鄰氟甲苯同分異構(gòu)體的分離和檢測

周茂東，李小飛，劉思光，李鐵健，張貴民＊

（1. 魯南制藥集團(tuán)有限公司，山東 臨沂 276000；2. 國家手性制藥工程技術(shù)研究中心，山東 臨沂 276000）

鄰氟甲苯，是一種無色液體，常被用作醫(yī)藥、農(nóng)藥有機(jī)合成中間體[1-3]，結(jié)構(gòu)見圖1。目前鄰氟甲苯的合成工藝，大多數(shù)以鄰甲苯胺為起始物料[4-5]，經(jīng)過一系列反應(yīng)得到鄰氟甲苯。如果鄰甲苯胺中有間甲苯胺、對甲苯胺，合成過程中可能產(chǎn)生其同分異構(gòu)體間氟甲苯和對氟甲苯，其結(jié)構(gòu)見圖1。

圖1 氟甲苯系列化合物結(jié)構(gòu)

原料藥中的雜質(zhì)與藥品的質(zhì)量緊密相關(guān)[6-9]，鄰氟甲苯作為醫(yī)藥有機(jī)合成中間體，其中的雜質(zhì)同樣影響原料藥的質(zhì)量，為了保證原料藥的質(zhì)量，需嚴(yán)格控制其中的雜質(zhì)。由于鄰氟甲苯、間氟甲苯、對氟甲苯三者互為同分異構(gòu)體，其物理化學(xué)性質(zhì)十分接近，因此分離和檢測有一定難度。目前未檢索到關(guān)于這3種化合物分析檢測的文獻(xiàn)，為了有效控制鄰氟甲苯的質(zhì)量，本研究建立了氣相色譜法分離鄰氟甲苯同分異構(gòu)體的方法，為此類化合物的分離和檢測提供參考。

1 儀器與試藥

Agilent GC 7890B氣相色譜儀（配備FID檢測器，美國安捷倫公司）；MS204TS/02型電子分析天平（Mettler Toledo公司）；SH-Rtx-225（30 m×0.32 mm，0.5 μm）色譜柱（日本島津公司）。

間氟甲苯對照品（廣州雋沐生物科技股份有限公司，批號：DM21092711，含量：99.9 %）；對氟甲苯對照品（廣州佳途，批號：0414-RB-0038，含量：98.2 %）；鄰氟甲苯（上海派沃蚨，批號：PWF2021102601）；甲醇（Merck，批號：I1148507118）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：SH-Rtx-225 （30 m×0.32 mm，0.5 μm）；升溫程序：起始溫度為45 ℃，保持15 min，以20 ℃/min升至200 ℃，保持5 min；進(jìn)樣口溫度：200 ℃；氫火焰離子化檢測器溫度：250 ℃；空氣流量：400 ml/min；氫氣流量：40 ml/min；尾吹氣（N2）流量：30 ml/min；分流比為20:1；載氣（N2）流量：1.0 ml/min；進(jìn)樣量：1 μl。在該色譜條件下，分離效果見圖2。

圖2 GC色譜圖

2.2 溶液的配制

2.2.1 空白溶劑 甲醇作為空白溶液。

2.2.2 對照品儲備液和對照品溶液 分別稱取間氟甲苯和對氟甲苯各約10 mg，分別置入10 ml量瓶，用溶劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別作為儲備液；精密量取上述對照品儲備液各2 ml，置入同一50 ml量瓶，用溶劑稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。

2.2.3 供試品溶液 稱取鄰氟甲苯約200 mg，置入10 ml量瓶，用溶劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2.2.4 測試溶液 稱取鄰氟甲苯約200 mg，置入10 ml量瓶，用對照品溶液稀釋至刻度，搖勻，作為測試溶液。

2.3 方法學(xué)驗證

2.3.1 檢測限和定量限 分別取2.2.3項供試品溶液，2.2.2項間氟甲苯和對氟甲苯對照品儲備液，采用加溶劑逐步稀釋法，以S/N≥10時的濃度作為定量限濃度；以S/N≥3時的濃度作為檢測限濃度。結(jié)果表明，鄰氟甲苯，間氟甲苯及對氟甲苯的定量限濃度分別為5.030，5.195，4.596 μg/ml；檢測限濃度分別為1.677，1.732，1.532 μg/ml。

2.3.2 線性與范圍 稱取鄰氟甲苯約400 mg，置入10 ml量瓶，精密加入2.2.2項間氟甲苯和對氟甲苯對照品儲備液各800 μl，用溶劑稀釋至刻度，搖勻，作為200 %線性儲備液；依次稀釋200 %線性儲備液至限度濃度的20 %，40 %，60 %，80 %，100 %和150 %，作為線性與范圍溶液2～7，定量限溶液作為線性與范圍溶液1。進(jìn)樣分析，以峰面積（A）為縱坐標(biāo)，濃度（C）為橫坐標(biāo)，繪制線性回歸方程，結(jié)果見表1。

表1 線性與范圍試驗結(jié)果

2.3.3 進(jìn)樣精密度 按2.2項方法，配制對照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6針。間氟甲苯和對氟甲苯峰面積的RSD分別為3.8 %和2.8 %，表明儀器精密度良好。

2.3.4 重復(fù)性 按2.2項方法，平行配制6份測試溶液，測得6份間氟甲苯和對氟甲苯含量的RSD分別為1.8 %和2.2 %。

2.3.5 中間精密度 按重復(fù)性試驗，計算不同分析人員、不同分析儀器和不同時間測定6份測試溶液所得結(jié)果。結(jié)果12份間氟甲苯和對氟甲苯含量的RSD分別為1.7 %和2.7 %。表明本法精密度良好。

2.3.6 回收率 按2.2項方法，配制間氟甲苯和對氟甲苯濃度為40 μg/ml混合溶液，作為對照品溶液；配制鄰氟甲苯濃度為20 mg/ml溶液，作為供試品溶液；同時配制含鄰氟甲苯20 mg/ml，間氟甲苯和對氟甲苯均為20 μg/ml混合溶液，作為50 %測試溶液；含鄰氟甲苯20 mg/ml，間氟甲苯和對氟甲苯均為40 μg/ml混合溶液，作為100 %測試溶液；含鄰氟甲苯20 mg/ml，間氟甲苯和對氟甲苯均為60 μg/ml混合溶液，作為150 %測試溶液。取上述溶液進(jìn)樣分析并計算回收率。結(jié)果見表2，間氟甲苯和對氟甲苯的平均回收率分別為107.35 %，98.14 %；回收率的RSD分別為3.5 %，2.5 %；表明本法的準(zhǔn)確度良好。

表2 回收率試驗結(jié)果

2.3.7 耐用性 按2.2.4項方法配制含鄰氟甲苯20 mg/ml，間氟甲苯和對氟甲苯均為40 μg/ml的混合溶液（測試溶液）。分別于標(biāo)準(zhǔn)條件及分別改變進(jìn)樣口溫度（±10 ℃）、流速（±0.1 ml/min）、升溫速率（±5 ℃/min）的條件下，取以上溶液進(jìn)樣分析，鄰氟甲苯、間氟甲苯、對氟甲苯三者間的分離度良好，最小為1.22，表明本法的耐用性良好。

3 討論與結(jié)論

3.1 色譜柱的選擇

由于鄰氟甲苯，間氟甲苯及對氟甲苯的物理化學(xué)性質(zhì)相似，沸點(diǎn)相近，試驗中篩選不同的毛細(xì)管柱。在選擇DB-WAX柱時，鄰氟甲苯、間氟甲苯、對氟甲苯有分離趨勢，但不能完全分離。在選擇ZB-50柱時，鄰氟甲苯、間氟甲苯、對氟甲苯完全重合，不能分離。使用SH-Rtx-225柱時，鄰氟甲苯、間氟甲苯、對氟甲苯三者間分離度較好，峰形較好，靈敏度高，適合對鄰氟甲苯同分異構(gòu)體的分離和檢測。

3.2 結(jié)論

本法采用氣相色譜法對鄰氟甲苯的同分異構(gòu)體進(jìn)行分離和檢測，方法簡單實(shí)用，操作方便，準(zhǔn)確性高。本研究為此類化合物的分離和檢測提供了良好的參考依據(jù)。