此,建立的OPLS-DA模型穩(wěn)定可靠,具有較高的預測能力[22]。

    表1 OPLS-DA模型的評價參數(shù)Table 1 Evaluation parameters of OPLS-DA models

    圖3 4 組樣品的正離子模式(A~D)和負離子模式(E~H)OPLS-DA得分圖Fig.3 OPLS-DA score plots of the four groups in positive(A,B,C and D) and negative ion (E,F,G and H) modes

    2.3 差異代謝物的篩選與識別

    根據(jù)OPLS-DA獲得的VIP>1和t檢驗的P<0.05篩選組間的顯著差異代謝物。在56G vs.56O、36G vs.36O、56G vs.36G和56O vs.36O比較組中,分別有72、70、83 個和64 個顯著差異代謝物(包括正、負離子模式),在各比較組中,呈下調(diào)趨勢的差異代謝物較多(圖4)。由于同一代謝物可在不同組間均表現(xiàn)差異顯著性,因此,共篩選到124 個顯著差異代謝物,其中正離子模式下有73 個,負離子模式下有51 個?;趯嶒炇易越〝?shù)據(jù)庫和HMDB數(shù)據(jù)庫,識別到上述差異代謝物主要包括有機酸、碳水化合物、脂類、黃酮類、次生代謝物等(圖5),其中,脂類和黃酮是被稱為“軟黃金”沙棘油中最有價值的生物活性成分,在代謝組層面解析了沙棘果肉生物活性成分的代謝特征,為進一步開展轉(zhuǎn)錄組、蛋白質(zhì)組關(guān)聯(lián)分析沙棘關(guān)鍵成分的合成機制提供科學依據(jù)[2,4,23]。

    圖5 沙棘品系‘Za56’和‘TF2-36’綠色和橙色果實樣品的顯著差異代謝物熱圖Fig.5 Heatmap of significantly differential metabolites in green and orange berry pulps from ‘Za56’ and ‘TF2-36’ sea buckthorn

    2.4 與脂類合成代謝相關(guān)的顯著差異代謝物分析

    基于4 組果實樣品(56G、56O、36G和36O)間的124 個顯著差異代謝物數(shù)據(jù),進一步利用HMDB數(shù)據(jù)庫和KEGG代謝通路功能分析,共識別到15 個顯著差異代謝物參與脂類、脂肪酸合成積累(表2),它們在4 組樣品中呈現(xiàn)出不同的含量差異(離子峰的相對豐度),根據(jù)箱形圖可直觀反映各差異代謝物在4 組樣品中的豐度變化(圖6)。在‘Za56’和‘TF2-36’果肉發(fā)育過程中,分別識別到8 個和7 個顯著差異代謝物,棕櫚油酸、PC(16:0/16:0)、甘油磷酰膽堿、二羥基丙酮、植物鞘氨醇、二氫鞘氨醇和油酸呈上調(diào)趨勢,尤其,PC(16:0/16:0)、二羥基丙酮和植物鞘氨醇在兩個品系中均顯著上調(diào)(表2);另外,在兩個品系的綠果和橙果時期分別發(fā)現(xiàn)9 個和10 個顯著差異代謝物,PC(16:0/16:0)、甘油磷酰膽堿和二氫鞘氨醇呈上調(diào)趨勢(圖6),但只有甘油磷酰膽堿在兩個比較組中均上調(diào)(表2)。

    表2 沙棘果肉脂類、黃酮和5-羥色胺等合成代謝相關(guān)的顯著差異代謝物Table 2 Significantly differential metabolites associated with the synthesis and metabolism of lipids,flavonoids and serotonin in sea buckthorn berry pulp

    圖6 56G、56O、36G和36O果肉的顯著差異代謝物比較Fig.6 Comparison of significantly differential metabolites between the four groups

    Omega-7脂肪酸通常在深海魚類(如鳳尾魚、鯊魚等)和少數(shù)植物種子(如澳洲堅果、貓爪草等)中積累,沙棘是自然界中罕有的在果肉(非種子組織)中高積累棕櫚油酸(omega-7脂肪酸)的植物[12]。沙棘果肉棕櫚油酸在‘Za56’發(fā)育期間顯著上調(diào),且在56O中顯著高于36O(表2),這與‘Za56’果肉發(fā)育期間的C16:1含量顯著上升,且‘Za56’發(fā)育期間的果肉含量(13.3%~41.30%)顯著高于‘TF2-36’(12.57%~39.03%)的規(guī)律一致[24]。有研究認為沙棘果油中的生物活性成分多于沙棘籽油,尤其,特有的C16:1可降低人體膽固醇、防止心律失常和抑制腫瘤[25]。Yang Baoru等[26]發(fā)現(xiàn)沙棘C16:1等脂肪酸和脂類含量高低與其(亞)種、海拔、采摘時期等有關(guān),而且C16:1含量及以其為主的單不飽和脂肪酸含量占總脂肪酸的比例是評價沙棘果油真?zhèn)渭捌焚|(zhì)的關(guān)鍵指標[27]。

    脂肪酸通常以酯的形式參與各種脂質(zhì)的組成,TAG是植物油的主要成分,其含量與含油率高低密切相關(guān)[28]。脂肪酸的高積累則與其在TAG合成過程中被二酰甘油轉(zhuǎn)移酶(diacylglycerol acyltransferasea,DGAT)和磷脂∶二酰甘油?;D(zhuǎn)移酶(phospholipid∶diacylglycerol acyltransferase,PDAT)催化結(jié)合至TAG有關(guān)[29]。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上的3-磷酸甘油連續(xù)組裝來自于細胞質(zhì)的acyl-CoA脂肪酸形成DAG后,在DGAT催化下合成TAG,這被稱為依賴acyl-CoA的Kennedy途徑[30];此外,近年來在酵母、蓖麻和擬南芥TAG合成過程中發(fā)現(xiàn)的acyl-CoA獨立途徑也逐漸被重視[31],即利用磷脂(而非acyl-CoA)作為酰基供體,DAG為受體,在PDAT催化下,將磷脂酰膽堿(phosphatidylcholine,PC)sn-2位的?;D(zhuǎn)移到DAG上,合成TAG[29,31]。研究發(fā)現(xiàn),PC的合成代謝途徑更復雜,在溶血磷脂?;D(zhuǎn)移酶(lysophospholipid acyltransferase,LPCAT)的作用下,溶血磷脂酰膽堿(lysophosphatidylcholine,lysoPC)和游離acyl-CoA反應(yīng)生成PC[32];而且有膽堿存在時,DAG又會被二?;视湍憠A磷酸轉(zhuǎn)移酶催化形成PC[33]。在‘Za56’和‘TF2-36’果實成熟過程中,橙色果實樣品(56O和36O)的PC(16:0/16:0)顯著高于綠色果實(56G和36G),而且在36G中顯著高于56G(表2),表明成熟沙棘果肉的PC(16:0/16:0)相對含量較高,這與‘Za56’和‘TF2-36’果肉發(fā)育期間C16:0含量(分別升高1.5 倍和1.4 倍)和含油率(分別升高1.7 和3.7 倍)逐漸增加的規(guī)律相符[24],因此,PC(16:0/16:0)可能是影響沙棘果肉C16:0含量和含油率的代謝標志物。另外,LysoPC(16:0)和LysoPC(18:1(9Z))的相對含量下調(diào)(表2),這可能與LPCAT優(yōu)先以LysoPC(16:0)和LysoPC(18:1(9Z))為底物而反應(yīng)生成PC有關(guān)[33],而且,膽堿在各比較組中也呈顯著下調(diào)趨勢,即為DAG向PC轉(zhuǎn)化提供了大量供體[29]??梢奓ysoPC(16:0)、LysoPC(18:1(9Z))和膽堿的下調(diào)都與PC合成積累相關(guān)。除此之外,LysoPC還可被溶血磷脂酶I催化生成甘油磷酰膽堿,然后進一步被甘油磷酸二酯酶催化生成膽堿和甘油三磷酸(glycerol 3-phosphate,G3P)[34]。高油品系‘TF2-36’果肉中的甘油磷酰膽堿顯著高于低油品系‘Za56’(表2),而且在果肉發(fā)育期間呈顯著上調(diào)趨勢(圖6),這與PC(16:0/16:0)的變化模式相似,這可能與甘油磷酰膽堿被催化為膽堿和G3P后,分別為PC和TAG合成提供更多前體物質(zhì)有關(guān)。因此,甘油磷酰膽堿也可能是影響沙棘果肉含油率高低的代謝標志物。

    2.5 與黃酮合成代謝相關(guān)的顯著差異代謝物分析

    沙棘油之所以被譽為“軟黃金”,還在于其富含多種黃酮類物質(zhì)。根據(jù)HMDB數(shù)據(jù)庫和KEGG代謝通路分析,在4 組果實樣品(56G、56O、36G和36O)的代謝組比較中,共識別到7 個與黃酮合成相關(guān)的顯著差異代謝物(表2),分別為異鼠李素、水仙堿/異鼠李素-3-O-蕓香糖苷、山柰酚-3-O蕓香糖苷、兒茶素、柚皮素、蘆丁和原花青素B2,其中,只有異鼠李素在發(fā)育期間呈上調(diào)趨勢,它們具有抗氧化、抗病毒等生物活性,在防治炎癥、癌癥和心腦血管疾病等方面作用明顯[35-36]。沙棘不同品種、組織器官(果肉、種子、葉片等)和發(fā)育時期的黃酮類成分含量差異明顯[37-39]。在沙棘果汁中異鼠李素含量最高(25.1~31.1 mg/100 g),其次為槲皮素(7.7~8.1 mg/100 g)和山柰酚(1.2~1.6 mg/100 g)[37];在沙棘全果實(含果肉和種子)中槲皮素(6.7~17.5 mg/100 g)和異鼠李素(4.5~10.6 mg/100 g)含量也較高[38]。在‘Za56’和‘TF2-36’果肉發(fā)育期間分別識別到4 個和5 個顯著差異代謝物,其中顯著上調(diào)的僅有異鼠李素(表2),差異倍數(shù)(fold change,F(xiàn)C)分別達3.76和2.50,其他顯著差異代謝物均不同程度的下調(diào)(圖6),這與沙棘果汁中異鼠李素含量較高的規(guī)律相符[37]。在56G vs.36G和56O vs.36O比較組中分別發(fā)現(xiàn)7 個和5 個顯著差異代謝物,均顯著上調(diào)(表2),即它們在‘TF2-36’果肉中的合成量一直高于‘Za56’(圖6)。有研究發(fā)現(xiàn)沙棘總黃酮含量在果肉發(fā)育期間先下降后上升,而異鼠李素含量在沙棘果實發(fā)育期間呈顯著上升趨勢,這可能與兒茶素、山柰酚和蘆丁含量顯著下降有關(guān)[37,40],溫秀鳳等[41]發(fā)現(xiàn)沙棘葉游離總黃酮在7月中下旬急劇下降,其中,槲皮素、山柰酚和蘆丁含量也均呈下降趨勢。這與‘Za56’和‘TF2-36’果肉中異鼠李素上調(diào)和兒茶素下調(diào)的變化規(guī)律相似。因此,異鼠李素可能是影響沙棘果肉黃酮含量高低的代謝標志物。

    2.6 5-羥色胺等生物活性成分分析

    5-羥色胺是一種單胺類神經(jīng)遞質(zhì),具有廣泛的生物學活性,參與調(diào)節(jié)神經(jīng)活動、胃腸道功能、止凝血過程與機體免疫等多種生理過程[42]。有研究發(fā)現(xiàn),沙棘莖和葉中富含5-羥色胺(分別為840~4 410 μg/g和12.5~213.8 μg/g),且其提取物具有抗癌、抗菌和清除自由基活性[43-44]。利用UPLC-MS技術(shù)在沙棘果肉中發(fā)現(xiàn)了5-羥色胺及其上下游代謝物,其中5-羥色胺及其前體色胺在各比較組中均呈下調(diào)趨勢,而其代謝產(chǎn)物N-乙酰羥色氨在各比較組中均顯著上調(diào)(表2),可見,二者之間的關(guān)鍵酶芳香基胺N-乙酰轉(zhuǎn)移酶活性對5-羥色胺的合成積累具有重要影響[45],這可為解析沙棘5-羥色胺合成代謝機理提供科學依據(jù),也為利用基因工程技術(shù)提高5-羥色胺含量提供了關(guān)鍵靶點。

    許多研究表明,沙棘果實、葉片和莖提取物具有抗氧化、抗癌和抗腫瘤活性[46-48]。本實驗組在沙棘果肉中首次發(fā)現(xiàn)卡培他濱,有研究表明,它通過抑制細胞分裂、干擾RNA和蛋白質(zhì)合成抑制腫瘤生長,是一種對癌細胞具有高選擇性的口服抗癌藥物[49]。在‘Za56’和‘TF2-36’果肉變色成熟期間,卡培他濱均顯著上調(diào)(FC分別為1.32和2.63)(表2)。此外,在沙棘果肉中還發(fā)現(xiàn)了γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)、白藜蘆醇、甜菜堿、焦兒茶酚、VC和VB6等顯著差異代謝物。尤其,‘TF2-36’成熟果肉(36O)中的GABA含量顯著高于56O(FC=2.13)(表2),這與沙棘果肉的非靶向1H核磁共振代謝組研究結(jié)果相似[5]。GABA是哺乳動物中樞神經(jīng)系統(tǒng)中一種重要的抑制性神經(jīng)遞質(zhì),具有鎮(zhèn)定、抗癌、降脂、降壓等功能[50]。發(fā)現(xiàn)并解析沙棘果肉的生物活性成分合成規(guī)律,為利用其為原料研發(fā)抗癌、抗抑郁,治療心血管和精神類疾病等藥物提供科學依據(jù)。

    3 結(jié)論

    采用UPLC-MS技術(shù)對2 個沙棘品系發(fā)育期間(綠色和橙色)的果肉進行了非靶向代謝組學研究。分析發(fā)現(xiàn)4 組樣品間存在較大的代謝差異,并識別到124 個顯著差異代謝物,包括有機酸、碳水化合物、脂類、黃酮類和次生代謝物等;根據(jù)KEGG代謝通路分析,分別識別到15、7 個和4 個顯著差異代謝物與脂類、黃酮和5-羥色胺合成代謝相關(guān),以及其他8 個與抗癌功能相關(guān)的顯著差異代謝物。PC(16:0/16:0)和甘油磷酰膽堿在各比較組中均顯著上調(diào),它們是影響沙棘果肉含油率高低的代謝標志物。異鼠李素在各比較組中均顯著上調(diào),與沙棘果肉中富含黃酮密切相關(guān)。此外,N-乙酰羥色氨、卡培他濱和GABA等抗癌相關(guān)生物活性成分在‘Za56’和‘TF2-36’果肉發(fā)育期間也呈現(xiàn)出相對較高的含量。本研究采用非靶向代謝組學方法較為系統(tǒng)地闡明了不同沙棘品系果肉發(fā)育期間的代謝組差異,將為解析沙棘生物活性成分合成代謝機制以及相關(guān)功能產(chǎn)品開發(fā)提供科學依據(jù)。

    猜你喜歡
    黃酮差異
    相似與差異
    音樂探索(2022年2期)2022-05-30 21:01:37
    桑黃黃酮的研究進展
    找句子差異
    DL/T 868—2014與NB/T 47014—2011主要差異比較與分析
    一測多評法同時測定腦心清片中6種黃酮
    中成藥(2018年11期)2018-11-24 02:57:00
    生物為什么會有差異?
    HPLC法同時測定固本補腎口服液中3種黃酮
    中成藥(2017年8期)2017-11-22 03:19:40
    MIPs-HPLC法同時測定覆盆子中4種黃酮
    中成藥(2017年10期)2017-11-16 00:50:13
    DAD-HPLC法同時測定龍須藤總黃酮中5種多甲氧基黃酮
    中成藥(2017年4期)2017-05-17 06:09:50
    M1型、M2型巨噬細胞及腫瘤相關(guān)巨噬細胞中miR-146a表達的差異
    亚洲av电影不卡..在线观看| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 两个人视频免费观看高清| 能在线免费看毛片的网站| 青春草国产在线视频| 久久久久久久亚洲中文字幕| 国产精品国产高清国产av| 日日啪夜夜撸| 欧美性猛交黑人性爽| 在现免费观看毛片| 精品无人区乱码1区二区| 亚洲三级黄色毛片| 欧美三级亚洲精品| 亚洲综合色惰| 免费观看的影片在线观看| 精品久久久久久久久久久久久| 精品少妇黑人巨大在线播放 | 丰满乱子伦码专区| 久久久国产成人免费| 观看免费一级毛片| 免费观看在线日韩| 日韩制服骚丝袜av| 欧美激情在线99| 成人av在线播放网站| 乱码一卡2卡4卡精品| 国产毛片a区久久久久| 人人妻人人澡欧美一区二区| 欧美一区二区亚洲| 午夜福利高清视频| 亚洲精品亚洲一区二区| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 亚洲天堂国产精品一区在线| 午夜精品一区二区三区免费看| 国产成人午夜福利电影在线观看| 成年版毛片免费区| 22中文网久久字幕| 婷婷色综合大香蕉| 国产精品一及| 久久久精品欧美日韩精品| 日日干狠狠操夜夜爽| 精品人妻熟女av久视频| 免费看av在线观看网站| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 波野结衣二区三区在线| 91av网一区二区| 九九热线精品视视频播放| 2021少妇久久久久久久久久久| 又爽又黄无遮挡网站| 国产精品永久免费网站| 国产成人a区在线观看| 特级一级黄色大片| 午夜a级毛片| 国产亚洲最大av| 精品人妻熟女av久视频| 青春草视频在线免费观看| 日本-黄色视频高清免费观看| 久久久成人免费电影| 色播亚洲综合网| 18禁动态无遮挡网站| 免费看光身美女| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 我要看日韩黄色一级片| 91精品国产九色| 亚洲在久久综合| 亚洲精品,欧美精品| 中国国产av一级| 秋霞在线观看毛片| 国产激情偷乱视频一区二区| 亚洲,欧美,日韩| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 哪个播放器可以免费观看大片| 男女边吃奶边做爰视频| 国产亚洲一区二区精品| 亚洲av二区三区四区| 男女下面进入的视频免费午夜| 一区二区三区四区激情视频| 欧美成人精品欧美一级黄| 一个人看视频在线观看www免费| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| 国产精品三级大全| 色视频www国产| 国产成人一区二区在线| 亚洲美女视频黄频| 精品欧美国产一区二区三| 国产成人a区在线观看| 日本免费在线观看一区| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄 | 久久综合国产亚洲精品| 嫩草影院入口| videos熟女内射| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄 | 高清视频免费观看一区二区 | 我要看日韩黄色一级片| 高清毛片免费看| 99视频精品全部免费 在线| 国产精品av视频在线免费观看| 成人漫画全彩无遮挡| 免费黄色在线免费观看| videos熟女内射| 一级毛片aaaaaa免费看小| 亚洲欧美日韩东京热| 女人久久www免费人成看片 | 一本久久精品| 午夜激情欧美在线| 又爽又黄a免费视频| 日韩在线高清观看一区二区三区| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 午夜日本视频在线| 男女下面进入的视频免费午夜| 久久精品影院6| 亚洲最大成人av| 一区二区三区乱码不卡18| 成人av在线播放网站| 免费看日本二区| 国产伦在线观看视频一区| 日本色播在线视频| 午夜免费激情av| 亚洲在线自拍视频| 国产极品天堂在线| 69av精品久久久久久| 内地一区二区视频在线| 我的老师免费观看完整版| 少妇的逼好多水| 熟女人妻精品中文字幕| 中文字幕久久专区| 成人毛片a级毛片在线播放| 国国产精品蜜臀av免费| 亚洲欧美精品综合久久99| 欧美不卡视频在线免费观看| 美女黄网站色视频| 韩国av在线不卡| 少妇的逼水好多| 欧美日本亚洲视频在线播放| 一边摸一边抽搐一进一小说| 少妇的逼水好多| 中文欧美无线码| av卡一久久| 观看免费一级毛片| 国产三级在线视频| 亚洲国产最新在线播放| av在线老鸭窝| 日日啪夜夜撸| 天天躁日日操中文字幕| 99久久精品一区二区三区| 日本与韩国留学比较| 69人妻影院| 欧美另类亚洲清纯唯美| 国产精品一区二区性色av| 成人特级av手机在线观看| 夜夜爽夜夜爽视频| 国产成人精品久久久久久| 国产一区二区在线av高清观看| 久久久久性生活片| 三级经典国产精品| 国产精品人妻久久久影院| 国产黄色视频一区二区在线观看 | 国产黄色小视频在线观看| 别揉我奶头 嗯啊视频| 免费观看在线日韩| or卡值多少钱| 级片在线观看| 成人三级黄色视频| 欧美成人a在线观看| 久久久精品大字幕| 免费观看a级毛片全部| 午夜亚洲福利在线播放| 国产黄色视频一区二区在线观看 | 桃色一区二区三区在线观看| 亚洲国产精品国产精品| 九草在线视频观看| 午夜a级毛片| av国产久精品久网站免费入址| 免费看日本二区| 欧美激情国产日韩精品一区| 日本与韩国留学比较| 成人漫画全彩无遮挡| 91精品国产九色| 国产精品人妻久久久久久| 国产激情偷乱视频一区二区| 99久久九九国产精品国产免费| av天堂中文字幕网| 欧美又色又爽又黄视频| 国产黄a三级三级三级人| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | 国内揄拍国产精品人妻在线| 国产视频首页在线观看| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 免费看av在线观看网站| 亚洲丝袜综合中文字幕| 亚洲经典国产精华液单| 久久99蜜桃精品久久| 麻豆国产97在线/欧美| 最近手机中文字幕大全| 国产乱人偷精品视频| 免费av不卡在线播放| 国产精品久久久久久精品电影| 久久久国产成人免费| 伊人久久精品亚洲午夜| 有码 亚洲区| 久久久久久久国产电影| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 欧美成人一区二区免费高清观看| 国产午夜精品论理片| 国产成人免费观看mmmm| 特大巨黑吊av在线直播| 国产精品一区二区性色av| 搡老妇女老女人老熟妇| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 免费播放大片免费观看视频在线观看 | 久久久久网色| 小说图片视频综合网站| 综合色丁香网| 国产激情偷乱视频一区二区| 日韩三级伦理在线观看| 亚洲国产精品久久男人天堂| 2022亚洲国产成人精品| 日本欧美国产在线视频| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜 | 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 99热这里只有是精品50| 精华霜和精华液先用哪个| 中文乱码字字幕精品一区二区三区 | av播播在线观看一区| 午夜福利在线在线| 国产精品一区二区三区四区久久| 国产高清有码在线观看视频| a级毛色黄片| 亚洲国产精品国产精品| 看免费成人av毛片| 午夜福利在线在线| 国产精品爽爽va在线观看网站| 欧美色视频一区免费| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久 | 欧美+日韩+精品| 午夜福利网站1000一区二区三区| 美女黄网站色视频| 国模一区二区三区四区视频| 免费看av在线观看网站| 久久亚洲国产成人精品v| 日本与韩国留学比较| 久久精品久久精品一区二区三区| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜 | 免费观看a级毛片全部| 99久久中文字幕三级久久日本| av专区在线播放| 99视频精品全部免费 在线| 国产私拍福利视频在线观看| 日本欧美国产在线视频| 亚洲性久久影院| 国产精品久久久久久精品电影| 国产麻豆成人av免费视频| 日韩国内少妇激情av| 日韩制服骚丝袜av| 午夜免费激情av| 看片在线看免费视频| www日本黄色视频网| 大香蕉97超碰在线| 国产伦在线观看视频一区| 只有这里有精品99| 欧美激情在线99| 久久草成人影院| 高清视频免费观看一区二区 | 久久国产乱子免费精品| 一级毛片电影观看 | 啦啦啦韩国在线观看视频| 日韩av在线免费看完整版不卡| 国产av不卡久久| 国产精品一二三区在线看| 国产熟女欧美一区二区| 男女国产视频网站| 桃色一区二区三区在线观看| 国产精品99久久久久久久久| 亚洲欧美日韩无卡精品| 日本欧美国产在线视频| 亚洲性久久影院| 日韩欧美三级三区| 国产中年淑女户外野战色| 午夜免费男女啪啪视频观看| 两个人的视频大全免费| or卡值多少钱| 午夜精品国产一区二区电影 | 国模一区二区三区四区视频| 丝袜喷水一区| 2022亚洲国产成人精品| 免费看美女性在线毛片视频| 国产亚洲av片在线观看秒播厂 | 白带黄色成豆腐渣| 日本午夜av视频| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 成人欧美大片| 汤姆久久久久久久影院中文字幕 | 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 国产精品蜜桃在线观看| 国产伦一二天堂av在线观看| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄 | 亚洲久久久久久中文字幕| 免费看光身美女| 99在线人妻在线中文字幕| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 亚洲第一区二区三区不卡| 日本免费a在线| 99久久成人亚洲精品观看| 国产高清不卡午夜福利| 精品久久久久久电影网 | 白带黄色成豆腐渣| 久久这里只有精品中国| 亚洲最大成人手机在线| 少妇的逼水好多| 精品人妻视频免费看| 久久综合国产亚洲精品| 麻豆乱淫一区二区| 日韩成人伦理影院| 欧美bdsm另类| 亚洲国产最新在线播放| 天堂网av新在线| 中文天堂在线官网| 一个人免费在线观看电影| 级片在线观看| 欧美区成人在线视频| 一夜夜www| 久久久久久久久中文| 九色成人免费人妻av| 亚洲天堂国产精品一区在线| av免费在线看不卡| 99久久成人亚洲精品观看| 午夜a级毛片| 极品教师在线视频| 精品人妻视频免费看| 99热这里只有是精品在线观看| 两个人的视频大全免费| 国产人妻一区二区三区在| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线 | 在线播放无遮挡| 国产伦精品一区二区三区视频9| 美女cb高潮喷水在线观看| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 国产免费一级a男人的天堂| 青春草亚洲视频在线观看| 成人欧美大片| 九九热线精品视视频播放| 亚洲av成人精品一区久久| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| a级毛片免费高清观看在线播放| 天美传媒精品一区二区| 婷婷色av中文字幕| 国产成人一区二区在线| 国产一区二区三区av在线| 久久久色成人| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 一夜夜www| 国产成人一区二区在线| 精品免费久久久久久久清纯| 一个人看视频在线观看www免费| 久久综合国产亚洲精品| 国产高清有码在线观看视频| 亚洲最大成人中文| 岛国在线免费视频观看| 黄色一级大片看看| 亚洲国产精品成人综合色| 亚洲在久久综合| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 丰满乱子伦码专区| 国产成人精品一,二区| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 午夜福利成人在线免费观看| 久久亚洲精品不卡| 国产精品久久久久久久久免| www日本黄色视频网| 亚洲欧美精品综合久久99| 亚洲自拍偷在线| 又爽又黄无遮挡网站| 深夜a级毛片| 亚洲精品456在线播放app| 成人三级黄色视频| 中文字幕免费在线视频6| 亚洲成人精品中文字幕电影| 久久草成人影院| 亚洲精品成人久久久久久| 又爽又黄无遮挡网站| 美女大奶头视频| 国产v大片淫在线免费观看| 精华霜和精华液先用哪个| 午夜福利成人在线免费观看| 亚洲国产精品专区欧美| 国产 一区 欧美 日韩| 美女国产视频在线观看| 男女那种视频在线观看| 麻豆国产97在线/欧美| 成人午夜精彩视频在线观看| 91久久精品国产一区二区三区| 18+在线观看网站| 深爱激情五月婷婷| 大香蕉久久网| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线 | 亚洲中文字幕日韩| 国产精品久久久久久精品电影小说 | 亚洲国产最新在线播放| 日本黄大片高清| 在现免费观看毛片| 欧美一区二区精品小视频在线| 亚洲最大成人手机在线| 日韩av不卡免费在线播放| 少妇熟女欧美另类| 婷婷色综合大香蕉| 内地一区二区视频在线| www.色视频.com| 精品久久久久久久久久久久久| 日韩欧美三级三区| 国产激情偷乱视频一区二区| 99九九线精品视频在线观看视频| 国产毛片a区久久久久| 国产精品久久视频播放| 少妇熟女aⅴ在线视频| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 久久这里有精品视频免费| 成人亚洲精品av一区二区| 色网站视频免费| 一夜夜www| 国产伦精品一区二区三区四那| 国产私拍福利视频在线观看| 亚洲精品456在线播放app| 黄色日韩在线| 观看美女的网站| 国产成人午夜福利电影在线观看| 搡老妇女老女人老熟妇| 亚洲成人av在线免费| 国产在视频线精品| 国产乱人视频| 亚洲精品456在线播放app| 成人国产麻豆网| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 我的女老师完整版在线观看| 亚洲欧美精品综合久久99| 只有这里有精品99| 国产真实乱freesex| 麻豆成人av视频| 99在线人妻在线中文字幕| 晚上一个人看的免费电影| 国产免费福利视频在线观看| av卡一久久| 日本免费在线观看一区| 能在线免费观看的黄片| 久久国产乱子免费精品| 日韩欧美国产在线观看| 国国产精品蜜臀av免费| 亚洲最大成人中文| 男人的好看免费观看在线视频| av.在线天堂| 99在线视频只有这里精品首页| 久久久亚洲精品成人影院| 午夜激情福利司机影院| 免费观看a级毛片全部| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 性色avwww在线观看| 全区人妻精品视频| 免费观看的影片在线观看| 日韩一本色道免费dvd| a级毛色黄片| 看非洲黑人一级黄片| 亚洲国产精品国产精品| 少妇的逼好多水| av在线亚洲专区| 日日干狠狠操夜夜爽| 精品国产露脸久久av麻豆 | 天天躁日日操中文字幕| 精品一区二区三区人妻视频| 亚洲欧美一区二区三区国产| 亚洲精品日韩av片在线观看| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 日韩大片免费观看网站 | 国产精品一及| a级一级毛片免费在线观看| 国产黄色小视频在线观看| 一级黄色大片毛片| 熟女人妻精品中文字幕| 免费观看a级毛片全部| 乱码一卡2卡4卡精品| 久久久久久久午夜电影| 国产探花极品一区二区| 最近手机中文字幕大全| 久久欧美精品欧美久久欧美| 成年av动漫网址| 亚洲精品乱久久久久久| 日韩在线高清观看一区二区三区| 色播亚洲综合网| 麻豆久久精品国产亚洲av| 99热全是精品| 国产伦精品一区二区三区视频9| 青春草视频在线免费观看| 一级毛片久久久久久久久女| 最近中文字幕2019免费版| 国产精品美女特级片免费视频播放器| av免费观看日本| 国产色爽女视频免费观看| 亚洲最大成人av| 国语自产精品视频在线第100页| 国产片特级美女逼逼视频| 欧美日韩在线观看h| 天堂影院成人在线观看| 亚洲精品国产成人久久av| 国产精品.久久久| 久久久久网色| 免费观看a级毛片全部| 亚洲天堂国产精品一区在线| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 九草在线视频观看| 国产淫片久久久久久久久| 国产 一区精品| 级片在线观看| 最近视频中文字幕2019在线8| 色综合色国产| 欧美色视频一区免费| 少妇人妻一区二区三区视频| 乱码一卡2卡4卡精品| 我要看日韩黄色一级片| 欧美日韩综合久久久久久| 熟女人妻精品中文字幕| 成人国产麻豆网| av专区在线播放| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 国产免费一级a男人的天堂| 久久草成人影院| 国产精品人妻久久久影院| 伦精品一区二区三区| 日日摸夜夜添夜夜爱| 成人毛片60女人毛片免费| 亚洲欧美精品综合久久99| 国产亚洲91精品色在线| 看免费成人av毛片| 国产真实乱freesex| 久久精品国产自在天天线| 国产日韩欧美在线精品| 精品免费久久久久久久清纯| 精品一区二区三区人妻视频| 老司机福利观看| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 国内精品一区二区在线观看| 欧美色视频一区免费| 日韩中字成人| 中文字幕久久专区| 91久久精品国产一区二区成人| ponron亚洲| 亚洲图色成人| 我要看日韩黄色一级片| 日本免费在线观看一区| 一级av片app| 爱豆传媒免费全集在线观看| 日本wwww免费看| 成人午夜精彩视频在线观看| 精品久久久久久久末码| 国产亚洲5aaaaa淫片| 国产 一区 欧美 日韩| 免费看美女性在线毛片视频| 国产免费福利视频在线观看| 成人亚洲精品av一区二区| 国产亚洲午夜精品一区二区久久 | 亚洲性久久影院| 国产在视频线精品| 国产 一区精品| 免费人成在线观看视频色| 99久久无色码亚洲精品果冻| 波多野结衣高清无吗| 国产久久久一区二区三区| 国产一区二区亚洲精品在线观看| av天堂中文字幕网| 桃色一区二区三区在线观看| 国产高清视频在线观看网站| 国产毛片a区久久久久| 亚洲人与动物交配视频| 国产成人免费观看mmmm| 久久久久久久久久成人| 99在线视频只有这里精品首页| 免费播放大片免费观看视频在线观看 | 边亲边吃奶的免费视频| 中文字幕制服av| 色综合站精品国产| 黄色日韩在线| 日本黄色片子视频| 长腿黑丝高跟| 特级一级黄色大片| 简卡轻食公司| 亚洲av男天堂| 高清视频免费观看一区二区 | a级一级毛片免费在线观看| 日韩av在线大香蕉| 亚洲av日韩在线播放| 热99re8久久精品国产| 亚洲精品日韩av片在线观看| 国产乱人偷精品视频| 国产精品人妻久久久影院| 美女被艹到高潮喷水动态| 青青草视频在线视频观看| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 成人午夜高清在线视频| 在线观看66精品国产| 国产片特级美女逼逼视频| 久久99精品国语久久久| 亚洲欧美精品综合久久99| 免费电影在线观看免费观看| 久久久久久久亚洲中文字幕| 亚洲美女视频黄频| 嘟嘟电影网在线观看| 日日撸夜夜添| 午夜精品一区二区三区免费看| 免费电影在线观看免费观看| 国产乱人偷精品视频| 长腿黑丝高跟| 欧美+日韩+精品| 午夜老司机福利剧场| 亚洲激情五月婷婷啪啪|