霍山石斛鮮品對(duì)慢性酒精性肝損傷小鼠的保護(hù)作用研究

姚靜，劉翠玲，孫輝，何秋婷，梁奇（廣州中醫(yī)藥大學(xué)附屬寶安中醫(yī)院，廣東 深圳 518101）

酒精性肝?。ˋlcoholic liver disease，ALD）是一種因長期或過量飲酒引起的肝臟疾病，臨床上常表現(xiàn)為不同程度的肝損傷形式。ALD 的病理發(fā)展包括肝脂肪變性、脂肪性肝炎、纖維化和/或肝硬化的重疊和進(jìn)展階段，其中早期的ALD 病變是可逆的[1]，因此ALD 早期階段的防治具有重要意義?；羯绞―endrobium huoshanenseC. Z. Tang et S. J. Cheng）俗稱“米斛”， 是蘭科石斛屬多年生草本植物，其性微寒， 味甘、淡， 具有生津止渴、益精強(qiáng)陰、補(bǔ)虛羸、除胃中虛火之功效?，F(xiàn)代研究[2-6]表明，霍山石斛具有抗炎、抗氧化、調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝、保肝等藥理作用，對(duì)ALD、非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）、藥物性肝損傷、化學(xué)性肝損傷、肝纖維化等多種肝臟疾病都有良好的治療和預(yù)防作用。中醫(yī)認(rèn)為酒為大熱有毒之品，易傷津液，日久必?fù)p及真陰[5]。石斛為滋陰要藥，擅長滋陰補(bǔ)虛，尤其擅長治療酒毒誘發(fā)的脾腎陰虛。名老中醫(yī)施今墨認(rèn)為鮮石斛甘寒汁濃，擅養(yǎng)胃陰、生津液、清虛熱、止煩渴[6]。石斛以鮮品入藥，可取其更多的汁液，以增強(qiáng)養(yǎng)陰生津、清熱退熱、泄熱除煩之功，因而以“鮮用尤佳”。故本研究擬以慢性乙醇灌胃的方式復(fù)制酒精性肝損傷小鼠模型，比較霍山石斛鮮品藥材與干品藥材對(duì)慢性酒精性肝損傷模型小鼠的療效差異，以期明確霍山石斛鮮品藥材在抗酒精性肝損傷方面的優(yōu)勢(shì)，為其臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，促進(jìn)藥食兩用中藥鮮藥的臨床應(yīng)用。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物 8～10 周齡雄性C57BL/6N 小鼠60 只，SPF級(jí)，體質(zhì)量（24±2）g，購自浙江維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（浙）2019-0001，動(dòng)物質(zhì)量合格證號(hào)：20220209Abzz0619000459。動(dòng)物飼養(yǎng)于廣州中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，飼養(yǎng)環(huán)境：相對(duì)溫度22～28 ℃，相對(duì)濕度60%，自由飲水和攝食。動(dòng)物適應(yīng)性飼養(yǎng)1 周后開始實(shí)驗(yàn)。本實(shí)驗(yàn)經(jīng)廣州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，批文號(hào)：20211110014。

1.2 藥物及試劑 霍山石斛鮮品、干品藥材分別購自安徽省六安市霍山縣市場(chǎng)和深圳市宏盛昌中藥飲片有限公司，經(jīng)廣州中醫(yī)藥大學(xué)附屬寶安中醫(yī)院主任中藥師梁奇鑒定為蘭科石斛屬霍山石斛（Dendrobium huoshanenseC. Z. Tang et S. J. Cheng）的莖?；羯绞善匪逡褐苽洌悍Q取130 g 霍山石斛干品藥材，浸泡30 min，常規(guī)煎煮2 次，濾過；合并2 次濾液，濃縮至生藥量為0.13 g·mL-1的霍山石斛干品水煎液，冷卻后分裝，置于-20 ℃冰箱備用。鮮霍山石斛汁制備：稱取鮮霍山石斛藥材500 g，洗凈后晾干水分，置于破壁機(jī)中，加入1 000 mL 水；粉碎，濾過，制成生藥量為0.5 g·mL-1的鮮霍山石斛汁，分裝后置于-20 ℃冰箱備用。

55°原漿酒，深圳市海望科技有限公司，批號(hào)：SC11544142400122；4%多聚甲醛組織固定液，北京蘭杰柯科技有限公司，批號(hào)：21230593；二甲苯，上海麥克林生化科技有限公司，批號(hào)：C11300953；蛋白酶抑制劑混合物（批號(hào)：P1010）、Pierce BCA 蛋白定量試劑盒（批號(hào)：WK342259），均購自賽默飛世爾生物化學(xué)制品（北京）有限公司；丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（ALT/GPT，批號(hào)：20220505）、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（AST/GOT，批號(hào)：20220507）、總膽固醇（TC，批號(hào)：20220507）、甘油三酯（TG，批號(hào)：20220509）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C，批號(hào)：20220509）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C，批號(hào)：20220509）、總超氧化物歧化酶（SOD，批號(hào)：20220507）、丙二醛（MDA，批號(hào)：20220507）測(cè)定試劑盒，均購自南京建成生物工程研究所；腫瘤壞死因子α（TNF-α，批號(hào)：A28220233）、白細(xì)胞介素6（IL-6，批號(hào)：A20620224）、 白 細(xì) 胞 介 素 1β（IL- 1β， 批 號(hào)：A201B20344）ELISA 檢測(cè)試劑盒，均購自杭州聯(lián)科生物技術(shù)股份有限公司。

1.3 主要儀器 SCIENTZ-48 型高通量組織研磨器，寧波新芝生物科技股份有限公司；BioteK 多功能酶標(biāo)儀，美國伯騰公司；BX43 型光學(xué)顯微鏡，日本OLYMPUS 公司；SIGMA1-14K 型小型臺(tái)式冷凍離心機(jī)，德國SIGMA 公司。

1.4 分組、模型復(fù)制及給藥 小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1 周后，隨機(jī)分為正常組、模型組、霍山石斛干品組（1.30 g·kg-1）及霍山石斛鮮品低、中、高劑量組（1.25、2.50、5.00 g·kg-1），每組10 只。每日上午按照設(shè)定劑量灌胃給藥，正常組和模型組給予等體積生理鹽水；每日下午，除正常組給予等體積生理鹽水外，其余各組小鼠灌胃給予55°原漿酒（10 mL·kg-1），連續(xù)60 d。造模期間，每周稱量并記錄小鼠體質(zhì)量；每周固定時(shí)間段給予每籠小鼠200 g 飼料，維持1 周不添加飼料，直至下周同一時(shí)間段稱量每籠剩余飼料量，每籠小鼠磨牙飼料量忽略不計(jì)，默認(rèn)差值即為每籠小鼠1 周內(nèi)的攝食量。

1.5 標(biāo)本采集及肝臟指數(shù)計(jì)算 造模第60 天末，稱量并記錄小鼠體質(zhì)量；禁食不禁水12 h，麻醉后摘眼球取血，離心分離血清，分裝于EP 管中，置于-80 ℃冰箱保存?zhèn)溆?。脫頸椎法處死小鼠后，采集完整肝組織，用提前預(yù)冷的生理鹽水沖洗，濾紙吸干水分并去除肝臟表面雜質(zhì)；測(cè)定小鼠肝臟質(zhì)量，計(jì)算：肝臟指數(shù)（%）=肝臟質(zhì)量（g）/體質(zhì)量（g）×100%。剪取每只小鼠肝左葉組織，置于4%多聚甲醛組織固定液中固定，用于HE 染色；剩余肝組織置于-80 ℃冰箱冷凍保存。

1.6 醉酒潛伏期測(cè)定 參考相關(guān)研究[7-8]，灌胃55°原漿酒后將小鼠輕放于動(dòng)物籠內(nèi)，背部朝下，若小鼠在30 s 內(nèi)不能自行翻轉(zhuǎn)身體則為翻正反射消失，即視為進(jìn)入醉酒狀態(tài)。在造模最后1 周，連續(xù)記錄5 d各組小鼠從灌酒到翻正反射消失的時(shí)間，作為醉酒潛伏期，并觀察小鼠酒后行為學(xué)表現(xiàn)。

1.7 HE 染色法觀察肝臟組織病理變化 剪取相同部位肝組織，置于4%多聚甲醛組織固定液中固定72 h；經(jīng)脫水后，石蠟包埋，切片（5 μm），蘇木素-伊紅染色，中性樹膠封片。于光學(xué)顯微鏡下觀察肝臟組織病理形態(tài)學(xué)改變，并采集病理圖片。

1.8 血清生化指標(biāo)測(cè)定 嚴(yán)格按照試劑盒說明書步驟操作，檢測(cè)血清中TC、LDL-C、HDL-C 含量及ALT、AST 活力。

1.9 肝臟生化指標(biāo)測(cè)定 制備肝組織勻漿上清液，嚴(yán)格按照試劑盒說明書步驟操作，檢測(cè)肝組織中的TG、MDA、SOD、TNF-α、IL-6、IL-1β 水平。

1.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法 采用SPSS 25.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析；計(jì)量資料以均數(shù)± 標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示；多組間比較采用單因素方差分析（One-way ANOVA），兩兩比較采用LSD 檢驗(yàn)；以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 霍山石斛鮮品對(duì)慢性酒精性肝損傷小鼠醉酒潛伏期的影響 結(jié)果見表1。模型組小鼠飲酒后平衡性差，爬行時(shí)后肢無力，逐漸進(jìn)入醉酒狀態(tài)，翻正反射消失。與模型組相比，霍山石斛鮮/干品組小鼠的醉酒潛伏期顯著延長（P＜0.01），且鮮品組呈劑量相關(guān)性。與霍山石斛干品組比較，霍山石斛鮮品高劑量組小鼠的醉酒潛伏期顯著延長（P＜0.01）。結(jié)果表明，霍山石斛鮮品可減輕小鼠醉酒狀態(tài)，其高劑量組作用優(yōu)于霍山石斛干品組。

表1 霍山石斛鮮品對(duì)慢性酒精性肝損傷小鼠醉酒潛伏期的影響（±s，n=10）Table 1 Effect of fresh Dendrobium huoshanense C. Z. Tang et S. J. Cheng on drunk incubation period in mice with chronic alcoholic liver injury（±s，n=10）

表1 霍山石斛鮮品對(duì)慢性酒精性肝損傷小鼠醉酒潛伏期的影響（±s，n=10）Table 1 Effect of fresh Dendrobium huoshanense C. Z. Tang et S. J. Cheng on drunk incubation period in mice with chronic alcoholic liver injury（±s，n=10）

注：與模型組比較，**P＜0.01；與霍山石斛干品組比較，ΔΔP＜0.01

醉酒潛伏期/min 15.30±2.98 21.10±5.36**38.80±4.85**63.60±3.20**ΔΔ 39.90±4.18**組別模型組霍山石斛鮮品低劑量組霍山石斛鮮品中劑量組霍山石斛鮮品高劑量組霍山石斛干品組劑量/（g·kg-1）-1.25 2.50 5.00 1.30

2.2 霍山石斛鮮品對(duì)慢性酒精性肝損傷小鼠體質(zhì)量、肝指數(shù)及攝食量的影響 結(jié)果見表2、表3。與正常組相比，模型組小鼠的體質(zhì)量、攝食量顯著下降（P＜0.01），肝臟指數(shù)顯著上升（P＜0.01）。與模型組相比，霍山石斛鮮/干品組小鼠的體質(zhì)量、攝食量均無明顯改善（P＞0.05），但肝臟指數(shù)顯著降低（P＜0.01）。與霍山石斛干品組相比，霍山石斛鮮品高劑量組的肝臟指數(shù)顯著降低（P＜0.01）。結(jié)果表明，霍山石斛鮮品可明顯抑制慢性酒精性肝損傷小鼠的肝臟指數(shù)上升，但對(duì)小鼠食欲不振、體質(zhì)量下降無明顯改善作用。

表2 霍山石斛鮮品對(duì)慢性酒精性肝損傷小鼠體質(zhì)量的影響（±s，n=8）Table 2 Effect of fresh Dendrobium huoshanense C. Z. Tang et S. J. Cheng on body mass of mice with chronic alcoholic liver injury（±s，n=8）

表2 霍山石斛鮮品對(duì)慢性酒精性肝損傷小鼠體質(zhì)量的影響（±s，n=8）Table 2 Effect of fresh Dendrobium huoshanense C. Z. Tang et S. J. Cheng on body mass of mice with chronic alcoholic liver injury（±s，n=8）

注：與正常組比較，##P＜0.01；與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與霍山石斛干品組比較，△P＜0.05

組別正常組模型組霍山石斛鮮品低劑量組霍山石斛鮮品中劑量組霍山石斛鮮品高劑量組霍山石斛干品組劑量/（g·kg-1）體質(zhì)量/g 8 周30.7±1.3 26.2±0.6##25.9±1.3 26.3±1.5 27.4±1.8 26.6±0.8--1.25 2.50 5.00 1.30 0 周25.6±0.8 25.6±0.3 25.2±1.2 25.2±0.7 25.6±0.7 24.8±0.9 1 周26.9±0.3 22.8±0.7##23.2±1.2 24.0±1.1**24.7±1.1**△23.8±0.6*2 周26.4±0.6 23.6±0.6##23.3±1.1 23.5±1.1 24.4±1.0 23.6±0.9 3 周27.8±0.7 23.9±0.5##23.9±0.9 24.1±0.6 24.1±1.0 24.0±0.9 4 周28.6±0.7 24.0±0.5##24.1±1.2 24.6±0.6 24.7±1.0 24.5±0.8 5 周29.3±0.9 24.1±0.5##24.2±1.1 24.9±1.4 25.5±1.7*24.7±1.0 6 周29.8±0.9 25.2±0.6##25.5±1.0 25.8±1.3 26.4±1.5*25.5±1.0 7 周30.1±0.9 26.0±0.8##25.9±1.1 26.2±1.3 27.2±1.7 26.3±1.3

表3 霍山石斛鮮品對(duì)慢性酒精性肝損傷小鼠肝臟指數(shù)、攝食量的影響（±s，n=10）Table 3 Effects of fresh Dendrobium huoshanense C. Z. Tang et S. J. Cheng on liver index and food intake of mice with chronic alcoholic liver injury（±s，n=10）

表3 霍山石斛鮮品對(duì)慢性酒精性肝損傷小鼠肝臟指數(shù)、攝食量的影響（±s，n=10）Table 3 Effects of fresh Dendrobium huoshanense C. Z. Tang et S. J. Cheng on liver index and food intake of mice with chronic alcoholic liver injury（±s，n=10）

注：與正常組比較，##P＜0.01；與模型組比較，**P＜0.01；與霍山石斛干品組比較，ΔΔP＜0.01

攝食量/g 29.14±2.88 23.37±1.27##21.69±1.07 22.68±1.86 22.56±1.66 22.71±1.42組別正常組模型組霍山石斛鮮品低劑量組霍山石斛鮮品中劑量組霍山石斛鮮品高劑量組霍山石斛干品組劑量/（g·kg-1）--1.25 2.50 5.00 1.30肝臟指數(shù)/%4.28±0.48 5.20±0.45##4.25±0.37**4.14±0.23**3.52±0.45**ΔΔ 4.57±0.22**

2.3 霍山石斛鮮品對(duì)慢性酒精性肝損傷小鼠肝組織病理變化的影響 結(jié)果見圖1。正常組小鼠肝小葉清晰，肝細(xì)胞排列整齊、結(jié)構(gòu)完整。與正常組相比，模型組小鼠肝細(xì)胞基本結(jié)構(gòu)消失，表現(xiàn)為肝細(xì)胞彌漫性腫脹，胞漿疏松化、半透明，部分肝細(xì)胞胞漿幾乎完全透明呈氣球樣，肝竇隙狹窄，幾近消失。與模型組相比，霍山石斛鮮品低劑量組和霍山石斛干品組小鼠肝細(xì)胞出現(xiàn)輕微的脂肪變性，霍山石斛鮮品中、高劑量組小鼠肝組織損傷明顯減輕，形態(tài)結(jié)構(gòu)趨近正常組。結(jié)果表明，霍山石斛鮮品能有效保護(hù)慢性酒精性肝損傷小鼠的肝臟組織病理損傷，以中、高劑量組效果明顯。

圖1 霍山石斛鮮品對(duì)慢性酒精性肝損傷小鼠肝組織病理變化的影響（HE 染色，×400）Figure 1 Effect of fresh Dendrobium huoshanense C. Z. Tang et S. J. Cheng on liver histopathology of mice with chronic alcoholic liver injury（HE staining，×400）

2.4 霍山石斛鮮品對(duì)慢性酒精性肝損傷小鼠血清ALT、AST 水平的影響 結(jié)果見表4。與正常組相比，模型組小鼠的血清ALT、AST 活力顯著升高（P＜0.01），表明長期飲酒會(huì)導(dǎo)致肝功能出現(xiàn)異常。與模型組相比，霍山石斛鮮/干品組小鼠的血清ALT、AST 活力均明顯降低（P＜0.05，P＜0.01）。與霍山石斛干品組相比，霍山石斛鮮品中、高劑量組小鼠的血清AST 活力明顯降低（P＜0.05）。結(jié)果表明，霍山石斛鮮品可有效減輕長期飲酒對(duì)肝功能的影響。

表4 霍山石斛鮮品對(duì)慢性酒精性肝損傷小鼠血清ALT、AST 活力的影響（±s，n=9）Table 4 Effects of fresh Dendrobium huoshanense C. Z. Tang et S. J. Cheng on the activity of ALT and AST in serum of mice with chronic alcoholic liver injury（±s，n=9）

表4 霍山石斛鮮品對(duì)慢性酒精性肝損傷小鼠血清ALT、AST 活力的影響（±s，n=9）Table 4 Effects of fresh Dendrobium huoshanense C. Z. Tang et S. J. Cheng on the activity of ALT and AST in serum of mice with chronic alcoholic liver injury（±s，n=9）

注：與正常組比較，##P＜0.01；與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與霍山石斛干品組比較，ΔP＜0.05

AST/（U·L-1）15.21±0.23 21.32±0.89##18.37±0.78**16.72±0.45**Δ 16.27±0.47**Δ 17.38±0.17**組別正常組模型組霍山石斛鮮品低劑量組霍山石斛鮮品中劑量組霍山石斛鮮品高劑量組霍山石斛干品組劑量/（g·kg-1）--1.25 2.50 5.00 1.30 ALT/（U·L-1）8.06±0.74 10.59±1.13##8.82±0.45**8.57±0.48**8.39±0.54**9.27±0.41*

2.5 霍山石斛鮮品對(duì)慢性酒精性肝損傷小鼠肝臟TG及血清TC、LDL-C、HDL-C 水平的影響 結(jié)果見表5。與正常組相比，模型組小鼠的肝臟TG 含量及血清TC、LDL-C 含量顯著升高（P＜0.01），血清HDL-C 含量顯著降低（P＜0.01）。與模型組相比，霍山石斛鮮品中、高劑量組和霍山石斛干品組小鼠的肝臟TG 含量及血清TC、LDL-C 含量顯著降低（P＜0.01），血清HDL-C 含量顯著升高（P＜0.05，P＜0.01）。與霍山石斛干品組相比，霍山石斛鮮品中、高劑量組小鼠的血清TC 含量顯著降低（P＜0.01）。結(jié)果表明，霍山石斛鮮品能夠明顯改善慢性酒精性肝損傷小鼠的脂質(zhì)蓄積及脂質(zhì)代謝紊亂，且霍山石斛鮮品中、高劑量組優(yōu)于霍山石斛干品組。

表5 霍山石斛鮮品對(duì)慢性酒精性肝損傷小鼠肝臟TG 及血清TC、LDL-C、HDL-C 含量的影響（±s，n=9）Table 5 Effects of fresh Dendrobium huoshanense C. Z. Tang et S. J. Cheng on the contents of TG in liver and TC，LDL-C，HDL-C in serum of mice with chronic alcoholic liver injury（±s，n=9）

表5 霍山石斛鮮品對(duì)慢性酒精性肝損傷小鼠肝臟TG 及血清TC、LDL-C、HDL-C 含量的影響（±s，n=9）Table 5 Effects of fresh Dendrobium huoshanense C. Z. Tang et S. J. Cheng on the contents of TG in liver and TC，LDL-C，HDL-C in serum of mice with chronic alcoholic liver injury（±s，n=9）

注：與正常組比較，##P＜0.01；與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與霍山石斛干品組比較，ΔΔP＜0.01

HDL-C/（mmol·L-1）1.57±0.05 1.09±0.13##1.16±0.12 1.28±0.09**1.32±0.13**1.22±0.11*組別正常組模型組霍山石斛鮮品低劑量組霍山石斛鮮品中劑量組霍山石斛鮮品高劑量組霍山石斛干品組劑量/（g·kg-1）--1.25 2.50 5.00 1.30 TG/（μmol·g-1）3.62±0.13 7.72±0.95##7.09±0.61 5.57±0.51**5.12±0.17**6.13±0.32**TC/（mmol·L-1）3.47±0.25 8.92±0.43##4.37±0.21**3.43±0.09**ΔΔ 3.37±0.12**ΔΔ 4.19±0.35**LDL-C/（mmol·L-1）0.67±0.09 1.41±0.18##1.29±0.11 1.02±0.09**0.96±0.07**1.14±0.07**

2.6 霍山石斛鮮品對(duì)慢性酒精性肝損傷小鼠肝臟炎癥因子水平的影響 結(jié)果見表6。與正常組相比，模型組小鼠肝臟的炎癥因子TNF-α、IL-6、IL-1β 水平顯著升高（P＜0.01）。與模型組相比，霍山石斛鮮/干品組小鼠肝臟的炎癥因子TNF-α、IL-6、IL-1β 水平明顯降低（P＜0.05，P＜0.01）。與霍山石斛干品組相比，霍山石斛鮮品中、高劑量組肝臟的TNF-α、IL-1β 水平明顯降低（P＜0.05，P＜0.01）。結(jié)果表明，霍山石斛鮮品能夠抑制慢性酒精性肝損傷小鼠肝臟炎癥因子水平，且霍山石斛鮮品中、高劑量組優(yōu)于霍山石斛干品組。

表6 霍山石斛鮮品對(duì)慢性酒精性肝損傷小鼠肝臟TNF-α、IL-6 及IL-1β 水平的影響（±s，n=9）Table 6 Effects of fresh Dendrobium huoshanense C. Z. Tang et S. J. Cheng on the levels of TNF-α，IL-6 and IL-1β in liver of mice with chronic alcoholic liver injury（±s，n=9）

表6 霍山石斛鮮品對(duì)慢性酒精性肝損傷小鼠肝臟TNF-α、IL-6 及IL-1β 水平的影響（±s，n=9）Table 6 Effects of fresh Dendrobium huoshanense C. Z. Tang et S. J. Cheng on the levels of TNF-α，IL-6 and IL-1β in liver of mice with chronic alcoholic liver injury（±s，n=9）

注：與正常組比較，##P＜0.01；與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與霍山石斛干品組比較，ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01

IL-1β/（pg·mg-1）496.90±49.15 1 078.22±131.34##954.55±172.61*760.57±116.83**527.79±76.73**ΔΔ 808.84±89.36**組別正常組模型組霍山石斛鮮品低劑量組霍山石斛鮮品中劑量組霍山石斛鮮品高劑量組霍山石斛干品組劑量/（g·kg-1）--1.25 2.50 5.00 1.30 TNF-α/（pg·mg-1）8.35±0.18 8.97±0.09##8.81±0.09 8.41±0.10**Δ 8.35±0.18**Δ 8.70±0.17*IL-6/（pg·mg-1）933.14±69.90 1 327.51±87.71##1 245.16±52.29*1 054.61±36.11**1 011.76±63.29**1 166.67±34.65**

2.7 霍山石斛鮮品對(duì)慢性酒精性肝損傷小鼠肝臟SOD、MDA 水平影響 結(jié)果見表7。與正常組相比，模型組小鼠肝臟中的SOD 活力顯著降低（P＜0.01），MDA 含量顯著升高（P＜0.01）。與模型組相比，霍山石斛鮮/干品組小鼠肝臟中的SOD 活力均顯著升高（P＜0.05，P＜0.01），MDA 含量顯著降低（P＜0.01）。結(jié)果表明，霍山石斛鮮品可提高慢性酒精性肝損傷小鼠肝臟的抗氧化能力，降低脂質(zhì)過氧化水平，減少氧化應(yīng)激對(duì)肝臟的損傷。

表7 霍山石斛鮮品對(duì)慢性酒精性肝損傷小鼠肝臟SOD、MDA 水平的影響（±s，n=9）Table 7 Effects of fresh Dendrobium huoshanense C. Z. Tang et S. J. Cheng on the levels of SOD and MDA in liver of mice with chronic alcoholic liver injury（±s，n=9）

表7 霍山石斛鮮品對(duì)慢性酒精性肝損傷小鼠肝臟SOD、MDA 水平的影響（±s，n=9）Table 7 Effects of fresh Dendrobium huoshanense C. Z. Tang et S. J. Cheng on the levels of SOD and MDA in liver of mice with chronic alcoholic liver injury（±s，n=9）

注：與正常組比較，##P＜0.01；與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01

MDA/（nmol·mg-1）0.55±0.02 1.72±0.05##0.79±0.04**0.73±0.07**0.69±0.06**0.77±0.03**組別正常組模型組霍山石斛鮮品低劑量組霍山石斛鮮品中劑量組霍山石斛鮮品高劑量組霍山石斛干品組劑量/（g·kg-1）--1.25 2.50 5.00 1.30 SOD/（U·mg-1）0.63±0.01 0.49±0.02##0.51±0.01*0.54±0.00**0.55±0.01**0.50±0.01*

3 討論

近年來，隨著人們生活壓力加大和飲食結(jié)構(gòu)的改變，由飲酒導(dǎo)致的酒精性肝?。ˋLD）發(fā)病率逐漸升高。目前我國的ALD 發(fā)病率已達(dá)6.1%，而全世界每年因飲酒而死亡的人數(shù)占慢性肝病死亡人數(shù)的5.3%，約300 萬人[9]，疾病負(fù)擔(dān)嚴(yán)重。目前ALD 的最佳治療策略仍然是戒酒，亟待開發(fā)新的、更實(shí)用的方法來早期干預(yù)和治療ALD。

石斛具有養(yǎng)陰清熱、益胃生津之功效，全國高等院校教材《中藥學(xué)》中記載：“石斛鮮者清熱生津之功較干品為佳，故凡遇熱病傷津、舌絳干燥、口渴思飲者，當(dāng)用新鮮石斛[10]”，名老中醫(yī)魏長春更是認(rèn)為“非鮮石斛不用[11]”?？梢娛r品入藥具有干品所不能及的效果，可能與鮮品石斛避免了干燥及煎煮過程中因水分流失、溫度變化導(dǎo)致部分活性成分丟失有關(guān)。中藥鮮用歷史悠久，是傳統(tǒng)中醫(yī)藥的重要組成部分，《中國藥典》也將鮮石斛收入其中，明確其不可替代性[12]?，F(xiàn)代研究[13-14]表明，霍山石斛多糖和霍山石斛水提取物對(duì)乙醇誘導(dǎo)的肝損傷具有明顯的保護(hù)作用。因此，本研究通過復(fù)制慢性酒精性肝損傷小鼠模型，比較了霍山石斛鮮品及干品對(duì)ALD 的干預(yù)效果。

ALT、AST 是肝功能的血清標(biāo)志物，是肝損傷最敏感的指標(biāo)[15]。本研究結(jié)果顯示，長期飲酒可影響小鼠的行為學(xué)表現(xiàn)和損害肝臟組織形態(tài)及功能，攝食量及體質(zhì)量明顯下降、肝臟指數(shù)顯著升高，提示長期乙醇暴露會(huì)降低食欲和干擾機(jī)體對(duì)營養(yǎng)成分的吸收能力；其次，肝臟出現(xiàn)肝細(xì)胞彌漫性腫脹、細(xì)胞基本結(jié)構(gòu)消失，血清ALT、AST 水平顯著升高，說明肝細(xì)胞受損嚴(yán)重。霍山石斛鮮/干品干預(yù)后，小鼠的醉酒潛伏期顯著延長，肝臟指數(shù)顯著降低，肝組織紊亂及肝細(xì)胞彌漫性腫脹現(xiàn)象明顯減輕，血清ALT、AST 活力均明顯降低。提示霍山石斛鮮/干品均能夠?qū)挂掖紝?dǎo)致的酒后行為學(xué)異常及肝損傷，具有預(yù)防醉酒的作用，但霍山石斛鮮品高劑量組的作用明顯優(yōu)于霍山石斛干品組。

ALD 發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，尚未完全闡明，目前報(bào)道的脂質(zhì)代謝失衡是ALD 的核心驅(qū)動(dòng)因素之一[16]。長期過量飲酒，乙醇及其代謝產(chǎn)物會(huì)導(dǎo)致血液中HDL-C含量降低的同時(shí)引起LDL-C、TC 和TG 含量增加，從而出現(xiàn)常見的高血脂和脂肪肝的癥狀[17]。脂肪變性是肝臟對(duì)長期飲酒的最早反應(yīng)，其特征是肝細(xì)胞內(nèi)脂肪（甘油三酯、磷脂和膽固醇酯）蓄積[18]。其次，氧化應(yīng)激與脂質(zhì)過氧化已被認(rèn)為是乙醇誘導(dǎo)肝損傷的主要機(jī)制之一[19]。健康個(gè)體能夠保持自由基和抗氧化酶系統(tǒng)［如超氧化物歧化酶（SOD）和過氧化氫酶（CAT），以及抗氧化劑如谷胱甘肽（GSH）、維生素C、E 等］之間的動(dòng)態(tài)平衡[20]。飲酒后，乙醇在肝臟中代謝產(chǎn)生大量ROS，過量的ROS 不僅破壞細(xì)胞內(nèi)氧化和抗氧化之間的平衡，而且ROS 還與多種生物物質(zhì)發(fā)生反應(yīng)。脂質(zhì)物質(zhì)與ROS 反應(yīng)發(fā)生脂質(zhì)過氧化，產(chǎn)生4-羥基壬烯醛和丙二醛（MDA，脂質(zhì)過氧化終產(chǎn)物），可誘導(dǎo)多種形式的細(xì)胞死亡[21]。過量的肝臟脂質(zhì)沉積和氧化應(yīng)激還會(huì)導(dǎo)致肝臟炎癥反應(yīng)激活，并伴隨著炎癥介質(zhì)如TNF-α、IL-1β、IL-6 等的表達(dá)增加，而促炎細(xì)胞因子TNF-α 及IL-1 表達(dá)增加被認(rèn)為是ALD 發(fā)病機(jī)制中至關(guān)重要的一步[20]。本研究結(jié)果顯示，霍山石斛鮮/干品能顯著降低慢性酒精性肝損傷小鼠的肝臟TG、MDA、TNF-α、IL-6、IL-1β 水平，以及顯著降低血清TC、LDL-C 水平，提高血清HDL-C 水平及肝臟SOD 活力；二者均能夠明顯改善慢性酒精性肝損傷小鼠的脂質(zhì)蓄積及脂質(zhì)代謝紊亂，提高抗氧化能力，降低脂質(zhì)過氧化水平，抑制炎癥因子水平，且霍山石斛鮮品高劑量組的作用明顯優(yōu)于霍山石斛干品組。

綜上所述，霍山石斛鮮品能夠明顯改善慢性酒精性肝損傷小鼠的肝臟組織病理損傷，其作用與調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝、抗氧化應(yīng)激損傷及抑制炎癥反應(yīng)有關(guān)，且霍山石斛鮮品的干預(yù)效果優(yōu)于干品藥材。