中醫(yī)藥治療鼻咽癌用藥規(guī)律分析與網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究

龍遠(yuǎn)雄，韓蜜，2，朱鎮(zhèn)華，陳鎮(zhèn)，鄧桂明（.湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，湖南 長(zhǎng)沙 40007；2.湖南省腫瘤醫(yī)院，湖南 長(zhǎng)沙 4003）

鼻咽癌是一種鱗狀上皮細(xì)胞癌，與其他腫瘤相比，具有明顯的地理分布特征，據(jù)統(tǒng)計(jì)全球約一半病例來(lái)自中國(guó)，其中以嶺南地區(qū)居多[1-2]。目前鼻咽癌的病因尚未完全明確，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為其發(fā)生是多因素、多基因以及多步驟綜合作用的結(jié)果，與EB病毒感染、遺傳、環(huán)境因素密切相關(guān)。放療是治療鼻咽癌行之有效的方法，但放療存在敏感性低、毒副作用大（如口腔黏膜損傷、腹脹腹痛）等弊端，被患者排斥[3]。中醫(yī)藥與放療等西醫(yī)相結(jié)合治療鼻咽癌具有減毒增效作用。因此，本研究對(duì)中國(guó)知網(wǎng)（CNKI）、萬(wàn)方數(shù)據(jù)庫(kù)（Wanfang）、維普中文科技期刊（VIP）等數(shù)據(jù)庫(kù)中有關(guān)中醫(yī)藥治療鼻咽癌的臨床研究文獻(xiàn)進(jìn)行挖掘，總結(jié)用藥規(guī)律，聚類(lèi)形成新方，基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)探討新方可能的作用機(jī)制，以期為鼻咽癌的治療與新藥研發(fā)等提供新思路。

1 資料與方法

1.1 數(shù)據(jù)來(lái)源與檢索策略以中國(guó)知網(wǎng)、萬(wàn)方數(shù)據(jù)源、維普中文科技期刊為數(shù)據(jù)來(lái)源。中國(guó)知網(wǎng)：選擇高級(jí)檢索，檢索格式：（主題=經(jīng)驗(yàn)）OR（主題=驗(yàn)方）OR（主題=醫(yī)案）AND（主題=鼻咽癌）；萬(wàn)方數(shù)據(jù)庫(kù)：選擇專(zhuān)業(yè)檢索，檢索格式：主題：（“經(jīng)驗(yàn)”O(jiān)R“驗(yàn)方”O(jiān)R“醫(yī)案”）AND 主題：（鼻咽癌）；維普數(shù)據(jù)庫(kù)：選擇高級(jí)檢索，選擇題名或關(guān)鍵詞，檢索式：“醫(yī)案”O(jiān)R“驗(yàn)方”O(jiān)R“經(jīng)驗(yàn)”AND“鼻咽癌”。文獻(xiàn)發(fā)表時(shí)間從建庫(kù)至2023年2月15日。

1.2 納入標(biāo)準(zhǔn)①中醫(yī)藥治療鼻咽癌的臨床隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)或者臨床觀(guān)察，觀(guān)察對(duì)象符合《腫瘤中醫(yī)診療指南（ZYYXH/T 136-156-2008）》[4]中鼻咽癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)等（癥見(jiàn)鼻塞、鼻衄、流涕或涕中帶血、耳鳴及耳聾，頭痛等，CT、MRI、間接鼻咽鏡檢查、鼻咽纖維鏡檢查等觀(guān)察具體部位的異常及結(jié)構(gòu)改變；病理學(xué)診斷：結(jié)節(jié)型、菜花型、黏膜下浸潤(rùn)型和潰瘍型腫塊等）。②結(jié)果報(bào)告臨床療效確切；③干預(yù)措施為中藥內(nèi)服方劑，涉及的中藥處方組方完整。

1.3 排除標(biāo)準(zhǔn)①診斷標(biāo)準(zhǔn)不明確的文獻(xiàn)；②單味中藥處方；③非臨床治療類(lèi)文獻(xiàn)，如動(dòng)物實(shí)驗(yàn)等；④重復(fù)發(fā)表的文獻(xiàn)僅納入其中1篇。

1.4 數(shù)據(jù)預(yù)處理將藥物名稱(chēng)按照《中國(guó)藥典》[5]或《中藥學(xué)》[6]進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化，保證一藥一名。如“麥門(mén)冬”標(biāo)準(zhǔn)化為“麥冬”。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析應(yīng)用中醫(yī)傳承輔助平臺(tái)（V2.5）進(jìn)行數(shù)據(jù)挖掘，統(tǒng)計(jì)高頻藥物、藥對(duì)，通過(guò)關(guān)聯(lián)規(guī)則與熵聚類(lèi)方法分析形成新方，根據(jù)新方功效，結(jié)合中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)《腫瘤中醫(yī)診療指南》[7]中鼻咽癌4個(gè)主要證型（熱邪犯肺證、肝郁痰凝證、血瘀阻絡(luò)證和氣陰兩虛證），選擇最具研究意義的新方開(kāi)展網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究[7]。

1.6 新方1 有效化合物及作用靶點(diǎn)查詢(xún)通過(guò)TCMSP平臺(tái)（http://lsp，nwu.edu.cn/tcmsp.php）檢索中藥成分，根據(jù)口服生物利用度≥30%，類(lèi)藥性≥0.18 篩選有效化合物，通過(guò)其MOL ID 號(hào)檢索各成分作用靶點(diǎn)，利用Uniprot 數(shù)據(jù)庫(kù)（http://www.uniprot.org/）檢索靶點(diǎn)基因名。對(duì)TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)未載入的中藥通過(guò)Herb數(shù)據(jù)庫(kù)（http://www.herb.org/）檢索有效成分，通過(guò)SwissTargetPrediction（http://www.swisstargetprediction.ch）數(shù)據(jù)庫(kù)預(yù)測(cè)其有效靶點(diǎn)。

1.7 鼻咽癌靶點(diǎn)的預(yù)測(cè)在GeneCards（https://www.genecards.org/）數(shù)據(jù)庫(kù)中輸入“Nasopharyngeal carcinoma”獲取鼻咽癌靶點(diǎn)。并與新方1 靶點(diǎn)取交集，得到治療鼻咽癌的相關(guān)靶點(diǎn)。

1.8 “化合物-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建將交集靶點(diǎn)導(dǎo)入Cytoscape 3.7.1 軟件，形成化合物-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖，并利用“NetworkAnalyzer”進(jìn)行分析，篩選出作用于鼻咽癌的關(guān)鍵化合物。

1.9 蛋白互作網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建及核心靶點(diǎn)篩選將交集靶點(diǎn)導(dǎo)入STRING 數(shù)據(jù)庫(kù)構(gòu)建交集靶點(diǎn)蛋白互作（proteinprotein interaction，PPI）網(wǎng)絡(luò)。借助Cytoscape 3.7.1對(duì)網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行拓?fù)浞治?，選取連接度（Degree）、介數(shù)（Betweenness）、中心度（Closeness）均大于均值的靶點(diǎn)為核心靶點(diǎn)。

1.10 GO 功能及KEGG 通路富集分析將交集靶點(diǎn)導(dǎo)入DAVID 6.8 數(shù)據(jù)庫(kù)（https://david.ncifcrf.gov/tools.jsp），進(jìn)行GO 功能富集和KEGG 通路分析，并用微生信平臺(tái)進(jìn)行可視化處理。

1.11 分子對(duì)接將篩選的關(guān)鍵化合物（小分子）與核心靶蛋白進(jìn)行對(duì)接。靶蛋白X射線(xiàn)晶體結(jié)構(gòu)來(lái)自PDB蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(kù)。化合物小分子結(jié)構(gòu)來(lái)源于TCMSP 數(shù)據(jù)庫(kù)。使用Autodock Vina 1.2.0 進(jìn)行分子對(duì)接。選取最優(yōu)結(jié)合構(gòu)象分析相互作用，利用PyMOL 2.2.0生成對(duì)接可視化圖。若結(jié)合能小于-5 kcal·mol-1表示具有較好的結(jié)合活性，小于-7 kcal·mol-1表示具有強(qiáng)烈的結(jié)合活性[8]。

2 結(jié)果

共檢索到749篇文獻(xiàn)，按納入和排除標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行篩選，最終得到102 篇文獻(xiàn)，從中提取有效治療處方115首，涉及中藥271味。

2.1 藥物頻次統(tǒng)計(jì)在271味藥物中，累計(jì)使用頻次1 457 次，使用頻次排前5 位的中藥依次為甘草、麥冬、玄參、生地黃、白花蛇舌草。治療鼻咽癌高頻中藥（頻次≥10次）共45味。見(jiàn)表1。

表1 治療鼻咽癌的高頻藥物統(tǒng)計(jì)（頻次≥10 次）Table 1 High frequency drug statistics for the treatment of nasopharyngeal carcinoma（frequency≥10）

2.2 中藥功效分類(lèi)統(tǒng)計(jì)對(duì)271味按中藥功效進(jìn)行分類(lèi)[6]，可分為18 類(lèi)。見(jiàn)表2。使用頻次排前5 位的依次為補(bǔ)虛藥、清熱藥、解表藥、化痰止咳平喘、活血化瘀藥，其使用頻率合計(jì)占比為79.34%。

表2 治療鼻咽癌的中藥功效類(lèi)別頻數(shù)統(tǒng)計(jì)Table 2 Frequency statistics of traditional Chinese medicine categories for treating nasopharyngeal carcinoma

2.3 關(guān)聯(lián)規(guī)則分析將支持度個(gè)數(shù)設(shè)為12，置信度設(shè)為0.6，得到常用核心藥對(duì)25 組（見(jiàn)表3），強(qiáng)關(guān)聯(lián)藥物組合14個(gè)（見(jiàn)表4），核心藥物關(guān)聯(lián)圖譜見(jiàn)圖1。

圖1 治療鼻咽癌的核心藥物關(guān)聯(lián)圖譜Figure 1 The association map of core drugs for the treatment of nasopharyngeal carcinoma

表3 治療鼻咽癌的核心藥對(duì)統(tǒng)計(jì)Table 3 Statistics of core drug pairs for the treatment of nasopharyngeal cancer

表4 治療鼻咽癌的關(guān)聯(lián)規(guī)則分析結(jié)果表（置信度≥0.6）Table 4 Analysis results of association rules for the treatment of nasopharyngeal cancer（Confidence level ≥0.6）

2.4 基于熵聚類(lèi)的核心組合及新方組合分析根據(jù)篩選出的治療鼻咽癌方劑數(shù)量、綜合臨床用藥經(jīng)驗(yàn)進(jìn)行判斷及不同參數(shù)提取數(shù)據(jù)的預(yù)讀[9]，選擇相關(guān)度為4，懲罰度為2，進(jìn)行層次聚類(lèi)分析，得到治療鼻咽癌方劑中271味中藥兩兩之間的關(guān)聯(lián)度，其中基于復(fù)雜系統(tǒng)熵聚類(lèi)，演化出3 味藥的核心組合共計(jì)14 個(gè)。在以上核心組合的基礎(chǔ)上，進(jìn)行無(wú)監(jiān)督熵層次聚類(lèi)，有8 個(gè)核心組合參與聚類(lèi)（見(jiàn)表5），得到4 個(gè)新處方（見(jiàn)表6），并利用中醫(yī)傳承輔助平臺(tái)（V2.5）的網(wǎng)絡(luò)展示功能進(jìn)行展示，見(jiàn)圖2。

圖2 治療鼻咽癌新處方藥物網(wǎng)絡(luò)展示Figure 2 Network display of new prescriaption drugs for treating nasopharyngeal carcinoma

表5 治療鼻咽癌新方聚類(lèi)的核心組合Table 5 Core combinations of new prescription clustering for the treatment of nasopharyngeal carcinoma

表6 基于無(wú)監(jiān)督熵層次聚類(lèi)治療鼻咽癌的新處方Table 6 New prescription for nasopharyngeal carcinoma based on unsupervised entropy hierarchical clustering

2.5 新方1 的網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究

2.5.1新方1 有效化合物及靶點(diǎn) 新方1 中藥組成為麥冬、生地黃、玄參、黃芪、女貞子、枸杞子。獲得麥冬有效化合物4個(gè)，對(duì)應(yīng)靶點(diǎn)156個(gè)；生地黃有效化合物23 個(gè)，對(duì)應(yīng)靶點(diǎn)304 個(gè)；玄參有效化合物9 個(gè)，對(duì)應(yīng)靶點(diǎn)36 個(gè)；黃芪有效化合物21 個(gè)，對(duì)應(yīng)靶點(diǎn)214 個(gè)；女貞子有效化合物13 個(gè)，對(duì)應(yīng)靶點(diǎn)182 個(gè)；枸杞有效化合物15 個(gè)，對(duì)應(yīng)靶點(diǎn)64 個(gè)。去重后，新方1有效化合物79個(gè)，靶點(diǎn)數(shù)430個(gè)。

2.5.2新方1 治療鼻咽癌的疾病靶點(diǎn)預(yù)測(cè) 檢索獲得鼻咽癌相關(guān)靶點(diǎn)數(shù)2 161 個(gè)。將新方1 獲得的430 個(gè)靶點(diǎn)，與鼻咽癌2 161個(gè)靶點(diǎn)基因比對(duì)，獲取交集靶點(diǎn)165個(gè)，其可能是治療鼻咽癌的相關(guān)靶點(diǎn)，對(duì)應(yīng)的活性化合物60個(gè)，可能為新方1治療鼻咽癌的有效成分。

2.5.3化合物-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建與分析結(jié)果 利用Cytoscape 3.7.1 軟件對(duì)60 個(gè)活性化合物和165 個(gè)靶點(diǎn)構(gòu)建化合物-鼻咽癌靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)（見(jiàn)圖3），并利用Network Analyzer 功能對(duì)網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行分析，將連接度（Degree）＞10的化合物視為新方1治療鼻咽癌的關(guān)鍵化合物，共獲得10個(gè)化合物。見(jiàn)表7。

圖3 新方1 有效化合物-鼻咽癌靶點(diǎn)的網(wǎng)絡(luò)圖Figure 3 Network diagram of effective compounds of New Prescription 1-targets of nasopharyngeal cancer

表7 新方1 治療鼻咽癌的關(guān)鍵化合物（Degree＞10）Table 7 Key compounds of New Prescription 1 for the treatment of nasopharyngeal cancer（Degree＞10）

2.5.4蛋白互作網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建與關(guān)鍵靶點(diǎn)篩選 在165 個(gè)交集靶點(diǎn)的PPI 網(wǎng)絡(luò)中，有161 個(gè)靶點(diǎn)間存在互作關(guān)系（見(jiàn)圖4），拓?fù)浞治鲲@示網(wǎng)絡(luò)中Degree、Betweenness、Closeness 值均大于平均值（分別為44.23、0.566、0.005）的靶點(diǎn)共39 個(gè)（見(jiàn)表8），這些靶點(diǎn)可能是新方1的主要作用靶點(diǎn)。

圖4 治療鼻咽癌的交集靶點(diǎn)蛋白互作（PPI）網(wǎng)絡(luò)圖Figure 4 PPI network diagram of intersection target protein for the treatment of nasopharyngeal cancer

表8 新方1 治療鼻咽癌的關(guān)鍵靶點(diǎn)Table 8 Key targets of New Prescription 1 for the treatment of nasopharyngeal cancer

2.5.5GO 功能與KEGG 通路富集分析結(jié)果 GO 功能分析富集得到518 個(gè)條目（P＜0.01），包括生物過(guò)程（BP）417 個(gè)、細(xì)胞組成（CC）37 個(gè)和分子功能（MF）64 個(gè)。KEGG 通路富集得到信號(hào)通路141 條（P＜0.01）。選擇富集顯著性（按P值升序）排前10 位的生物進(jìn)程、分子功能、細(xì)胞組成，以及排前15 位的通路進(jìn)行展示。結(jié)果見(jiàn)圖5和圖6。

圖5 中醫(yī)藥治療鼻咽癌的GO 功能富集分析Figure 5 GO enrichment analysis results of TCM for the treatment of nasopharyngeal cancer

圖6 中醫(yī)藥治療鼻咽癌的KEGG 富集分析Figure 6 KEGG enrichment analysis results of TCM for the treatment of nasopharyngeal cancer

2.5.6分子對(duì)接 將新方1 中Degree 值最高的3 個(gè)核心活性成分和前3 個(gè)靶點(diǎn)蛋白進(jìn)行分子對(duì)接。見(jiàn)表9。結(jié)果顯示，活性成分與靶點(diǎn)蛋白的結(jié)合能均小于-5 kcal·mol-1，其中配體槲皮素與受體TP53（SER-269）形成氫鍵，齊墩果酸與TP53（ASP-268）、AKT1（LYS-154）、TNF（LYS-65）形成氫鍵，結(jié)合能均小于-7 kcal·mol-1，表明其結(jié)合力較強(qiáng)，對(duì)接模型見(jiàn)圖7。

圖7 核心活性成分與靶點(diǎn)蛋白的對(duì)接模型Figure 7 Visualization of the docking between key compounds and core targets

表9 中醫(yī)藥治療鼻咽癌的核心活性成分與靶點(diǎn)蛋白對(duì)接結(jié)果Table 9 Molecular docking results of core active ingredients of TCM for the treatment of nasopharyngeal cancer and target proteins

3 討論

鼻咽癌歸屬于中醫(yī)學(xué)“矢榮”“巖”“上石疽”等范疇[10]。中醫(yī)認(rèn)為其產(chǎn)生多因正氣內(nèi)虛、外感邪毒、內(nèi)傷七情等致臟腑功能失常，而產(chǎn)生氣郁、血瘀、痰濁等病理產(chǎn)物，日久漸積而成，其病機(jī)以本虛標(biāo)實(shí)為特點(diǎn)?，F(xiàn)代醫(yī)家對(duì)中醫(yī)藥治療鼻咽癌的理論和臨床進(jìn)行了大量探索，積累了豐富的辨治經(jīng)驗(yàn)，由于中醫(yī)治療各有特色，其用藥規(guī)律需進(jìn)一步歸納整理，因此，本研究運(yùn)用中醫(yī)輔助傳承平臺(tái)挖掘中醫(yī)藥治療鼻咽癌的用藥規(guī)律。

本研究共獲得中醫(yī)藥治療鼻咽癌的有效處方115 首，涉及中藥271 味，累計(jì)使用頻次1 457 次，使用頻次排前5 位的中藥依次為甘草、麥冬、玄參、生地黃、白花蛇舌草。甘草具有補(bǔ)脾益氣，緩急止痛的功效，在處方配伍中能調(diào)和諸藥，常作為使藥。同時(shí)，甘草具有抗腫瘤的作用，所含的異甘草素能誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡和自噬，調(diào)節(jié)相關(guān)信號(hào)通路以抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)[11]。麥冬為養(yǎng)陰生津之品。研究[12]發(fā)現(xiàn)麥冬可促進(jìn)唾液分泌，改善放療后的陰虛癥狀。玄參滋陰降火，解毒散結(jié)，所含玄參多糖能抑制腫瘤細(xì)胞活性、增強(qiáng)機(jī)體免疫功能[13]。生地黃與玄參同屬于清熱涼血養(yǎng)陰之品，可用于熱毒熾盛鼻咽癌患者的治療。白花蛇舌草清熱解毒，所含多糖對(duì)鼻咽癌細(xì)胞增殖有顯著的抑制作用，且其水提物能提高鼻咽癌患者放療的臨床療效，具有增敏作用[14]。根據(jù)藥物功效的不同，治療鼻咽癌的中藥可分為18 類(lèi)，其中補(bǔ)虛藥比例最高，占32.33%，體現(xiàn)治療鼻咽癌的關(guān)鍵在于扶正補(bǔ)虛，大量運(yùn)用健脾補(bǔ)中益氣中藥，包括甘草、黃芪、白術(shù)等。清熱藥次之，占比為26.97%。鼻咽癌初期患者，易出現(xiàn)火毒郁結(jié)、毒熱內(nèi)阻，病性為實(shí)，可以使用玄參、生地黃、白花蛇舌草等清熱藥治療。其后依次為解表藥、化痰藥、活血化瘀藥等。鼻咽癌的高危人群以正虛為主，因正氣虧虛，外因六淫之邪可乘虛而入，故以解表藥以祛之。當(dāng)疾病進(jìn)一步惡化時(shí)，會(huì)伴有明顯的夾熱夾瘀、火毒郁結(jié)、痰濁結(jié)聚、氣血瘀阻等癥狀，此時(shí)，應(yīng)予以活血化瘀、化痰散結(jié)之治法，故在鼻咽癌的治療中補(bǔ)虛藥、清熱藥、解表藥、化痰藥、活血化瘀藥最為常用。

關(guān)聯(lián)分析結(jié)果顯示，麥冬、玄參、生地黃兩兩組合使用頻率較高，且3味藥之間形成的關(guān)聯(lián)規(guī)則也具有較高的置信度，如生地黃，玄參→麥冬的置信度最高，說(shuō)明這3味藥組合使用最常見(jiàn)。該組合即為增液湯，凸顯清熱涼血養(yǎng)陰之功效，常用于鼻咽癌化療后陰虛證的治療。藥對(duì)麥冬-甘草、玄參-甘草、麥冬-太子參，以及關(guān)聯(lián)規(guī)則：玄參、甘草→麥冬，太子參→麥冬，體現(xiàn)了益氣健脾、養(yǎng)陰生津的治法；石斛-麥冬疏清虛熱、補(bǔ)益脾胃；黃芪-甘草健脾補(bǔ)氣；麥冬-南沙參養(yǎng)陰清熱、益胃生津；黃芪-白術(shù)、黨參-白術(shù)等益氣健脾，燥濕利水；連翹→金銀花清熱解毒。基于無(wú)監(jiān)督熵層次聚類(lèi)生成了4個(gè)新方，其中新方1由麥冬、生地黃、玄參、黃芪、女貞子、枸杞子組成，具有清熱涼血、養(yǎng)陰生津、益氣健脾利濕、補(bǔ)益肝腎等功效。新方2清熱解毒、養(yǎng)陰潤(rùn)燥、生津止渴；新方3健脾化濕、溫中和胃；新方4清熱解毒、健脾滲濕、補(bǔ)益脾胃、破血行氣。綜合高頻藥物、功效歸類(lèi)及藥物關(guān)聯(lián)特點(diǎn)，總結(jié)推斷中醫(yī)藥治療鼻咽癌以益氣養(yǎng)陰、清熱解毒為主，兼顧活血化瘀，強(qiáng)調(diào)脾胃、肝腎同調(diào)，重視健脾益胃、補(bǔ)益肝腎、滲濕利水等治法。

鼻咽癌治法以益氣養(yǎng)陰、清熱解毒為主，結(jié)合新方1所體現(xiàn)的清熱益氣養(yǎng)陰的功效，故以新方1為例開(kāi)展網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究。通過(guò)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析，獲得新方1 治療鼻咽癌的有效化合物60 個(gè)，關(guān)鍵化合物10 個(gè)，作用于鼻咽癌靶點(diǎn)165 個(gè)，核心靶點(diǎn)39 個(gè)，排前3位的關(guān)鍵化合物為槲皮素、齊墩果酸、木樨草素，排前3 位的核心靶點(diǎn)為T(mén)P53、AKT1、TNF。槲皮素為黃酮類(lèi)化合物，具有抗腫瘤、抗氧化等作用，能通過(guò)調(diào)控抑癌基因的表達(dá)，影響腫瘤細(xì)胞生命周期[15]；齊墩果酸能抑制腫瘤微循環(huán)，預(yù)防腫瘤形成，能劑量依賴(lài)性抑制鼻咽癌細(xì)胞增殖[16]。同時(shí)能逆轉(zhuǎn)放化療耐藥性，調(diào)節(jié)免疫功能等。木樨草素能通過(guò)調(diào)節(jié)信號(hào)通路、阻滯細(xì)胞周期來(lái)抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)，還可以改變絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）等活性抑制癌細(xì)胞浸潤(rùn)[17]。TP53 抑瘤基因?yàn)楦黝?lèi)腫瘤常見(jiàn)核心靶點(diǎn)之一，TP53 在應(yīng)激條件下激活后，可以啟動(dòng)腫瘤細(xì)胞凋亡程序，抑制細(xì)胞增殖與腫瘤血管生成，在癌癥的發(fā)生發(fā)展中起至關(guān)重要的作用[18]；AKT1 是一種抗凋亡蛋白激酶，能促進(jìn)腫瘤細(xì)胞侵襲、加速腫瘤轉(zhuǎn)移，在其變異情況下可提高鼻咽癌患病風(fēng)險(xiǎn)[19]；TNF對(duì)鼻咽癌的作用表現(xiàn)為雙重調(diào)控機(jī)制，既有抗瘤活性，又能作為內(nèi)源性的腫瘤促進(jìn)因子，可刺激腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖、侵襲與轉(zhuǎn)移[20]。

GO 功能與KEGG 通路富集分析得到新方1 號(hào)治療鼻咽癌有顯著性影響的條目518 個(gè)、信號(hào)通路141 條，涉及到RNA聚合酶II啟動(dòng)子的順向調(diào)控、細(xì)胞凋亡的負(fù)向調(diào)控等生物過(guò)程，還涉及到癌癥傳導(dǎo)、PI3K-AKt 信號(hào)傳導(dǎo)、AGE-RAGE 信號(hào)傳導(dǎo)、MAPK 信號(hào)傳導(dǎo)、EBV 感染等重要信號(hào)通路。其中PI3K-Akt 信號(hào)通路作為生長(zhǎng)因子調(diào)控細(xì)胞增殖和存活的重要通路，可參與癌細(xì)胞增殖、分化、遷移、凋亡等過(guò)程，與鼻咽癌的發(fā)生及預(yù)后有密切聯(lián)系[8]。研究[21]發(fā)現(xiàn)癌細(xì)胞的增殖、遷移、侵襲和克隆形成能力與AGE-RAGE、PI3K-Akt 信號(hào)通路介導(dǎo)的上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化有關(guān)。MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路可將細(xì)胞外化學(xué)信號(hào)傳遞至細(xì)胞內(nèi)，引起細(xì)胞內(nèi)部一系列生物學(xué)反應(yīng)，參與細(xì)胞分化、增殖、凋亡和血管生成等調(diào)節(jié)。MAPK 通路中的數(shù)個(gè)蛋白在人類(lèi)癌癥中存在突變、擴(kuò)增或缺失，促進(jìn)癌細(xì)胞增殖、生存等[22]。EB病毒感染與鼻咽癌密切相關(guān)，它可與多條通路相互作用導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞增殖分化，共同參與抑制免疫、病毒潛伏、整合基因、侵襲轉(zhuǎn)移、抑制凋亡等生物過(guò)程[23]。

分子對(duì)接實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，新方1的關(guān)鍵成分與核心靶點(diǎn)形成了多組相互作用力，如齊墩果酸分別與核心靶點(diǎn)TP53、AKT1、TNF 的結(jié)合位點(diǎn)ASP-268、LYS-154、LYS-65形成了氫鍵，在這些相互作用力的作用下，蛋白小分子復(fù)合物的結(jié)合能小于-7 kcal·mol-1，其結(jié)合能較強(qiáng)，表明它們?cè)谥委煴茄拾┓矫婵赡馨l(fā)揮重要作用。

綜上，本研究了總結(jié)中醫(yī)藥治療鼻咽癌的用藥規(guī)律，通過(guò)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究與分子對(duì)接驗(yàn)證探討了數(shù)據(jù)挖掘結(jié)果形成的新方在鼻咽癌治療中可能的作用機(jī)制。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究結(jié)果表明新方1可能通過(guò)槲皮素、齊墩果酸、木樨草素等關(guān)鍵成分作用于鼻咽癌TP53等核心靶點(diǎn)，影響RNA 聚合酶Ⅱ啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄的正調(diào)控等生物學(xué)過(guò)程及癌癥通路、PI3K-Akt 通路等，發(fā)揮治療鼻咽癌的作用。本研究可為鼻咽癌的中醫(yī)藥治療與新藥研發(fā)提供一定的參考。