circ-CBLB/miR-486-5p 在脾虛濕盛型類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者中的異常表達(dá)及意義

李 舒，萬 磊，劉 健，黃傳兵，陳瑩瑩，李方澤，胡賽賽，程 靜

（1.安徽中醫(yī)藥大學(xué)，安徽 合肥 230031；2.安徽中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院風(fēng)濕科，安徽 合肥 230031）

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis，RA)是以關(guān)節(jié)炎癥及免疫細(xì)胞浸潤為主的自身免疫性疾病［1，2］，巨噬細(xì)胞參與了類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎發(fā)生和發(fā)展過程，巨噬細(xì)胞在不同因素誘導(dǎo)下呈現(xiàn)不同的表型、功能，即M1 型和M2 型巨噬細(xì)胞，類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者機(jī)體內(nèi)外周血、滑膜和滑液巨噬細(xì)胞傾向于M1 型促炎性巨噬細(xì)胞極化［3］。極化后M1 型巨噬細(xì)胞分泌大量促炎性細(xì)胞因子如白介素系列、腫瘤壞死因子、趨化因子等，激活成纖維細(xì)胞和破骨細(xì)胞，引發(fā)一系列炎癥反應(yīng)，造成關(guān)節(jié)軟骨破壞。類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎“炎癥極化”失衡機(jī)制與環(huán)RNA（circRNA）、小RNA（miRNA）及信號通路異常激活有關(guān)［4］。因此，從circRNA/miRNA 角度研究類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎“炎癥極化”具有重要意義［5］。本課題組前期通過提取類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者外周血單個(gè)核細(xì)胞（peripheral blood mononuclear cell，PBMC），采用高通量基因測序篩選差異表達(dá)的circRNAs［6］，通過circRNAs 基因測序并結(jié)合GEO 數(shù)據(jù)庫發(fā)現(xiàn)circ_0066715（CBLB）的差異表達(dá)相對較大，通過RNAhybRid 預(yù)測發(fā)現(xiàn)circ_0066715 與miR-486-5p 存在潛在位點(diǎn)，故本研究選取了兩者。同時(shí)本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎中醫(yī)證候?qū)W呈現(xiàn)脾虛濕盛和痰瘀互結(jié)的特點(diǎn)［7］?！捌⑻摗痹陬愶L(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的發(fā)病中起重要作用。本研究旨在探討circ-CBLB/miR-486-5p 在脾虛濕盛型類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者中的異常表達(dá)及意義，現(xiàn)報(bào)道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

納入的60 例類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者來自安徽中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院風(fēng)濕病科門診及住院部，30 例健康者來自安徽省中醫(yī)院體檢中心，納入時(shí)間為2021 年1 月～2021 年12 月。本研究經(jīng)安徽中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)后實(shí)施（No.2019AH-12），納入對象均簽署知情同意書。

1.2 西醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)

參考2010 年美國風(fēng)濕病學(xué)會（American College of Rheumatology，ACR）結(jié)合1987 年ACR 修訂的類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎分類標(biāo)準(zhǔn)和評分系統(tǒng)［8］。根據(jù)對患者的詳細(xì)的病史詢問、體格檢查及必要的輔助檢查診斷。

1.3 中醫(yī)證候標(biāo)準(zhǔn)

參照《類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎病證結(jié)合診療指南》［9］，中醫(yī)證型為脾虛濕盛證。主癥：肢體關(guān)節(jié)疼痛腫脹，四肢乏力麻木，形體消瘦，面色晦暗，肌肉萎縮。次癥：食欲減退，食少納呆，大便稀溏。舌象：舌淡紅，苔白膩；脈象：脈沉細(xì)。

1.4 納入標(biāo)準(zhǔn)

（1）符合以上分類標(biāo)準(zhǔn)者；（2）患者簽署知情同意書；（3）年齡在18～75 歲；（4）疾病活動期患者，28處關(guān)節(jié)疾病活動度評估（28-joint Disease Activity Score，DAS28）大于2.6。

1.5 排除標(biāo)準(zhǔn)

（1）合并有其他系統(tǒng)如呼吸、心血管和血液系統(tǒng)等嚴(yán)重疾??；（2）關(guān)節(jié)嚴(yán)重畸形的患者；（3）有精神疾??；（4）在研究開始前至少4 周服用糖皮質(zhì)激素及其他免疫抑制劑。

1.6 主要儀器設(shè)備及試劑

流式細(xì)胞儀（CytoFLEX，貝克曼公司）；熒光定量PCR 儀（PIKOREAL-96，Thermo 公司）；酶標(biāo)儀（RT-6000，雷設(shè)公司）；離心機(jī)（JW3021HR，嘉文公司）；全自動生化分析儀（7600-020，HITACHI 公司）；全自動血液分析儀（Sysmex K-4500，HITACHI 公司）；全自動血沉分析儀（Vital Monitor-20，ELECTA 公 司）。 CD14-FITC（Biotechnology，B328962）；CD86 - PE - Cyanine5（Biotechnology，B326934）；CD163-APC（Biotechnology，B326936）；氯仿（上海蘇懿，20190227）；無水乙醇（上海廣諾，20210914）；異丙醇（上海廣諾，20210716）；Trizo（Life technogies，350508）；DEPC-H2O（Gene 類 風(fēng)濕 關(guān) 節(jié) 炎y Biotech，2107G20）；Novostart SYBR qPCR SuperMix Plus（novoprotein，05229413）；ELISA 試劑盒（武漢基因美，GR2021-06）；PrimeScript?RT reagent Kit with gDNA ERAser（TaKa 類 風(fēng) 濕 關(guān)節(jié)炎，AL21115A）。

1.7 觀察指標(biāo)及方法

1.7.1 免疫炎癥相關(guān)指標(biāo) 采用血沉管（黑管）采集納入對象空腹前臂靜脈血3 mL，采用全自動血沉分析儀檢測血沉（erythrocyte sedimentation rate，ESR）；生 化 指 標(biāo)C 反 應(yīng) 蛋 白（c-reactive protein，CRP）、類風(fēng)濕因子（rheumatoid factor，RF）、抗環(huán)瓜氨酸肽抗體（anti-cyclic citrullinated peptide antibody，Anti-CCP-Ab）：用生化管（黃管）采集納入對象前臂靜脈血5 mL，3 ℃～5 ℃下低溫凝固后，置于離心機(jī)中以4 000 r/min 離心15 min，分離血清后放在-80 ℃冰箱保存，待標(biāo)本全部收集完成后采用全自動生化分析儀檢測。

1.7.2 炎癥細(xì)胞因子 采用生化管（黃管）采集納入對象前臂靜脈血5 mL，3 ℃～5 ℃下低溫凝固后，置于離心機(jī)中以4 000 r/min 離心15 min，分離血清后放在-80 ℃冰箱保存，待標(biāo)本全部收集完成，采用酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）法同一批次檢測血清白介素-4（interleukin-4，IL-4）、IL-6、IL-10、腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）水平。

1.7.3 M1、M2 巨噬細(xì)胞極化標(biāo)志物 采用流式細(xì)胞術(shù)檢測M1、M2 巨噬細(xì)胞極化標(biāo)志物CD86、CD163。方法：用肝素抗凝管（綠管）采取靜脈全血1 mL。人M1、M2 巨噬細(xì)胞表達(dá)加入帶熒光標(biāo)記的小鼠抗人CD14-FITC、CD86-PE-Cyanine5、CD163-APC 單克隆抗體試劑10 μL，充分混勻，在4 ℃冰箱中反應(yīng)30 min。以1 500 r/min 離心5 min，去上清。PBS 重懸細(xì)胞，流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測，結(jié)果用Flow Jo 7.6.1 軟件分析。

1.7.4 通路相關(guān)指標(biāo) 采用RT-qPCR 檢測類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者與健康對照者PBMCs 中相關(guān)基因的表達(dá)，具體步驟參考說明書，相關(guān)引物如下（表1）。

表1 相關(guān)引物Tab 1 Relevant primers

1.7.5 疾病活動相關(guān)指標(biāo) 視覺疼痛評分（visual analogue scales，VAS）、DAS28 評分［10］。類風(fēng)濕 關(guān)節(jié)炎疾病低活動度范圍為：（2.6＜DAS28＜3.2）、中活動度：（3.2＜DAS28＜5.1）、高活動度（DAS28＞5.1）。分值越高代表疾病活動度越高。

1.7.6 關(guān)節(jié)癥狀及脾虛證候積分 參照《中藥新藥》［11］，關(guān)節(jié)癥狀及脾虛證候積分量化標(biāo)準(zhǔn)［12］：關(guān)節(jié)癥狀包括關(guān)節(jié)疼痛、關(guān)節(jié)腫脹、關(guān)節(jié)壓痛、晨僵。脾虛證候?yàn)榫氲》αΑ⑹秤麥p退、食后腹脹、大便稀溏。按無、輕、中、重程度分級，關(guān)節(jié)癥狀分別計(jì)0、3、6、9 分，脾虛證候分別計(jì)0、2、4、6 分。

2 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS23.0 統(tǒng)計(jì)軟件統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料用均數(shù)加減標(biāo)準(zhǔn)差（±s）描述，組間比較采用t檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用Pearson 檢驗(yàn)或Spearman 檢驗(yàn)。取α=0.05，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者免疫炎癥指標(biāo)的變化

與健康者相比，類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎組炎癥免疫指標(biāo)ESR、CRP、RF、Anti-CCP-Ab、促炎因子IL-6、TNF-α 水平升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），抗炎因子IL-4、IL-10 水平顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。見表2。

表2 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者免疫炎癥指標(biāo)的變化（±s）Tab 2 Changes of immune inflammatory indexes in RA patients（±s）

表2 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者免疫炎癥指標(biāo)的變化（±s）Tab 2 Changes of immune inflammatory indexes in RA patients（±s）

注：**P＜0.01。

指標(biāo)ESR (mm/h)CRP (mg/L)RF (U/mL)Anti-CCP-Ab (U/mL)IL-4 (pg/mL)IL-6 (pg/mL)IL-10 (pg/mL)TNF-α (pg/mL)健康者(n=30)7.21±3.05 2.42±1.01 4.02±1.56 2.13±0.95 43.68±18.33 2.80±0.98 20.23±5.69 15.38±2.19 RA 組(n=60)59.18±15.26**62.56±16.98**50.89±19.36**60.26±25.89**22.56±8.26**49.64±18.78**6.50±1.72**90.86±30.37**t P 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000-19.552-24.849-14.364-13.132 7.405-13.836 17.269-16.581

3.2 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者通路基因表達(dá)的變化

與健康者相比，類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎組circ-CBLB表達(dá)水平明顯下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），miR-486-5p表達(dá)水平明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。見表3，圖1。

圖1 兩組circ-CBLB 與miR-486-5p 表達(dá)水平的比較Fig 1 Comparison of expression levels of circ-CBLB and miR-486-5p in two groups

表3 兩組circ-CBLB 與miR-486-5p 表達(dá)水平的比較（±s）Tab 3 Comparison of expression levels of circ-CBLB and miR-486-5p in two groups（±s）

表3 兩組circ-CBLB 與miR-486-5p 表達(dá)水平的比較（±s）Tab 3 Comparison of expression levels of circ-CBLB and miR-486-5p in two groups（±s）

注：**P＜0.01。

指標(biāo)t P circ-CBLB miR-486-5p健康者(n=30)1.68±0.50 0.82±0.24類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎組(n=60)0.65±0.24**1.93±0.42**0.000 0.000 13.232-13.331

3.3 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者巨噬細(xì)胞極化標(biāo)志物表達(dá) 水平的變化

與健康者相比，類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎組CD14+CD86+表達(dá)水平明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），CD14+CD163+表達(dá)水平明顯下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。見表4 及圖2、3。

圖2 兩組CD14+CD86+、CD14+CD163+流式細(xì)胞圖Fig 2 Flow cytometry of CD14+CD86+ and CD14+CD163+in two groups

圖3 兩組巨噬細(xì)胞極化標(biāo)志物表達(dá)水平的比較Fig 3 Comparison of expression levels of macrophage polarization markers between the two groups

表4 兩組巨噬細(xì)胞極化標(biāo)志物表達(dá)水平的比較（±s，%）Tab 4 Comparison of expression levels of polarizing markers of macrophages between the two groups（±s，%）

表4 兩組巨噬細(xì)胞極化標(biāo)志物表達(dá)水平的比較（±s，%）Tab 4 Comparison of expression levels of polarizing markers of macrophages between the two groups（±s，%）

注：**P＜0.01。

指標(biāo)t P CD14+CD86+CD14+CD163+健康者(n=30)14.12±4.41 29.92±9.03類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎組(n=60)19.03±6.31**5.42±2.44**0.000 0.000-14.227 13.060

3.4 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者通路基因與炎癥極化標(biāo)志物及免疫炎癥之間的相關(guān)性

相關(guān)性結(jié)果顯示，類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者circ-CBLB 表達(dá)水平，與CD14+CD163+呈正相關(guān)（P＜0.01），與miR-486-5p、CD14+CD86+呈負(fù)相關(guān)（P＜0.01）；miR-486-5p 表達(dá)水平與CD14+CD163+呈負(fù)相 關(guān)（P＜0.01），與CD14+CD86+呈 正 相 關(guān)（P＜0.01）；CD14+CD86+與CD14+CD163+呈負(fù)相關(guān)（P＜0.01）；ESR 與circ-CBLB 呈負(fù)相關(guān)（P＜0.01），與miR-486-5p、CD14+CD86+、CRP 呈 正 相 關(guān)（P＜0.01）；CRP 與circ-CBLB、CD14+CD163+呈負(fù)相關(guān)（P＜0.05，P＜0.01），與CD14+CD86+、ESR 呈正相關(guān)（P＜0.01）。見表5。

表5 circ-CBLB、miR-486-5p 與CD14+CD86+、CD14+CD163+及免疫炎癥相關(guān)指標(biāo)之間的相關(guān)性Tab 5 Correlation between circ-CBLB， miR-486-5p， CD14+CD86+， CD14+CD163+ and immune inflammation related indexes

3.5 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者通路基因與關(guān)節(jié)癥狀、脾虛證候積分之間的相關(guān)性

相關(guān)性結(jié)果顯示，類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者circ-CBLB 表達(dá)水平與關(guān)節(jié)壓痛、晨僵、少氣懶言、食后腹脹呈負(fù)相關(guān)（P＜0.05，P＜0.01）；miR-486-5p 表達(dá)水平與關(guān)節(jié)壓痛、食欲減退呈正相關(guān)（P＜0.05）。見表6。

表6 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者通路基因與關(guān)節(jié)癥狀、脾虛證候積分之間的相關(guān)性Tab 6 Correlation between pathway genes and joint symptoms and spleen deficiency syndrome score in RA patients

3.6 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者通路基因表達(dá)水平與類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者疾病活動相關(guān)指標(biāo)的關(guān)系

circ-CBLB 在平均數(shù)以下為1，平均數(shù)以上為2，1 和2 分別對應(yīng)的ESR、CRP、VAS、DAS28，miR-486-5p 與circ-CBLB 相反。結(jié)果顯示circ-CBLB 方面（圖4），ESR、CRP、VAS、DAS28 AUC 分別為0.662（P=0.032），0.658（P=0.035），0.516（P=0.830），0.791（P=0.000）。miR-486-5p 方面（圖4）ESR、CRP、VAS、DAS28 AUC 分 別 為0.566（P=0.385），0.511（P=0.883），0.592（P=0.223），0.727（P=0.003）。結(jié)果表明circ-CBLB 表達(dá)低水平和miR-486-5p 表達(dá)高水平對類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者的疾病活動的可能有一定的預(yù)測價(jià)值。

圖4 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者通路基因與疾病活動相關(guān)指標(biāo)關(guān)系的ROC 曲線Fig 4 ROC curve of the relationship between pathway genes and disease activity related indicators in RA patients

4 討論

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎臨床表現(xiàn)為關(guān)節(jié)腫脹、晨僵、疼痛等癥，其分子機(jī)理是促炎、抑炎等細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)紊亂［13］，致使關(guān)節(jié)炎癥增加而出現(xiàn)上述癥狀。類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎中醫(yī)證候?qū)W呈現(xiàn)“脾虛濕盛、痰瘀痹阻”的特征。“脾虛”在“痹證”發(fā)病中起到重要作用，具體有如下五種作用：（1）脾失運(yùn)化，水液不化停聚成痰。（2）脾運(yùn)不足，生化乏源，氣血虧虛。（3）脾氣不充，衛(wèi)外不固，易受濕困。（4）濕滯積聚，日久生瘀，氣血運(yùn)行不暢而使痰濕兼血瘀，最終痰瘀互結(jié)，痹阻經(jīng)絡(luò)、關(guān)節(jié)致關(guān)節(jié)疼痛、腫脹纏綿難愈甚至關(guān)節(jié)變形。（5）濕邪常與寒、熱夾雜，寒性凝滯，侵犯經(jīng)脈，使血行遲緩，甚至凝滯不通；熱邪循環(huán)入血，煎熬血液使血行塞滯成瘀；氣虛、推動血行無力，則血流不暢，日久成瘀。痰濕日久與瘀血夾雜而致痰瘀互結(jié)，關(guān)節(jié)痹阻。本研究結(jié)果顯示，與健康者相比，脾虛濕盛型類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者的促炎因子IL-6、TNF-α 水 平 升 高，抗 炎 因 子IL-4、IL-10 水 平 顯 著降低。

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎是一種以關(guān)節(jié)滑膜炎癥、軟骨和骨質(zhì)破壞為主要病理特征的自身免疫性疾?。?4］，然而目前該病缺乏有效的早期診斷和治療，誤診、誤治會導(dǎo)致嚴(yán)重的殘疾，并最終導(dǎo)致早期死亡。circRNA 是一類新型的內(nèi)源性表達(dá)ncRNA，它是通過共價(jià)鍵形成的，具有較高的穩(wěn)定性，且與自身免疫性疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)［15-18］，circRNA 相比于其他ceRNAs，與有相應(yīng)結(jié)合位點(diǎn)的miRNA 結(jié)合更為緊密，進(jìn)而可以影響其下游靶基因的表達(dá)和功能，因此也被稱為“超級海綿”［19］。circRNA 與miRNA 的串?dāng)_也被證實(shí)是在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的生理病理過 程 中［20］，其 機(jī) 制 是circRNA 競 爭 性 地 與miRNA結(jié)合，從而參與滑膜組織和PBMC 中下游基因的調(diào)控。本研究結(jié)果顯示，與健康組比較，脾虛濕盛型類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者的PBMC 中的circ-CBLB基因表達(dá)水平異常下調(diào)，miR-486-5p基因表達(dá)水平異常上調(diào)，且ROC 曲線結(jié)果顯示：circ-CBLB 的低水平和miR-486-5p 的高水平表達(dá)對類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎疾病活動度有一定的預(yù)測價(jià)值。

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的“炎癥極化”也稱為“巨噬細(xì)胞極化”。巨噬細(xì)胞能產(chǎn)生多種促炎性細(xì)胞因子和趨化因子參與類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎致病過程［21］。類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者滑膜組織中巨噬細(xì)胞數(shù)量明顯增多。巨噬細(xì)胞具有很強(qiáng)異質(zhì)性和可塑性的功能［22］。巨噬細(xì)胞根據(jù)表型和功能不同分為M1 型巨噬細(xì)胞和M2 型巨噬細(xì)胞［23］，M1 型巨噬細(xì)胞可分泌多種促炎性細(xì)胞因子，表達(dá)CD80、CD86 等分子，能促進(jìn)炎癥發(fā)展，加速細(xì)胞外基質(zhì)降解和細(xì)胞凋亡。M2 型巨噬細(xì)胞分泌抗炎細(xì)胞因子，表達(dá)CD206、CD163 等分子，發(fā)揮抗炎作用。類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎疾病發(fā)展過程中多種因素會打破處于動態(tài)平衡的M1/M2 型巨噬細(xì)胞，引起數(shù)量和比例失衡，導(dǎo)致M1 型巨噬細(xì)胞不斷增多，從而加劇炎癥反應(yīng)［24，25］。本研究結(jié)果顯示，脾虛濕盛型類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者的circ-CBLB 表達(dá)水平，與CD14+CD163+呈正相關(guān)，與miR-486-5p、CD14+CD86+呈負(fù)相關(guān)；miR-486-5p 表達(dá)水平與CD14+CD163+呈負(fù)相關(guān)；且免疫炎癥方面：CD14+CD86+與炎癥指標(biāo)ESR 和CRP 呈正相關(guān)，CD14+CD163+與CRP 呈負(fù)相關(guān)。同時(shí)，脾虛濕盛型類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者的關(guān)節(jié)癥狀與脾虛證候的相關(guān)性結(jié)果顯示：circ-CBLB 表達(dá)水平與關(guān)節(jié)壓痛、晨僵、少氣懶言、食后腹脹呈負(fù)相關(guān)；miR-486-5p 表達(dá)水平與關(guān)節(jié)壓痛、食欲減退呈正相關(guān)。

綜上，脾虛濕盛型類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者外周血單個(gè)核細(xì)胞中的circ-CBLB、miR-486-5p 的異常表達(dá)與類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的炎癥極化標(biāo)志物、免疫炎癥、疾病活動度、關(guān)節(jié)癥狀及脾虛證候有關(guān)，且circ-CBLB的低水平表達(dá)和miR-486-5p 的高水平表達(dá)對類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎疾病活動度有一定的預(yù)測價(jià)值。

作者貢獻(xiàn)度說明：

李舒：負(fù)責(zé)文章的整體框架的搭建、數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析及文章撰寫；萬磊：負(fù)責(zé)文章思路的構(gòu)思；劉健、黃傳兵：負(fù)責(zé)檢驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)；陳瑩瑩、李方澤：負(fù)責(zé)實(shí)驗(yàn)材料的購買與指標(biāo)檢測；胡賽賽、程靜：負(fù)責(zé)臨床資料的收集與整理。

所有作者聲明沒有任何利益沖突關(guān)系。