胎盤凍干粉顆粒毒理學評價

許超，魏偉

（廣州瑞鉑茵健康科技有限公司，廣東廣州 510663）

胎盤是哺乳動物妊娠期間與胎兒進行養(yǎng)分交換的重要組織。據(jù)《本草綱目》記載，胎盤俗稱紫河車，具有“益氣養(yǎng)血、補腎益精”之功效，作為一種珍貴的溫補中藥在我國已有悠久的歷史。胎盤中活性成分復雜，研究表明胎盤中富含酶、核酸、維生素、氨基酸、類固醇及脂肪酸等物質[1]。迄今為止，已有多項研究顯示，胎盤中提取的活性成分在傷口愈合和緩解炎癥方面有著顯著的療效[2-4]。此外，胎盤最重要的作用之一是保護胚胎免受氧化應激的影響，這主要歸因于胎盤中的多種抗氧化成分，如尿嘧啶、酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸[5-6]等。隨著人們健康意識的提高，市面上出現(xiàn)的抗氧化劑和抗衰老類藥物越來越多，但這些藥物大多是化學合成藥，雖然短期內療效顯著，但長期使用反而會降低體內抗氧化酶的表達，增強脂質過氧化水平，進而造成體內代謝調控紊亂，加快衰老進程[7-8]。胎盤是人類寶貴的生物資源，但其安全性問題卻飽受爭議。本文按照《保健食品檢驗與評價技術規(guī)范》對胎盤凍干粉顆粒進行毒理學評價，為其食用安全性提供實驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 受試物

胎盤凍干粉顆粒（0.05 g/粒×60 粒/瓶），人體推薦食用方法及食用量：口服，每日1 次，每次1 粒。

1.2 實驗動物及菌株

SPF 級KM 小鼠、SD 大鼠均購自廣東省醫(yī)學實驗動物中心，許可證號為SCXK（粵）2018—0002；質量合格證號：NO.44007200093777。

動物飼養(yǎng)管理條件：溫度20 ～26 ℃，濕度40%～70%，光照12 h 明暗交替。動物飼料由廣東省醫(yī)學實驗動物中心提供，實驗動物飼料生產(chǎn)許可證號為粵飼證（2019 年）05073。

1.3 儀器與試劑

PRACTUM612-1CN 系列天子天平，德國Sartorius公司；KDC-1044 低速離心機，安徽中科中佳科學儀器有限公司；7020 型全自動生化分析儀，日本日立公司；XT-2000iV 全自動五分類動物血液分析儀，日本Sysmex公司；CA-620凝血分析儀，日本Sysmex公司；H-800 尿液分析儀，迪瑞醫(yī)療科技股份有限公司。

多氯聯(lián)苯誘導的雄性SD 大鼠肝臟微粒體酶（S9）（批號3745），美國MOLTOX 公司；敵克松（Dexon）（批號40709），德國Dr. Ehrenstorfer GmbH 公司；疊氮鈉（SA）（批號0639），美國Amresco 公司；2-氨基芴（2-AF）（批號AG310001），美國Sigma 公司；1,8-二羥基蒽醌（1,8-DHQ）（批號A0248756），中國北京伊諾凱科技有限公司；環(huán)磷酰胺（CP）（批號WXBC4021V），美國Sigma 公司。

1.4 實驗方法

1.4.1 急性毒性實驗

本試驗采用限量法，只設10 g/（kg bw）1 個劑量。即取檢疫合格小鼠20 只，雌雄各半，實驗前動物禁食5 h，不限制飲水，空腹灌胃2 次，灌胃容量為每次30.0 mL/（kg bw），給予受試物后小鼠繼續(xù)禁食l h，觀察并記錄動物的中毒表現(xiàn)、死亡數(shù)和死亡時間，觀察期為14 d。參照《食品安全國家標準 急性經(jīng)口毒性試驗》（GB 15193.3—2014）4.3.2 條目和附錄G評價規(guī)定判斷毒性分級。

1.4.2 28 d 經(jīng)口毒性實驗

選用SD 大鼠80 只，體重60 ～80 g，隨機分為4組，分別為陰性對照組、低劑量組、中劑量組和高劑量組，每組20 只，雌雄各半；高劑量0.083 g/（kg bw），中劑量0.042 g/（kg bw），低劑量0.021 g/（kg bw），灌胃體積均為10 mL/（kg bw），陰性對照組給予等容量的純水，連續(xù)經(jīng)口灌胃28 d。連續(xù)喂養(yǎng)28 d 后，過夜禁食16 h 后稱重、麻醉，腹主動脈采血，進行血常規(guī)和血生化測定。

1.4.3 統(tǒng)計學方法

實驗數(shù)據(jù)采用SPSS 軟件進行統(tǒng)計分析。各指標均使用單因素方差分析（ANOVA），P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果與分析

2.1 急性毒性實驗

受試物以10 g/（kg bw）的劑量經(jīng)口灌胃給予雌、雄性KM 小鼠，連續(xù)觀察14 d，發(fā)現(xiàn)動物糞便、體毛、活動正常，動物體重變化未見異常，實驗期間未見其他明顯的動物中毒癥狀和死亡。結果表明該受試物對雌、雄性KM 小鼠的急性經(jīng)口毒性LD50大于10 g/（kg bw）。

2.2 28 d 經(jīng)口毒性實驗

2.2.1 受試物對大鼠血常規(guī)的影響

與陰性對照組比較，受試物各劑量組大鼠白細胞（WBC）、紅細胞（RBC）數(shù)量低于陰性對照組，但差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；受試物高劑量組血紅蛋白含量（HGB）、紅細胞比容（HCT）和血小板數(shù)量（PLT）高于陰性對照組，但差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），見表1。根據(jù)以上結果分析得出，該受試物各劑量組對大鼠血常規(guī)指標無顯著影響。

表1 胎盤凍干粉對大鼠血常規(guī)的影響（±s，n=20）

表1 胎盤凍干粉對大鼠血常規(guī)的影響（±s，n=20）

組別 WBC/（×109/L） RBC/（×1012/L） HGB/（g/L） HCT/% PLT/（×109/L）陰性對照組 3.81±1.16 7.09±0.28 140.30±5.58 40.97±1.57 968.2±69.7低劑量組 3.35±1.31 6.79±0.36 133.60±5.87 41.11±1.71 1 007.4±124.9中劑量組 3.38±1.29 6.92±0.19 137.00±3.50 40.39±0.08 966.7±62.8高劑量組 3.74±1.47 6.77±0.63 141.30±6.75 41.90±2.01 1 038.4±129.7

2.2.2 胎盤凍干粉對大鼠生化指標的影響

由表2 可知，受試物灌胃28 d 后，各劑量組大鼠血液生化指標總蛋白含量（TP）、血清白蛋白含量（ALB）、尿素氮（BUN）、肌酐（CRE）、谷草轉氨酶（AST）、谷丙轉氨酶（ALT）與陰性對照組比較均無顯著差異（P＞0.05），表明受試物對大鼠血液生化指標無明顯影響。

表2 胎盤凍干粉對大鼠血液生化指標的影響（±s，n=20）

表2 胎盤凍干粉對大鼠血液生化指標的影響（±s，n=20）

劑量 ALT/（U/L） AST/（U/L） BUN/（mmol/L） CRE/（μmol/L） TP/（g/L） ALB/（g/L）陰性對照組 30.90±5.93 85.00±11.73 7.43±1.26 12.60±2.59 52.83±2.17 34.42±2.08低劑量組 32.90±6.17 89.90±8.63 7.49±0.95 14.40±2.84 52.62±2.02 33.77±2.04中劑量組 30.80±6.14 83.20±11.94 7.38±0.81 14.20±2.86 54.17±4.32 35.34±3.20高劑量組 33.00±6.46 84.50±9.58 7.34±0.98 12.40±3.75 53.47±2.93 33.80±2.34

3 結論

本研究對冷凍干燥技術制備的胎盤凍干粉進行毒理學研究，受試物對雌、雄性KM 小鼠急性經(jīng)口毒性LD50＞10 g/（kg bw），屬實際無毒級。將受試樣品按0.083 g/（kg bw）、0.042 g/（kg bw）、0.021 g/（kg bw）的劑量對SPF 級雌、雄性SD 大鼠連續(xù)給予28 d，受試動物均未見明顯的中毒癥狀；體重、血常規(guī)指標、血液生化指標與陰性對照組比較均無差異。此外，動物一般生理體征、行為、大小便、皮毛等均未見異常。本研究結果表明，胎盤凍干粉口服后沒有毒性，安全性有保障，為胎盤凍干粉作為保健食品的進一步開發(fā)提供了實驗依據(jù)。