曲妥珠單抗聯(lián)合化療方案治療乳腺癌的療效及其作用機(jī)制研究

陸佳團(tuán)，王征，張浩

南陽市中心醫(yī)院乳腺科一病區(qū)，河南 南陽 473200

乳腺癌(breast cancer，BC)主要發(fā)生于乳腺腺上皮組織，我國BC 篩查率較低，20%的BC 患者確診時(shí)已處于局部晚期，5 年生存率約為24%[1]。目前尚未有統(tǒng)一治療方案，部分患者存在多種耐藥性或多線治療失敗，因而尋找合理有效BC 治療方案具有重要意義。TP 化療方案常用于治療BC，僅采用TP 化療方案未達(dá)到臨床預(yù)期[2-3]。曲妥珠單抗是一種重組人源化單克隆抗體，可提高HER2 陽性轉(zhuǎn)移性BC 治療效果[4-5]。但曲妥珠單抗聯(lián)合TP 化療方案治療BC 的臨床價(jià)值尚未明確。磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信號通路異常活化與BC 預(yù)后不良有關(guān)，Akt 磷酸化可調(diào)節(jié)絲狀肌動(dòng)蛋白、上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)相關(guān)蛋白表達(dá)，促進(jìn)BC 細(xì)胞轉(zhuǎn)移[6]，而PI3K/Akt 信號通路是否可作為治療BC 的潛在靶點(diǎn)尚未明確。本研究探討其聯(lián)合治療BC 的療效、生存率、毒副反應(yīng)發(fā)生率，并分析其對PI3K/Akt 通路的影響，為臨床治療提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2019年3月至2021年1月南陽市中心醫(yī)院收治的68 例女性BC 患者為研究對象。納入標(biāo)準(zhǔn)：符合BC 診斷標(biāo)準(zhǔn)[7]；經(jīng)組織病理學(xué)檢查確診為BC；生存時(shí)間≥6 個(gè)月；卡氏功能狀態(tài)(KPS)評分≥60 分；無化療禁忌證；簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并其他惡性腫瘤者；精神障礙者；既往放化療史者；非原發(fā)性BC；合并全身感染性疾病者。采用奇偶分組法將患者分為單一組和聯(lián)合組，每組34 例。兩組患者的一般資料比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，具有可比性，見表1。本研究經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)。

表1 兩組患者的一般資料比較[，例(%)]Table 1 Comparison of general information between the two groups[,n(%)]

表1 兩組患者的一般資料比較[，例(%)]Table 1 Comparison of general information between the two groups[,n(%)]

組別例數(shù)年齡(歲)月經(jīng)情況TNM分期單一組聯(lián)合組t/χ2值P值34 34 56.24±3.03 57.13±3.15 1.187 0.239絕經(jīng)22(64.71)20(58.82)未絕經(jīng)12(35.29)14(41.18)0.249 0.618Ⅲ期23(67.65)24(70.59)Ⅳ期11(32.35)10(29.41)0.069 0.793

1.2 治療方法

1.2.1 單一組 該組患者予以TP 方案(紫杉醇+順鉑)化療，化療前12 h口服地塞米松20 mg(昆藥集團(tuán)股份有限公司，國藥準(zhǔn)字H53020826，規(guī)格：0.75 mg)，前30 min內(nèi)分別肌內(nèi)注射苯海拉明50 mg(湖北科倫藥業(yè)有限公司，國藥準(zhǔn)字H42021175，規(guī)格：1 mL∶20 mg)、西咪替丁300 mg(江蘇朗歐藥業(yè)有限公司，國藥準(zhǔn)字H32025601，規(guī)格：2 mL∶0.2 g)，第1 天靜脈滴注紫杉醇150 mg/m2(海南紫杉園制藥有限公司，國藥準(zhǔn)字H20066558，規(guī)格：5 mL∶30 mg)，持續(xù)3 h；第2 天靜脈滴注順鉑25 mg/m2(云南生物谷藥業(yè)股份有限公司，國藥準(zhǔn)字H20043889，規(guī)格：2 mL∶10 mg)，1 次/d，21 d為一個(gè)周期，連續(xù)治療3個(gè)周期。

1.2.2 聯(lián)合組 該組患者予以曲妥珠單抗+TP方案化療，TP化療方案同單一組，同時(shí)予以曲妥珠單抗(上海復(fù)宏漢霖生物制藥有限公司，國藥準(zhǔn)字S20200019，規(guī)格：150 mg/瓶)治療，初始劑量8 mg/kg，1.5 h/次，21 d為一個(gè)周期，每周期給藥一次，連續(xù)治療3個(gè)周期。

1.3 觀察指標(biāo)與評價(jià)(檢測)方法 (1)臨床療效[8]：完全緩解(CR)，腫瘤病灶完全消失且至少維持4 周；部分緩解(PR)，腫瘤面積縮小≥50%且至少維持4 周；疾病穩(wěn)定(SD)，腫瘤面積增加≤25%或縮小＜50%，且至少維持4 周；疾病進(jìn)展(PD)，腫瘤面積增加＞25%或出現(xiàn)新病灶。總有效率=(CR 例數(shù)+PR 例數(shù))/總例數(shù)×100%，疾病控制率=(CR 例數(shù)+PR 例數(shù)+SD 例數(shù))/總例數(shù)×100%。(2)血清腫瘤標(biāo)志物：于治療前后分別采集兩組患者的外周靜脈血5 mL，離心10 min(3 000 r/min)后取血清。ELISA 法檢測血清癌胚抗原(CEA)、糖類抗原125(CA125)、糖類抗原153(CA153)水平，上海酶聯(lián)生物提供檢測試劑盒。(3)生化指標(biāo)：于治療前后分別采集兩組患者的外周靜脈血5 mL，離心10 min (3 000 r/min)后取血清。ELISA 法檢測血清血小板第4 因子(PF4)、中期因子(MK)、脂質(zhì)運(yùn)載蛋白-2(LCN-2)水平，上海酶聯(lián)生物提供PF4 檢測試劑盒，武漢艾美捷科技提供MK 檢測試劑盒，上海白益生物提供LCN-2 檢測試劑盒。(4)外周血PI3K/Akt 通路相關(guān)蛋白表達(dá)量：使用非抗凝管分別采集兩組患者治療前后空腹肘靜脈血2 mL，提取單核細(xì)胞。采用蛋白免疫印跡法(Western blot)檢測蛋白表達(dá)量：使用500 μL 裂解液提取單核細(xì)胞總蛋白，二喹啉甲酸法(BCA)檢測蛋白濃度，取蛋白樣品(30 μL)經(jīng)十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)，分離蛋白轉(zhuǎn)移至聚偏二氟乙烯(PVDF)膜上，加入磷酸化磷脂酰肌醇-3-激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)一抗[美國Abcam公司，稀釋比1∶1 000]、內(nèi)參GAPDH 稀釋液(稀釋比1∶3 000)孵育24 h (4℃)，室溫孵育山羊抗兔IgG 二抗(美國CST 公司，稀釋比1∶5 000) 1 h，使用Quantity One 軟件檢測蛋白條帶灰度值。(5)生活質(zhì)量和生存率：治療前后使用歐洲癌癥研究與治療組織生命質(zhì)量測定量表(EORTC QLQ-C30)評估生活質(zhì)量[9]，包括健康(1 項(xiàng))、功能(5 項(xiàng))、癥狀(9 項(xiàng))，每項(xiàng)0～3 分，分值越高表明生活質(zhì)量較好。治療結(jié)束后以門診復(fù)查、電話方式進(jìn)行隨訪，隨訪時(shí)間為1 年，統(tǒng)計(jì)隨訪期間生存情況。(6)毒副反應(yīng)：比較兩組患者治療期間的上消化道反應(yīng)、中性粒細(xì)胞減少、蛋白尿、血紅蛋白減少等不良反應(yīng)發(fā)生情況。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS24.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析數(shù)據(jù)。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差()表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者的臨床療效比較 聯(lián)合組患者的治療總有效率、疾病控制率均高于單一組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見表2。

表2 兩組患者的臨床療效比較[例(%)]Table 2 Comparison of clinical efficacy between the two groups[n(%)]

2.2 兩組患者治療前后的血清腫瘤標(biāo)志物水平比較 治療前，兩組患者的血清CEA、CA125、CA153水平比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。治療后，兩組患者的血清CEA、CA125、CA153 水平明顯低于治療前，且聯(lián)合組明顯低于單一組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見表3。

表3 兩組患者治療前后的血清腫瘤標(biāo)志物水平比較()Table 3 Comparison of serum tumor marker levels between the two groups()

表3 兩組患者治療前后的血清腫瘤標(biāo)志物水平比較()Table 3 Comparison of serum tumor marker levels between the two groups()

注：與同組治療前比較，aP＜0.05。Note:Compared with that in the same group before treatment,aP＜0.05.

時(shí)間治療前例數(shù)34 34治療后組別聯(lián)合組單一組t值P值聯(lián)合組單一組t值P值34 34 CEA(ng/mL)17.26±3.75 17.41±3.82 0.172 0.864 4.58±1.02a 10.22±2.41a 12.567 0.001 CA125(U/mL)95.38±18.71 94.43±17.52 0.216 0.830 40.31±9.46a 72.39±14.13a 11.001 0.001 CA153(U/mL)74.36±15.86 75.03±16.13 0.173 0.863 35.17±8.72a 56.61±12.27a 8.305 0.001

2.3 兩組患者治療前后的生化指標(biāo)比較 治療前，兩組患者的血清PF4、MK、LCN-2 水平比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。治療后，兩組患者的血清PF4、MK、LCN-2水平均較治療前降低，且聯(lián)合組患者治療后的血清PF4、MK、LCN-2 水平明顯低于單一組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見表4。

表4 兩組患者治療前后的生化指標(biāo)比較()Table 4 Comparison of biochemical indexes between the two groups()

表4 兩組患者治療前后的生化指標(biāo)比較()Table 4 Comparison of biochemical indexes between the two groups()

注：與同組治療前比較，aP＜0.05。Note:Compared with that in the same group before treatment,aP＜0.05.

時(shí)間治療前例數(shù)34 34治療后組別聯(lián)合組單一組t值P值聯(lián)合組單一組t值P值34 34 PF4(ng/mL)0.36±0.08 0.34±0.07 1.097 0.277 0.19±0.04a 0.26±0.06a 5.660 0.001 MK(pg/mL)706.41±135.42 711.28±147.09 0.142 0.887 413.21±97.76a 577.09±112.36a 6.416 0.001 LCN-2(ng/mL)95.36±20.78 96.51±22.07 0.221 0.826 65.76±12.05a 74.09±19.63a 2.109 0.039

2.4 兩組患者治療前后的外周血PI3K/Akt 通路相關(guān)蛋白表達(dá)量比較 治療前，兩組患者的p-PI3K、p-AKT 蛋白表達(dá)量比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。治療后，兩組患者的p-PI3K、p-AKT 蛋白表達(dá)量均較治療前降低，且聯(lián)合組明顯低于單一組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見表5。

表5 兩組患者治療前后的外周血PI3K/Akt 通路相關(guān)蛋白表達(dá)量比較()Table 5 The expression of PI3K/Akt pathway related protein in peripheral blood between the two groups()

表5 兩組患者治療前后的外周血PI3K/Akt 通路相關(guān)蛋白表達(dá)量比較()Table 5 The expression of PI3K/Akt pathway related protein in peripheral blood between the two groups()

注：與同組治療前比較，aP＜0.05。Note:Compared with that in the same group before treatment,aP＜0.05.

時(shí)間治療前例數(shù)34 34治療后組別聯(lián)合組單一組t值P值聯(lián)合組單一組t值P值34 34 p-PI3K 0.85±0.19 0.82±0.18 0.686 0.495 0.33±0.08a 0.79±0.14 16.635 0.001 p-AKT 0.78±0.13 0.80±0.15 0.588 0.559 0.28±0.04a 0.76±0.10 25.987 0.001

2.5 兩組患者治療前后的生活質(zhì)量比較 治療前，聯(lián)合組和單一組患者的EORTC QLQ-C30 評分分別為(75.43±5.03)分、(74.03±4.91)分，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=1.161，P＞0.05)。治療后，聯(lián)合組患者的EORTC QLQ-C30 評分為(116.32±9.13)分，明顯高于單一組的(101.24±8.46)分，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=7.064，P＜0.05)。

2.6 兩組患者的生存率和毒副反應(yīng)發(fā)生率比較 隨訪1年后，聯(lián)合組失訪2例、單一組失訪5例，聯(lián)合組患者的總生存率為93.75%(30/32)，明顯高于單一組的72.41%(21/29)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=5.053，P=0.025)。而兩組患者的毒副反應(yīng)發(fā)生率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，見表6。

表6 兩組患者的毒副反應(yīng)發(fā)生率比較[例(%)]Table 6 Comparison of the incidence of side effects between the two groups[n(%)]

3 討論

紫杉醇、順鉑化療可促進(jìn)微管聚合，抑制微管網(wǎng)重組，誘導(dǎo)細(xì)胞周期停滯于M 期，降低腫瘤細(xì)胞增殖能力[10]。曲妥珠單抗可結(jié)合HER2，減緩腫瘤生長進(jìn)程，提高侵襲性無病生存期[11-12]。本研究中聯(lián)合組總有效率、疾病控制率高于單一組，表明聯(lián)合治療可提高BC 治療效果，有效控制BC 發(fā)展進(jìn)程。CEA、CA125、CA153 屬于腫瘤標(biāo)志物，可用于監(jiān)測病情發(fā)展、評估預(yù)后[13]。本研究結(jié)果與其相似，聯(lián)合治療可降低CEA、CA125、CA153水平，表明TP方案加入曲妥珠單抗后全面抗BC作用更為高效，可能與細(xì)胞增殖、血管生成得以抑制有關(guān)。PF4、MK 可參與BC 血管生成過程，LCN-2 可調(diào)節(jié)EMT 相關(guān)蛋白表達(dá)，促進(jìn)BC 浸潤轉(zhuǎn)移[14]。本研究比較治療前后兩組患者的血清PF4、MK、LCN-2 水平，結(jié)果發(fā)現(xiàn)治療后聯(lián)合組患者的血清各指標(biāo)水平低于單一組，表明聯(lián)合治療可降低酪氨酸激酶活性，抑制腫瘤生長、轉(zhuǎn)移。分析原因可能為聯(lián)合治療可抑制DNA 合成、HER2 及其相關(guān)受體表達(dá)，調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞增殖、分化，有效抑制BC 病情進(jìn)展。

PI3K/Akt 通路可調(diào)節(jié)腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、淋巴管形成，HER2等細(xì)胞外信號刺激PI3K后Akt發(fā)生膜轉(zhuǎn)位，進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)可參與腫瘤遷移、黏附、細(xì)胞外基質(zhì)降解過程[15]。本研究說明聯(lián)合治療可降低p-PI3K、p-AKT蛋白表達(dá)。由此推測抑制PI3K/Akt 通路活化可能是聯(lián)合組療效顯著的原因之一。曲妥珠單抗對HER2具有高度親和力，可競爭性與惡性細(xì)胞或正常細(xì)胞HER2 胞外激酶結(jié)合，抑制PI3K 磷酸化、PI3K/Akt 通路活化，導(dǎo)致細(xì)胞周期停滯于G0/G1期，阻斷腫瘤細(xì)胞生長進(jìn)程，促進(jìn)細(xì)胞凋亡[16]。同時(shí)本研究分析結(jié)果顯示，治療后聯(lián)合組患者的EORTC QLQ-C30 評分高于單一組，這是由于大部分BC 患者經(jīng)長期治療后出現(xiàn)不同程度耐藥性，降低生活質(zhì)量；TP 化療聯(lián)合曲妥珠單抗可控制BC 進(jìn)展，表明聯(lián)合治療有助于提高生活質(zhì)量、生存率。BC 治療過程中可產(chǎn)生不同程度的毒副作用，本研究結(jié)果顯示，兩組患者的上消化道反應(yīng)、中性粒細(xì)胞減少、蛋白尿、血紅蛋白減少發(fā)生率比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，表明聯(lián)合治療并不會增加毒副反應(yīng)。

綜上所述，曲妥珠單抗聯(lián)合TP 化療方案治療BC效果顯著，可降低腫瘤標(biāo)志物和生化指標(biāo)水平，提高生存率，改善生活質(zhì)量，且具有一定安全性，其可能通過抑制PI3K/Akt通路活化發(fā)揮作用。