連翹的化學(xué)成分研究

聶承冬，沙冬梅，何曉勇，何 斌，田玉寒，劉 圓，李 瑩，張紹山，馮景秋，李 娟，閻新佳，溫 靜

連翹的化學(xué)成分研究

聶承冬1, 2，沙冬梅1, 3, 4，何曉勇1, 3, 4，何 斌1, 3, 4，田玉寒1, 3, 4，劉 圓1, 3, 4，李 瑩3, 4，張紹山1, 3, 4，馮景秋1, 3, 4，李 娟1, 3, 4，閻新佳1, 3, 4*，溫 靜2, 5*

1. 西南民族大學(xué) 青藏高原研究院，四川 成都 610041 2. 哈爾濱商業(yè)大學(xué)藥學(xué)院，黑龍江 哈爾濱 150076 3. 四川省羌彝藥用資源保護(hù)與利用技術(shù)工程實(shí)驗(yàn)室，四川 成都 610225 4. 青藏高原民族藥用資源保護(hù)與利用國家民委重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，四川 成都 610225 5. 四川中醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校，四川 綿陽 621000

研究連翹的化學(xué)成分及其體外抗腫瘤活性。采用多種色譜技術(shù)進(jìn)行分離純化，通過理化性質(zhì)和波譜學(xué)手段（NMR和MS）鑒定化合物結(jié)構(gòu)，測(cè)試各化合物對(duì)HepG-2和MCF-7細(xì)胞的細(xì)胞毒性。從連翹75%乙醇提取物中共分離鑒定出26個(gè)化合物，分別為2-(4-羥基苯基)乙基-6[(4-羥基苯基)乙?；鵠-β吡喃葡萄糖苷（1）、木通苯乙醇苷B（2）、2-(4-羥基苯基)乙基-6()-咖啡酰-β吡喃葡萄糖苷（3）、6香豆酰-1[2-(3,4-二羥基苯基)乙基]-β吡喃葡萄糖苷（4）、(＋)-松脂素（5）、8-羥基松脂素（6）、松脂素-4β吡喃葡萄糖苷（7）、(＋)-表松脂素（8）、(＋)-1-羥基-2-表松脂素（9）、連翹脂素（10）、(＋)-表松脂素-4β吡喃葡萄糖苷（11）、(＋)-落葉松脂素（12）、(?)-落葉松脂素（13）、-(7,8,8)-forsythialan C（14）、-(7,8,8)-forsythialan C（15）、(7,8,8)-異落葉松脂素（16）、羅漢松脂素（17）、羅漢松脂素-4β吡喃葡萄糖苷（18）、(?)-甘密樹皮素B-β吡喃葡萄糖苷（19）、(7,7,8,8)-4,4-二羥基-3,3-二甲氧基-7,7-環(huán)氧木脂素-4β吡喃葡萄糖苷（20）、(7,7,8,8)-4,4-二羥基-3,3-二甲氧基-7,7-環(huán)氧木脂素-4β吡喃葡萄糖苷（21）、10β桃金娘烯醇苷（22）、neryl-βglucopyranoside（23）、α-松油醇-8β吡喃葡萄糖苷（24）、連翹環(huán)己醇酮（25）和阿魏酸甲酯（26）。化合物1、3、4和19～24、26為首次從連翹屬植物中分離得到。在40 μmol/L濃度下化合物5～18對(duì)HepG-2和MCF-7細(xì)胞系具有一定的細(xì)胞毒性活性。

連翹；苯乙醇苷；單萜苷；木脂素；抗腫瘤活性；2-(4-羥基苯基)乙基-6()-咖啡酰-β吡喃葡萄糖苷；(＋)-松脂素；羅漢松脂素-4β吡喃葡萄糖苷；α-松油醇-8β吡喃葡萄糖苷

連翹(Thunb.) Vahl.為木犀科（Oleaceae）連翹屬Vahl.植物，氣微香，味苦，微寒。歸小腸、心、肺經(jīng)。古人稱其為“瘡家圣藥”，主要用于清熱解毒，消腫散結(jié)，主治癰疽瘰疬，乳癰丹毒等癥[1-2]。目前國內(nèi)外學(xué)者從連翹中發(fā)現(xiàn)多種化學(xué)成分（苯乙醇苷類、木脂素類、萜類黃酮類成分和其他類成分等）和多種藥理活性（抗腫瘤、抗炎、抗病毒和抗氧化等）[3]。研究表明，連翹屬植物具有較好的抗腫瘤活性，但研究對(duì)象主要局限于其提取物[4-8]，無法全面反映連翹屬植物中各類化學(xué)成分的活性特點(diǎn)，導(dǎo)致活性成分不夠明確，藥效物質(zhì)難以闡明。為進(jìn)一步闡明中藥連翹抗腫瘤的藥效物質(zhì)，深入挖掘連翹中抗腫瘤活性成分，本實(shí)驗(yàn)對(duì)連翹進(jìn)行了系統(tǒng)的化學(xué)成分研究，利用液液萃取方法和多種色譜手段（硅膠柱色譜、開放ODS柱色譜和高效液相色譜等）對(duì)連翹75%乙醇提取物進(jìn)行分離，基于理化性質(zhì)和波譜學(xué)手段進(jìn)行化學(xué)結(jié)構(gòu)的鑒定。從連翹75%乙醇提取物中分離鑒定出26個(gè)化合物，分別為2-(4-羥基苯基)乙基-6[(4-羥基苯基)乙?；鵠-β吡喃葡萄糖苷（2-(4- hydroxyphenyl)ethyl-6[(4-hydroxyphenyl) acetyl]- βglucopyranoside，1）、木通苯乙醇苷B（calceolarioside B，2）、2-(4-羥基苯基)乙基-6()-咖啡酰-β吡喃葡萄糖苷[2-(4-hydroxyphenyl) ethyl-6()-caffeoyl-βglucopyranoside，3]、6香豆酰-1[2-(3,4-二羥基苯基)乙基]-β吡喃葡萄糖苷（6coumaroyl-1[2-(3,4- dihydroxyphenyl) ethyl]-βglucopyranoside，4）、(＋)-松脂素[(＋)-pinoresinol，5]、8-羥基松脂素（8-hydroxypinoresinol，6）、松脂素-4β吡喃葡萄糖苷（pinoresinol-4βglucopyranoside，7）、(＋)-表松脂素 [(＋)-epipinoresinol，8）]、(＋)-1-羥基-2-表松脂素 [(＋)-1-hydroxy-2-epipinoresinol，9]、連翹脂素（phillygenin，10）、(＋)-表松脂素-4β吡喃葡萄糖苷 [(＋)-epipinoresinol-4βglucopyranoside，11]、(＋)-落葉松脂素[(＋)- lariciresino，12]、(?)-落葉松脂素[(?)-lariciresinol，13]、-(7,8,8)-forsythialan C（14）、- (7,8,8)-forsythialan C（15）、(7,8,8)-異落葉松脂素 [(7,8,8)-isolariciresinol，16]、羅漢松脂素（matairesinol，17）、羅漢松脂素-4β吡喃葡萄糖苷（martairesinol-4βglucopyranoside，18）、(?)-甘密樹皮素B-β吡喃葡萄糖苷 [(?)- nectandrin B-βglucopyranoside，19]、(7,7,8, 8)-4,4-二羥基-3,3-二甲氧基-7,7-環(huán)氧木脂素- 4β吡喃葡萄糖苷 [(7,7′,8,8′)-4,4′- dihydroxy-3,3′-di-methoxy-7,7′-epoxylignan-4βglucopyranoside，20]、(7,7,8,8)-4,4-二羥基- 3,3-二甲氧基-7,7-環(huán)氧木脂素-4β吡喃葡萄糖苷[(7,7′,8,8′)-4,4′-dihydroxy-3,3′-dimethoxy- 7,7′-epoxylignan-4′βglucopyranoside，21]、10β桃金娘烯醇苷（myrtenylβglucopyranoside，22）、neryl-βglucopyranoside（23）、α-松油醇-8β吡喃葡萄糖苷（α-terpineol- 8βglucopyranoside，24）、連翹環(huán)己醇酮（rengyolone，25）和阿魏酸甲酯（methyl ferulate，26）。其中化合物1、3、4和19～24、26為首次從連翹屬植物中分離得到。對(duì)分離得到的化合物進(jìn)行了體外抗腫瘤活性測(cè)試，結(jié)果顯示在40 μmol/L濃度下化合物5～18對(duì)HepG-2和MCF-7細(xì)胞系具有一定的細(xì)胞毒性活性。

1 儀器與材料

Waters 2487紫外檢測(cè)器和Waters 515高效液相色譜儀（美國Waters公司），UPLC-Waters SYNG2SIHD TOF超高效液相-高分辨飛行時(shí)間質(zhì)譜（美國Waters公司），Bruker avance Ⅲ600核磁共振波譜儀（德國Bruker公司）和P850型旋光儀（中國濟(jì)南海能儀器股份有限公司）。

柱色譜硅膠（100～200、200～300目）和薄層硅膠GF254（青島海洋化工有限公司），聚酰胺（60～90目，江蘇長豐化工有限公司），MCI GEL CHP20P填料（日本三菱化學(xué)），開放柱ODS填料（日本三菱公司）和YMC-Pack ODS-A反相色譜柱（日本三菱公司）。

連翹藥材采購于哈爾濱三棵樹藥材市場(chǎng)，經(jīng)沈陽藥科大學(xué)中藥學(xué)院呂重寧副教授鑒定為木犀科連翹屬植物連翹(Thunb.) Vahl的干燥果實(shí)。樣品（FS-201909）保存于西南民族大學(xué)敬文園B棟221實(shí)驗(yàn)室。

2 提取與分離

75%乙醇水溶液超聲提取連翹果實(shí)（11.8 kg），減壓濃縮后，用水復(fù)溶，依次用氯仿、醋酸乙酯和正丁醇試劑按照1∶1的比例進(jìn)行萃取，得到氯仿層（650.9 g）、醋酸乙酯層（213.2 g）和正丁醇層（700.3 g）。對(duì)醋酸乙酯萃取層采用HP20色譜柱進(jìn)行分離，流動(dòng)相為體積分?jǐn)?shù)10%、30%、50%、70%、90%甲醇水以及純甲醇梯度洗脫，得到7個(gè)流分（E-1～E-7）。E-2首先經(jīng)硅膠柱色譜進(jìn)行初步分離，二氯甲烷-甲醇（40∶1、20∶1、10∶1、8∶1、4∶1、0∶1）梯度洗脫，得到7個(gè)流分（E-2-1～E-2-7）。E-2-2經(jīng)凝膠柱色譜分離，純甲醇等度洗脫，得到8個(gè)流分（E-2-2-1～E-2-2-8），對(duì)E-2-2-7采用pHPLC進(jìn)行等度洗脫，流動(dòng)相為55%甲醇水，得到化合物22（E-2-2-7-2-1，R＝60 min，10.5 mg）、23（R＝62 min，7.2 mg）和24（R＝62 min，5.9 mg）；E-2-3經(jīng)凝膠柱色譜分離，流動(dòng)相依次為純甲醇，洗脫7個(gè)保留體積，合并濃縮后得到5個(gè)流分（E-2-3-1～E-2-3-5），對(duì)E-2-3-4采用pHPLC進(jìn)行等度洗脫，流動(dòng)相為40%甲醇水，得到化合物1（R＝30 min，15.8 mg）。E-2-4經(jīng)聚酰胺柱色譜分離，流動(dòng)相二氯甲烷-甲醇（30∶1、25∶1、15∶1、10∶1、5∶1、0∶1）梯度洗脫，得到10個(gè)流分（E-2-4-1～E-2-4-10）。E-2-4-4經(jīng)硅膠柱色譜分離，二氯甲烷-甲醇-水（15∶1∶0.05、8∶2∶0.2、7∶3∶0.5）進(jìn)行洗脫，得到3個(gè)流分（E-2-4-4-1～E-2-4-4-3）。對(duì)E-2-4-4-2采用pHPLC進(jìn)行等度洗脫，流動(dòng)相為38%甲醇水，得到化合物7（R＝40 min，12.5 mg）、11（R＝45 min，25.1 mg）、18（R＝50 min，6.1 mg）。E-2-4-9，經(jīng)硅膠柱色譜分離，流動(dòng)相為二氯甲烷∶甲醇∶水＝15∶1∶0.05、8∶2∶0.2和7∶3∶0.5進(jìn)行洗脫，得到4個(gè)流分（E-2-4-9-1～E-2-4-9-4），對(duì)E-2-4-9-3采用pHPLC進(jìn)行等度洗脫，流動(dòng)相為36%甲醇水，得到化合物3（R＝51 min，15.1 mg）、4（R＝52 min，10.2 mg）；E-2-5經(jīng)聚酰胺柱色譜分離，流動(dòng)相為二氯甲烷-甲醇（30∶1、25∶1、15∶1、10∶1、5∶1、0∶1）梯度洗脫，得到4個(gè)流分（E-2-5-1～E-2-5-4）。E-2-5-3經(jīng)硅膠柱色譜分離，流動(dòng)相二氯甲烷-甲醇-水（15∶1∶0.05、8∶2∶0.2、7∶3∶0.5）洗脫，得到6個(gè)流分（E-2-5-3-1～E-2-5-3-6）。對(duì)E-2-5-3-4采用pHPLC進(jìn)行等度洗脫，流動(dòng)相為29%甲醇水，得到化合物2（R＝37 min，13.4 mg）。E-7首先經(jīng)硅膠柱色譜進(jìn)行初步的分離，開放柱流動(dòng)相依次為二氯甲烷-甲醇（40∶1、20∶1、10∶1、8∶1、4∶1、0∶1）梯度洗脫，得到5個(gè)流分（E-7-1～E-7-5）。E-7-4經(jīng)聚酰胺柱色譜分離，流動(dòng)相二氯甲烷-甲醇（30∶1、25∶1、15∶1、10∶1、5∶1、0∶1）梯度洗脫，得到6個(gè)流分（E-7-4-1～E-7-4-6）。E-7-4-5-6通過ODS開放柱色譜，以甲醇-水（40%～100%）為流動(dòng)相梯度洗脫，得到6個(gè)流分（E-7-4-5-6-1～E-7-4-5-6-5）。E-7-4-5-6-4在經(jīng)pHPLC進(jìn)行等度洗脫，流動(dòng)相為32%甲醇水，得到化合物19（R＝19 min，7.2 mg）、20（R＝23 min，15 mg）、21（R＝26 min，20 mg）。

對(duì)氯仿萃取層采用HP20色譜柱進(jìn)行分離，流動(dòng)相依次為體積分?jǐn)?shù)為30%～90%甲醇水以及純甲醇，進(jìn)行梯度洗脫，得到7個(gè)流分（D-1～D-7）。D-3經(jīng)硅膠柱色譜，流動(dòng)相二氯甲烷-醋酸乙酯（40∶1、30∶1、20∶1、15∶1、10∶1、2∶1）梯度洗脫，得9個(gè)流分（D-3-1～D-3-9）。D-3-3通過Sephadex LH-20柱色譜分離，流動(dòng)相為純甲醇，得到5個(gè)流分（D-3-3-1～D-3-3-5），D-3-3-3通過pHPLC等度洗脫，流動(dòng)相為45%甲醇水，得到化合物5（R＝17 min，15.4 mg）、17（R＝19 min，10.2 mg）、8（R＝22 min，9.1 mg）、12（R＝24 min，4.4 mg）和10（R＝36 min，11.6 mg）。D-3-5通過pHPLC等度洗脫，流動(dòng)相為30%甲醇水，得到化合物9（R＝19 min，9 mg）、6（R＝26 min，16.9 mg）和13（R＝31 min，10 mg）。D-3-7通過ODS開放柱色譜，以甲醇-水（40%～100%）為流動(dòng)相梯度洗脫，得到6個(gè)流分（D-3-7-1～D-3-7-6），D-3-7-2經(jīng)pHPLC進(jìn)行等度洗脫，流動(dòng)相為35%甲醇水，得到化合物14（R＝17 min，6.2 mg）、15（R＝32 min，22.5 mg）和16（R＝38 min，5.6 mg）。D-6經(jīng)硅膠柱色譜進(jìn)行初步的分離，流動(dòng)相二氯甲烷-醋酸乙酯（40∶1、30∶1、20∶1、15∶1、10∶1、2∶1）梯度洗脫，得到7個(gè)流分（D-6-1～D-6-7）。D-6-2通過ODS開放柱色譜，以甲醇-水（40%～100%）為流動(dòng)相梯度洗脫，得到5個(gè)流分（D-6-2-1～D-6-2-5），D-6-2-3在經(jīng)pHPLC進(jìn)行等度洗脫，流動(dòng)相為35%甲醇水，得到化合物26（R＝38 min，5.9 mg）。D-6-4經(jīng)聚酰胺柱色譜分離，流動(dòng)相二氯甲烷-甲醇（40∶1、25∶1、15∶1、10∶1、4∶1）梯度洗脫，得到6個(gè)流分（D-6-4-1～D-6-4-6），D-6-4-4通過ODS開放柱色譜，以甲醇-水（40%～100%）為流動(dòng)相梯度洗脫，得到6個(gè)流分（D-6-4-4-1～D-6-4-4-6）。D-6-6經(jīng)聚酰胺柱色譜，以二氯甲烷-甲醇（40∶1、30∶1、20∶1、15∶1、10∶1、4∶1）為流動(dòng)相，梯度洗脫得到5個(gè)流分（D-6-6-1～D-6-6-5），D-6-6-2通過ODS開放柱色譜以甲醇-水（40%～100%）為流動(dòng)相梯度洗脫，得到6個(gè)流分（D-6-6-2-1～D-6-6-2-6），D-6-6-2-4在經(jīng)pHPLC進(jìn)行等度洗脫，流動(dòng)相為37%甲醇水，得到化合物25（R＝35 min，4.1 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：白色無定形粉末（氯仿-甲醇）。ESI-MS/457.146 8 [M＋Na]+(Calcd. 457.146 8, C22H26O9Na)，分子式為C22H26O9。1H-NMR (600 MHz, DMSO-6): 9.31 (1H, s, OH), 9.18 (1H, s, OH), 7.02 (2H, dd,= 9.0, 2.0 Hz, H-2), 6.67 (2H, dd,= 9.0, 2.0 Hz, H-3), 2.73 (2H, t,= 6.7 Hz, H-7), 3.78 (1H, td,= 9.8, 8.1, 6.7 Hz, H-8a), 3.58～3.56 (1H, m, H-8b), 4.19 (1H, d,= 7.8 Hz, H-1), 2.97 (1H, t,= 7.8 Hz, H-2), 3.18～3.13 (1H, m, H-3), 3.06 (1H, t,= 9.4 Hz, H-4), 3.33 (1H, dd,= 11.8, 6.9, 2.0 Hz, H-5), 4.31 (1H, dd,= 11.8, 2.0 Hz, H-6a), 4.05 (1H, dd,= 11.8, 6.9 Hz, H-6b), 7.04 (2H, dd,= 9.0, 2.0 Hz, H-2), 6.65 (2H, dd,= 9.0, 2.0 Hz, H-3), 3.52 (2H, d,= 2.5 Hz, H-7)；13C-NMR (150 MHz, DMSO-6): 129.1 (C-1), 130.2 (C-2), 115.6 (C-3), 156.1 (C-4), 115.6 (C-5), 130.2 (C-6), 35.3 (C-7), 70.5 (C-8), 103.3 (C-1′), 74.1 (C-2′), 76.9 (C-3′), 70.6 (C-4′), 73.8 (C-5′), 64.4 (C-6′), 124.8 (C-1′′),130.7 (C-2′′), 115.5 (C-3′′), 156.7 (C-4′′), 115.5 (C-5′′), 130.7 (C-6′′), 40.0 (C-7′′), 172.0 (C-8′′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)對(duì)照[9]，鑒定化合物1為2-(4-hydroxyphenyl)ethyl-6[(4-hydroxyphenyl) acetyl]-βglucopyranoside。

化合物2：棕色無定形粉末（氯仿-甲醇）。ESI-MS/501.136 4 [M＋Na]+(Calcd. 501.137 3, C22H26O11Na)，分子式為C22H26O11。1H-NMR (600 MHz, CD3OD): 6.67 (1H, d,= 2.0 Hz, H-2), 6.63 (1H, d,= 8.0 Hz, H-5), 6.53 (1H, dd,= 8.0, 2.0 Hz, H-6), 2.79～2.77 (2H, m, H-7), 3.97～3.95 (1H, m, H-8a), 3.71～3.69 (1H, m, H-8b), 4.32 (1H, d,= 7.8, H-1′), 3.22 (1H, t,= 7.8 Hz, H-2′), 3.38～3.36 (1H, m, H-3′), 3.37～3.35 (1H, m, H-4′), 3.52～3.50 (1H, m, H-5′), 4.50 (1H, dd,= 11.9, 2.2 Hz, H-6′a), 4.32 (1H, dd,= 11.9, 6.0 Hz, H-6′b) , 7.03 (1H, d,= 2.1 Hz, H-2′′), 6.77 (1H, d,= 8.2 Hz, H-5′′), 6.88 (1H, dd,= 8.2, 2.1 Hz, H-6′′), 7.56 (1H, d,= 15.9 Hz, H-7′′), 6.28 (1H, d,= 15.9 Hz, H-8′′)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD): 130.0 (C-1), 115.7 (C-2), 144.7 (C-3), 143.3 (C-4), 115.0 (C-5), 119.9 (C-6), 35.3 (C-7), 71.0 (C-8), 103.2 (C-1′), 73.7 (C-2′), 76.5 (C-3′), 70.3 (C-4′), 74.1 (C-5′), 63.2 (C-6′), 126.3 (C-1′′), 113.6 (C-2′′), 145.8 (C-3′′), 148.3 (C-4′′), 115.1 (C-5′′), 121.8 (C-6′′), 145.4 (C-7′′), 113.4 (C-8′′), 167.8 (C-9′′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)對(duì)照[10]，鑒定化合物2為calceolarioside B。

化合物3：淡黃色粉狀物（氯仿-甲醇）。1H-NMR (600 MHz, CD3OD): 4.33 (1H, d,= 7.2 Hz, H-1), 3.24 (1H, t,= 8.2 Hz, H-2), 3.39～3.38 (1H, m, H-3), 3.37～3.36 (1H, m, H-4), 3.54 (1H, ddd,= 8.6, 6.1, 2.0 Hz, H-5), 4.50 (1H, dd,= 8.1, 2.0 Hz, H-6a), 4.34～4.32 (1H, m, H-6b), 7.04 (1H, d,= 2.0 Hz, H-2′), 6.78 (1H, d,= 8.4 Hz, H-5′), 6.90 (1H, dd,= 8.4, 2.0 Hz, H-6′), 7.57 (1H, d,= 15.9 Hz, H-7′ ), 6.30 (1H, d,= 15.9 Hz, H-8′), 7.03 (2H, d,= 8.0 Hz, H-2′′, 6′′), 6.66 (2H, d,= 8.0 Hz, H-3′′, 5′′), 2.84～2.82 (2H, m, H-7′′), 3.95～3.94 (1H, m, H-8′′a), 3.75～3.72 (1H, m, H-8′′b)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD):103.2 (C-1), 74.1 (C-2), 76.6 (C-3), 71.1 (C-4), 73.8 (C-5), 63.4 (C-6), 126.4 (C-1′), 115.2 (C-2′), 145.5 (C-3′), 148.4 (C-4′), 113.6 (C-5′), 121.9 (C-6′), 146.0 (C-7′), 113.8 (C-8′), 167.9 (C-9′), 129.3 (C-1′′), 114.9 (C-2′′), 129.5 (C-3′′), 155.5 (C-4′′), 129.6 (C-5′′), 114.9 (C-6′′), 35.2 (C-7′′), 70.5 (C-8′′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)對(duì)照[11]，鑒定化合物3為2-(4-hydroxyphenyl)ethyl-6()-caffeoyl-βgluco- pyranoside。

化合物4：淡黃色粉狀（氯仿-甲醇)。1H-NMR (600 MHz, CD3OD): 6.59 (1H, d,= 2.0 Hz, H-2), 6.55 (1H, d,= 8.0 Hz, H-5), 6.45 (1H, dd,= 8.0, 2.0 Hz, H-6), 2.70 (2H, t,= 7.6 Hz, H-7), 3.86 (1H, dt,= 9.9, 7.6 Hz, H-8a), 3.63～3.62 (1H, m, H-8b), 4.25 (1H, d,= 7.7 Hz, H-1′), 3.13 (1H, t,= 8.3 Hz, H-2′), 3.32～3.31(1H, m, H-3′), 3.27～3.26 (1H, m, H-4′), 3.43～3.42 (1H, m, H-5′), 4.42 (1H, dd,= 11.8, 2.2 Hz, H-6′a), 4.23～4.22 (1H, m, H-6′b), 7.31 (2H, d,= 8.5 Hz, H-2′′, 6′′), 6.71 (2H, d,= 8.5 Hz, H-3′′, 5′′), 7.53 (1H, d,= 15.9 Hz, H-7′′), 6.25 (1H, d,= 15.9 Hz, H-8′′)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD): 130.1 (C-1), 115.8 (C-2), 143.4 (C-3), 145.6 (C-4), 113.6 (C-5), 119.9 (C-6), 35.4 (C-7), 71.2 (C-8), 103.3 (C-1′), 73.8 (C-2′), 76.6 (C-3′), 70.5 (C-4′), 74.1 (C-5′), 63.4 (C-6′), 125.8 (C-1′′), 115.6 (C-2′′), 129.9 (C-3′′), 159.9 (C-4′′), 129.9 (C-5′′), 115.6 (C-6′′), 144.8 (C-7′′), 115.1 (C-8′′), 167.9 (C-9′′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)對(duì)照[12]，鑒定化合物4為6′coumaroyl-1′[2-(3,4-dihydroxyphenyl)ethyl]-βglucopyranoside。

化合物6：黃色油狀物（氯仿-甲醇），ESI-MS/373.129 6 [M－H]?(Calcd. 373.128 7, C20H21O7)，分子式為C20H22O7。1H-NMR (600 MHz, CD3OD): 7.05 (1H, d,= 8.0 Hz, H-2), 6.85 (1H, d,= 1.9 Hz, H-5), 6.86 (1H, dd,= 8.0, 1.9 Hz, H-6), 4.68 (1H, brs, H-7), 3.87 (1H, m, H-9a), 3.76 (2H, dd,= 9.1, 6.2 Hz, H-9b), 6.88 (1H, d,= 2.0 Hz, H-2′), 6.73 (1H, d,= 8.1 Hz, H-5′), 6.79 (1H, dd,= 8.1, 2.0 Hz, H-6′), 4.87 (1H, d,= 5.2 Hz, H-7′), 4.04 (1H, d,= 9.3 Hz, H-9′a), 4.46 (1H, dd,= 9.3, 8.2 Hz, H-9′b), 3.02～3.05 (1H, m, H-8′), 3.87 (3H, s, -OCH3), 3.86 (3H, s, -OCH3)；13C-NMR (150 MHz, DMSO-6): 132.3 (C-1), 111.4 (C-2), 147.5 (C-3), 146.2 (C-4), 115.0 (C-5), 120.3 (C-6), 88.0 (C-7), 91.5 (C-8), 74.8 (C-9), 127.9 (C-1′), 110.0 (C-2′), 147.4 (C-3′), 146.1 (C-4′), 114.7 (C-5′), 119.2 (C-6′), 86.5 (C-7′), 61.1 (C-8′), 70.7 (C-9′), 55.1 (-OCH3), 55.0 (-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)對(duì)照[14]，鑒定化合物6為8-hydroxypinoresinol。

化合物7：黃色膠體（氯仿-甲醇），ESI-MS/543.183 4 [M＋Na]+(Calcd. 543.184 2, C26H32O11Na)，分子式為C26H32O11。1H-NMR (600 MHz, CD3OD): 6.94 (1H, d,= 1.9 Hz, H-2), 6.76 (1H, d,= 8.1 Hz, H-5), 6.80 (1H, dd,= 8.1, 1.9 Hz, H-6), 4.70 (1H, d,= 4.2 Hz, H-7), 3.14～3.12 (1H, m, H-8), 4.24～4.22 (1H, m, H-9a), 3.86～3.85 (1H, m, H-9b), 7.02 (1H, d,= 2.1 Hz, H-2′), 7.14 (1H, d,= 8.3 Hz, H-5′), 6.91 (1H, dd,= 8.3, 2.1 Hz, H-6′), 4.75 (1H, d,= 4.0 Hz, H-7′), 3.15～3.13 (1H, m, H-8′), 4.23～4.21 (1H, m, H-9′a), 3.85～3.84 (1H, m, H-9′b), 4.88 (1H, d,= 8.0 Hz, H-1′′), 3.40～3.38 (1H, m, H-2′′), 3.47～4.45 (1H, m, H-3′′), 3.39～3.37 (1H, m, H-4′′), 3.52～3.47 (1H, m, H-5′′), 3.34 (1H, m, H-6′′b), 3.68 (1H, dd,= 11.9, 3.6 Hz, H-6′′a), 3.86 (3H, s, -OCH3), 3.85 (3H, s, -OCH3)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD): 136.1 (C-1), 110.2 (C-2), 149.6 (C-3), 146.1 (C-4), 116.6 (C-5), 118.4 (C-6), 85.7 (C-7), 54.1 (C-8), 71.3 (C-9), 132.4 (C-1′), 109.6 (C-2′), 147.7 (C-3′), 145.9 (C-4′), 114.7 (C-5′), 118.7 (C-6′), 86.1 (C-7′), 54.0 (C-8′), 71.3 (C-9′),101.4 (C-1′′), 73.5 (C-2′′), 76.4 (C-3′′), 69.9 (C-4′′), 76.8 (C-5′′), 61.1 (C-6′′), 55.3 (-OCH3), 55.0 (-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)對(duì)照[15]，鑒定化合物7為pinoresinol-4βglucopyranoside。

化合物10：無色針狀結(jié)晶（氯仿-甲醇）。1H-NMR (600 MHz, DMSO-6): 3.77, 3.76, 3.75 (9H, s, 3, 3′, 4′-OCH3), 6.72～6.93 (6H, m, H-2, 2′, 5, 5′, 6, 6′), 4.32 (1H, d,= 7.0 Hz, H-7), 2.81～2.85 (m, 1H, H-8), 4.07 (1H, d,= 9.3 Hz, H-9a), 3.73 (1H, m, 1H, H-9b), 4.80 (1H, d,= 5.9 Hz, 1H, H-7′), 3.36～3.41 (1H, m, H-8′, 9a′), 3.73 (1H, m, H-9b′)；13C-NMR (150 MHz, DMSO-6): 132.9 (C-1), 110.8 (C-2), 148.1 (C-3), 148.1 (C-4), 115.7 (C-5), 119.2 (C-6), 87.6 (C-7), 54.5 (C-8), 69.4 (C-9), 131.8 (C-1′), 110.0 (C-2′), 149.0 (C-3′), 146.5 (C-4′), 112.1 (C-5′), 118.1 (C-6′), 81.8 (C-7′), 49.9 (C-8′), 70.9 (C-9′), 56.1 (-OCH3), 56.0 (-OCH3), 54.5 (-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)對(duì)照[17]，鑒定化合物10為phillygenin。

化合物14：白色粉末（氯仿-甲醇），ESI-MS/357.134 7 [M－H]?(Calcd. 357.133 8, C20H21O6)，分子式為C20H22O6。1H-NMR (600 MHz, CD3OD): 7.52 (1H, d,= 2.1 Hz, H-2), 6.96 (1H, d,= 8.1 Hz, H-5), 7.57 (1H, dd,= 8.1, 2.1 Hz, H-6), 4.46 (1H, d,= 8.4 Hz, H-8), 4.42 (1H, dd,= 9.0, 6.5 Hz, H-9a), 4.28 (1H, dd,= 6.5, 4.1 Hz, H-9b), 6.81 (1H, d,= 1.8 Hz, H-2′), 6.80 (1H, d,= 8.5 Hz, H-5′), 6.77 (1H, dd,= 8.5, 1.8 Hz, H-6′), 2.55～2.48 (1H, m, H-8′), 0.79 (3H, d,= 7.1 Hz, 9′-CH3), 3.88 (3H, s, -OCH3), 3.87 (3H, s, -OCH3)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD): 132.1 (C-1), 110.1 (C-2), 147.8 (C-3), 149.2 (C-4), 115.5 (C-5), 124.7 (C-6), 199.4 (C-7), 46.0 (C-8), 69.6 (C-9), 127.4 (C-1′), 109.7 (C-2′), 146.2 (C-3′), 145.1 (C-4′), 114.7 (C-5′), 119.2 (C-6′), 87.7 (C-7′), 48.6 (C-8′), 11.7 (C-9′), 55.1 (-OCH3), 54.9 (-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)對(duì)照[21]，鑒定化合物14為-(7,8′,8)-forsythialan C。

化合物15：白色粉末（氯仿-甲醇），ESI-MS/357.134 9 [M－H]?(Calcd. 357.133 8, C20H21O6)，分子式為C20H22O6。1H-NMR (600 MHz, CD3OD): 7.58 (1H, d,= 2.0 Hz, H-2), 6.96 (1H, d,= 8.3 Hz, H-5), 7.61 (1H, dd,= 8.3, 2.0 Hz, H-6), 3.84 (1H, dt,= 10.3, 9.0 Hz, H-8), 4.09 (1H, dd,= 8.4, 6.9 Hz, H-9a), 4.01 (1H, dd,= 9.0, 6.9 Hz, H-9b), 6.93 (1H, d,= 1.8 Hz, H-2′), 6.89 (1H, d,= 8.4 Hz, H-5′), 6.81 (1H, dd,= 8.4, 1.8 Hz, H-6′), 4.38 (1H, d,= 9.6 Hz, H-7′), 2.44～2.43 (1H, m, H-8′), 1.02 (3H, d,= 6.6 Hz, H-9′), 3.93 (3H, s, -OCH3), 3.88 (3H, s, -OCH3)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD): 131.5 (C-1), 110.8 (C-2), 146.4 (C-3), 149.3 (C-4), 114.8 (C-5), 124.0 (C-6), 198.8 (C-7), 53.6 (C-8), 70.2 (C-9), 132.5 (C-1′), 109.7 (C-2′), 147.9 (C-3′), 146.8 (C-4′), 114.6 (C-5′), 119.8 (C-6′), 89.1 (C-7′), 46.4 (C-8′), 13.8 (C-9′), 55.2 (-OCH3), 54.1 (-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)對(duì)照[21]，鑒定化合物15為-(7,8′,8)-forsythialan C。

化合物16：黃色無定形粉末（氯仿-甲醇），ESI-MS/359.150 5 [M－H]?(Calcd. 359.149 5, C20H23O6)，分子式C20H24O6。1H-NMR (600 MHz, CD3OD): 6.66 (1H, s, H-2), 6.19 (1H, s, H-5), 2.78 (2H, d,= 7.8 Hz, H-7), 2.02～1.98 (m, 1H, H-8), 3.68～3.66 (1H, m, H-9a), 3.66～3.64 (1H, m, H-9b ), 6.68 (1H, d,= 2.0 Hz, H-2′), 6.75 (1H, d,= 8.0 Hz, H-5′), 6.62 (1H, dd,= 8.0, 2.0 Hz, H-6′), 3.81～3.79 (1H, m, H-7′), 1.77～1.75 (1H, m, H-8′), 3.71 (1H, dd,= 11.3, 4.9 Hz, H-9′a), 3.40 (1H, dd,= 11.3, 4.1 Hz, H-9′b), 3.81 (3H, s, -OCH3), 3.78 (3H, s, -OCH3)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD): 138.8 (C-1′), 113.9 (C-2′), 149.2 (C-3′), 146.1 (C-4′), 115.9 (C-5′), 123.3 (C-6′), 48.2 (C-7′), 48.1 (C-8′), 62.3 (C-9′), 129.1 (C-1), 112.5 (C-2), 147.3 (C-3), 145.4 (C-4), 117.5 (C-5), 134.3 (C-6), 33.7 (C-7), 40.1 (C-8), 66.1 (C-9), 56.5 (-OCH3), 56.5 (-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)對(duì)照[22]，鑒定化合物16為(7,8,8)- isolariciresinol。

化合物17：淡黃色油狀物（氯仿-甲醇），ESI-MS/357.135 1 [M－H]?(Calcd. 357.133 8, C20H21O6)，分子式C20H22O6。1H-NMR (600 MHz, CD3OD): 6.57 (1H, d,= 2.0 Hz, H-2), 6.53 (1H, d,= 7.6 Hz, H-5), 6.69 (1H, dd,= 7.6, 2.0 Hz, H-6), 2.82 (2H, d,= 7.0 Hz, H-7), 2.54～2.52 (1H, m, H-8), 4.18 (1H, d,= 7.4 Hz, H-9a), 4.16 (1H, d,= 7.4 Hz, H-9b), 6.70 (1H, d,= 2.0 Hz, H-2′), 6.51 (1H, d,= 7.0 Hz, 1H, H-5′), 6.59 (1H, dd,= 7.0, 2.0 Hz, H-6′), 2.90 (2H, dd,= 5.4, 2.0 Hz, H-7′), 2.68～2.66 (1H, m, H-8′), 3.80 (3H, s, -OCH3), 3.79 (3H, s, -OCH3)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD): 129.5 (C-1), 112.6 (C-2), 147.8 (C-3), 145.1 (C-4), 114.9 (C-5), 121.8 (C-6), 37.6 (C-7), 46.5 (C-8), 71.6 (C-9), 130.2 (C-1′), 112.0 (C-2′), 147.7 (C-3′), 144.9 (C-4′), 114.8 (C-5′), 120.9 (C-6′), 34.1 (C-7′), 41.2 (C-8′), 180.4 (C-9′), 55.0 (-OCH3), 55.0 (-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)對(duì)照[23]，鑒定化合物17為matairesinol。

化合物18：黃色無定型粉末（氯仿-甲醇），ESI-MS/543.184 1 [M＋Na]+(Calcd. 543.184 2, C26H32O11Na)，分子式C26H32O11。1H-NMR (600 MHz, DMSO-6): 6.62 (1H, d,= 2.0 Hz, H-2), 6.99 (1H, d,= 8.0 Hz, H-5), 6.49 (1H, dd,= 8.0, 2.0 Hz, H-6), 2.42 (1H, d,= 5.4 Hz, H-8), 4.09 (1H, m, H-9a), 3.86 (1H, t,= 8.5 Hz, H-9b), 6.68 (1H, d,= 2.0 Hz, H-2′), 6.65 (1H, d,= 8.0 Hz, H-5′), 6.78 (1H, dd,= 8.0, 2.0 Hz, H-6′), 2.43 (1H, d,= 9.0 Hz, H-7′a), 2.81～2.80 (1H, m, H-7′b), 2.73 (1H, dt,= 8.9, 6.0 Hz, H-8′), 4.84 (1H, d,= 7.2 Hz, H-1′′), 3.26～3.25 (1H, m, H-2′′), 3.27～3.26 (1H, m, H-3′′), 3.15～3.14 (1H, m, H-4′′), 3.23～3.22 (1H, m, H-5′′), 3.65 (1H, dd,= 11.7, 2.1 Hz, H-6′′a), 3.44 (1H, dd,= 11.7, 5.6 Hz, H-6′′b), 3.72 (3H, s, -OCH3), 3.71 (3H, s, -OCH3)；13C-NMR (150 MHz, DMSO-6): 132.2 (C-1), 113.1 (C-2), 149.1 (C-3), 145.4 (C-4), 115.5 (C-5), 121.2 (C-6), 37.3 (C-7), 41.3 (C-8), 71.2 (C-9), 130.0 (C-1′), 114.3 (C-2′), 148.0 (C-3′), 145.7 (C-4′), 115.8 (C-5′), 121.8 (C-6′), 33.9 (C-7′), 46.0 (C-8′), 178.9 (C-9′), 100.6 (C-1′′), 73.7 (C-2′′), 77.4 (C-3′′), 70.1 (C-4′′), 77.3 (C-5′′), 61.1 (C-6′′), 56.1 (-OCH3), 56.0 (-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)對(duì)照[24]，鑒定化合物18為martairesinol-4βglucopyranoside。

化合物20：淡黃色油狀物（氯仿-甲醇）。1H-NMR (600 MHz, CD3OD): 7.17 (1H, d,= 2.0 Hz, H-2), 6.96 (1H, dd,= 8.1, 2.0 Hz, H-5), 7.22 (1H, d,= 8.1 Hz, H-6), 5.14 (2H, dd,= 12.1, 8.9 Hz, H-7), 1.83～1.81 (1H, m, H-8, 8′), 1.04 (6H, dd,= 8.3, 6.5 Hz, H-9, 9′), 7.07 (1H, d,= 2.0 Hz, H-2′), 6.83 (1H, d,= 8.0 Hz, H-5′), 6.92 (1H, dd,= 8.0, 2.0 Hz, H-6′), 4.40 (2H, dd,= 12.4, 9.5 Hz, H-7′), 4.93 (1H, d,= 7.4 Hz, H-1′′), 3.71 (1H, dd,= 5.2, 2.2 Hz, H-2′′), 3.48～3.47 (1H, m, H-3′′), 3.43～3.42 (1H, m, H-4′′), 3.41～3.40 (1H, m, H-5′′), 3.72～3.70 (1H, m, H-6′′a), 3.70～3.69 (1H, m, H-6′′b), 3.90 (3H, s, -OCH3), 3.89 (3H, s, OCH3)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD): 132.5 (C-1), 112.4 (C-2), 149.6 (C-3), 146.0 (C-4), 116.7 (C-5), 119.4 (C-6), 87.8 (C-7), 45.3 (C-8), 14.0 (C-9), 136.0 (C-1′), 110.7 (C-2′), 147.8 (C-3′), 146.4 (C-4′), 114.9 (C-5′), 119.7 (C-6′), 87.3 (C-7′), 48.3 (C-8′), 13.9 (C-9′), 55.5 (OCH3), 55.4 (-OCH3), 101.5 (C-1′′), 73.6 (C-2′′), 76.6 (C-3′′), 70.1 (C-4′′), 76.9 (C-5′′), 61.2 (C-6′′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)對(duì)照[25]，鑒定化合物20為(7,7′,8,8′)-4,4′-dihydroxy-3,3′-dimethoxy-7,7′- epoxylignan-4βglucopyranoside。

化合物21：淡黃色油狀物（氯仿-甲醇）。1H-NMR (600 MHz, CD3OD): 6.81 (1H, d,= 1.8 Hz, H-2), 6.94 (1H, dd,= 8.1, 1.8 Hz, H-5), 6.80 (1H, d,= 8.1 Hz, H-6), 5.14 (2H, dd,= 12.1, 8.9 Hz, H-7), 1.77～1.75 (1H, m, H-8, 8′), 1.04 (6H, dd,= 8.3, 6.5 Hz, H-9, 9′), 7.02 (1H, d,= 2.0 Hz, H-2′), 7.18 (1H, d,= 8.0 Hz, H-5′), 7.09 (1H, dd,= 8.0, 2.0 Hz, H-6′), 4.91 (2H, d,= 7.5 Hz, H-7′), 4.91 (1H, d,= 7.5 Hz, H-1′′), 3.41～3.40 (1H, m, H-2′′), 3.49～3.48 (1H, m, H-3′′), 3.43～3.42 (1H, m, H-4′′), 3.71 (1H, dd,= 5.2, 2.2 Hz, H-5′′), 3.72～3.71 (1H, m, H-6′′a), 3.48～3.47 (1H, m, H-6′′b), 3.86 (3H, s, -OCH3), 3.85 (3H, s, -OCH3)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD): 131.6 (C-1), 110.4 (C-2), 147.4 (C-3), 145.6 (C-4), 114.5 (C-5), 119.1 (C-6), 83.0 (C-7), 45.7 (C-8), 13.6 (C-9), 135.4 (C-1′), 111.0 (C-2′), 149.1 (C-3′), 146.3 (C-4′), 116.1 (C-5′), 119.6 (C-6′), 83.5 (C-7′), 48.1 (C-8′), 13.6 (C-9′), 55.2 (-OCH3), 55.1 (-OCH3), 101.5 (C-1′′), 73.6 (C-2′′), 76.6 (C-3′′), 70.1 (C-4′′), 76.6 (C-5′′), 61.2 (C-6′′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)對(duì)照[25]，鑒定化合物21為(7,7′,8,8′)-4,4′- dihydroxy-3,3′-dimethoxy-7,7′-epoxylignan-4′βglucopyranoside。

化合物22：白色針狀結(jié)晶（氯仿-甲醇），ESI-MS/337.161 9 [M＋Na]+(Calcd. 337.162 7, C16H26O6Na)，分子式C16H26O6。1H-NMR (600 MHz, CD3OD): 2.23 (1H, td,= 5.6, 1.4 Hz, H-1), 5.58～5.54 (1H, m, H-3), 2.29 (2H, dt,= 11.7, 2.5 Hz, H-4), 2.11～2.06 (1H, m, H-5), 2.42 (1H, m, H-6a), 1.19 (1H, d,= 8.6 Hz, H-6b), 1.30 (3H, s, H-8), 0.87 (3H, s, H-9), 4.23～4.21 (1H, m, H-10a), 4.02～4.00 (1H, m, H-10b), 4.27 (1H, d,= 7.8 Hz, H-1′), 3.33 (1H, d,= 8.9 Hz, H-2′), 3.28 (1H, dd,= 9.1, 8.9 Hz, H-3′), 3.22～3.20 (1H, m, H-4′), 3.19～3.17 (1H, m, H-5′), 3.85 (1H, dd,= 11.9, 2.3 Hz, H-6′a), 3.66 (1H, dd,= 11.9, 5.7 Hz, H-6′b)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD): 102.0 (C-1′), 73.7 (C-2′), 76.6 (C-3′), 71.2 (C-4′), 76.8 (C-5′), 61.4 (C-6′), 43.1 (C-1), 144.9 (C-2), 119.4 (C-3), 31.1 (C-4), 40.8 (C-5), 30.9 (C-6), 37.5 (C-7), 25.2 (C-8), 20.2 (C-9), 70.3 (C-10)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)對(duì)照[26-28]，鑒定化合物22為myrtenylβglucopyranoside。

化合物23：白色粉狀物（氯仿-甲醇），1H-NMR (600 MHz, CD3OD): 4.31～4.30 (1H, m, H-1), 5.40 (1H, m, H-2), 1.77～1.75 (3H, m, H-4), 2.15～2.12 (1H, m, H-5), 2.10 (1H, m, H-6), 5.12 (1H, m, H-7), 1.68 (3H, s, H-9), 1.62 (3H, s, H-10), 4.28 (1H, d,= 7.8 Hz, H-1′), 3.86 (1H, dd,= 8.1, 2.3 Hz, H-2′), 3.29 (1H, d,= 8.1 Hz, H-3′), 3.68 (1H, dd,= 11.9, 5.6 Hz, H-6′a), 3.34 (1H, m, H-6′b)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD): 64.9 (C-1), 121.3 (C-2), 140.5 (C-3), 16.5 (C-4), 31.8 (C-5), 26.4 (C-6), 123.7 (C-7), 131.5 (C-8), 22.4 (C-9), 24.6 (C-10), 101.6 (C-1′), 73.8 (C-2′), 76.6 (C-3′), 70.3 (C-4′), 76.8 (C-5′), 61.4 (C-6′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)對(duì)照[29]，鑒定化合物23為neryl-βglucopyranoside。

化合物24：淡黃色無定形粉末（氯仿-甲醇）。1H-NMR (600 MHz, CD3OD): 1.70～1.69 ( 1H, m, H-1), 1.30 (1H, ddd,= 12,0, 9.5, 4.4 Hz, H-2), 2.01～1.99 (1H, m, H-3), 5.37 (1H, d,= 2.3 Hz, H-5), 2.17～2.16 (1H, m, H-6), 1.21～1.20 (3H, m, H-7), 0.90 (3H, s, H-9), 0.88 (3H, d,= 1.7 Hz, H-10), 4.25 (1H, d,= 7.8 Hz, H-1′),3.35～3.34 (1H, m, H-2′), 3.28 (1H, t,= 9.1 Hz, H-3′), 3.22 (1H, m, H-4′), 3.16 (1H, dd,= 9.1, 7.7 Hz, H-5′), 3.84 (1H, dd,= 11.8, 2.4 Hz, H-6′a), 3.67 (1H, td,= 11.8, 5.5 Hz, H-6′b)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD): 43.9 (C-1), 22.3 (C-2), 30.8 (C-3), 133.5 (C-4), 120.6 (C-5), 26.4 (C-6), 21.7 (C-7), 83.1 (C-8), 23.8 (C-9), 23.8 (C-10), 101.8 (C-1′), 74.0 (C-2′), 76.2 (C-3′), 70.4 (C-4′), 77.1 (C-5′), 61.6 (C-6′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)對(duì)照[30]，鑒定化合物24為α-terpineol-8βglucopyranoside。

化合物25：淡黃色無定形粉末（氯仿-甲醇）。1H-NMR (600 MHz, DMSO-6): 4.46 (1H, dd,= 16.2, 8.4 Hz, H-2), 2.78 (1H, dd,= 16.2, 4.2 Hz, H-3a), 2.60 (1H, ddd,= 12.7, 3.0, 1.8 Hz, H-3b), 5.89 (1H, d,= 10.1 Hz, H-5), 6.77 (1H, dd,= 10.1, 1.7 Hz, H-6), 2.44 (1H, ddd,= 10.5, 4.7, 4.6 Hz, H-7a), 2.15 (1H, ddd,= 10.5, 2.2, 1.7, Hz, H-7b), 4.03 (1H, td,= 4.7, 1.7 Hz, H-8a), 3.86 (1H, ddd,= 4.7, 2.6, 1.7 Hz, H-8b)；13C-NMR (150 MHz, DMSO-6): 74.5 (C-1), 81.1 (C-2), 42.5 (C-3), 197.4 (C-4), 127.5 (C-5), 150.6 (C-6), 38.2 (C-7), 66.0 (C-8)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)對(duì)照[31]，鑒定化合物25為rengyolone。

化合物26：黃色無定形粉末（氯仿-甲醇）， ESI-MS/207.067 3 [M－H]?(Calcd. 207.065 7, C11H11O4)，分子式C11H12O4。1H-NMR (600 MHz, CD3OD): 7.18 (1H, d,= 2.0 Hz, H-2), 6.80 (1H, d,= 8.2 Hz, H-3), 7.06 (1H, dd,= 8.2, 2.0 Hz, H-6), 7.61 (1H, d,= 15.9 Hz, H-7), 6.36 (1H, d,= 15.9 Hz, H-8), 3.89 (3H, s, H-10), 3.76 (3H, s, H-11)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD): 126.2 (C-1), 122.7 (C-2), 115.1 (C-3), 149.4 (C-4), 148.0 (C-5), 110.3 (C-6), 145.5 (C-7), 113.7 (C-8), 168.3 (C-9), 55.0 (C-10), 50.6 (C-11)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)對(duì)照[32]，鑒定化合物26為methyl ferulate。

4 體外抗腫瘤活性評(píng)價(jià)

取生長狀態(tài)良好的細(xì)胞，加胰酶細(xì)胞消化液使貼壁細(xì)胞消化脫落，形成細(xì)胞混懸液，對(duì)細(xì)胞進(jìn)行記數(shù)，并將細(xì)胞稀釋到1×104個(gè)/mL。在96孔板上，每孔接種190 μL細(xì)胞懸液，置37 ℃、5% CO2的恒溫箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)12 h使細(xì)胞貼壁。倒掉培養(yǎng)液，每孔加入100 μL（含待測(cè)化合物濃度為40 μmol/L）DMEM高糖培養(yǎng)液，在恒溫箱中培養(yǎng)48 h。吸去100 μL上清液，加入100 μL新鮮DMEM高糖培養(yǎng)液，再加入配制好的10 μL MTT溶液（5 mg/mL、0.5% MTT），繼續(xù)在恒溫箱中培養(yǎng)4 h。吸去100 μL上清液，每孔加入100 μL的甲?溶解液，置搖床上低速振蕩10 min，在恒溫箱中放置4 h左右。在酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀570 nm處測(cè)量各個(gè)孔的吸光度（）值，按照公式計(jì)算抑制率。每組設(shè)定4個(gè)復(fù)孔，同時(shí)設(shè)置空白組（含有培養(yǎng)基和MTT）、對(duì)照組（含有細(xì)胞、培養(yǎng)液和MTT）和陽性對(duì)照組（含有細(xì)胞、培養(yǎng)液、5-氟尿嘧啶和MTT）。結(jié)果見表1。

抑制率＝[(對(duì)照－空白)－(給藥－空白)]/(對(duì)照－空白)

5 討論

本研究利用多種色譜分離手段對(duì)中藥連翹進(jìn)行了化學(xué)成分研究，分離鑒定了共26個(gè)化合物，其中10個(gè)屬內(nèi)首次分離的化合物，化合物1～4為苯乙醇苷類，5～21為木脂素及其苷類，22～24為單萜苷類，25為環(huán)己酮類，26為簡(jiǎn)單苯丙素類化合物?；钚詼y(cè)定結(jié)果表明，在40 μmol/L下化合物5～18對(duì)HepG-2和MCF-7細(xì)胞具有一定的細(xì)胞毒活性。本研究豐富了連翹的化學(xué)成分，為連翹抗腫瘤作用的活性成分發(fā)現(xiàn)提供科學(xué)依據(jù)。

表1 化合物的抑制率

Table1 Inhibition rate of compounds

化合物抑制率/%HepG-2MCF-7 557.3±4.849.5±5.4 654.7±8.941.6±5.5 753.2±9.443.8±1.7 851.0±5.838.1±2.4 954.6±5.344.1±5.4 1055.3±9.341.7±2.2 1151.2±0.747.4±4.8 1256.2±3.544.1±3.5 1349.6±7.240.2±3.5 1447.4±7.842.5±5.1 1549.9±3.643.4±3.5 1647.9±4.339.1±4.9 1752.8±1.839.6±4.8 1851.1±4.451.7±3.4 陽性對(duì)照73.8±4.571.3±3.2

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Study on chemical constituents from

NIE Cheng-dong1, 2, SHA Dong-mei1, 3, 4, HE Xiao-yong1, 3, 4, HEBin1, 3, 4, TIAN Yu-han1, 3, 4, LIU Yuan1, 3, 4, LI Ying3, 4, ZHANG Shao-shan1, 3, 4, FENG Jing-qiu1, 3, 4, LI Juan1, 3, 4, YAN Xin-jia1, 3, 4, WEN Jing2, 5

1. Institute of Qinghai-Tibetan Plateau, Southwest Minzu University, Chengdu 610041, China 2. College of Pharmacy, Harbin University of Commerce, Harbin 150076, China 3. Sichuan Provincial Qiang-Yi Medicinal Resources Protection and Utilization Technology Engineering Laboratory, Chengdu 610225, China 4. Key Laboratory of Protection and Utilization of Ethnic Medicinal Resources in Qinghai-Tibet Plateau, State Ethnic Affairs Commission, Chengdu 610225, China 5. School of Pharmacy, Sichuan College of Traditional Chinese Medicine, Mianyang 621000, China

To study the chemical constituents from Lianqiao [(Thunb.) Vahl].The compounds were separated and purified by various chromatographic techniques, and their structures were identified by physical and chemical properties and spectroscopic methods (NMR and MS). The cytotoxicity of each compound on HepG-2 and MCF-7 cells was tested.A total of 26 compounds were isolated and identified as 2-(4-hydroxyphenyl)ethyl-6[(4-hydroxyphenyl)acetyl]-βglucopyranoside (1), calceolarioside B (2), 2-(4-hydroxyphenyl)ethyl-6()-caffeoyl-βglucopyranoside (3), 6coumaroyl-1[2-(3,4-dihydroxyphenyl) ethyl]-βglucopyranoside (4), (＋)-pinoresinol (5), 8-hydroxypinoresinol (6), pinoresinol-4βglucopyranoside (7), (＋)-epipinoresinol (8), (＋)-1-hydroxy-2-epipinoresinol (9), phillygenin (10), (＋)-epipinoresinol-4βglucopyranoside (11), (＋)-lariciresinol (12), (?)-lariciresinol (13),- (7,8′,8)-forsythialan C (14),-(7,8′,8)-forsythialan C (15), (7,8,8)-isolariciresinol (16), matairesinol (17), martairesinol-4βglucopyranoside (18), (?)-nectandrin B-βglucopyranoside (19), (7,7′,8,8′)-4,4′-dihydroxy-3,3′- dimethoxy-7,7′-epoxylignan-4βglucopyranoside (20), (7,7′,8,8′)-4,4′-dihydroxy-3,3′-dimethoxy-7,7′-epoxylignan-4′βglucopyranoside (21), myrtenylβglucopyranoside (22), neryl-βglucopyranoside (23), α-terpineol-8βglucopyranoside (24), rengyolone (25) and methyl ferulate (26).Compounds 1, 3, 4, 19—24 and 26 are separated from the genus offor the first time. All compounds are evaluated for cytotoxic activities against MCF-7 and HepG-2 cell lines by MTT assay, and the results showed that compounds 5-18 have potential inhibitory activity on MCF-7 and HepG-2 cell lines at 40 μmol/L.

(Thunb.) Vahl.; phenylethanol glycoside; monoterpene glycoside; lignan; antitumor activity; 2-(4- hydroxyphenyl)ethyl-6()-caffeoyl-βglucopyranoside; (＋)-pinoresinol; martairesinol-4βglucopyranoside; α-terpineol- 8βglucopyranoside

R284.1

A

0253 - 2670(2023)17 - 5487 - 11

10.7501/j.issn.0253-2670.2023.17.003

2023-01-19

國家自然科學(xué)基金青年基金項(xiàng)目（81803696）；西南民族大學(xué)中央高?；究蒲袠I(yè)務(wù)費(fèi)專項(xiàng)資金項(xiàng)目資助（ZYN2023068）

聶承冬，男，碩士研究生，研究方向?yàn)橹兴幩幮镔|(zhì)基礎(chǔ)研究。Tel: (028)89165778 E-mail: 13591776911@163.com

閻新佳，男，博士，教授，研究方向?yàn)橹兴幩幮镔|(zhì)基礎(chǔ)研究。Tel: (028)89165778 E-mail: yanxinjia@yeah.net

溫 靜，女，博士，工程師，研究方向?yàn)橹兴幩幮镔|(zhì)基礎(chǔ)研究。Tel: (028)89165778 E-mail: dachitu@yeah.net

[責(zé)任編輯 王文倩]