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    菌落濃度對肉桂酸鉀及苯甲酸鈉抑菌效果影響的分析

    2023-12-02 09:29:06余春平馬齊兵
    農(nóng)產(chǎn)品加工 2023年20期
    關(guān)鍵詞:苯甲酸鈉肉桂酸防腐劑

    余春平,馬齊兵

    (武漢能邁科實業(yè)有限公司,湖北 武漢 430000)

    食品防腐劑是一類可防止食品在貯存、流通過程中受到微生物增殖而引起變質(zhì)的化合物,大部分防腐劑僅具有抑制微生物生長的作用,無殺菌作用,因此食品中初始菌落總數(shù)的高低可能會影響防腐劑的抑制作用。

    肉桂酸又名桂皮酸、3 - 苯丙烯酸,是中藥肉桂的有效活性成分。肉桂酸具有良好的抑菌、抗腫瘤、消炎等活性,被廣泛應(yīng)用于食品、醫(yī)藥等行業(yè)中。肉桂酸幾乎不溶于水,實際應(yīng)用時常使用鉀鹽,即肉桂酸鉀[1]。

    采用天然抑菌劑和防腐劑對食品進(jìn)行防腐保鮮是食品加工過程中的常用手段,食品預(yù)處理也是重要的環(huán)節(jié)。苯甲酸鈉和山梨酸鉀因價格低廉且具有廣譜的抑菌效果,食品行業(yè)將其作為首選防腐劑[2],以大腸桿菌為指示菌,以天然抑菌物質(zhì)肉桂酸鉀、傳統(tǒng)防腐劑苯甲酸鈉為例,就初始菌落濃度對抑菌效果的影響進(jìn)行了研究。

    1 材料與方法

    1.1 試驗材料與儀器

    大腸桿菌(CMCC(B) 44103);牛肉膏、蛋白胨、瓊脂粉、平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基,奧博星生物提供;75%乙醇、95%乙醇,武漢興和達(dá)商貿(mào)有限公司提供;氫氧化鈉、氯化鈉,天力化學(xué)試劑公司提供;苯甲酸鈉,萬邦化工公司提供;肉桂酸鉀,武漢能邁科實業(yè)有限公司提供。

    BBS-DDC 型超凈工作臺,歐萊博科學(xué)儀器公司產(chǎn)品;DGL-35B 型高壓蒸汽滅菌鍋、FA1004 型電子天平,力辰儀器公司產(chǎn)品;DHP-360 型恒溫培養(yǎng)箱,永光明醫(yī)療儀器公司產(chǎn)品;SZ-93 型自動雙重純水蒸餾器,亞榮生化儀器公司產(chǎn)品。

    1.2 試驗方法

    1.2.1 菌種的活化培養(yǎng)

    以大腸桿菌為試驗指示菌,按許春芳等人[1]大腸桿菌活化培養(yǎng)的方法制備工作菌種。

    1.2.2 培養(yǎng)基的制備

    營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基(NB)、營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基(NA)、生理鹽水、平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基(PCA) 制備方法參考GB/T 39101—2020。

    1.2.3 不同濃度菌懸液的制備

    (1) 無菌操作下取適量工作菌種溶解于100 mL NB 中,混合均勻,得大腸桿菌菌懸液。

    (2) 預(yù)先按照GB 4789.2 中的操作方法進(jìn)行大腸桿菌的菌落計數(shù),于波長600 nm 處測定各濃度菌懸液的吸光度,根據(jù)對應(yīng)的菌落計數(shù)值與吸光度建立相關(guān)性。根據(jù)相關(guān)性,將菌懸液調(diào)整至一定吸光度。

    (3) 將上述菌懸液用無菌生理鹽水稀釋至10-1,10-2,10-3,制備成不同濃度菌懸液1(5×106CFU/mL),2(5×107CFU/mL),3(5×108CFU/mL)、4(5×109CFU/mL) 備用。

    1.2.4 防腐劑溶液的配制

    用生理鹽水配制80 g/kg 苯甲酸鈉、肉桂酸鉀溶液;將2 組防腐劑用生理鹽水逐級稀釋至40 g/kg,10 g/kg。于121 ℃下高溫滅菌15 min,備用。

    1.2.5 檢測平板制備

    將滅菌后的NA 培養(yǎng)基冷卻至45~50 ℃,放置到50 ℃水浴鍋中備用,使用前表面噴上酒精,移入超凈臺;將制備的不同濃度菌懸液(按照1%添加量) 加入到NA 中制備成工作NA,緩慢地?fù)u勻避免產(chǎn)生氣泡,用滅菌的容器量取20 mL 工作NA 緩慢倒入滅菌平皿,輕輕搖動使之鋪平,不能產(chǎn)生氣泡,待冷卻凝固后備用。

    1.2.6 測定

    用打孔器在工作平板上等距離打3 個孔(6 mm),量取樣品20 μL,緩慢加入到孔中,每個樣品做2 個平行。將平板移入4~6 ℃冰箱擴散2 h,取出平板放置于37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h 或至抑菌圈清晰,測量抑菌圈的直徑,取平均值[3-4]。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 肉桂酸鉀和苯甲酸鈉抑菌效果

    在菌懸液濃度為3(5×108CFU/mL) 的培養(yǎng)基中,分別統(tǒng)計不同濃度下肉桂酸鉀、苯甲酸鈉抑菌圈直徑。

    肉桂酸鉀、苯甲酸鈉抑菌圈見圖1,不同含量肉桂酸鉀、苯甲酸鈉對大腸桿菌抑菌作用見圖2。

    圖1 肉桂酸鉀、苯甲酸鈉抑菌圈

    圖2 不同含量肉桂酸鉀、苯甲酸鈉對大腸桿菌抑菌作用

    由圖1 可知,在該菌懸液含量下,除10 g/kg 的肉桂酸鉀和苯甲酸鈉無抑菌圈,其余2 個含量均有抑菌圈,且肉桂酸鉀抑菌圈直徑在2 種含量下均大于苯甲酸鈉,因此推測在相同菌落數(shù)條件下,同等含量的肉桂酸鉀抑菌性大于苯甲酸鈉。

    因10 g/kg 時無抑菌圈,80 g/kg 時太高,選擇40 g/kg 作為固定濃度(濃度4%),檢測不同濃度菌落數(shù)對肉桂酸鉀和苯甲酸鈉抑菌性影響。

    2.2 不同濃度菌懸液對肉桂酸鉀、苯甲酸鈉的抑菌性影響

    繪制不同濃度大腸桿菌下4%濃度肉桂酸鉀和苯甲酸鈉的抑菌圈大小折線圖。

    不同菌落濃度下肉桂酸鉀和苯甲酸鈉抑菌效果見圖3。

    圖3 不同菌落濃度下肉桂酸鉀和苯甲酸鈉抑菌效果

    由圖3 可知,隨著菌落濃度的增加,肉桂酸鉀和苯甲酸鈉抑菌圈直徑均減小,抑菌能力下降,且在菌落濃度為4(5×109CFU/mL) 時,抑菌圈消失抑菌效果較弱,證明肉桂酸鉀和苯甲酸鈉抑菌性和菌落初始數(shù)具有相關(guān)性,且初始菌落數(shù)越高其抑菌性越低。在菌落濃度低于4(5×109CFU/mL) 時,肉桂酸鉀的抑菌性均強于苯甲酸鈉,推測肉桂酸鉀對初始菌落數(shù)的耐受性更強。

    2.3 不同菌懸液濃度對肉桂酸鉀、苯甲酸鈉復(fù)配物抑菌效果的影響

    防腐劑在實際應(yīng)用中會根據(jù)食品性質(zhì)進(jìn)行復(fù)配,以求達(dá)到更好的防腐效果。復(fù)配后的防腐劑具有綜合防腐性好、價格低廉等優(yōu)點。研究驗證了肉桂酸鉀與苯甲酸鈉復(fù)配對不同濃度菌懸液抑菌效果的影響。根據(jù)國家食品安全法規(guī)定,肉桂酸鉀屬于食品用香料,除GB 2760 規(guī)定不能使用食品香料目錄中的食品,其他食品均可按照需求適量添加,因此肉桂酸鉀與苯甲酸鈉進(jìn)行復(fù)配,可按照需求制定肉桂酸鉀的量[5]。

    將肉桂酸鉀與苯甲酸鈉按照1∶3,1∶2,1∶1,2∶1,3∶1 的比例進(jìn)行復(fù)配,得到5 組復(fù)配物。按照上述抑菌圈測定方法,測定在不同濃度大腸桿菌菌懸液濃度下4%濃度的5 組復(fù)配物的抑菌圈大小。

    不同濃度菌懸液下5 組復(fù)配物的抑菌效果見表1,不同濃度菌懸液下5 組復(fù)配物的抑菌效果柱形圖見圖4。

    表1 不同濃度菌懸液下5 組復(fù)配物的抑菌效果/CFU·mL-1

    圖4 不同濃度菌懸液下5 組復(fù)配物的抑菌效果柱形圖

    由表1 和圖4 可知,5 組復(fù)配物在不同菌落濃度下,其抑菌效果均呈現(xiàn)下降趨勢,且在濃度為4(5×109CFU/mL) 時均無抑菌圈。在濃度為1(5×106CFU/mL) 時,復(fù)配比例為2∶1 時抑菌效果最佳;當(dāng)濃度為2(5×107CFU/mL) 時,復(fù)配比例為3∶1 時其抑菌效果最佳。從試驗數(shù)據(jù)推斷,雖復(fù)配比例和抑菌效果不呈正比例關(guān)系,但肉桂酸鉀在復(fù)配時其添加比例超過50%時,在不同濃度菌液下的抑菌性更高。

    3 結(jié)論

    通過檢測肉桂酸鉀及苯甲酸鈉對不同菌落濃度大腸桿菌的抑菌率,確定了菌落濃度對肉桂酸鉀和苯甲酸鈉抑菌性影響具有相關(guān)性:隨著菌落濃度升高,肉桂酸鉀和苯甲酸鈉抑菌性相對減弱;另外,當(dāng)防腐劑濃度一致時,肉桂酸鉀對大腸桿菌的抑菌性優(yōu)于苯甲酸鈉。研究為肉桂酸鉀的抑菌性能提供了試驗依據(jù),并驗證了菌落濃度越高,對防腐劑抑菌效果的影響越大,防腐效果變差。為肉桂酸鉀和防腐劑應(yīng)用在食品中提供了數(shù)據(jù)參考,給“控制初始菌落數(shù)是食品防腐保鮮工藝中的重要因素”提供了依據(jù)。在實際應(yīng)用中,肉桂酸鉀可配合苯甲酸鈉進(jìn)行使用,其復(fù)配比例按照肉桂酸鉀含量大于50%進(jìn)行復(fù)配,其抑菌效果更好。

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