藏藥灰蒿質量標準研究*

邱毅 任溫雅 蘭鈞 任剛 達娃卓瑪**

1.西藏自治區(qū)食品藥品檢驗研究院中藥（藏藥）質量控制重點實驗室，西藏 拉薩 850005；2.江西中醫(yī)藥大學，江西 南昌 330004

灰蒿，為菊科植物沙蒿Artemisia desertorum Spreng、灰蒿Artemisia conaensis Ling et Y.R.Ling 的干燥地上部分。產(chǎn)于內(nèi)蒙古、東北三省、四川及西藏等地；多生于草原、高山草原、干河谷、荒坡、河岸邊及路旁等，局部地區(qū)成片生長[1]。

目前有關藏藥灰蒿的基原植物沙蒿地上部分化學成分的報道較少，化學成分研究主要集中在沙蒿籽。沙蒿籽主要含揮發(fā)油和黃酮類化合物。筆者在前期試驗中發(fā)現(xiàn)，沙蒿地上部分中東莨菪內(nèi)酯含量較高。東莨菪內(nèi)酯，化學名為6-甲氧基-7-羥基香豆素，屬于香豆素類化合物，具有抗腫瘤、抗炎及鎮(zhèn)痛、解痙攣、降血糖、降血壓、抗神經(jīng)退行性疾病等多種藥理活性[10，11]；王韻[12]等在對茵陳蒿湯的研究中提出東莨菪內(nèi)酯具有潛在抗炎和抗肝損傷作用。這些研究提示，東莨菪內(nèi)酯的生物活性與沙蒿散腫的功能相一致。為了建立科學可控的藥材質量標準，對灰蒿的基原品種沙蒿進行了性狀、薄層色譜鑒別、顯微鑒別、灰分檢查及水分檢查、浸出物測定等研究，為該藥材地方標準制修訂奠定基礎。

1 儀器、試劑與藥材

1.1 儀器

超聲清洗機KQ-5200DB 型（昆山市超聲波儀器公司）；電子分析天平Al204型（Mettler Toledo 儀器（上海）有限公司）；8-10 型箱式電阻爐（中國沈陽市節(jié)能電爐廠制造）；萬能粉碎機（浙江紅景天工貿(mào)有限公司）；電熱恒溫鼓風干燥箱DHG-9140A（鞏義市予華儀器有限責任公司）；數(shù)碼攝影顯微鏡（Nikon）；薄層色譜掃描儀CAMAG AUTOMATIC TlC SAMPlER 4；雙槽展開缸。

1.2 試劑（藥）

1.2.1 對照品。東莨菪內(nèi)酯（PS010525）購置于上海源葉生物科技有限公司，純度98%.

1.2.2 試劑。甲醇、乙酸乙酯、甲酸、三氯甲烷、氨水、甲酸、環(huán)己烷均為分析純。硅膠G 板薄層板為青島譜科分離材料有限公司產(chǎn)品。

1.3 試驗材料

本次收集了21 批灰蒿藥材，詳見表1。藥材樣品均經(jīng)江西中醫(yī)藥大學慕澤涇副教授鑒定為沙蒿（Artemisia desertorumSpreng）的干燥地上部分。

表1 藥材信息表

2 方法與結果

2.1 性狀

灰蒿莖枝多見、圓柱形、淺紅色或紅褐色，微具毛并具細縱棱，表皮與中心微剝離；質硬、折斷面呈海綿狀、乳白色、中央髓部灰白色，斷面上密布網(wǎng)狀小孔，斷面外緣與棱角相應處，有數(shù)個灰白色團塊存在。頭狀花序球形，直徑約1.5～2mm；總苞片外層深綠色或紫色，質薄易碎。葉片多破碎少見，完整葉片輪廓長圓狀楔形或長圓形，羽狀深裂至全裂，小裂片線性。氣微，味稍苦[10]。

圖1 藥材外觀圖

2.2 顯微鑒別

在顯微鏡下觀察，21批次藥材粉末黃綠色。葉碎片兩面均具不等式或不定式氣孔長28～35μm，，直徑22～27μm，長圓形或不定式，副衛(wèi)細胞3～5個。表皮細胞不規(guī)則，細胞壁微波狀彎曲或較平直，呈角質增厚，可見橢圓形或類圓形的毛根基。油室碎片細胞多角形，內(nèi)含黃棕色分泌物。薄壁細胞類長方形，有明顯的網(wǎng)狀壁孔，壁多木質化。非腺毛為T 形毛，多碎斷，頂端細胞長而彎曲，兩臂不等長，柄易脫落，1～2細胞。柱頭頂端表皮細胞呈乳頭狀突起，長條形?；ǚ哿１姸?，類球形，具三孔溝，表面具刺及刺狀雕紋，直徑15～22μm?；ǚ勰覂?nèi)壁細胞多見，細胞呈星形網(wǎng)狀增厚。石細胞散在有類方形和柱狀兩種，類方形直徑約15～20μm，柱形直徑10～15μm 左右。纖維散在或成束，多碎斷、壁厚，直徑7～13μm，胞腔多呈線形。具緣紋孔導管和螺紋導管，具緣紋孔導管直徑45～50μm左右，螺紋導管直徑9～16μm左右。[10，11]。

圖2 藥材粉末顯微圖

2.3 薄層鑒別

2.3.1 薄層色譜對照品溶液的制備。取東莨菪內(nèi)酯對照品適量，精密稱定，置適量的容量瓶中，加甲醇制成每lmL 含0.1mg 的溶液，作為薄層色譜鑒別對照品溶液。

2.3.2 供試品溶液的制備及薄層鑒別。取本品粉末1g，加入甲醇50mL，超聲處理（功率250W，頻率40kHz）30min，濾過、濾液蒸干，殘渣加甲醇5mL 使溶解，作為薄層色譜供試品溶液。另精密稱取東莨菪內(nèi)酯對照品適量，加甲醇制成每1mL 含0.1mg 的對照品溶液。照現(xiàn)行版《中國藥典》四部通則0502薄層色譜法[13]試驗，吸取東莨菪內(nèi)酯對照品溶液和21 批灰蒿藥材溶液各2μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-甲酸（25:1.5:0.1）作為展開劑，薄層板預飽和20min，展開，取出薄層板，置通風櫥中晾干，在紫外光燈（365nm）下進行檢視。21批次灰蒿供試品色譜中，在與東莨菪內(nèi)酯對照品色譜相應的位置上，結果顯相同顏色的熒光斑點。

采用薄層鑒別方法，檢測21 批沙蒿藥材，薄層色譜圖與東莨菪內(nèi)酯對照品一致，操作簡單，重現(xiàn)性好，納入標準。樣品薄層色譜圖見圖3。

圖3 灰蒿藥材薄層色譜圖

2.4 水分、總灰分和酸不溶性灰分檢查

2.4.1 水分檢查。照《中國藥典》2020 版四部通則0832 水分測定法第二法（烘干法）測定，共測定21 批藥材的水分，范圍在7.15%～11.26%間（測定結果見表2），9 號和21 號樣品為離群值，故未統(tǒng)計。其余19 批次灰蒿樣品計算平均值為9.17%.根據(jù)以上測定數(shù)據(jù)，取均值的120%為上限，并綜合《中國藥典》限度制定相關考慮，暫定灰蒿水分含量不得高于13.0%，21 批次灰蒿樣品全部合格。

表2 藥材水分、總灰分及酸不溶性灰分檢查、浸出物測定結果

2.4.2 總灰分檢查。按《中國藥典》2020 版四部通則2032 測定法，對21 批次藥材進行了總灰分的測定，在6.03%～14.79%之間浮動，21 號灰蒿樣品為離群值，故舍去。選擇其余20 批次樣品計算平均值得出結果為8.09%.取均值上浮20%[14]為9.71%，綜合考慮，暫定灰蒿藥材總灰分量不得高于10.0%，21 批次灰蒿樣品中有20批合格，合格率為95.2%.

2.4.3 酸不溶性灰分檢查。根據(jù)《中國藥典》2020 版四部通則2032 項下得酸不溶性灰分測定法，測定了21 批次灰蒿藥材的酸不溶性灰分，21 號樣品為離群值，舍去。20 批樣品酸不溶性灰分為0.06%～1.470%，平均0.56%.多數(shù)樣品的酸不溶性灰分低于0.50%，各批次間數(shù)據(jù)波動較大，規(guī)定該限量無意義，因此建議不列入灰蒿質量標準（草案）正文。

2.5 浸出物測定

照2020 年版《中國藥典》第四部通則2201 浸出物測定法中熱浸法進行測定，最終選擇75%乙醇作為該項目的提取溶劑。5 號和7 號樣品為離群值，故舍去。選擇其余19 批次灰蒿樣品計算平均值為20.68%.根據(jù)以上測定所得數(shù)據(jù)，取均值下浮20%值為16.5%，綜合考慮，暫定灰蒿藥材浸出物不得少于15.0%.

3 討論

筆者在前期試驗中發(fā)現(xiàn)，沙蒿地上部分中東莨菪內(nèi)酯含量較高。王韻［12］等在對茵陳蒿湯的研究中提出東莨菪內(nèi)酯具有潛在抗炎和抗肝損傷作用。這些研究提示，東莨菪內(nèi)酯的生物活性與沙蒿散腫散毒的功能相一致。因此，本標準中以東莨菪內(nèi)酯作為灰蒿藥材薄層鑒別的對照品。

在薄層鑒別試驗中，比較了三氯甲烷-甲醇-甲酸（25:1.5:0.1）、環(huán)己烷-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸（6:10:7:1.2）、乙酸乙酯-甲醇–氨水（17 :2 :1）以及三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-氨水（3:4:2.5:0.5）四種展開系統(tǒng)，經(jīng)反復試驗后，結果以三氯甲烷-甲醇-甲酸（25:1.5:0.1）為展開條件時斑點清晰，Rf 值適中，無拖尾，故以此為展開條件。還考察了供試品溶液的不同制備方法和預飽和對展開效果的影響，發(fā)現(xiàn)預飽和20分鐘展開效果更好。同時對選定的展開系統(tǒng)進行了18%RH 和88%RH 兩種濕度，以及4℃和35℃兩種溫度的考察，結果表明，濕度、溫度對灰蒿薄層色譜鑒別斑點無明顯影響，說明本薄層方法中展開系統(tǒng)耐用性教好。

在浸出物項目中，分別對灰蒿藥材進行了水和不同濃度的乙醇提取溶媒進行了考察，以浸出率為指標，考察了冷浸法和熱浸法兩種提取方式。在研究中發(fā)現(xiàn)實驗室質量控制研究人員更注重以浸出物含量數(shù)據(jù)較大確定提取方法［15］，而更多相關領域的專家以臨床價用藥習慣作為主要依據(jù)，以水煎服選擇水作為提取溶劑，制成酊劑等含醇溶劑的劑型時選擇醇作為提取溶劑。藏藥灰蒿多配方用或遵醫(yī)囑，藏藥成方制劑主要入丸散服用，本研究在浸出物項既考慮了浸出物含量數(shù)值，又結合了藏藥入藥習慣。

綜上所述，本研究就21批次藏藥灰蒿基原品種沙蒿藥材進行顯微鑒別及薄層鑒別、總灰分檢查及酸不溶性灰分檢查、水分檢查和浸出物測定，建立了灰蒿的質量標準，以上研究結果可為建立灰蒿藥材的地方標準提供依據(jù)和參考。