基于TLR4/NF-κB通路研究訶子多糖對(duì)CIA模型大鼠及其腸黏膜屏障的影響＊

劉 君，董秋梅

（內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)學(xué)院 呼和浩特 010100）

類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（Rheumatoid arthritis，RA）是一種常見(jiàn)的慢性免疫介導(dǎo)疾病，在過(guò)去幾十年的研究中，RA 的發(fā)病機(jī)制仍然沒(méi)有被完全理解，世界人口的大約1%患有RA[1-2]。發(fā)病機(jī)制尚未明確，目前認(rèn)為多與環(huán)境，遺傳，腸道菌群等相關(guān)。有研究表明,腸道黏膜免疫在RA 病程中起著重要作用[3-4]。并且腸黏膜屏障功能障礙與關(guān)節(jié)炎的發(fā)病息息相關(guān)[5-6]。腸道作為機(jī)體消化、吸收的重要器官，腸黏膜是其重要保護(hù)屏障，也是人體的第一道防護(hù)體系，當(dāng)腸黏膜結(jié)構(gòu)被損傷，引起腸道細(xì)菌、內(nèi)毒素等穿過(guò)腸黏膜屏障入侵機(jī)體，引起機(jī)體的炎癥反應(yīng)，使腸黏膜的通透性增加，腸內(nèi)抗原受刺激活化，激活致病性系統(tǒng)性免疫反應(yīng)，導(dǎo)致滑膜、軟骨等損害[7-8]。同時(shí)，受損的腸組織會(huì)出現(xiàn)ZO-1、claudin-1、occludin-1 等蛋白減少，進(jìn)而影響腸黏膜形態(tài)[9-10]。Toll 樣受體4（Toll-like receptor 4，TLR4）是一種I 型跨膜蛋白，并表達(dá)于多種組織細(xì)胞中，可通過(guò)NF-κB 途徑啟動(dòng)細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)[11]。TLR4 被激活會(huì)介導(dǎo)下游NF-κB 信號(hào)通路活化，在“腸黏膜屏障-關(guān)節(jié)軸”發(fā)病機(jī)制中起重要作用，并抑制相關(guān)炎性因子表達(dá)[12-13]。

訶子有良好的抗RA 效果，且治療RA 的蒙醫(yī)藥復(fù)方大多含有訶子[14]。訶子含有多酚類(lèi)活性成分，如訶子寧可抑制炎癥因子的表達(dá)，從而延緩關(guān)節(jié)炎癥的發(fā)生發(fā)展[15-16]。前期研究發(fā)現(xiàn)訶子提取物可有效調(diào)節(jié)CIA 模型大鼠腸道菌群構(gòu)成，增加益生菌菌屬，降低大腸桿菌數(shù)量，且通過(guò)藥物分析法發(fā)現(xiàn)訶子多糖在訶子水提物中占比14.36%，含量較多[17]。推斷訶子多糖可能具有調(diào)節(jié)CIA模型大鼠腸道免疫的功能?，F(xiàn)代藥理研究表明訶子多糖具有抗氧化，提高免疫等功效，且關(guān)于其提取純化、提取工藝及含量測(cè)定的研究較多，尚未發(fā)現(xiàn)訶子多糖對(duì)CIA模型大鼠腸道免疫方面的影響[18-19]。本研究旨在探討訶子多糖是否通過(guò)抑制TLR4/NF-κB 通路，調(diào)節(jié)CIA 模型大鼠腸黏膜屏障，進(jìn)而緩解類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎癥狀。

1 材料

1.1 動(dòng)物

雄性SD大鼠，80只，SPF級(jí)；體重（170±10）g，鼠齡4-5 周，由北京科宇動(dòng)物養(yǎng)殖中心提供，許可證編號(hào)：SCXK(京)2018-0010。飼養(yǎng)于內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心實(shí)驗(yàn)室。

1.2 主要試劑及儀器

訶子多糖（購(gòu)自德思特生物公司提取的訶子多糖標(biāo)準(zhǔn)品，DST191023-196，經(jīng)紫外分光光度儀檢測(cè)純度≥98%）；甲氨蝶呤片（上海信宜藥廠有限公司，H31020644）牛Ⅱ型膠原（Chondrex 公司，190306）；不完全弗氏佐劑（Chondrex 公司，190425）；NF-κBp50（Affinity 公司，AF6217）；NF-κBp65（Affinity 公司，AF5006）；TLR4（Affinity 公司，AF7017）；IFN- γ（Affinity 公司，DF6045）；ZO-1（Affinity 公司，AF5145）；Claudin-1（Affinity公司，AF0127）；Occludin-1（Affinity 公司，DF7504）；SDS-PAGE 凝膠制備試劑盒（武漢百仟度生物科技有限公司，Ba1012）；BCA 蛋白質(zhì)濃度測(cè)定試劑盒（武漢百仟度生物科技有限公司，Ba1086）；ECL 化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒（武漢百仟度生物科技有限公司，Ba1059）；酶標(biāo)儀（Thermo 公司，muLISKANMK3）；4℃離心機(jī)（德國(guó)Eppendorf 公司，Centrifuge 5415R）；掃描儀（EPSON公司，L4158）。

2 方法

2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組

SD雄性大鼠80只，經(jīng)1周飼養(yǎng)后將大鼠隨機(jī)分為6組，并進(jìn)行造模。篩選造模成功的大鼠60只，分成正常組、模型組、甲氨蝶呤組、訶子多糖高劑量組、訶子多糖中劑量組、訶子多糖低劑量組（經(jīng)前期急性毒性實(shí)驗(yàn)測(cè)出訶子多糖高、中、低劑量組范圍），每組10只。

2.2 造模及分組給藥

從4℃冰箱中取出液體型牛Ⅱ型膠原和不完全弗氏佐劑，以1∶1的比例混合相同的量后，在離大鼠尾根部約1 cm 處各注射0.2 mL，除正常對(duì)照組外。7天后，再次進(jìn)行強(qiáng)化免疫，劑量為每只0.1 mL[20]。免疫誘導(dǎo)21天后，將大鼠隨機(jī)分為6組：正常組、模型組、甲氨蝶呤組、高、中、低訶子多糖組。大鼠分別給予6 g·kg-1、3 g·kg-1和1.5 g·kg-1濃度的訶子多糖，每天一次，以及0.3 mg·kg-1的甲氨蝶呤，每周2次[21]，灌胃28天。

2.3 觀察測(cè)量大鼠一般情況

每7 天觀察一次大鼠皮毛、體色、食欲、活動(dòng)和體重等一般情況，及爪關(guān)節(jié)有無(wú)紅腫等變化。造模前使用游標(biāo)卡尺測(cè)量大鼠后足足爪厚度，開(kāi)始灌胃后每周測(cè)量1 次。使用關(guān)節(jié)炎指數(shù)（Arhtritic index，AI）評(píng)分記錄關(guān)節(jié)炎的發(fā)生和嚴(yán)重程度，在此基礎(chǔ)上分為5 個(gè)級(jí)別（0-4 級(jí)）：0 級(jí)：未出現(xiàn)關(guān)節(jié)腫脹（0 分）；1 級(jí)：小腳趾關(guān)節(jié)腫脹（1 分）；2 級(jí)：趾關(guān)節(jié)和足底有腫脹（2 分）；3 級(jí)：踝關(guān)節(jié)以下腫脹（3 分）；4 級(jí)：整個(gè)踝關(guān)節(jié)腫脹（4 分）。上述采用肢體評(píng)分系統(tǒng)測(cè)定，累計(jì)得分AI 的最高分是16 分。RA 動(dòng)物模型成功建立至少1 只踝關(guān)節(jié)出現(xiàn)腫脹，AI分?jǐn)?shù)達(dá)4分或以上[22]。

2.4 標(biāo)本采集

乙醚麻醉后開(kāi)始取血，血液標(biāo)本靜置30 min 后置于（3000 r·min-1）離心機(jī)內(nèi)離心10 min，取血清，-80℃保存待測(cè)。取血后，取下小腸組織和踝關(guān)節(jié)組織，清洗干凈后，將其置于裝有4%、10%的多聚甲醛采樣杯中分別固定24 h和48 h。

2.5 ELISA 法檢測(cè)CIA 大鼠血清IFN-γ、TLR-4 因子含量

按照試劑盒說(shuō)明書(shū)及參照文獻(xiàn)[23]操作方法，采用雙抗體夾心法測(cè)定大鼠血清中IFN-γ、TLR4含量。主要操作步驟如下：將所用抗原用包被稀釋液稀釋到適當(dāng)濃度（1∶200），每孔抗原加入100 μL，置37℃ 4，h，棄去孔中液體，封閉酶標(biāo)反應(yīng)孔，5%小牛血清置37℃封閉40 min，封閉時(shí)將封閉液加滿各反應(yīng)孔，并去除各孔中的氣泡，封閉結(jié)束后用洗滌液滿孔洗滌3 遍，每遍3 min。加入待檢測(cè)樣品，采用1∶200 的稀釋度，將稀釋好的樣品加入酶標(biāo)反應(yīng)孔中，每樣品至少加雙孔，每孔100 μL，置于37℃，40-60 min。用洗滌液滿孔洗滌3遍，每遍3 min。加入酶標(biāo)抗體，每孔加100 μL，洗滌同前。加入底物液（現(xiàn)用現(xiàn)配）：首選TMB-過(guò)氧化氫尿素溶液，OPD-過(guò)氧化氫底物液系統(tǒng)次之。底物加入量：每孔100 μL，置37℃避光放置3-5 min，加入終止液顯色，OPD 顯色后采用492 nm 波長(zhǎng)，TMB 反應(yīng)產(chǎn)物檢測(cè)需要450 nm 波長(zhǎng)。檢測(cè)時(shí)一定要首先進(jìn)行空白孔系統(tǒng)調(diào)零，用測(cè)定標(biāo)本孔的吸收值與一組陰性標(biāo)本測(cè)定孔平均值的比值。

2.6 CIA大鼠踝關(guān)節(jié)和小腸組織HE染色

將多聚甲醛固定好的組織常規(guī)梯度脫水、石蠟包埋，切片，進(jìn)行HE 染色，做連續(xù)切片（4 μm）→將片子置于水浴鍋（37℃）內(nèi)展片→用標(biāo)記好的防脫載玻片撈片→將載玻片置于恒溫烤片機(jī)烤3 h（60℃）→二甲苯Ⅰ脫蠟10 min→二甲苯脫蠟Ⅱ10 min→無(wú)水乙醇5 min→95%乙醇5 min→90%乙醇5 min→80%乙醇3 min→蒸餾水3 min→蘇木精染色10 min→流水沖洗→1%鹽酸乙醇分化15 s→流水沖洗→伊紅染色40 s→80%乙醇30 s→90%乙醇30 s→95%乙醇1 min×2次→無(wú)水乙醇3 min×2 次→二甲苯3 min×2 次→封片，光學(xué)顯微鏡下觀察大鼠踝關(guān)節(jié)和小腸組織病理變化情況。

2.7 免疫組織化學(xué)法檢測(cè)小腸組織中IFN-γ，TLR4及踝關(guān)節(jié)組織NF-κBp50，NF-κBp65的表達(dá)情況

參照文獻(xiàn)[24]，將包埋好的蠟塊切片至4-5 mm 厚度，經(jīng)脫蠟、水化、抗原修復(fù)后，PBS 沖洗3-5 次，分別滴加一抗IFN-γ，TLR4，NF-κBp50，NF-κBp65 抗體，4℃過(guò)夜。滴加二抗，37℃孵育60 min，DAB 顯色，自來(lái)水反復(fù)沖洗，HE復(fù)染，脫水、封片，于100倍鏡下照相，固定面積值，求各因子平均蛋白表達(dá)結(jié)果。

2.8 Western Blot 法檢測(cè)小腸組織上ZO-1、claudin-1、occludin-1蛋白的表達(dá)

按照試劑盒說(shuō)明提取蛋白質(zhì)，根據(jù)文獻(xiàn)[25]記錄方法，測(cè)定蛋白濃度后，對(duì)蛋白進(jìn)行變性處理。每孔采集總蛋白100 μg，每塊膠水恒流電源15 mA進(jìn)行電泳。轉(zhuǎn)膜后用含5%脫脂奶粉的TBST 室溫封膜2 h。一抗ZO-1、claudin-1、occludin-1 和GAPDH 分別稀釋為1∶250、1∶250、1∶250和1∶1000。將冰箱置于4℃下過(guò)夜。用TBST 沖洗PVDF 膜3 次，5 min。將PVDF 膜置于酶標(biāo)二抗（稀釋:1∶1000）中，室溫孵育2 h。用TBST 沖洗膜3 次，5 min。反應(yīng)5 分鐘后，熒光帶明顯，用濾紙吸收多余的襯底液，在天能自動(dòng)化學(xué)發(fā)光分析儀中曝光并拍照。將各組ZO-1、claudin-1、occludin-1 的相對(duì)蛋白表達(dá)水平與GAPDH（靶蛋白ID/內(nèi)參ID）進(jìn)行綜合灰度值比較。

2.9 統(tǒng)計(jì)方法

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均屬于計(jì)量資料，首先進(jìn)行正態(tài)分布檢驗(yàn)，符合用均值±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示。其次進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，若方差齊，使用單因素方差分析；方差不齊，用Games-Howell 檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)使用SPSS21.0 軟件統(tǒng)計(jì)分析，P＜0.05 或P＜0.01，提示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 訶子多糖對(duì)各組大鼠足掌厚度變化影響

造模前，各組大鼠足掌厚度無(wú)差異。造模成功后，各組大鼠足掌相繼開(kāi)始增厚，變紅腫。與正常組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；隨用藥時(shí)間增加，模型組大鼠足掌增厚程度嚴(yán)重，各用藥組足掌變厚厚度與模型組比較（P＜0.01），其中訶子多糖高劑量組和甲氨蝶呤組下降最快，訶子多糖高劑量組與甲氨蝶呤組相比，兩者無(wú)明顯差異（P＞0.01），見(jiàn)表1。

表1 訶子多糖對(duì)CIA大鼠足掌厚度的影響（n=10）

3.2 訶子多糖對(duì)各組大鼠關(guān)節(jié)炎指數(shù)變化影響

正常組大鼠踝關(guān)節(jié)及腳趾無(wú)紅腫，關(guān)節(jié)炎指數(shù)為0。模型組及用藥組大鼠AI 指數(shù)均高于正常組（P＜0.01）。實(shí)驗(yàn)灌胃前，各組大鼠關(guān)節(jié)炎指數(shù)與正常組相比，有明顯差異（P＜0.01）；隨著灌胃時(shí)間增加，用藥組大鼠關(guān)節(jié)紅腫程度明顯下降，甲氨蝶呤組與訶子多糖中、低劑量組相比有顯著性差異（P＜0.01），和高劑量組相比，無(wú)明顯差異（P＞0.01），見(jiàn)表2。

表2 訶子多糖對(duì)CIA大鼠關(guān)節(jié)炎指數(shù)的影響（n=10）

3.3 訶子多糖對(duì)CIA大鼠血清IFN-γ、TLR4含量水平的影響

ELISA 結(jié)果示，模型組大鼠血清IFN-γ、TLR4 因子含量較正常組及各用藥組顯著增多（P＜0.01）；與模型組相比，甲氨蝶呤組及訶子多糖各組治療后因子水平明顯下降（P＜0.01），IFN-γ、TLR4 在甲氨蝶呤組、訶子多糖高劑量組間無(wú)明顯差異（P＞0.01）；訶子多糖中、低劑量組的IFN-γ、TLR4 表達(dá)無(wú)明顯差異（P＞0.01），見(jiàn)表3。

表3 訶子多糖對(duì)CIA大鼠血清IFN-γ、TLR4水平的影響（n=10）

3.4 訶子多糖對(duì)CIA大鼠關(guān)節(jié)組織病理學(xué)觀察

HE 結(jié)果顯示，正常組踝關(guān)節(jié)結(jié)構(gòu)正常，滑膜細(xì)胞排列整齊，未見(jiàn)異?；ぴ錾?，未見(jiàn)炎性細(xì)胞的浸潤(rùn)，沒(méi)有軟骨破壞和新生血管等病理改變；模型組關(guān)節(jié)結(jié)構(gòu)嚴(yán)重受損，伴有軟骨細(xì)胞嚴(yán)重變性壞死，滑膜纖維組織異常增生，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；訶子多糖高劑量組和甲氨蝶呤組關(guān)節(jié)腔內(nèi)有少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)和少量滑膜增生，訶子多糖中、低劑量組治療效果不明顯，較其它治療組改善情況較弱（圖1）。

圖1 訶子多糖對(duì)CIA大鼠踝關(guān)節(jié)組織病理的影響（100×）

3.5 訶子多糖對(duì)CIA大鼠腸道組織病理學(xué)觀察

HE 結(jié)果顯示：正常組腸道組織結(jié)構(gòu)正常，粘膜上皮細(xì)胞排列整齊，未見(jiàn)減少或脫落；粘膜未見(jiàn)炎性細(xì)胞；模型組腸道組織結(jié)構(gòu)損壞嚴(yán)重，大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，腸粘膜水腫、潰瘍嚴(yán)重，腺體杯狀細(xì)胞減少；甲氨蝶呤組和訶子多糖高組腸絨毛排列整齊，部分脫落，腸粘膜見(jiàn)輕微水腫，部分有少量炎性細(xì)胞；訶子多糖中組腸絨毛排列尚可，腸粘膜中度水腫，有中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，腺體杯狀細(xì)胞減少；訶子低組腸絨毛排列較亂，腸粘膜重度水腫，出現(xiàn)大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；訶子多糖組高劑量組和甲氨蝶呤組出現(xiàn)輕度腸組織結(jié)構(gòu)異常，訶子多糖中、低劑量組治療效果較弱（圖2）。

圖2 訶子多糖對(duì)CIA大鼠小腸組織病理的影響（100×）

3.6 訶子多糖對(duì)CIA 大鼠腸道IFN-γ，TLR4 表達(dá)的影響

免疫組化結(jié)果顯示：與正常組相比，各組IFN-γ因子表達(dá)均升高（P＜0.05），TLR4 表達(dá)顯著增高（P＜0.01）；與模型組相比，各組IFN-γ、TLR4 陽(yáng)性表達(dá)明顯降低（P＜0.05）；與甲氨蝶呤組相比，訶子多糖高、中、低劑量組有顯著性差異（P＜0.01），見(jiàn)表4。

表4 訶子多糖對(duì)CIA大鼠小腸組織IFN-γ，TLR4表達(dá)的影響（n=10）

3.7 訶子多糖對(duì)CIA 大鼠關(guān)節(jié)NF-κBp50、NF-κBp65表達(dá)的影響

免疫組化結(jié)果顯示：與正常組相比，各組NFκBp50、NF-κBp65 因子表達(dá)差異顯著（P＜0.01）；與模型組相比，各組因子表達(dá)顯著降低（P＜0.01）；與甲氨蝶呤組相比，各組有顯著性差異（P＜0.01），見(jiàn)表5。

表5 訶子多糖對(duì)CIA大鼠踝關(guān)節(jié)組織NF-κBp50、NF-κBp65表達(dá)的影響（n=10）

3.8 訶子多糖對(duì)CIA 模型大鼠小腸組織上ZO-1、claudin-1、occludin-1蛋白的影響

Western blot 結(jié)果顯示：甲氨蝶呤組的ZO-1、claudin-1、occludin-1 蛋白與正常組相比，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；訶子多糖高、中、低劑量組的ZO-1、claudin-1 與正常組比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），訶子多糖高、中劑量組與模型組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），而訶子多糖低劑量組的occludin-1 與模型組相比，無(wú)顯著性差異（P＞0.05），見(jiàn)圖3-4。

圖3 訶子多糖對(duì)CIA大鼠小腸組織中ZO-1、claudin-1及occludin-1蛋白表達(dá)的影響

圖4 訶子多糖對(duì)CIA大鼠小腸組織中ZO-1、claudin-1及occludin-1蛋白表達(dá)的影響

4 討論

NF-κB 在RA 中扮演著至關(guān)重要的角色，p50 和p65是NF-κB通路在細(xì)胞中最常見(jiàn)、最主要的形式，且經(jīng)過(guò)二聚活化后可調(diào)控眾多細(xì)胞因子的表達(dá)，導(dǎo)致大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，引起或加重機(jī)體炎癥反應(yīng)[26-27]。NFκB 的激活可提高TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8 等因子的轉(zhuǎn)錄水平[28-30]。INF-γ 的表達(dá)與RA 及腸道炎癥反應(yīng)相關(guān)，并影響NF-κB 的激活[31-32]，而TLR4 通過(guò)活化NF-κB 通路使其轉(zhuǎn)入核內(nèi)，啟動(dòng)炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致IL-6、IL-17、IL-1β 等炎癥因子釋放，加劇滑膜炎產(chǎn)生[33-34]。本研究觀察發(fā)現(xiàn)訶子多糖有效降低CIA大鼠血清和小腸組織IFN-γ、TLR4 的表達(dá)，降低滑膜組織NFκBp50、NF-κBp65炎癥因子。訶子多糖可以有效治療CIA 大鼠關(guān)節(jié)炎癥狀，并緩解其腸道炎癥反應(yīng)，進(jìn)一步證實(shí)多糖是抗RA 和調(diào)節(jié)腸道免疫的重要活性成分，且訶子多糖可通過(guò)抑制TLR4/NF-κB 通路，作為類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎及其腸黏膜屏障之間的阻斷劑。

相關(guān)研究指出腸道微生物群引起的腸黏膜屏障失衡，激活TLR4/NF-κB 通路，加重腸黏膜炎癥反應(yīng)，反之，TLR4/NF-κB 信號(hào)通路因子的激活，引起腸上皮炎癥[35-36]。“腸黏膜-關(guān)節(jié)”軸與TLR4/NF-κB 的發(fā)生密切相關(guān)，大量炎癥因子浸潤(rùn)，包括TLR4、NF-κBp50、NF-κBp65的異常表達(dá)激活TLR4/NF-κB通路，導(dǎo)致腸黏膜屏障損壞，大量有害物質(zhì)入侵，經(jīng)血液循環(huán)引起全身免疫反應(yīng)，誘發(fā)關(guān)節(jié)炎癥，這也證實(shí)腸黏膜與類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎間的相關(guān)性[37]。腸黏膜屏障完整性依賴于Occludin、ZO-1、Claudin-1 等緊密連接蛋白的表達(dá)情況，該蛋白是腸黏膜上皮細(xì)胞間的連接蛋白，可封閉細(xì)胞間隙，保護(hù)腸黏膜避免有害物質(zhì)穿過(guò)細(xì)胞間隙引起腸道炎性改變，具有保護(hù)腸道屏障的作用[38-40]。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)CIA 大鼠模型組的小腸組織上ZO-1、claudin-1、occludin-1 蛋白表達(dá)異常，明顯高于正常組和用藥組，表明腸黏膜屏障結(jié)構(gòu)的完整性與緊密連接蛋白含量相關(guān)，與文獻(xiàn)報(bào)道一致。

訶子及其提取物或有效成分作用顯著，具有抗炎、抗癌、調(diào)節(jié)免疫、抗氧化活性、抑菌、降血糖等多種藥理作用[41-42]，并且可以有效緩解類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎癥狀，對(duì)腸黏膜有一定的保護(hù)作用，但具體是哪種活性成分可以調(diào)節(jié)這兩種免疫性疾病，還缺乏系統(tǒng)的機(jī)制研究。本研究以訶子中的多糖為干預(yù)藥物，通過(guò)建立CIA 大鼠模型，發(fā)現(xiàn)訶子多糖可能介導(dǎo)TLR4/NF-κB通路上相關(guān)炎性因子表達(dá)，增加腸道緊密連接蛋白，降低腸道通透性，保護(hù)腸黏膜屏障，從而緩解類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎癥狀。明確了訶子多糖具有調(diào)節(jié)RA 與腸黏膜屏障的雙重作用，為中醫(yī)藥治療RA提供新思路。