UPLC同時測定黃酒中安賽蜜、糖精鈉、苯甲酸及山梨酸

陳芳　房新宇

安賽蜜、糖精鈉是甜味劑，苯甲酸、山梨酸是防腐劑，都被廣泛用于食品中，但這些物質過量攝入會對人體造成一定傷害。黃酒因香氣濃郁、甘甜美味、風味醇厚而被人們喜歡，在黃酒生產過程中根據需要可以適量添加焦糖色素，但嚴禁添加安賽蜜、糖精鈉、苯甲酸、山梨酸用于增加甜味和防腐。本文對利用超高效液相色譜法（UPLC）同時測定黃酒中安賽蜜、糖精鈉、苯甲酸、山梨酸的方法進行了探索。實驗結果顯示，此方法簡單快速、準確可靠、靈敏度高，可用于同時測定黃酒中安賽蜜、糖精鈉、苯甲酸、山梨酸。

一、試驗準備

1.儀器與試劑。Waters超高效液相色譜儀（Waters ACQUITY UPLC）系統，配有二極管整列檢測器、自動進樣器、色譜工作站、Waters ACQUITY BEH shield RP18色譜柱（2.1X100mm，1.7μm）。

分析天平，感量為0.001g和0.0001g；渦旋振蕩器；離心機，轉速>8000r/min；恒溫水浴鍋；超聲波清洗器；真空抽濾器；勻漿機。

甲醇（色譜純，Merk）；乙酸銨（分析純）；亞鐵氰化鉀；乙酸鋅；安賽蜜（GBW（E）082620，1000μg/mL，北京壇墨質檢科技有限公司）；糖精鈉（GBW（E）100008，1.00mg/mL，中國計量科學研究院）；苯甲酸（GBW（E）100006，1.00mg/mL，中國計量科學研究院）；山梨酸（GBW（E）100007，1.00mg/mL，中國計量科學研究院）。

2.試劑配制。亞鐵氰化鉀溶液（92g/L）：稱取106g亞鐵氰化鉀，加入適量水溶解，用水定容至1000mL。乙酸鋅溶液（183g/L）：稱取220g乙酸鋅溶于少量水中，加入30mL冰乙酸，用水定容至1000mL。0.02mol/L乙酸銨溶液：1.54g乙酸銨，用水定容至1000mL，0.22μm過濾。標準系列溶液配置：量取適量標準溶液，用水稀釋配置成所需濃度混合標準溶液，構成濃度分別為1.0、5.0、10.0、25.0、50.0mg/L的標準使用液。

3.樣品處理。準確稱取約2g（精確到0.001g）試樣于50mL具塞離心管中，加水約25mL，渦旋混勻，于50℃水浴超聲20min，冷卻至室溫后加亞鐵氰化鉀溶液2mL和乙酸鋅溶液2mL，混勻，8000r/min離心5min。將水相轉移至50mL容量瓶中，殘渣中加水20mL，渦旋混勻后超聲5min，8000r/min離心5min。將水相轉移到同一50mL容量瓶中，并加水定容至刻度，混勻。取適量上清液過0.22μm濾膜，待液相色譜測定。

4.液相色譜條件。色譜柱：Waters ACQUITY UPLC BEH shield RP18色譜柱（2.1X100mm，1.7μm）；流動相：0.02mol/L的乙酸銨一甲醇（96：4）；檢測波長：230nm；光譜掃描范圍：210nm-400nm；柱溫：40℃；流速：0.3mL/min；進樣量：10μL。

二、結果與分析

1.檢測波長的確定。本實驗對4種食品添加劑在210-400nm進行全波長掃描，所得光譜圖見圖1，安賽蜜、糖精鈉、苯甲酸、山梨酸的最大吸收波長見表1。為兼顧各組分的靈敏度，本文選擇的實驗波長為230nm，在此波長下各組分均有較好的靈敏度。

2.流動相及流速的選擇。把乙酸銨和甲醇水溶液作為流動相的比例分別設置為90：10和96：4和98：2，當甲醇：乙酸銨水溶液為96：4時，出峰時間較短，且分離效果理想。如果甲醇比例更低，安賽蜜和苯甲酸將出現重疊，分離效果差，因此二者的比例選擇為96：4。

把甲醇和乙酸銨水溶液的比例設置為96：4，當流速為0.6mL/min時，雖然安賽蜜、糖精鈉、苯甲酸、山梨酸能夠很快分離，但是安賽蜜和苯甲酸的峰型不好，且保留時間太接近，分離不完全。將時間流速改為0.3mL/min時，不僅能完全分離且分離效果理想，故選擇流速為0.3mL/min。在甲醇：乙酸銨水溶液為96：4、流速為0.3mL/min時，分離效果較好，5min內便可使4種組分完全分離，色譜圖見圖2。

3.線性范圍及檢出限。按所選擇的色譜條件進樣不同質量濃度的標準溶液10μL，獲得不同質量濃度下各組分的峰面積，以質量濃度和峰面積繪制標準曲線。取標品逐級稀釋進樣10μL，按色譜儀最低響應值S（S=3N，N為儀器噪音水平）所對應的濃度為檢出限。各組分的線性范圍、線性方程、相關系數及檢出限見表2。從表2可以看出各組分在線性范圍內，線性關系良好。

4.回收率及精密度實驗。配制一混合標準溶液，連續(xù)進樣10次，做精密度實驗。再準確稱取黃酒樣品2.00g，按線性范圍加入一定量的混合標準品，按選定的條件進行分析，平行測定10次，結果如表3所示。結果顯示，被測樣品加標回收率在96.83%-105.68%，RSD小于1.93%，測定結果準確可靠。

5.樣品的檢測分析。使用優(yōu)化后的色譜條件，對市售黃酒進行檢測，樣品色譜圖見圖3。經過對30件黃酒樣品的檢測，檢測結果匯總見表4。由圖3和表4可知，黃酒樣品基質復雜，雜峰較多，且檢測出微量苯甲酸，由于規(guī)定不得添加，故建議使用加入法和質譜法判別是否存在假陽性。

三、結論

本研究建立了超高效液相色譜法（UPLC）同時測定黃酒中安賽蜜、糖精鈉、苯甲酸、山梨酸的分析方法。此方法簡單快速、準確可靠、靈敏度高，可為黃酒中安賽蜜、糖精鈉、苯甲酸、山梨酸的同時測定提供參考。

作者簡介：陳芳（1993-），女，漢族，安徽桐城人，技師，大學本科，研究方向為食品理化檢驗。