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    雞肉中二種氟喹諾酮類藥物殘留檢測能力驗證實驗

    2023-08-24 05:59:28林品言崔先鋒
    湖南畜牧獸醫(yī) 2023年4期
    關鍵詞:恩諾環(huán)丙沙星沙星

    林品言,崔先鋒

    (1.常德市畜禽水產(chǎn)品質(zhì)量安全檢驗檢測中心,湖南常德 415000;2.澧縣農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測中心,湖南常德 415500)

    1 引言

    能力驗證是按照預先制定的準則,通過實驗室間比對,來評價參加者的能力[1-2],它是評價檢驗檢測機構綜合檢測能力的重要手段,通過參加能力驗證活動,能夠提高檢驗檢測機構的檢測水平,有利于提升實驗室的綜合能力。

    氟喹諾酮類藥物是一類人工合成的新型殺菌性抗菌藥物[3],其具有抗菌譜廣、使用方便、價格低廉等優(yōu)點,作為廣譜抗菌藥被養(yǎng)殖戶在畜牧、水產(chǎn)等養(yǎng)殖生產(chǎn)中廣泛使用。由于不合理的用藥可導致氟喹諾酮類藥物及其代謝產(chǎn)物在畜禽水產(chǎn)品中殘留。如果長期食用含有氟喹諾酮類藥物的動物源食品,會使人對致病菌產(chǎn)生耐藥性,從而對人體健康造成嚴重威脅。氟喹諾酮類藥物殘留的常用檢測方法有液相色譜- 質(zhì)譜聯(lián)用法[4-5]、高效液相色譜法[6]、酶聯(lián)免疫吸附法[7]等。本文以參加2022 年湖南省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳組織的雞肉中二種氟喹諾酮類藥物殘留檢測能力驗證為例,采用《動物性食品中氟喹諾酮類藥物殘留檢測:高效液相色譜法》(農(nóng)業(yè)部1025號公告—14—2008)和能力驗證作業(yè)指導書對雞肉中氟喹諾酮類藥物殘留進行測定,通過參加本次能力驗證,可以對實驗方案設計、定量分析方法以及測定結果分析等關鍵環(huán)節(jié)進行評價,提高實驗室檢測數(shù)據(jù)的有效性和可靠性。

    2 材料與方法

    2.1 樣品來源

    兩份平行考核的雞肉樣品,每份雞肉樣品2.00 g,樣品編號為E02。空白雞肉樣品10.00 g,能力驗證樣品為已經(jīng)絞碎并稱好放在離心管中的雞肉樣品,-20℃以下保存,由湖南省獸藥飼料監(jiān)察所提供。

    2.2 材料與試劑

    能力驗證樣品:2 份平行考核雞肉樣品(編號:E02,質(zhì)量:2.00 g)和空白雞肉樣品(質(zhì)量:10.00 g):湖南省獸藥飼料監(jiān)察所提供;恩諾沙星、環(huán)丙沙星混合標準工作液(2 μg/mL):湖南省獸藥飼料監(jiān)察所提供;磷酸(優(yōu)級純):國藥集團化學試劑有限公司;氫氧化鈉(優(yōu)級純):西隴科學股份有限公司;乙腈(色譜純):CNW Technologies;甲醇(分析純):CNW Technologies;三乙胺(分析純):CNW Technologies;磷酸二氫鉀(分析純):天津市恒興化學試劑制造有限公司。

    2.3 儀器與設備

    LC-20AT 高效液相色譜儀(日本島津):熒光檢測器;CP153C 電子天平:奧豪斯儀器(上海)有限公司;XW-80A 微型旋渦混合儀:上海滬西分析儀器廠有限公司;TG16K-II 高速離心機:長沙東旺實驗儀器有限公司;摩爾原子超純水:上海摩勒科學儀器有限公司;DL-01 抽濾裝置;12 道SPE 固相萃取裝置;量筒;容量瓶;具塞離心管;移液槍;固相萃取柱:Agilent Technologies C18 柱(100 mg/mL)。

    2.4 試驗方法

    2.4.1 樣品前處理

    稱取空白雞肉樣品2.00 g 3 份置50 mL 離心管中,一份做空白樣品,二份做加標回收實驗,與2 份平行考核雞肉樣品一起,先加磷酸鹽緩沖溶液10.0mL,放在振蕩器上振蕩10 min,10000 r/min 離心5 min,取上清液,待用。再在殘渣中加入10.0 mL磷酸鹽緩沖溶液,放在振蕩器上振蕩10 min,10000 r/min 離心5 min。合并兩次上清液,混勻,使用濾紙過濾,備用。

    固相萃取柱先依次用甲醇、磷酸鹽緩沖溶液各2 mL 預洗。取上清液5.0 mL 過柱,用水1mL 淋洗,擠干。用流動性1.0 mL 洗脫,擠干,收集洗脫液。經(jīng)濾膜過濾后作為試樣溶液,供高效液相色譜法測定。

    2.4.2 液相色譜條件

    色譜柱:C18 色譜柱(250 mm×4.6 mm,粒徑:5 μm);流速:0.8 mL/min;流動相:0.05 mol/L 磷酸溶液/三乙胺- 乙腈(82+18,v/v),使用前經(jīng)微孔濾膜過濾;檢測波長:激發(fā)波長280 nm、發(fā)射波長450 nm;柱溫:30 ℃;進樣體積:20 μL。

    取100 ng/mL 二種氟喹諾酮類藥物殘留混合標準工作液,按上述色譜條件進行高效液相色譜分析,標準色譜圖如圖1 所示。

    圖1 環(huán)丙沙星和恩諾沙星標準樣品色譜圖

    圖1 中,7.880 min、10.322 min 分別為環(huán)丙沙星、恩諾沙星色譜峰??梢钥闯?,環(huán)丙沙星和恩諾沙星的色譜峰均峰形尖銳,對稱性好。

    3 結果與分析

    3.1 標準曲線

    精確量取適量2 μg/mL 環(huán)丙沙星和恩諾沙星標準工作液,用流動相稀釋成濃度為10、25、50、100、200 ng/mL 的環(huán)丙沙星和恩諾沙星標準溶液,供高效液相色譜分析。由表1 可知,二種氟喹諾酮類藥物的回歸方程及相關系數(shù),在10~200 ng/mL的濃度范圍具有良好的線性關系。

    表1 喹諾酮類藥物的回歸方程、相關系數(shù)

    3.2 質(zhì)控樣的回收率

    向稱好的2 份空白雞肉樣品中添加80.0 ng/g、100.0 ng/g 的2 個不同濃度的混合標準工作液,按照2.4 方法進行添加回收試驗。結果顯示,本方法在80.0~100.0 ng/g 的添加范圍內(nèi),回收率范圍為80.08%~85.23%。符合標準中方法在20~500μg/kg添加濃度的回收率為60%~100%的要求??瞻纂u肉樣品中添加2 種藥物回收率的結果見表2。

    表2 空白基質(zhì)中添加二種藥物回收率

    3.3 能力驗證樣品中二種氟喹諾酮類藥物殘留的含量

    由表1 可知,環(huán)丙沙星、恩諾沙星濃度范圍在10~200 ng/mL 內(nèi),線性關系良好。根據(jù)線性回歸方程計算各組分濃度,環(huán)丙沙星未檢出,恩諾沙星含量為66.9 μg/kg(見表3)。

    表3 二種氟喹諾酮類藥物殘留的含量及精密度

    4 結論

    本次由湖南省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳組織的雞肉中二種氟喹諾酮類藥物殘留檢測能力驗證中,考核雞肉樣品E02環(huán)丙沙星未檢出,而恩諾沙星測定結果為66.9 μg/kg。根據(jù)2022 年農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測技術能力驗證添加值及判定范圍可知,環(huán)丙沙星實際未添加,恩諾沙星實際添加為80 μg/kg,根據(jù)實驗檢測結果計算得到回收率在80%以上,結果判定優(yōu)秀。通過本次能力驗證,實驗室中采用的方法、儀器的穩(wěn)定性、試劑的有效性等都得到了確認,實驗室檢測人員對采用高效液相色譜儀進行定量檢測有了更深的認知,實驗室的整體水平得到了很大的提高。 □

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