專(zhuān)利中藥復(fù)方治療功能性便秘的用藥規(guī)律及機(jī)制研究

高松林，韋柳婷，覃雁，吳美玲，黃萱，黃貴華（. 廣西中醫(yī)藥大學(xué)，廣西 南寧 530000；. 廣西中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，廣西 南寧 530000）

功能性便秘（functional constipation）是一種常見(jiàn)的以排便次數(shù)減少、排便困難為特點(diǎn)的功能性胃腸道疾病[1]。功能性便秘的診斷多依照羅馬標(biāo)準(zhǔn)，按照羅馬Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ標(biāo)準(zhǔn)診斷的全球成人患病率分別為11.2%、10.4%和10.1%[2]；我國(guó)成人患病率分別為10.6%、6.5%和8.1%，女性患病率高于男性[3]。功能性便秘的病因尚不清楚，其發(fā)病機(jī)制與結(jié)、直腸動(dòng)力及盆底肌功能、腦腸軸、腸道菌群、黏膜免疫功能改變等相關(guān)[4-8]。

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)治療功能性便秘的主要方法是生活方式干預(yù)、藥物療法、生物反饋療法和手術(shù)治療等，具有良好的短期療效，但缺乏長(zhǎng)期有效性和安全性[9-10]。

中醫(yī)治療功能性便秘注重整體觀念和辨證論治，療效確切，具有遠(yuǎn)期療效佳、安全性強(qiáng)等優(yōu)勢(shì)[11-12]。中藥復(fù)方專(zhuān)利源于長(zhǎng)期反復(fù)的臨床實(shí)踐，具有較好的療效和可重復(fù)性，為新藥研發(fā)的重要來(lái)源。

本研究整合數(shù)據(jù)挖掘、網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和分子對(duì)接方法探討國(guó)家專(zhuān)利復(fù)方防治功能性便秘的用藥規(guī)律和作用機(jī)制，以期為臨床提供參考。

1 資料與方法

1.1 數(shù)據(jù)來(lái)源 登錄國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局的中國(guó)專(zhuān)利公布公告網(wǎng)（http://epub.cnipa.gov.cn/），在高級(jí)查詢(xún)界面中同時(shí)選擇“發(fā)明授權(quán)”及“發(fā)明公布”選項(xiàng)，在“文本-名稱(chēng)”或“文本-摘要/簡(jiǎn)要說(shuō)明”項(xiàng)目中輸入“功能性便秘”“慢傳輸型便秘”分別進(jìn)行檢索。檢索時(shí)間范圍為建庫(kù)至2022 年9 月3 日。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 納入標(biāo)準(zhǔn)：專(zhuān)利名稱(chēng)或摘要或簡(jiǎn)要說(shuō)明中，明確指出用于功能性便秘的中藥復(fù)方專(zhuān)利。

1.2.2 排除標(biāo)準(zhǔn)：①用法為外用的專(zhuān)利（包括貼劑、熨燙劑、精油、灌腸等）；②專(zhuān)利處方中組成不明確且在中國(guó)知網(wǎng)專(zhuān)利數(shù)據(jù)庫(kù)下載全文后仍不能補(bǔ)充完整者；③食品、飲品、保健品類(lèi)專(zhuān)利；④只有單味中藥的專(zhuān)利處方。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)一及錄入 參照《中藥學(xué)》[13]對(duì)藥名規(guī)范處理，未收錄的中藥則參考2020 年版《中華人民共和國(guó)藥典》[14]，若在二者中均未收錄則保留原名。如元參、麻仁、附片、雞屎藤、生地、熟地分別規(guī)范為玄參、火麻仁、附子、雞矢藤、生地黃、熟地黃；炒枳實(shí)、焦神曲分別規(guī)范為枳實(shí)、六神曲。雙人雙機(jī)分別在Excel 表中錄入和校對(duì)處方數(shù)據(jù)，組成相同的專(zhuān)利僅錄入1 次。將整理后的Excel 表導(dǎo)入中醫(yī)傳承計(jì)算平臺(tái)V3.0（TCMICS V3.0）進(jìn)行數(shù)據(jù)挖掘。

1.4 數(shù)據(jù)分析 使用“TCMICS V3.0”平臺(tái)，在“方劑分析”模塊中選擇藥物頻數(shù)、關(guān)聯(lián)規(guī)則、聚類(lèi)分析等功能對(duì)復(fù)方專(zhuān)利中藥物的頻數(shù)、組方規(guī)律等進(jìn)行分析，運(yùn)用Excel 表分析高頻藥物的性味歸經(jīng)和功效。

1.5 網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析 基于TCMSP 數(shù)據(jù)庫(kù)（https://tcmspw.com/tcmsp.php）以口服生物利用度（OB）≥30%且類(lèi)藥性（DL）≥0.18 為條件篩選出核心高頻藥物組的活性成分和作用靶點(diǎn)，借助Uniprot 數(shù)據(jù)庫(kù)（https://www.uniprot.org/），以Status 設(shè)為Reviewed、Popular organisms 設(shè) 為Human” 對(duì) 靶 點(diǎn) 進(jìn) 行 規(guī) 范。 在GeneCards（https://www.genecards.org/）、OMIM（https://omim.org/）、TTD（http://db.idrblab.net/ttd/）和DrugBank數(shù) 據(jù) 庫(kù)（https://go.drugbank.com/）中 以“functional constipation”作為關(guān)鍵詞執(zhí)行檢索，合并去重后獲得功能性便秘的相關(guān)靶點(diǎn)。利用R 軟件進(jìn)行Venn 分析獲取核心高頻藥組與功能性便秘的交集靶點(diǎn)，采用Cytoscape 3.8.0 構(gòu)建中藥-活性成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)并篩選關(guān)鍵活性成分。將交集靶點(diǎn)上傳至STRING 數(shù)據(jù)庫(kù)（https://string-db.org/），設(shè)定生物種類(lèi)為“Homo sapiens”， 最小互相作用閾值設(shè)定為“highest confidence”（＞0.95），隱藏游離的靶點(diǎn)，構(gòu)建蛋白互作（PPI）網(wǎng)絡(luò)模型，通過(guò)Cytoscape 3.8.0 對(duì)PPI 網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行分析。使用R 軟件對(duì)交集靶點(diǎn)進(jìn)行富集分析。通過(guò)PubChem 數(shù)據(jù)庫(kù)、PDB 數(shù)據(jù)庫(kù)下載核心活性成分、關(guān)鍵靶點(diǎn)的結(jié)構(gòu)，結(jié)合Chem3D 軟件、PyMol軟件、AutoDockTools 1.5.6 軟件進(jìn)行預(yù)處理，運(yùn)用AutoDockVina 1.1.2 軟件進(jìn)行分子對(duì)接。

2 結(jié)果

2.1 數(shù)據(jù)挖掘結(jié)果

2.1.1 專(zhuān)利復(fù)方檢索結(jié)果 初步檢索共獲得專(zhuān)利279 項(xiàng)，由于“文本-名稱(chēng)”項(xiàng)目檢索出來(lái)的結(jié)果大部分都存在于“文本-摘要/簡(jiǎn)要說(shuō)明”項(xiàng)目檢索的結(jié)果中，故重復(fù)的復(fù)方專(zhuān)利較多，經(jīng)去重、篩選后共納入專(zhuān)利72 項(xiàng)。72 項(xiàng)復(fù)方專(zhuān)利的申請(qǐng)公布日或授權(quán)公告日為1998 年9 月30 日—2022 年8 月30 日。

2.1.2 高頻藥物頻數(shù)分析 見(jiàn)表1。72 項(xiàng)復(fù)方專(zhuān)利共涉及262 種中藥，總頻數(shù)達(dá)691 次，每項(xiàng)復(fù)方專(zhuān)利的中藥味數(shù)在2～40 味之間。高頻藥物有白術(shù)（26 次，36.11%）、甘草（24 次，33.33%）、肉蓯蓉（20 次，27.78%）、枳實(shí)（19 次，26.39%）、當(dāng)歸（19 次，26.39%）、火麻仁（18 次，25.00%）等20 味。

表1 防治功能性便秘專(zhuān)利中藥復(fù)方的高頻藥物統(tǒng)計(jì)（頻數(shù)≥10 次）Table 1 High-frequency statistics of patented Chinese herbal compounds for the treatment of functional constipation（frequency ≥10）

2.1.3 高頻藥物功效分析 見(jiàn)表2。對(duì)20 味高頻中藥進(jìn)行功效分類(lèi)統(tǒng)計(jì)，發(fā)現(xiàn)補(bǔ)虛藥最多，其次是理氣藥和清熱藥，隨后依次是瀉下藥、化濕藥和活血化瘀藥。

表2 治療功能性便秘專(zhuān)利中藥復(fù)方的藥物功效頻數(shù)統(tǒng)計(jì)（頻數(shù)≥11 次）Table 2 Frequency statistics of the drug efficacy of patented Chinese herbal compounds in the treatment of functional constipation（frequency ≥11）

2.1.4 高頻藥物藥性分析 見(jiàn)圖1。對(duì)高頻中藥進(jìn)行四氣、五味、歸經(jīng)分析，結(jié)果表明四氣以溫（114 次）、微寒（67 次）、平（63 次）、寒（36 次）、微溫（14 次）為主，無(wú)涼性藥；五味以甘（179 次）、苦（177 次）、辛（112 次）、酸（44 次）、咸（31 次），微苦（12 次）為主，無(wú)淡味、澀味藥。歸經(jīng)以脾（204 次）、胃（172 次）為主，肺（98 次）和大腸（98 次）次之。

圖1 治療功能性便秘專(zhuān)利復(fù)方中藥高頻藥物的四氣（A）、五味（B）和歸經(jīng)（C）統(tǒng)計(jì)（頻數(shù)/次）Figure 1 Statistics of medicinal properties（A），flavours（B）and meridian tropism（C）of high-frequency drugs（frequency/time）of patented Chinese herbal compounds in the treatment of functional constipation

2.1.5 基于關(guān)聯(lián)規(guī)則的組方規(guī)律分析 當(dāng)設(shè)置支持個(gè)數(shù)=9（支持度12.5%），置信度=0.9 時(shí)，置信度可以用來(lái)衡量關(guān)聯(lián)規(guī)則的可信程度的大小，獲得8 個(gè)常用藥物組合，見(jiàn)表3。核心組方為白術(shù)、當(dāng)歸、肉蓯蓉、黃芪、甘草、厚樸、枳實(shí)，網(wǎng)絡(luò)展示見(jiàn)圖2。當(dāng)置信度≥0.7 時(shí)，結(jié)果顯示多種藥物關(guān)聯(lián)規(guī)則，見(jiàn)表4。

圖2 治療功能性便秘專(zhuān)利中藥復(fù)方的核心藥物關(guān)系網(wǎng)絡(luò)Figure 2 The relationship network of core drugs of patented Chinese herbal compounds in the treatment of functional constipation

表3 治療功能性便秘專(zhuān)利中藥復(fù)方中高頻藥物組合Table 3 Combinations of high-frequency drugs in the patented Chinese herbal compounds in the treatment of functional constipation

表4 治療功能性便秘專(zhuān)利中藥復(fù)方中藥物的關(guān)聯(lián)規(guī)則（置信度≥0.7）Table 4 Association rules of drug in the patented Chinese herbal compounds in the treatment of functional constipation（confidence ≥0.7）

2.1.6 聚類(lèi)分析 見(jiàn)圖3、表5。設(shè)置聚類(lèi)個(gè)數(shù)為4，將72 首專(zhuān)利復(fù)方聚類(lèi)為4 類(lèi)。

圖3 治療功能性便秘專(zhuān)利中藥復(fù)方方劑聚類(lèi)分析圖Figure 3 Diagram of the cluster analysis of the patented Chinese herbal compounds

表5 治療功能性便秘專(zhuān)利中藥復(fù)方中的藥物聚類(lèi)分析Table 5 Cluster analysis of drug in the patented Chinese herbal compounds in the treatment of functional constipation

2.2 網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析結(jié)果

2.2.1 核心高頻藥物組相關(guān)靶點(diǎn)篩選 見(jiàn)表6。經(jīng)篩選、去重后共獲取到核心高頻藥物組（白術(shù)-當(dāng)歸-肉蓯蓉）的14 個(gè)活性成分和190 個(gè)潛在靶點(diǎn)，規(guī)范化后最終得到潛在靶點(diǎn)163 個(gè)，涉及活性成分11 種。

2.2.2 核心高頻藥物組治療功能性便秘的潛在作用靶點(diǎn)預(yù)測(cè) 見(jiàn)圖4。將從4 個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)獲取的功能性便秘靶點(diǎn)整理去重后最終得到5 514 個(gè)，其中133 個(gè)靶點(diǎn)為核心高頻藥物組和功能性便秘的交集靶點(diǎn)。

圖4 核心高頻藥物組（白術(shù)-當(dāng)歸-肉蓯蓉）-功能性便秘靶點(diǎn)的韋恩圖Figure 4 Venn diagram of core high-frequency drug combination（Cistanches Herba-Angelicae Sinensis Radix-Atractylodis Macrocephalae Rhizoma）-functional constipation targets

2.2.3 中藥-活性成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建 使用Cytoscape 3.8.0 軟件對(duì)133 個(gè)交集靶點(diǎn)進(jìn)行中藥-活性成分-靶點(diǎn)圖的構(gòu)建（圖5）并篩選出度值靠前的5 位活性成分（表7）。

圖5 高頻藥物組治療功能性便秘的“中藥-活性成分-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)圖Figure 5 Network diagram of “TCM-active comprnents-targets”of high frequency drug combination for the treatment of functional constipation

表7 度值排前5 位的活性成分Table 7 Active components with the top 5 of the degree value

2.2.4 核心高頻藥物組防治功能性便秘潛在靶點(diǎn)PPI網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建 將交集靶點(diǎn)傳至STRING 數(shù)據(jù)庫(kù)得到PPI 網(wǎng)絡(luò)圖（圖6），通過(guò)Cytoscape 3.8.0 軟件分析DC、BC、EC、CC、NC 和LAC 拓?fù)鋮?shù)，以6 個(gè)數(shù)值均大于其中位數(shù)的節(jié)點(diǎn)為條件，進(jìn)行2 次篩選，得到蛋白激酶B1（AKT1）、熱休克蛋白90AA1（HSP90AA1）、 MYC、 缺 氧 誘 導(dǎo) 因 子1 亞 基α（HIF1A）、腫瘤抑制因子P53（TP53）和細(xì)胞周期蛋白1（CCND1）等6 個(gè)核心靶點(diǎn)（圖7）。

圖6 核心高頻藥物組防治功能性便秘潛在靶點(diǎn)的PPI 網(wǎng)絡(luò)模型Figure 6 Network model of PPI of high frequency drug combination for the treatment of functional constipation

圖7 核心高頻藥物組防治功能性便秘潛在靶點(diǎn)的PPI 網(wǎng)絡(luò)拓?fù)浞治龊诵幕騀igure 7 Topological analysis of core genes in PPI networks of high frequency drug combination for the treatment of functional constipation

2.2.5 交集靶點(diǎn)的通路富集分析 GO 富集分析得到2 181 個(gè)生物過(guò)程（BP）條目，主要包括對(duì)藥物反應(yīng)、活性氧代謝過(guò)程、對(duì)化學(xué)壓力的反應(yīng)等；72 個(gè)細(xì)胞組成（CC）條目，主要在膜筏、突觸后膜、突觸前膜等處發(fā)揮作用；172 個(gè)分子功能（MF）條目，主要富集在DNA-結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合、核受體活性、配體-激活轉(zhuǎn)錄因子活性等，KEGG 富集分析得到磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）、糖基化終產(chǎn)物（AGE）/糖基化終產(chǎn)物受體（RAGE）、絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）、腫瘤壞死因子（TNF）、白細(xì)胞介素（IL）-17、缺氧誘導(dǎo)因子（HIF）-1 等172 條通路。對(duì)排位靠前的條目進(jìn)行繪圖，見(jiàn)圖8 和圖9。

圖8 核心高頻藥物組-功能性便秘的GO 基因功能富集分析（前10 位）Figure 8 GO enrichment analysis of the targets of the core highfrequency drug combination-functional constipation（top 10）

圖9 核心高頻藥物組-功能性便秘的KEGG 通路分析（前30 位）Figure 9 KEGG enrichment analysis of the core high-frequency drug combination-functional constipation（top 30）

2.2.6 核心化學(xué)成分與關(guān)鍵靶點(diǎn)的分子對(duì)接 將度值排前3 位的活性成分與“2.2.4”項(xiàng)下的核心靶點(diǎn)進(jìn)行分子對(duì)接，結(jié)果顯示二者對(duì)接的最低結(jié)合能均≤-5 kcal·mol-1，可見(jiàn)結(jié)合活性較強(qiáng)[15]。并以功能性便秘臨床常用藥物莫沙必利（Mosapride）作為陽(yáng)性對(duì)照藥物，對(duì)接結(jié)果見(jiàn)表8。槲皮素-HIF1A 和槲皮素-CCND1 的結(jié)合活性最強(qiáng)，PyMol 軟件展示見(jiàn)圖10。

圖10 部分活性成分和關(guān)鍵靶點(diǎn)分子對(duì)接圖Figure 10 Molecular docking diagram of some active components and key targets

表8 分子對(duì)接結(jié)果Table 8 Molecular docking results

3 討論

3.1 從高頻用藥、性味歸經(jīng)和功效統(tǒng)計(jì)方面分析用藥規(guī)律 在治療功能性便秘的72 個(gè)復(fù)方專(zhuān)利處方中，高頻藥物有白術(shù)、甘草、肉蓯蓉、枳實(shí)、當(dāng)歸、火麻仁等20 味中藥，以補(bǔ)虛、理氣、清熱、瀉下、化濕、活血化瘀功效為主，這與便秘患者氣血陰陽(yáng)虧虛、氣滯、熱結(jié)、濕阻、血瘀病機(jī)的認(rèn)識(shí)一致[16-21]。白術(shù)在專(zhuān)利復(fù)方中出現(xiàn)的頻率最高，為健脾補(bǔ)氣要藥，其水溶性成分可以通過(guò)促進(jìn)胃腸動(dòng)力達(dá)到通便的效果[22-23]。肉蓯蓉的有效成分總寡糖能夠明顯升高5-羥色胺、血管活性腸肽、神經(jīng)降壓素，降低水通道蛋白3（AQP3），潤(rùn)暢通便效果較好[24]。枳實(shí)可以通過(guò)增加Cajal 間質(zhì)細(xì)胞（ICC）中X 連鎖凋亡抑制蛋白、增殖細(xì)胞核抗原蛋白的表達(dá)促進(jìn)ICC 的增殖，改善腸道運(yùn)動(dòng)功能障礙[25]。當(dāng)歸有助于結(jié)腸黏膜萎縮的恢復(fù)，促進(jìn)黏液分泌，增加糞便含水量，緩解便秘[26]。火麻仁油能調(diào)節(jié)腸內(nèi)短鏈脂肪酸（SCFAs）水平和腸道菌群改善便秘[27]。高頻藥物性味歸經(jīng)顯示性溫，味苦、甘、辛，歸屬脾、胃、肺、大腸四經(jīng)的藥物最多。溫藥具有溫中散寒、溫陽(yáng)通脈、溫陽(yáng)化氣等作用，既能散寒凝、血瘀之標(biāo)實(shí)，又能溫陽(yáng)助運(yùn)以治其本?？嗄苄梗逍够馃?，泄降肺胃之氣逆，令氣機(jī)調(diào)達(dá)，腸腑暢通。甘能補(bǔ)、能和，補(bǔ)益氣血津液，恢復(fù)腸道濡養(yǎng)狀態(tài)。辛味能散能行，能開(kāi)腠理、行氣滯、布津液發(fā)揮潤(rùn)燥的作用，亦有“辛潤(rùn)法”之稱(chēng)[28]。

3.2 從關(guān)聯(lián)規(guī)則分析藥物配伍規(guī)律 關(guān)聯(lián)規(guī)則結(jié)果數(shù)值越大，說(shuō)明其相關(guān)性高。綜合藥物頻次、支持度和置信度排位發(fā)現(xiàn)核心高頻藥物組是白術(shù)-肉蓯蓉-當(dāng)歸。白術(shù)歸脾胃經(jīng)，善于益氣健脾、燥濕利水，肉蓯蓉歸腎、大腸經(jīng)，善于補(bǔ)腎陽(yáng)、益精血，當(dāng)歸歸肝、心、脾經(jīng)，為血中圣藥，善于補(bǔ)血活血、潤(rùn)腸通便，三者配伍以補(bǔ)益為主，氣血互用，寓通于補(bǔ)，兼水濕、血瘀同治。核心組方包括白術(shù)、當(dāng)歸、肉蓯蓉、黃芪、甘草、厚樸、枳實(shí)7 味藥物，可看做是枳術(shù)丸、當(dāng)歸補(bǔ)血湯、小承氣湯、濟(jì)川煎等方劑的加減，臨床療效較佳[29-30]。其中關(guān)于枳術(shù)丸治療便秘的機(jī)制研究最多，其可能通過(guò)激活磷脂酶C-γ 信號(hào)通路、PI3K/AKT 信號(hào)、提高血清鈣離子的濃度、調(diào)節(jié)胃腸激素水平等促進(jìn)胃腸運(yùn)動(dòng)[31-34]。

3.3 從藥物聚類(lèi)分析處方核心組合 從聚類(lèi)分析來(lái)看，可分為四類(lèi)。第一類(lèi)：菊花、決明子、馬齒莧、枸杞子、金銀花、甘草，以清熱解毒，潤(rùn)腸通便為主。第二類(lèi)：火麻仁、白芍、肉蓯蓉、甘草、白術(shù)、決明子，以芍藥甘草湯為基礎(chǔ)加減，酸甘化陰，滋養(yǎng)脾陰，白術(shù)益氣健脾，火麻仁、肉蓯蓉、決明子潤(rùn)腸通便，以益氣養(yǎng)陰，潤(rùn)腸通便為主。第三類(lèi)：甘草、當(dāng)歸、枳殼、肉蓯蓉、黨參、白術(shù)，可看做為四君子湯加減，以健脾助運(yùn)，潤(rùn)腸通便為主，兼行氣導(dǎo)滯。第四類(lèi)：枳實(shí)、白術(shù)、玄參、麥冬、生地黃、甘草，為增液湯合枳術(shù)丸加減，既可行增水行舟使水滿(mǎn)舟行，又可健脾消痞使“四季脾旺不受邪”，以滋陰潤(rùn)腸、運(yùn)脾通便為主。

3.4 運(yùn)用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析核心高頻藥組可能的作用機(jī)制 基于數(shù)據(jù)挖掘研究結(jié)果，發(fā)現(xiàn)白術(shù)、肉蓯蓉、當(dāng)歸是防治功能性便秘的高頻藥物，三藥不僅作為常用藥物組合出現(xiàn)，而且也在核心藥物關(guān)系網(wǎng)絡(luò)和聚類(lèi)分析中列出，可見(jiàn)其為核心高頻藥組。白術(shù)-肉蓯蓉-當(dāng)歸治療功能性便秘的主要活性成分可能為槲皮素、β-谷甾醇和豆甾醇等。槲皮素能通過(guò)調(diào)節(jié)毒蕈堿乙酰膽堿受體下游信號(hào)、增加ICC 標(biāo)志物（酪氨酸激酶受體和干細(xì)胞因子）以及降低AQP3 的水平緩解洛哌丁胺誘導(dǎo)的大鼠便秘[35-36]。β-谷甾醇具有改變小鼠腸道菌群結(jié)構(gòu)并將其恢復(fù)到接近正常水平的潛力[37]。豆甾醇可能通過(guò)調(diào)節(jié)腸道菌群及其代謝物SCFAs 來(lái)恢復(fù)輔助性調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞/T 細(xì)胞17（Treg/Th17）平衡以改善腸道炎癥[38]。

白術(shù)-肉蓯蓉-當(dāng)歸治療功能性便秘的核心靶點(diǎn)有AKT1、HSP90AA1、MYC、HIF1A、TP53 和CCND1等。AKT1 是AKT 的一個(gè)亞型，通過(guò)調(diào)節(jié)AKT/核因子（NF）-κB 信號(hào)通路能夠促進(jìn)慢傳輸型便秘（STC）小鼠排便、改善腸道流動(dòng)性和增強(qiáng)ICC 增殖[39]。HSP90AA1 可以誘導(dǎo)結(jié)直腸癌細(xì)胞系的增殖、遷移和凋亡[40]。抑制c-Myc 介導(dǎo)的干擾素基因刺激因子活性，可以降低血清γ-干擾素（IFN-γ）和TNF-α 等炎性細(xì)胞因子的表達(dá)[41]。TNF-α 在小鼠結(jié)腸黏膜和肌層炎癥中發(fā)揮重要作用，并且TNF-α 可以通過(guò)作用于平滑肌直接誘導(dǎo)運(yùn)動(dòng)功能障礙[42]。HIF-1α 與腸道屏障的完整性和炎癥因子的轉(zhuǎn)錄調(diào)控有關(guān)[43]。IFN-γ以時(shí)間和劑量依賴(lài)性方式作用于NF-κB 通路提高HIF-1α 的表達(dá)，引發(fā)腸道屏障功能障礙和緊密連接蛋白破壞[44]。Tp53 通過(guò)唾液酸代謝在維持腸道微生物群共生和免疫穩(wěn)態(tài)中發(fā)揮著關(guān)鍵作用，其突變導(dǎo)致的唾液酸代謝失調(diào)可能會(huì)引發(fā)腸道微生態(tài)失調(diào)導(dǎo)致慢性炎癥[45]。CCND1 可以調(diào)節(jié)細(xì)胞周期從G1 期到S 期的進(jìn)程，位于蘇氨酸286 的突變體在調(diào)節(jié)炎癥和腫瘤發(fā)展中具有關(guān)鍵作用[46]。

KEGG 富集分析得到PI3K/Akt、AGE/RAGE、MAPK、TNF、IL-17、HIF-1 等信號(hào)通路。洛哌丁胺誘導(dǎo)的SD 大鼠便秘與補(bǔ)體C3 及其受體下游PI3K/AKT、RAS 同源基因家族成員A（RhoA）/肌球蛋白輕鏈（MLC）、MAPK 信號(hào)通路的上調(diào)密切相關(guān)[47]。有研究[48]發(fā)現(xiàn)抑制PI3K/Akt/雷帕霉素靶蛋白（mTOR）通路可以促進(jìn)谷氨酸誘導(dǎo)的ICC 的凋亡、自噬和焦亡治療STC。有學(xué)者[49]認(rèn)為AGE-RAGE 信號(hào)通路與腸道通透性有關(guān)，RAGE 可作為腸道屏障完整性的調(diào)節(jié)劑。AGE 和RAGE 水平升高可能導(dǎo)致糖尿病胃腸道功能障礙[50]。使用蛋白質(zhì)印跡法和聚合酶鏈反應(yīng)測(cè)量STC 誘導(dǎo)的大鼠腸組織中MAPK 和細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶（ERK）表達(dá)，發(fā)現(xiàn)二者顯著升高[51]。阻斷MAPK/ERK 通路信號(hào)能夠改善胃腸動(dòng)力障礙治療便秘[52]。IL-17A 通過(guò)上調(diào)肌層巨噬細(xì)胞中的一氧化氮合酶表達(dá)誘導(dǎo)腸道運(yùn)動(dòng)障礙[53]。

綜上所述，在治療功能性便秘的國(guó)家專(zhuān)利復(fù)方中，白術(shù)、甘草、肉蓯蓉、枳實(shí)、當(dāng)歸等為高頻藥物，藥物功效以補(bǔ)虛藥、理氣藥、清熱藥、瀉下藥、化濕藥和活血化瘀藥為主，性味以甘溫為主，主歸脾、胃、肺和大腸經(jīng)。最常用的藥對(duì)為肉蓯蓉-當(dāng)歸，核心高頻藥組是肉蓯蓉-當(dāng)歸-白術(shù)，核心處方組成為白術(shù)、當(dāng)歸、肉蓯蓉、黃芪、甘草、厚樸、枳實(shí)。核心高頻藥組肉蓯蓉-當(dāng)歸-白術(shù)可能通過(guò)槲皮素、β-谷甾醇、豆甾醇等活性成分，調(diào)節(jié)AKT1、HSP90AA1、MYC、HIF1A、TP53 和CCND1等核心靶點(diǎn)，調(diào)控PI3K/Akt、AGE/RAGE、MAPK、TNF、IL-17、HIF-1 等信號(hào)通路發(fā)揮恢復(fù)腸道動(dòng)力、調(diào)節(jié)腸道菌群、抑制炎癥反應(yīng)等作用治療功能性便秘。本研究基于中國(guó)專(zhuān)利數(shù)據(jù)庫(kù)、數(shù)據(jù)挖掘、網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和分子對(duì)接方法挖掘防治功能性便秘的國(guó)家專(zhuān)利復(fù)方的潛在用藥規(guī)律及作用機(jī)制，后續(xù)仍需結(jié)合臨床實(shí)踐，進(jìn)行相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)研究和臨床驗(yàn)證，為其臨床有效防治功能性便秘提供更準(zhǔn)確的證據(jù)。