早期潛伏梅毒病人外周血T淋巴細(xì)胞亞群、自然殺傷細(xì)胞的變化及意義

朱由瑾，周向昭，吳遠(yuǎn)慧，溫杰，高曉莉，馮冬梅

作者單位：河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院皮膚科，河北 張家口075000

梅毒是由梅毒螺旋體引起的慢性性傳播疾病，可侵犯全身各器官，導(dǎo)致病人出現(xiàn)硬下疳、腹股溝淋巴結(jié)腫大、皮膚丘疹或斑塊、潰瘍等多種癥狀或體征，并可引發(fā)骨骼梅毒、神經(jīng)梅毒等，嚴(yán)重危害病人身心健康［1］。相關(guān)研究［2］報道，我國近年來梅毒的發(fā)病率仍居高不下，呈逐年上升趨勢。但在臨床上，有部分梅毒病人多年無明顯臨床表現(xiàn)，而梅毒血清試驗(yàn)反應(yīng)陽性，呈現(xiàn)潛伏狀態(tài)，稱為潛伏梅毒，其難以被發(fā)現(xiàn)，對機(jī)體的影響更大。早期潛伏梅毒是指感染期限在2年以下的潛伏梅毒，因無臨床癥狀且具有傳染性，成為重要的傳染源［3］。目前，已有研究［4］指出，T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫應(yīng)答在梅毒病人的發(fā)病、疾病進(jìn)展及轉(zhuǎn)歸中均發(fā)揮重要作用。另有研究［5］表明，梅毒血清固定病人外周血自然殺傷細(xì)胞（NK）水平低于體檢健康人群，NK細(xì)胞功能失調(diào)與梅毒病情變化具有一定的關(guān)系。但關(guān)于早期潛伏梅毒病人外周血T淋巴細(xì)胞亞群、NK細(xì)胞的變化情況尚有待進(jìn)一步探索。鑒于此，本研究特開展對照試驗(yàn)，分析T淋巴細(xì)胞亞群、NK細(xì)胞與早期潛伏梅毒發(fā)病的關(guān)系，為臨床早期潛伏梅毒病人的診治提供一定的理論參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2015年3月至2021年3月河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院診治的早期潛伏梅毒病人135例為觀察組，另選取同期健康體檢者116例為對照組。其中觀察組男76例，女59例；年齡范圍為24～57歲，年齡（35.19±5.87）歲；病程3個月至2年，病程（1.27±0.25）年。對照組男55例，女48例；年齡范圍為21～59歲，年齡（34.52±6.13）歲。兩組性別、年齡比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），本研究符合《世界醫(yī)學(xué)協(xié)會赫爾辛基宣言》。病人或其近親屬對研究方案簽署知情同意書。

納入標(biāo)準(zhǔn)：觀察組均為經(jīng)臨床診斷的早期潛伏梅毒病人，無皮膚、黏膜、神經(jīng)系統(tǒng)等臨床癥狀，過去2年內(nèi)非螺旋體試驗(yàn)、梅毒螺旋體試驗(yàn)均陽性，或有一期或二期梅毒史，或其性伴侶患有病程2年以內(nèi)的一期、二期或潛伏梅毒；對照組均為體檢健康者，無感染性疾病等，非螺旋體試驗(yàn)、梅毒螺旋體試驗(yàn)均陰性；均知情同意，且自愿參與。

排除標(biāo)準(zhǔn)：出現(xiàn)一期或二期梅毒臨床癥狀或體征者；接受腦脊液檢查而結(jié)果顯示陽性者；自身免疫性疾病者；機(jī)體各系統(tǒng)及組織器官疾病者；近期急慢性期感染者；獲得性免疫缺陷綜合征；惡性腫瘤者；有精神疾患、無法配合研究者。

1.2 方法

1.2.1 外周血T淋巴細(xì)胞亞群、NK細(xì)胞表達(dá)檢測觀察組于治療前、對照組于體檢時，抽取空腹靜脈血4 mL，抗凝，離心，收集血清，采用流失細(xì)胞儀檢測、并應(yīng)用Canto自動軟件計算外周血CD3+、CD4+、CD8+以及NK細(xì)胞絕對計數(shù)，并測算CD3+、CD4+、CD8+以及NK細(xì)胞占總淋巴細(xì)胞的百分比，并計算CD4+/CD8+，其中FACSC alibur流失細(xì)胞儀、相關(guān)試劑盒均購自美國BD公司，嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作。

1.2.2 快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(yàn)（RPR）初始滴度檢測 所有病人均行RPR檢測，抽取靜脈血2 mL，分離血清，加入卡片上圓圈內(nèi)，并設(shè)陰性、陽性對照，滴加RPR抗原，旋轉(zhuǎn)搖動，觀察結(jié)果；根據(jù)檢測結(jié)果將病人分為RPR初始滴度≤1∶8組與＞1∶8組。

1.2.3 治療方法 對經(jīng)臨床明確診斷的早期潛伏梅毒病人，均給予芐星青霉素治療，肌內(nèi)注射，240萬單位/次，1次/周，共注射3次。

1.3 觀察指標(biāo) （1）觀察組與對照組外周血T淋巴細(xì)胞亞群、NK細(xì)胞檢測結(jié)果比較（百分比與絕對計數(shù)）。（2）RPR初始滴度≤1∶8組與＞1∶8組外周血T淋巴細(xì)胞亞群、NK細(xì)胞檢測結(jié)果比較。（3）早期潛伏梅毒病人外周血T淋巴細(xì)胞亞群、NK細(xì)胞與RPR初始滴度的相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 數(shù)據(jù)分析采用SPSS 24.0軟件，計量資料以表示，組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；T淋巴細(xì)胞亞群、NK細(xì)胞與RPR初始滴度的相關(guān)性采用Spearman秩相關(guān)性分析法；P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 觀察組與對照組外周血T淋巴細(xì)胞亞群、NK細(xì)胞檢測結(jié)果比較 觀察組外周血CD3+、CD8+絕對計數(shù)及所占比例與對照組比較均差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），外周血CD4+絕對計數(shù)及所占比例、CD4+/CD8+所占比例均高于對照組（P＜0.05），NK細(xì)胞絕對計數(shù)及所占比例均低于對照組（P＜0.05）。見表1，2。

表1 觀察組與對照組外周血T淋巴細(xì)胞亞群、自然殺傷細(xì)胞（NK）絕對計數(shù)/（個/微升，）

組別對照組觀察組t值P值例數(shù)116 135 CD3+1 316.52±259.84 1 379.94±263.07 1.92 0.057 CD4+679.84±159.33 765.41±164.29 4.17＜0.001 CD8+563.72±141.23 598.75±148.35 1.91 0.058 NK 351.27±63.28 331.62±64.59 2.43 0.016

表2 觀察組與對照組外周血T淋巴細(xì)胞亞群、自然殺傷細(xì)胞（NK）百分比/

表2 觀察組與對照組外周血T淋巴細(xì)胞亞群、自然殺傷細(xì)胞（NK）百分比/

組別對照組觀察組t值P值例數(shù)116 135 CD3+/%64.85±12.95 67.79±10.76 1.96 0.051 CD4+/%29.73±5.84 37.36±7.26 9.07＜0.001 CD8+/%28.09±5.61 29.51±5.92 1.94 0.053 CD4+/CD8+1.06±0.21 1.27±0.25 7.14＜0.001 NK/%17.46±3.34 16.59±3.29 2.07 0.039

2.2 RPR初始滴度≤1∶8組與＞1∶8組外周血T淋巴細(xì)胞亞群、NK細(xì)胞檢測結(jié)果比較 根據(jù)RPR檢測結(jié)果，135例早期梅毒潛伏病人中RPR初始滴度≤1∶8者有61例，＞1∶8者有74例。RPR初始滴度≤1∶8組外周血CD3+、CD4+、CD8+絕對計數(shù)及所占比例均低于RPR初始滴度＞1∶8組（P＜0.05），且CD4+/CD8+所占比例低于RPR初始滴度＞1∶8組（P＜0.05），NK細(xì)胞絕對計數(shù)及所占比例均高于RPR初始滴度＞1∶8組（P＜0.05）。見表3，4。

表3 早期潛伏梅毒不同RPR初始滴度組外周血T淋巴細(xì)胞亞群、自然殺傷細(xì)胞（NK）絕對計數(shù)/（個/微升，）

表3 早期潛伏梅毒不同RPR初始滴度組外周血T淋巴細(xì)胞亞群、自然殺傷細(xì)胞（NK）絕對計數(shù)/（個/微升，）

組別≤1∶8滴度組＞1∶8滴度組t值P值例數(shù)61 74 CD3+1 325.79±273.48 1 424.58±264.91 2.12 0.035 CD4+715.84±145.32 806.27±131.06 3.80＜0.001 CD8+571.03±132.46 621.60±138.53 2.15 0.033 NK 345.75±68.42 319.97±60.14 2.33 0.021

表4 早期潛伏梅毒不同RPR初始滴度組外周血T淋巴細(xì)胞亞群、自然殺傷細(xì)胞（NK）百分比/

表4 早期潛伏梅毒不同RPR初始滴度組外周血T淋巴細(xì)胞亞群、自然殺傷細(xì)胞（NK）百分比/

組別≤1∶8滴度組＞1∶8滴度組t值P值例數(shù)61 74 CD3+/%66.01±9.48 69.28±8.63 2.10 0.038 CD4+/%34.25±6.17 39.92±7.34 4.80＜0.001 CD8+/%28.46±5.35 30.38±5.74 1.99 0.048 CD4+/CD8+1.20±0.23 1.31±0.26 2.58 0.011 NK/%17.32±3.45 15.99±3.16 2.34 0.021

2.3 早期潛伏梅毒病人外周血T淋巴細(xì)胞亞群、NK細(xì)胞與RPR初始滴度的相關(guān)性 經(jīng)Spearman秩相關(guān)性分析顯示，早期潛伏梅毒病人外周血CD3+、CD4+、CD8+絕對計數(shù)與百分比均與RPR初始滴度呈正相關(guān)（P＜0.05），CD4+/CD8+比值與RPR初始滴度呈正相關(guān)（P＜0.05），NK細(xì)胞絕對計數(shù)、百分比均與RPR初始滴度呈負(fù)相關(guān)（P＜0.05）。見表5，6。

表5 早期潛伏梅毒病人外周血T淋巴細(xì)胞亞群、自然殺傷細(xì)胞（NK）絕對計數(shù)與RPR初始滴度的相關(guān)性

表6 早期潛伏梅毒病人外周血T淋巴細(xì)胞亞群、自然殺傷細(xì)胞（NK）百分比與RPR初始滴度的相關(guān)性

3 討論

梅毒主要通過性接觸傳播，好發(fā)于多個性伴侶、男同性戀、無保護(hù)性交等人群，臨床表現(xiàn)多種多樣，亦可無癥狀而長期處于潛伏狀態(tài)［6-7］。潛伏梅毒不易被發(fā)現(xiàn)，可對機(jī)體狀態(tài)與心理健康造成嚴(yán)重影響，危害性極大［8］。梅毒發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，已有研究［9］證實(shí)細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)與該病的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切。外周血T淋巴細(xì)胞亞群與NK細(xì)胞是機(jī)體免疫應(yīng)答中的重要反應(yīng)指標(biāo)，在機(jī)體的整個免疫狀態(tài)中舉足輕重。為了解外周血T淋巴細(xì)胞亞群、NK細(xì)胞在早期潛伏梅毒病人發(fā)病中的作用，本研究就此展開探討。

CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+均是T淋巴細(xì)胞亞群重要參數(shù)，可對機(jī)體細(xì)胞免疫狀態(tài)進(jìn)行良好地反應(yīng)。CD3+細(xì)胞屬于成熟的T淋巴細(xì)胞，可代表淋巴細(xì)胞亞群，主要執(zhí)行機(jī)體細(xì)胞免疫功能，反映特異性免疫應(yīng)答狀態(tài)；CD4+細(xì)胞屬于輔助性T細(xì)胞，具有免疫調(diào)節(jié)能力與特殊殺傷功能；多數(shù)CD8+細(xì)胞屬于抑制性T細(xì)胞，部分屬于毒性T淋巴細(xì)胞，可通過介導(dǎo)抗病毒性感染等細(xì)胞免疫反應(yīng)而抑制機(jī)體免疫反應(yīng)。正常情況下，CD4+、CD8+細(xì)胞相對穩(wěn)定，維持機(jī)體免疫功能。相關(guān)研究［10］指出，T淋巴細(xì)胞免疫可抑制梅毒螺旋體，以保護(hù)機(jī)體避免感染。有研究［11］表明，兔感染梅毒后，CD3+細(xì)胞逐漸上升，在第18 d時達(dá)到最高峰，表現(xiàn)為睪丸炎，而隨著癥狀的緩解逐漸下降到一個相對低水平，但數(shù)天后，再次持續(xù)上升，此推測可能在人體感染梅毒后亦可出現(xiàn)上述CD3+細(xì)胞變化情況。本研究中觀察組病人外周血CD3+細(xì)胞絕對計數(shù)與百分比與健康人群無明顯差異，可能是因此類病人屬于早期無癥狀感染。CD4+細(xì)胞在機(jī)體抗梅毒螺旋體感染過程中具有重要作用，其可分泌白細(xì)胞介素-2、抗腫瘤因子等多種細(xì)胞因子，激活細(xì)胞遲發(fā)型超敏反應(yīng)，從而發(fā)揮抗梅毒免疫［12］。而在抗梅毒螺旋體感染的免疫中，CD8+細(xì)胞在抑制機(jī)體免疫反應(yīng)的同時亦可抑制梅毒螺旋體抗體生成，避免造成梅毒螺旋體擴(kuò)散與潛伏［13］。本研究中觀察組外周血CD4+絕對計數(shù)及所占比例、CD4+/CD8+所占比例均較對照組高，而CD8+絕對計數(shù)及所占比例與對照組相當(dāng)，此與屈曉威［14］等研究結(jié)果相一致，提示早期潛伏梅毒病人可能存在一定的細(xì)胞免疫力增強(qiáng)情況，利于消除梅毒螺旋體。NK細(xì)胞是參與機(jī)體免疫調(diào)節(jié)的重要免疫細(xì)胞，可識別靶細(xì)胞與殺傷介質(zhì)而非特異性殺傷病毒感染細(xì)胞，在清除梅毒螺旋體方面起著重要作用。本研究中觀察組外周血NK細(xì)胞絕對計數(shù)及所占比例較對照組低，可能是因早期潛伏梅毒病人機(jī)體的防御功能受到一定的損傷，吞噬及殺傷梅毒螺旋體的功能降低，清除梅毒螺旋體的作用減弱，則引發(fā)機(jī)體被梅毒螺旋體感染［15］。相關(guān)研究［16］報道，梅毒血清固定病人NK細(xì)胞較健康者低，此與本研究結(jié)果基本符合。

本研究結(jié)果還發(fā)現(xiàn)，外周血CD3+、CD4+、CD8+絕對計數(shù)與所占比例以及CD4+/CD8+所占比例在RPR初始滴度≤1∶8的早期潛伏梅毒病人中較RPR初始滴度＞1∶8者低，而NK細(xì)胞絕對計數(shù)及所占比例在RPR初始滴度≤1∶8者中較RPR初始滴度＞1∶8者高，且經(jīng)Spearman秩相關(guān)性分析，早期潛伏梅毒病人外周血CD3+、CD4+、CD8+絕對計數(shù)和百分比以及CD4+/CD8+比值均與RPR初始滴度呈正相關(guān)，而NK細(xì)胞絕對計數(shù)、百分比均與RPR初始滴度呈負(fù)相關(guān)，提示外周血T淋巴細(xì)胞亞群與NK細(xì)胞變化情況可能與早期潛伏梅毒滴度存在一定的關(guān)系。早期潛伏梅毒滴度越高，則病人機(jī)體防御功能損壞越明顯，NK細(xì)胞下降，刺激機(jī)體自身產(chǎn)生更強(qiáng)的細(xì)胞免疫應(yīng)答能力以抵抗梅毒螺旋體感染，相關(guān)研究［17］顯示，甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)（TRUST）滴度＜1∶8的梅毒病人CD3+、CD4+、CD8+細(xì)胞均低于TRUST≥1∶8病人，而NK細(xì)胞高于TRUST≥1∶8病人，此與本研究結(jié)果基本符合，進(jìn)一步表明外周血T淋巴亞群、NK細(xì)胞的檢測對早期潛伏梅毒滴度評估有積極臨床意義。

綜上，與健康人群相比，早期梅毒潛伏病人外周血CD4+、CD4+/CD8+升高，NK細(xì)胞降低，而CD3+、CD8+細(xì)胞無明顯改變，但外周血T淋巴細(xì)胞亞群、NK細(xì)胞變化均與早期潛伏梅毒滴度存在一定的關(guān)系，推測此可能參與了早期潛伏梅毒的發(fā)病過程。