血人參中化學(xué)成分鑒定及其保肝活性研究

李開敏，劉育辰，劉 剛，張永萍，王 波

（貴州中醫(yī)藥大學(xué)，貴州 貴陽(yáng) 550025）

肝臟是人體內(nèi)新陳代謝最活躍的器官，參與物質(zhì)代謝并具有解毒作用［1］，易受到化學(xué)毒素、病原微生物、酒精等因素誘導(dǎo)，引發(fā)脂肪肝、肝纖維化、肝硬化甚至肝癌等多種肝?。?］。中藥因其具有多成分、多靶點(diǎn)的特點(diǎn)，在保肝方面發(fā)揮重要作用。研究顯示，血人參乙酸乙酯部位具有體外肝損傷保護(hù)作用［3-5］。本研究采用H2O2及油酸誘導(dǎo)HepG2 細(xì)胞損傷，用于篩選血人參乙酸乙酯部位具有保肝作用的化合物［6-7］。

血人參含有原花青素類鞣質(zhì)、黃酮苷類等成分［3-4，8-13］，現(xiàn)代藥理研究表明其具有保肝、抗氧化、抗癌、抗病毒、降血糖等作用［14］。血人參目前執(zhí)行的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)為《貴州省中藥材、民族藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》 （2003 年版）［15］，但僅有性狀描述，缺少質(zhì)量控制的化學(xué)方法。近年來(lái)，超高效液相色譜-串聯(lián)四極桿飛行時(shí)間質(zhì)譜法（UPLC-Q-TOF-MS） 廣泛應(yīng)用于化學(xué)成分研究［16-22］，具有靈敏度高、分辨率高、掃描范圍廣等特點(diǎn)，可有效識(shí)別復(fù)雜中藥材中的各類成分及其化學(xué)結(jié)構(gòu)［23］。本研究以血人參主要藥效部位-乙酸乙酯部位為研究對(duì)象，采用UPLC-Q-TOF-MS 技術(shù)，通過(guò)在線數(shù)據(jù)庫(kù)匹配、色譜峰的碎片裂解規(guī)律分析、參考相關(guān)文獻(xiàn)和對(duì)照品比對(duì)，并根據(jù)色譜峰、質(zhì)譜分子離子峰和碎片離子等信息，對(duì)化學(xué)成分進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定和分析，以期為進(jìn)一步的血人參藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及質(zhì)量控制研究提供依據(jù)。

1 材料

Acquity UPLC I-CLASS 超高效液相色譜儀、XEVO G2-XS Q-TOF 飛行時(shí)間質(zhì)譜儀（美國(guó)Waters 公司）； 數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）； 酶標(biāo)儀（multiskan FC 型，美國(guó)Thermo Fisher Scientific 公司）。

原花青素A1（批號(hào)CYK-Z1810251，純度≥98%）、原花青素A2（批號(hào)JKCYK-Z2004091，純度≥98%）、兒茶素（批號(hào)ST01600120，純度≥98%）、原花青素B1（批號(hào)CYK-Z0382，純度 ≥ 98%）、原花青素 B2（ 批號(hào)CHB180902，純度≥98%）、原花青素B3（批號(hào)CYKZ0384，純度≥98%）、表兒茶沒(méi)食子酸酯（批號(hào)BP0539，純度≥98%）、柚皮素-7-O-葡萄糖苷 （批號(hào)BP3263，純度≥98%）、根皮苷（批號(hào)BP1089，純度≥98%） 對(duì)照品均購(gòu)自武漢瓊格生物科技有限公司； 表兒茶素 （批號(hào)CHB180831，純度≥98%） 對(duì)照品購(gòu)自成都克洛瑪生物科技有限公司。谷胱甘肽（GSH）、油紅（北京索萊寶生物科技有限公司，批號(hào)630R059、331K057）； H2O2（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)20091021）； 油酸 （美國(guó)Sigma-Aldrich 公司，批號(hào)20150316215）。血人參購(gòu)自貴陽(yáng)德昌祥藥業(yè)有限公司，經(jīng)貴州中醫(yī)藥大學(xué)王波老師鑒定為豆科木藍(lán)屬植物茸毛木藍(lán)IndigoferastachyodesLindl.的干燥根。乙腈、甲酸為色譜純（美國(guó)Tedia 公司）； 水為純凈水（杭州娃哈哈集團(tuán)有限公司）。

2 方法

2.1 色譜條件 Waters Acquity BEH C18色譜柱（2.1 mm×100 mm，1.7 μm）； 流動(dòng)相乙腈（A） -0.1% 甲酸（B），梯度洗脫（0 ～2 min，2% A； 2 ～4 min，2% ～8% A； 4 ～9 min，8% ～25%A； 9～14 min，25% ～30%A； 14 ～20 min，30% ～65% A； 20 ～27 min，65% ～98% A； 27 ～32 min，98% ～2%A）； 體積流量0.4 mL/min； 柱溫35 ℃； 進(jìn)樣量1 μL。

2.2 質(zhì)譜條件 ESI 離子源； 負(fù)離子模式； 錐孔電壓25 V； 毛細(xì)管電壓2.5 kV； 離子源溫度120 ℃； 脫溶劑溫度400 ℃； 脫溶劑氣體積流量1 000 L/h； 采集方式為MSE； 采集時(shí)間32 min； 掃描范圍m/z100～1 200。

2.3 細(xì)胞液制備及細(xì)胞株處理 將10 個(gè)對(duì)照品用DMSO制成相應(yīng)濃度，加入細(xì)胞時(shí)用培養(yǎng)液按1 ∶1 000 比例稀釋，即得。人肝癌HepG2 細(xì)胞在含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液（含青霉素100 U/mL、鏈霉素100 μg/mL） 中培養(yǎng)，條件為37 ℃、5%CO2、飽和濕度，再用含0.25%胰蛋白酶、0.02%EDTA 溶液消化傳代。

2.4 氧化損傷造模 參考文獻(xiàn)［24］ 報(bào)道，HepG2 細(xì)胞接種于96 孔板中，培養(yǎng)24 h 后加入無(wú)毒濃度的樣品預(yù)孵育12 h，設(shè)陽(yáng)性藥物對(duì)照組（GSH）、溶劑對(duì)照組、模型組，每個(gè)濃度設(shè)3 ～4 個(gè)平行孔。12 h 后在96 孔板中避光加入H2O2（終濃度400 μmol/L） 培養(yǎng)12 h，棄去培養(yǎng)液，每孔加入MTT 液（0.5 mg/mL） 100 μL，繼續(xù)培養(yǎng)4 h，棄去MTT 液，每孔加入DMSO 150 μL，混和振蕩器振蕩，在酶標(biāo)儀570 nm 波長(zhǎng)處測(cè)定光密度（OD） 值，計(jì)算細(xì)胞存活率。

2.5 油酸誘導(dǎo)的脂肪堆積模型及油紅O 染色 參考文獻(xiàn)［25］ 報(bào)道，HepG2 細(xì)胞接種于96 孔板中，培養(yǎng)24 h 后加入無(wú)毒濃度的樣品、油酸（240 μmol/L），設(shè)非諾貝特陽(yáng)性藥物對(duì)照組（20 mol/L）、溶劑對(duì)照組、模型組，繼續(xù)作用于細(xì)胞24 h，棄去培養(yǎng)液，每孔加入100 μL 胎牛血清，30 s后棄去，重復(fù)3 次，再加入100 μL 4%多聚甲醛固定細(xì)胞，靜置40 min，棄去多聚甲醛，每孔加入100 μL 胎牛血清，30 s 后棄去，重復(fù)3 次，每孔加入100 μL 油紅染料，置于暗處避光，染色1 h 后棄去染料，每孔加入100 μL 胎牛血清，30 s 后棄去，重復(fù)3 次，每孔再加入50 μL 異丙醇，振蕩10 min，在酶標(biāo)儀532 nm 波長(zhǎng)處測(cè)定OD 值，計(jì)算抑制率，公式為抑制率＝ ［（模型組OD 值-給藥組OD值） /模型組OD 值］ ×100%。

2.6 供試品、對(duì)照品溶液制備

2.6.1 供試品溶液 精密稱定藥材粉末2 g，置于150 mL量瓶中，精密加入95%乙醇50 mL，回流提取4 h，濾過(guò)，濃縮得浸膏，等量蒸餾水溶解浸膏成混懸狀，依次用等量石油醚、乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯層揮干，50% 甲醇溶解制成質(zhì)量濃度為5 mg/mL 的溶液，50% 甲醇稀釋5 倍，0.22 μm 微孔濾膜過(guò)濾，取續(xù)濾液，即得。

2.6.2 對(duì)照品溶液制備 精密稱取原花青素A1、原花青素A2、兒茶素、原花青素B1、原花青素B2、原花青素B3、原花青素B4、表兒茶素、表兒茶沒(méi)食子酸酯、柚皮素-7-O-葡萄糖苷、根皮苷對(duì)照品各1 mg，50%甲醇溶解，制成質(zhì)量濃度均為1 mg/mL 的溶液，即得。

3 結(jié)果

3.1 成分鑒定 將血人參供試品溶液和混合對(duì)照品溶液按“2.1” 和“2.2” 項(xiàng)下檢測(cè)條件進(jìn)行UPLC-Q-TOF-MS 分析，得負(fù)離子模式下的總離子流圖，見(jiàn)圖1。色譜分離血人參乙酸乙酯樣品得到了比較良好的總離子流色譜圖，各峰的分離度均較良好； 負(fù)離子掃描模式下檢測(cè)質(zhì)量精度良好，能滿足通過(guò)精確質(zhì)量數(shù)去鑒定分子式、碎片元素組成的要求。根據(jù)血人參化學(xué)成分的保留時(shí)間（tR） 和質(zhì)譜信息，并結(jié)合對(duì)照品、相關(guān)文獻(xiàn)、數(shù)據(jù)庫(kù)和二級(jí)質(zhì)譜碎片信息進(jìn)行比對(duì)，共鑒定和推測(cè)出了27 個(gè)化合物，其中原花青素類鞣質(zhì)18 個(gè)，黃酮苷類4 個(gè)。經(jīng)二次質(zhì)譜實(shí)驗(yàn)，20 min以前以原流動(dòng)相梯度洗脫，得到與原來(lái)一致的總離子流圖，增加有機(jī)相比例后，未見(jiàn)有意義的成分，因此對(duì)照品負(fù)離子模式下的總離子流圖時(shí)間為20 min。保留時(shí)間23.95、24.17、24.33、24.83、25.91 min 可能為脂肪酸類化合物，由于該類成分質(zhì)譜碎片信息有限，幾乎無(wú)碎片離子，只能確定分子離子，是否有支鏈及不飽和脂肪酸的雙鍵位置無(wú)法確定?；衔镨b定結(jié)果見(jiàn)表1。

3.2 裂解規(guī)律研究

3.2.1 原花青素類化合物 原花青素又稱為縮合單寧［26］，是一類由黃烷-3-醇結(jié)構(gòu)單元通過(guò)C-C 鍵縮合形成的不同聚合度的混合物，按照黃烷-3-醇之間連接方式的不同，分為A 型和B 型，前者由一個(gè)碳鍵C4→C8或C4→C6和一個(gè)醚鍵C2→O→C7連接形成，后者通過(guò)一個(gè)碳鍵C4→C8或C4→C6連接形成［27］。其聚合度、單體結(jié)構(gòu)單元以及黃烷間連接類型和位置的變化導(dǎo)致原花青素分子之間存在相當(dāng)大的結(jié)構(gòu)復(fù)雜性和異構(gòu)性［28］。在血人參中共檢測(cè)出原花青素單聚體，二聚體和三聚體三種類型。單聚體以化合物2 為例，其保留時(shí)間5.18 min，在負(fù)離子模式下準(zhǔn)分子離子峰為m/z289.071 7 ［M-H］-，分子式為C15H14O6，根據(jù)二級(jí)質(zhì)譜圖母離子失去一分子H2O 得到m/z271.061 2 離子，再失去一個(gè)中性分子C3O2得到m/z203.075 1 離子，母離子失去一個(gè)中性分子CO2得到m/z245.089 8 離子，母離子失去二分子C2H2O 得到m/z205.061 7 離子，結(jié)合對(duì)照品比對(duì)及文獻(xiàn)［29-31］ 鑒定該化合物為兒茶素?；衔? 的準(zhǔn)分子離子峰m/z289.071 7 ［M-H］-與化合物2 相同，其二級(jí)質(zhì)譜裂解碎片也一致，推測(cè)二者為同分異構(gòu)體，根據(jù)對(duì)照品及文獻(xiàn)［32］ 比對(duì)，確定化合物7 為表兒茶素。其在負(fù)離子模式下的質(zhì)譜及裂解方式見(jiàn)圖2～3。

圖2 兒茶素低能量通道（A）、高能量通道（B） 質(zhì)譜圖

在血人參乙酸乙酯部位中檢測(cè)到原花青素二聚體有A型和B 型，2 種類型原花青素的裂解主要是黃烷間連接鍵的斷裂、逆狄爾斯-阿爾德反應(yīng)（RDA 反應(yīng)，發(fā)生在C2和O，C3和C4鍵的斷裂）、C 環(huán)開環(huán)后失去1 個(gè)間苯三酚單元。A 型原花青素以化合物19 為例，準(zhǔn)分子離子峰為m/z575.120 3 ［M-H］-，產(chǎn)生的二級(jí)碎片離子有m/z449.087 9［M-H-C6H5O2］-、RDA 反應(yīng)得到m/z425.073 8 ［M-HC9H10O3］-、黃烷單元間的共價(jià)鍵斷裂和醚鍵斷裂分別得到m/z289.071 9 ［catechin-H］-、m/z285.045 4 ［M-Hcatechin］-。根據(jù)對(duì)照品及文獻(xiàn)［33］ 報(bào)道，推測(cè)其為原花青素A2，化合物13 ～14、19 的準(zhǔn)分子離子峰均為m/z575.120 3 ［M-H］-，主要質(zhì)譜裂解碎片一致，推測(cè)三者為同分異構(gòu)體； B 型原花青素以化合物5 為例，其保留時(shí)間為5.85 min，在負(fù)離子模式下準(zhǔn)分子離子峰為m/z577.314 1 ［M-H］-，碎片離子主要有C4-C8鍵斷裂脫去一分子兒茶素289.071 9 ［M-H-catechin］-，再失去一分子C6H8O3得到碎片離子m/z161.033 2 ［M-H-C6H8O3］-，C環(huán)開環(huán)后，脫掉C2、C3失去一個(gè)間苯三酚單元形成碎片離子m/z451.103 8 ［M-H-C6H6O3］-、RAD 反應(yīng)得到碎片離子425.089 4 ［M-H-C8H8O3］-及進(jìn)一步脫水后得到碎片離子m/z407.075 7 ［M-H-C8H8O3-H2O］-，根據(jù)對(duì)照品及文獻(xiàn)［33-36］ 報(bào)道比對(duì)，鑒定化合物5 為原花青素B 型二聚體類化合物原花青素B2，化合物1、3～5、8、10、20 的準(zhǔn)分子離子峰均為m/z577.314 1 ［M-H］-，主要質(zhì)譜裂解碎片一致，推測(cè)7 種化合物為同分異構(gòu)體，其質(zhì)譜及裂解途徑見(jiàn)圖4～6。

圖4 原花青素A2 低能量通道（A）、高能量通道（B）質(zhì)譜圖

圖5 原花青素B2 低能量通道（A）、高能量通道（B）質(zhì)譜圖

圖6 原花青素A2、B2 裂解規(guī)律

三聚體以化合物6 為例，其保留時(shí)間為6.11 min，在負(fù)離子模式下準(zhǔn)分子離子峰為m/z863.181 0 ［M-H］-，產(chǎn)生的碎片離子有m/z711.129 3 ［M-H-C6H5O2］-，繼續(xù)失去一分子catechin 得到碎片離子m/z411.074 0 ［M-Hcatechin］-； 黃烷單元間的共價(jià)鍵斷裂得到m/z289.071 9［catechin-H］-和m/z573.101 6 ［M-H-catechin］-，并失去一個(gè)小分子得到m/z451.103 8 ［M-H-C6H5O2］-，碎片離子m/z289.071 9 ［catechin-H］-失去一分子CO2得到m/z245.086 6 ［M-H-CO2］-。根據(jù)以上裂解方式結(jié)合文獻(xiàn)［35］，鑒定化合物6 為肉桂鞣質(zhì)D1或其異構(gòu)體，分子式為C45H36O18。化合物6、9、11 ～12 的準(zhǔn)分子離子峰均為m/z863.181 0 ［M-H］-，主要質(zhì)譜裂解碎片一致，推測(cè)四者為同分異構(gòu)體，其在負(fù)離子模式下的質(zhì)譜及裂解方式見(jiàn)圖7～8。

圖7 肉桂肉質(zhì)D1 或其異構(gòu)體低能量通道（A）、高能量通道（B） 質(zhì)譜圖

化合物17 （tR＝7.58 min） 分子式為C22H18O10，在負(fù)離子模式下準(zhǔn)分子離子峰均為m/z441.081 3 ［M-H］-，其裂解途徑主要是酯鍵的斷裂產(chǎn)生2 個(gè)碎片離子m/z271.068 0 ［M-H-Gallic acid］-、m/z169.020 5 ［M-Hcatechin］-，在質(zhì)譜中出現(xiàn)的離子m/z169 是特征性離子，此離子的存在說(shuō)明結(jié)構(gòu)中有沒(méi)食子酸根的存在，該裂解特征與文獻(xiàn)［37］ 報(bào)道一致，根據(jù)對(duì)照品比對(duì)，鑒定化合物17 為表兒茶沒(méi)食子酸酯，化合物18 與其均具有相同的分子離子峰，其二級(jí)質(zhì)譜裂解碎片一致，推測(cè)二者為同分異構(gòu)體，推測(cè)其為兒茶沒(méi)食子酸酯。其質(zhì)譜及裂解途徑見(jiàn)圖9～10。

圖9 表兒茶沒(méi)食子酸酯的低能量通道（A）、高能量通道（B） 質(zhì)譜圖

圖10 表兒茶沒(méi)食子酸酯裂解規(guī)律

3.2.2 黃酮苷類化合物 黃酮類化合物廣泛存在于自然界，是一類基本母核為2-苯基色原酮的化合物，大部分以游離形式、與糖結(jié)合成苷類或以碳糖基的形式存在。由于黃酮類化合物具有相同的母核，該類化合物有相似的裂解規(guī)律［38］。在血人參中共鑒定出4 個(gè)黃酮苷類化合物，質(zhì)譜裂解規(guī)律主要表現(xiàn)丟失其糖基而得到苷元的離子峰，因此化合物15～16、21 ～22 被鑒定為黃酮苷類成分，其中化合物21～22 經(jīng)對(duì)照品比對(duì)及文獻(xiàn)［39-40］ 報(bào)道，分別鑒定為柚皮素-7-O-葡萄糖苷（21）、根皮苷（22），而化合物15～16 表現(xiàn)為與柚皮素-7-O-葡萄糖苷一樣的質(zhì)譜裂解規(guī)律，因此鑒定為柚皮素-7-O-葡萄糖苷同分異構(gòu)體，分別為柚皮素-5-O-葡萄糖苷或其異構(gòu)體、柚皮素-4＇-O-葡萄糖苷或其異構(gòu)體。其質(zhì)譜及裂解規(guī)律見(jiàn)圖11～12。

圖11 根皮苷低能量通道（A）、高能量通道（B） 質(zhì)譜圖

圖12 根皮苷裂解規(guī)律

3.2.3 化合物對(duì)H2O2誘導(dǎo)HepG2 細(xì)胞損傷的保護(hù)作用400 μmol/L H2O2作用于HepG2 細(xì)胞12 h 后，對(duì)人肝細(xì)胞產(chǎn)生顯著損傷，細(xì)胞存活率低于空白對(duì)照組（P＜0.01）；原花青素B2對(duì)H2O2導(dǎo)致的HepG2 細(xì)胞損傷有保護(hù)作用，與模型組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）； 陽(yáng)性對(duì)照藥（GSH） 亦表現(xiàn)顯著肝細(xì)胞損傷保護(hù)活性（P＜0.05），見(jiàn)表2。

表2 各化合物對(duì)H2O2 誘導(dǎo)HepG2 細(xì)胞損傷的保護(hù)作用（±s）

表2 各化合物對(duì)H2O2 誘導(dǎo)HepG2 細(xì)胞損傷的保護(hù)作用（±s）

注： 與空白對(duì)照組比較，**P＜0.01； 與H2O2 比較，＃P＜0.05。

化合物濃度/（μmol·L-1）OD 值存活率/%空白對(duì)照組—0.852±0.022100.00 H2O2—0.638±0.061** 74.82 GSH200.740±0.014＃ 86.79原花青素B1100.703±0.05082.52兒茶素100.670±0.03778.63原花青素B3100.698±0.02881.91原花青素B2100.754±0.025＃ 88.48表兒茶素100.588±0.05569.01原花青素A1100.621±0.02872.85表兒茶素沒(méi)食子酸酯100.710±0.02683.37原花青素A2100.649±0.06276.16槲皮素-7-O-葡萄糖苷100.675±0.03179.20根皮苷100.681±0.03779.87

3.2.4 化合物對(duì)油酸誘導(dǎo)HepG2 細(xì)胞損傷的保護(hù)作用240 μmol/L 油酸作用于HepG2 細(xì)胞24 h 后，細(xì)胞內(nèi)形成顯著的脂質(zhì)沉積，脂滴含量升高（P＜0.01）； 根皮苷對(duì)油酸誘導(dǎo)的HepG2 細(xì)胞脂質(zhì)沉積呈現(xiàn)抑制活性，與模型組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）； 陽(yáng)性對(duì)照藥（非諾貝特）對(duì)油酸誘導(dǎo)的HepG2 細(xì)胞脂質(zhì)沉積也表現(xiàn)出顯著的抑制作用（P＜0.05），見(jiàn)表3。

表3 各化合物對(duì)油酸誘導(dǎo)HepG2 細(xì)胞脂質(zhì)沉積的保護(hù)作用（±s）

表3 各化合物對(duì)油酸誘導(dǎo)HepG2 細(xì)胞脂質(zhì)沉積的保護(hù)作用（±s）

注： 與空白對(duì)照組比較，**P＜0.01； 與油酸比較，＃P＜0.05。

化合物濃度/（μmol·L-1）OD 值抑制率/%空白對(duì)照組—0.209±0.019—油酸—0.371±0.046**—非諾貝特200.309±0.021＃ 16.63原花青素B1100.384±0.033-3.58兒茶素100.373±0.027-0.45原花青素B3100.400±0.038-7.86原花青素B2100.342±0.0377.89表兒茶素100.347±0.0386.59原花青素A1100.363±0.0292.11表兒茶素沒(méi)食子酸酯100.374±0.032-0.88原花青素A2100.360±0.0312.89槲皮素-7-O-葡萄糖苷100.370±0.0170.39根皮苷100.258±0.058＃ 30.51

4 討論

本實(shí)驗(yàn)在負(fù)離子模式下，采用UPLC-Q-TOF-MS 技術(shù)對(duì)血人參中的化學(xué)成分進(jìn)行了系統(tǒng)分析，根據(jù)信號(hào)峰的保留時(shí)間、質(zhì)譜圖信息、精確相對(duì)分子質(zhì)量信息及分子式，結(jié)合對(duì)照品，利用UNIFY 軟件及參考文獻(xiàn)共鑒定出22 個(gè)主要信號(hào)峰的成分，并總結(jié)了它們的裂解規(guī)律。其中化合物8、10～12、14～16、20、22 首次在血人參中發(fā)現(xiàn)。該方法具有快速、準(zhǔn)確等特點(diǎn)，可對(duì)多種類型化合物進(jìn)行定性鑒別，同時(shí)也進(jìn)一步為血人參的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究、飲片炮制工藝研究及體內(nèi)外成分分析研究提供參考依據(jù)。此外，由于原花青素二聚體和三聚體上羥基的鏈接位置不同，導(dǎo)致該類成分中的同分異構(gòu)體較多，上述裂解規(guī)律也為原花青素二聚體和三聚體成分的結(jié)構(gòu)鑒定提供了重要依據(jù)，為今后原花青素類和黃酮苷的研究奠定了基礎(chǔ)，為中藥天然產(chǎn)物的鑒定提供了方法參考。本研究通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，原花青素B2對(duì)H2O2導(dǎo)致的HepG2 細(xì)胞損傷具有保護(hù)作用，根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，原花青素B2可提高肝細(xì)胞增殖活力，其保肝作用機(jī)制可能調(diào)控修復(fù)基因HOGG1 表達(dá)有關(guān)［41-43］； 根皮苷對(duì)油酸誘導(dǎo)的人肝細(xì)胞脂質(zhì)沉積表現(xiàn)顯著抑制活性，這與文獻(xiàn)［25-44］ 報(bào)道一致，其體外保肝作用可能與提高脂肪氧化代謝基因的表達(dá)和降低膽固醇合成相關(guān)基因的表達(dá)有關(guān)。本研究結(jié)果為血人參的進(jìn)一步利用開發(fā)提供科學(xué)的理論依據(jù)。