免疫抑制素（INH）試驗對湘西黃牛受孕率影響

姚茂清，田春燕，文明歡，謝詠良，張馬兵

（1.湖南省新晃縣畜牧水產(chǎn)事務中心，湖南 懷化 418000；2.辰溪縣田灣鎮(zhèn)人民政府農(nóng)業(yè)綜合服務中心，湖南 辰溪 419500；3.辰溪縣柿溪鄉(xiāng)農(nóng)業(yè)綜合服務中心，湖南 辰溪 419500；4.郴州市北湖區(qū)畜牧水產(chǎn)事務中心，湖南 郴州423000；5.湖南農(nóng)業(yè)大學，湖南 長沙 410128）

抑制素（inhibin，INH）是通過特異性抗體中和動物體內(nèi)源性INH，解除對卵泡刺激素分泌的抑制作用，從而使動物體內(nèi)卵泡雌激素水平上升，達到提高動物繁殖力的效果。母牛繁殖性能對肉牛養(yǎng)殖生產(chǎn)效率和經(jīng)濟效益具有重要意義，母牛繁殖性能的提升可以降低養(yǎng)殖成本，改善肉牛場的經(jīng)濟效益。通過調控母牛內(nèi)分泌機能及激素水平而達到提高肉牛繁殖性能的目的，一直是反芻動物繁殖領域的研究熱點。本試驗在湘西黃牛INH 免疫的基礎上，經(jīng)過同期發(fā)情處理后，進行人工定時輸精，然后利用B 超儀進行妊娠檢查，將妊娠檢查結果進行統(tǒng)計分析，研究INH 免疫對湘西黃牛受孕率的影響。

1 材料與方法

1.1 時間地點

試驗時間為2020 年5 月，地點為新晃縣某規(guī)模養(yǎng)牛場。

1.2 試驗牛群

選擇60 頭體質狀態(tài)良好、處于空懷期且發(fā)情周期正常的經(jīng)產(chǎn)能繁湘西黃牛母牛作為試驗對象，隨機分成2 組，每組30 頭（對照組：CON，試驗組：INH），每天07:00 和17:00 自由采食和飲水，飼喂全株青貯玉米、混合精料和干稻草。

1.3 試驗牛群處理

對選定的湘西黃牛進行同期發(fā)情處理，INH 組每頭母牛臀部肌肉注射1 mL INH 抗原和生源（GnRH），INH 蛋白濃度為1 mg/mL，生源終濃度為100 μg，CON 組僅注射生源（GnRH），注射后埋植CIDR 陰道栓，第11 d 從母牛陰道撤出CIDR，隨后注射氯前列醇鈉注射液（PGF2α）。撤栓后第二天，注射促黃體素釋放激素A3（LHRH-A3），終濃度為25 μg，同時于9:00 和16:00 分別輸精一次（如圖1），其中每組15 頭牛配安格斯凍精（AG），另外15 頭配性控凍精（XK）凍精，輸精后30 天進行B 超妊娠診斷，輸精90 天后進行直腸把握法進行孕檢確認。

圖1 母牛妊娠直腸檢查鑒定示意圖

1.4 試劑藥品與儀器

免疫抑制素（INH）由江蘇省農(nóng)業(yè)科學院施振旦教授研究團隊提供；孕酮栓（CIDR）、氯前列醇鈉（PGF2α）、促黃體素釋放激素A3（LRH-A3）由寧波市三生藥業(yè)有限公司出品；獸用妊娠B 超測定儀（EXAGO，法國）。

1.5 試驗方法

1.5.1 妊娠B 超檢查

將待檢母牛進行保定，呈站立姿勢，左手固定儀器，右手拿B 超探頭。在獸用B 超儀的探頭上涂抹耦合劑。耦合劑以剛好蓋住探頭頭部為宜。在母牛上腹部無毛區(qū)呈45 度角斜向對側上方，探頭緊貼皮膚一點，進行前后、上下定位扇形掃查，動作要慢。探查時無任何損傷和刺激，待顯示屏上出現(xiàn)清楚的圖像方可按動凍結鍵把圖像凍結下來，兩側子宮角掃描中發(fā)現(xiàn)胎兒、胎膜、跳動的臍動脈等指示性圖像即可判定妊娠診斷結果為已孕，反之則判定為空懷。

1.5.2 妊娠直腸檢查鑒定

將待檢母牛進行保定，將長臂手套涂抹上石蠟油后，操作者將手順著母牛直腸摸到子宮頸，再將中指向前滑動，尋找角間溝；以胎膜滑落感、子宮羊膜囊液體波動感配合卵巢上的妊娠黃體為妊娠指示判斷是否已孕。如有上述指示性觸診結果,判定為已孕，反之則判定為空懷（圖1）。

未孕現(xiàn)象：子宮頸、體、角及卵巢均位于骨盆腔內(nèi)；經(jīng)產(chǎn)多次的母牛，子宮角可垂入入口前緣腹腔內(nèi)，兩角大小相等，形狀亦相似，彎曲如綿羊角狀；經(jīng)產(chǎn)牛有時右角略于左角遲緩、肥厚，能夠清楚地提到子宮角間溝。子宮角經(jīng)觸摸即收縮，變得有彈性，幾乎有確實感，能將子宮握在手中，可判定卵巢大小與其中有無黃體和卵泡。

懷孕90 天（3 個月）：角間溝消失。子宮頸移至恥骨前緣。由于宮頸向前可觸到擴大的子宮從骨盆腔向腹腔下垂，兩角共寬一掌多。在腸胃內(nèi)容物多時，子宮被擠入骨盆入口，且子宮壁收縮時，可以摸到整個子宮的范圍，體積比排球稍??；偶爾還可觸到浮在胎水中的胎兒，有時感到有胎動。但子宮壁一般均感柔軟，無收縮。孕角比空角大得多；液體波動感清楚，有時在子宮壁上可以摸到如同蠶豆樣大小的胎盤突。

2 結果與分析

2.1 妊娠B 超檢查

如圖2-A 對所有試驗牛進行B 超妊娠診斷，將所有孕檢的B 超圖進行凍結保存，然后進行妊娠分析，圖2-C 中未見胎兒、胎膜、跳動的臍動脈等指示性圖像，即為未孕，圖2-D 中可以清晰觀測出胚胎（畫圈部分），即為已孕。

圖2 湘西黃牛妊娠檢查

2.2 妊娠直腸檢查鑒定

如圖2-B 所示，利用長臂手套對湘西黃牛進行妊娠檢查，并將所有直腸檢查數(shù)據(jù)結果進行統(tǒng)計（表1），統(tǒng)計結果顯示，INH 組總計懷孕牛為17頭，受孕率56.67%，其中性控凍精懷孕6 頭，受孕率40%，安格斯凍精11 頭，受孕率73.33%。對照組總計懷孕牛為19 頭，受孕率63.33%，其中性控凍精懷孕11 頭，受孕率73.33%，安格斯凍精8 頭，受孕率53.33%。

表1 湘西黃牛懷孕情況記錄

3 討論

不斷提高母畜繁殖效率是肉牛養(yǎng)殖業(yè)提升經(jīng)濟效益的關鍵。通過抑制素免疫技術調控動物繁殖力能有效提升養(yǎng)殖業(yè)的生產(chǎn)水平，具體表現(xiàn)在抑制素免疫技術提高牛雙胎與多胎繁殖率、強化禽類產(chǎn)蛋的數(shù)量和質量等技術手段。過去幾十年里，單胎動物的繁殖效率一直不理想，受機體機能、飼養(yǎng)管理以及環(huán)境等因素的制約，導致繁殖性能不斷下降。據(jù)統(tǒng)計，我國肉牛規(guī)?；B(yǎng)殖場的受胎率為30%～45%，在夏季高溫天氣，南方牧場的受胎率僅為10%左右；另有統(tǒng)計顯示，規(guī)?；膛鲈诋a(chǎn)后首次配種的受胎率從65%下降到35%左右[1-4]。為了縮短母畜的發(fā)情周期以及提高養(yǎng)殖場的經(jīng)濟效益，在過去的十幾年里，研究人員將抑制素免疫技術應用于牧場繁殖一線，研發(fā)了一套提高胚胎產(chǎn)量和質量的高效超排技術，同時配套同期發(fā)情和定時輸精技術，將南方亞熱帶地區(qū)夏季母畜配種受胎率從8%提高到44%，北方地區(qū)夏季母畜受胎率從26.7%提高到64.7%[5]。

受胎率是繁殖性能的重要體現(xiàn)，在卵泡和卵子發(fā)育質量有保障的前提下，通過技術處理提高母畜人工授精的受胎率，對養(yǎng)殖場的經(jīng)濟效益提升具有重要意義。有研究認為抑制素免疫和CIDR 處理相結合，應用到同步排卵和定時輸精技術中，能夠顯著提高奶牛配種的受胎率[6]。張寧等[7]研究發(fā)現(xiàn)，青年奶山羊經(jīng)過抑制素免疫技術處理后，兩組試驗動物受胎率均能達到為100%，試驗組4 只懷孕母羊產(chǎn)羔9只，比對照組產(chǎn)羔多5 只，試驗組產(chǎn)羔率比對照組高55%，兩組差異顯著；其中試驗組有3 只懷孕母羊產(chǎn)雙羔，而對照組僅有1 只產(chǎn)雙羔，證實了抑制素免疫技術不影響母羊的受胎率，還可以提高了青年奶山羊的產(chǎn)羔數(shù)量，具有提高母畜繁殖力的功能。

目前，關于INH 對肉牛受胎率的影響還鮮有研究報道，主要集中在小鼠、母豬、羊和奶牛等動物激素調節(jié)、卵泡發(fā)育和胚胎發(fā)育研究方向上[8-11]。王水蓮等[12]研究發(fā)現(xiàn)，用抑制素基因疫苗肌肉注射免疫黃牛，其抗體陽性組的大卵泡數(shù)、排卵卵泡直徑和黃體直徑均顯著高于抗體陰性組，在加強免疫第45 d，抗體陽性組的P4 水平也有顯著提升，使受胎率上升；而劉青[13]通過肌肉注射免疫抑制素基因疫苗發(fā)現(xiàn)雜交水牛在非繁殖季節(jié)和繁殖季節(jié)的受胎率分別為51.7%、32%，而對照組雜交水牛非繁殖季節(jié)和繁殖季節(jié)的受胎率分別為48.8%、37.2%，可以看出抑制素免疫在非繁殖階段的作用效果要略高于對照組，而在繁殖季節(jié)的受胎率要略低于對照組，說明INH 免疫不影響動物的繁殖受胎率。

4 結論

在本研究中，INH 組總計懷孕牛為17 頭，受孕率56.67%，其中性控凍精懷孕6 頭，受孕率40%，安格斯凍精11 頭，受孕率73.33%。對照組總計懷孕牛為19 頭，受孕率63.33%，其中性控凍精懷孕11 頭，受孕率73.33%，安格斯凍精8 頭，受孕率53.33%，從以上結果可以看出，INH 組的湘西黃牛母牛使用性控凍精和非性控凍精的受孕率均低于對照組，說明影響母牛受孕的因素可能與精液性質、輸精手法以及環(huán)境等因素有關，INH 免疫對湘西黃牛的受孕率無顯著影響。 □