• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    低交聯(lián)透明質酸與再生材料聯(lián)合應用的相容性評估

    2023-06-07 07:17:46費松吳偉東王瑛古佳升桃卓嫣方明星李丹
    醫(yī)學美學美容 2023年8期
    關鍵詞:透明質酸聚乳酸葡聚糖

    費松 吳偉東 王瑛 古佳升 桃卓嫣 方明星 李丹

    【摘 要】目的 評估小分子透明質酸與β-葡聚糖、聚乳酸、羥基磷灰石聯(lián)合應用的組織相容性。方法Wistar大鼠18只隨機分為3期實驗各6只,于背部劃分4個部位,根據(jù)注射不同配方的試劑分為4組。對照組注射小分子透明質酸1.00 ml,葡聚糖組注射0.25 ml小分子透明質酸+0.75 mlβ-葡聚糖,聚乳酸組注射0.25 ml小分子透明質酸+0.75 ml聚乳酸,羥基磷灰石組注射0.25 ml小分子透明質酸+0.75 ml羥基磷灰石,分別于注射7、14、28 d后處死大鼠,取其注射部位組織制成切片,經(jīng)HE染色后觀察免疫反應,免疫印跡法檢測第三期實驗大鼠皮膚組織中白介素1的表達水平。結果 7 d實驗中聚乳酸及羥基磷灰石組表現(xiàn)出輕微的免疫反應,14 d實驗中各組的免疫反應均呈上升趨勢,28 d實驗中各組的免疫反應均消退;免疫印跡法結果顯示,28 d實驗中三組注射部位的IL-1均低表達,差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。結論 小分子透明質酸與β-葡聚糖、聚乳酸、羥基磷灰石的聯(lián)合應用具有較好的組織相容性。

    【關鍵詞】透明質酸;β-葡聚糖;聚乳酸;羥基磷灰石

    中圖分類號:R318.08 文獻標識碼:A 文章編號:1004-4949(2023)08-0095-04

    Compatibility Evaluation of Low Cross-linked Hyaluronic Acid Combined with Recycled Materials

    FEI Song1, WU Wei-dong 1, WANG Ying2, GU Jia-sheng1, TAO Zhuo-yan1, FANG Ming-xing1, LI Dan1

    (1.Department of Cardiothoracic Surgery, Guangzhou Red Cross Hospital of Jinan University, Guangzhou 510000, Guangdong, China; 2.Guangzhou Xiao Man Yao Medical Equipment Co., Ltd., Guangzhou 510000, Guangdong, China)

    【Abstract】Objective To evaluate the histocompatibility of small molecular hyaluronic acid combined with β-glucan, polylactic acid and hydroxyapatite. Methods Eighteen Wistar rats were randomly divided into three phases of experiments, with 6 rats in each phase. Four parts were divided on the back and divided into 4 groups according to different formulations of reagents. The control group was injected with 1.00 ml of small molecular hyaluronic acid, the dextran group was injected with 0.25 ml of small molecular hyaluronic acid+0.75 ml of β-glucan, the polylactic acid group was injected with 0.25 ml of small molecular hyaluronic acid+0.75 ml of polylactic acid, and the hydroxyapatite group was injected with 0.25 ml of small molecular hyaluronic acid+0.75 ml of hydroxyapatite. The rats were sacrificed after 7, 14 and 28 days of injection, and the tissues at the injection site were taken and made into sections. The immune response was observed after HE staining, and the expression level of interleukin 1 in the skin tissue of the third phase of the experimental rats was detected by Western blotting. Results In the 7 d experiment, the polylactic acid and hydroxyapatite groups showed a slight immune response. In the 14 d experiment, the immune response of each group showed an upward trend, and the immune response of each group subsided in the 28 d experiment. The results of immunoblotting showed that the expression of IL-1 in the injection site of the three groups was low in the 28 d experiment, and the difference was not statistically significant (P>0.05). Conclusion The combination of small-molecule hyaluronic acid with β-glucan, polylactic acid and hydroxyapatite has good histocompatibility.

    【Key words】Hyaluronic acid; β-glucan; Polylactic acid; Hydroxyapatite

    皮膚的彈性和水分會隨著年齡的增長或受周圍環(huán)境的影響引起水分和膠原的流失[1],為解決這一問題,醫(yī)學上多采用皮下注射填充物來保障水分的保持或促進組織膠原的生成。目前醫(yī)學上使用較多的皮下填充產(chǎn)品有透明質酸、β-葡聚糖、聚乳酸、羥基磷灰石鈣等。各種材料都有其特點,也有不足之處,材料與材料間的聯(lián)合應用或聯(lián)合微針等方式可獲得更好的治療效果。透明質酸已經(jīng)廣泛用于皮膚美容[2],通過與其他材料聯(lián)合應用或聯(lián)合其他療法,可提高療效[3],同時也可能引起一系列的不良反應,如血管栓塞、感染、組織壞死等。因此,為評價不同皮下填充材料的生物安全性,本實驗將以小分子透明質酸為對照組,小分子透明質酸聯(lián)合β-葡聚糖、聚乳酸、羥基磷灰石等已經(jīng)在市面上廣泛使用的填充材料為實驗組,于大鼠皮下注射,觀察不良反應和微觀下免疫反應,通過各組注射材料的結果互相比較,以評估聯(lián)合應用材料的安全性。

    1.1 實驗動物 SPF級 Wistar 大鼠18只(購自南方醫(yī)科大學實驗動物管理中心),周齡6周,體重(200±20)g,動物實驗按照《國立衛(wèi)生研究院實驗動物護理與使用指南》進行,倫理號HTSW211103。大鼠飼養(yǎng)環(huán)境:室溫(25±2)℃,相對濕度(50±5)%,12 h明暗交替,分籠飼養(yǎng),自由攝食飲水,飼養(yǎng)7 d。

    1.2 試劑與儀器 小分子透明質酸(廣州小蠻腰醫(yī)療器械有限公司);β-葡聚糖(廣州小蠻腰醫(yī)療器械有限公司);聚乳酸;羥基磷灰石;白介素1(IL-1)和GADPH兔一抗抗體(博奧森),IL-1和GADPH羊抗兔二抗抗體(博奧森);無水乙醇(國藥集團化學試劑有限公司);二甲苯(天津市富宇精細化工有限公司);伊紅染液、蘇木素染液、中性樹膠(谷歌生物科技有限公司);顯微鏡(上海通灝光電科技有限公司);攤烤片機(湖北安立信醫(yī)療實業(yè)有限公司);脫水機(武漢俊杰電子有限公司);包埋機(武漢俊杰電子有限公司)。

    1.3 實驗分組 18只大鼠編號后采用隨機數(shù)字表法分為3期實驗,每期各6只,分別為7 d一期實驗、 14 d二期實驗和28 d三期實驗,大鼠背部各選取4個注射點,注射間隔1 cm以上,注射劑量均為1 ml,根據(jù)注射材料不同分為4組。對照組注射小分子透明質酸1 ml;葡聚糖組注射小分子透明質酸0.25 ml+β-葡聚糖0.75 ml;聚乳酸組注射小分子透明質酸0.25 ml+聚乳酸0.75 ml;羥基磷灰石組注射小分子透明質酸0.25 ml+羥基磷灰石0.75 ml。

    1.4 實驗方法 18只大鼠禁食12 h、禁水4 h后,稱重,采用7%水合氯醛(劑量:0.03 ml/kg)進行腹腔注射麻醉。麻醉成功后對大鼠背部皮膚進行備皮,選取脊柱旁兩側約2 cm 皮下組織為注射中心點,以注射點中心劃分1.5 cm寬度的正方形區(qū)域使用記號筆標注,一只大鼠背部脊柱兩側分別標注4個區(qū)域。經(jīng)75%醫(yī)用酒精擦拭皮膚表面消毒;利用30 G注射針頭斜面向上刺入表皮至皮下組織層,回抽無回血后進行注射,每個部位注射對應的劑量為1 ml,射后予以輕度按摩使材料分布更均勻。注射完成后常規(guī)飼養(yǎng)規(guī)飼養(yǎng),于7、14、28 d后,分別采用脊髓脫臼法處死對應實驗組的大鼠,去除大鼠背部毛發(fā),對標記筆標注的注射區(qū)域用手術刀切開皮膚全層,拍照記錄,使用蚊式鉗鈍性分離剩余的注射材料及周圍組織,保持包膜完整。

    1.4.1蘇木精-伊紅染色法 用組織剪剪取殘余的皮下組織,于10%甲醛溶液中固定48 h。流水緩慢沖洗4~8 h以洗去甲醛;將包埋塊裝在一個網(wǎng)兜里,放入70%乙醇過夜。第2天,依次放入80%、90%、100% A、100% B乙醇浸泡各1 h,二甲苯A、二甲苯B各浸泡30 min,至組織塊呈現(xiàn)棕黃色或暗紅色透明狀,放入水浴機石蠟缸A、B、C各1.5 h(60 ℃),包埋塊和包埋模具放入包埋儀至少30 min,包埋后關閉水浴箱,使用萊卡切片機切片,厚度為4 μm,45 ℃攤片,烤片機75 ℃烤片60 min。將石蠟切片放入染色盒,用二甲苯A、B、C各脫蠟5 min。依次100%、95%、80%、70%的酒精,入蒸餾水2次,5 min/次。蘇木素染核1 min,流水沖洗干凈,0.1%鹽酸酒精分化10 s,入蒸餾水放置10 min。0.5%伊紅染色1 min,流水沖洗干凈,入蒸餾水3 min,取出玻片放在通風櫥里晾干。用中性樹膠對晾干的組織切片進行封片。在光學顯微鏡下找到目標部位,拍照。

    1.4.2免疫印跡法 將用組織剪剪取皮下組織后提取組織總蛋白,采用BCA法進行蛋白定量后將蛋白樣品調至等濃度,SDS-PAGE電泳,轉膜后,4 ℃冰箱孵育IL-1和GADPH-抗過夜,與相應二抗室溫下孵育2 h,ECL顯影,拍照,進行圖像分析。以Image J 軟件分析蛋白條帶得到的灰度值表示IL-1蛋白的相對表達水平,以GADPH為內參,實驗重復 3 次以上,取平均值。

    1.5 組織學評價 皮膚對材料的免疫反應的程度按照2015國家食品藥品監(jiān)督管理局濟南醫(yī)療器械質量監(jiān)督檢驗中心,醫(yī)療器械生物學評價第6部分:植入后局部反應試驗半定量評分系統(tǒng)中的生物學反應評價標準,根據(jù)細胞類型/反應、新血管生成、纖維化、脂肪浸潤等情況進行評價,實驗組評分減去對照組的評分,得到的差值作為判斷材料對組織的刺激等級,具體判定標準為:無刺激:0~2.9分;輕度刺激:3.0~8.9分;中度刺激:9.0~15.0分;重度刺激:>15.0分。

    1.6 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 21.0統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)分析,計量資料以(x-±s)表示,多組間比較行F檢驗;P<0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

    術后大鼠進食,活動均正常,術后背部局部無明顯腫脹,所有實驗動物均存活。

    2.1 皮膚組織大體觀 皮膚外可見注射材料所在部位有輕微凸起,無明顯紅腫、壞死、化膿。皮下解剖可見清晰的血管形狀,注射材料所在部位的周圍組織與其他部位組織無明顯改變,無血管栓塞、組織壞死等表現(xiàn),見圖1。

    2.2 生物反應評價 每期實驗6只大鼠相同材料部位的評分取平均值,刺激平均評分=實驗組平均評分-對照組平均評分,結果見表2。7 d實驗中,各組刺激性分級情況均低;14 d實驗中,與對照組相比,葡聚糖組、聚乳酸組及羥基磷灰石組刺激分級均表現(xiàn)出一定的刺激性;28 d實驗中,各組的刺激性分級情況均偏低,且呈下降趨勢,見表1。

    2.3 術后三期實驗各組材料注射部位宿主反應 7 d實驗中,對照組僅有少量炎細胞浸潤;葡聚糖組除少量炎細胞外,還有一些纖維形成;聚乳酸組出現(xiàn)大量的炎細胞,纖維囊壁形成廣泛且排列紊亂,羥基磷灰石中的炎細胞程度輕微,可見少許血管。14 d實驗中,對照組的炎細胞較前減輕,且開始出現(xiàn)纖維層;葡聚糖組的炎細胞繼續(xù)增加,且纖維層較前明顯增多增厚,排列整齊,出現(xiàn)少許新生血管;聚乳酸組的炎細胞更為明顯,且纖維層較前整齊,出現(xiàn)大量的新生血管;羥基磷灰石的炎細胞反應較前減退,且纖維較前增厚,且紊亂。28 d實驗中,對照組的纖維層繼續(xù)增厚增多,炎細胞沒有繼續(xù)上升的趨勢;葡聚糖組的炎性反應明顯下降,且纖維層繼續(xù)增多增粗,排列整齊;此外,可見大量小血管生成;聚乳酸組炎細胞較前輕微,纖維層繼續(xù)增粗但排列紊亂,未見14 d時豐富的新生小血管;羥基磷灰石組幾乎不可見血管生成,炎細胞消退,纖維層較對照組明顯薄弱。HE染色實驗切片見圖2。

    2.4 IL-1的表達水平 免疫印跡法結果顯示,28 d實驗中三組注射部位的IL-1均呈低表達,差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05,F(xiàn)=2.101),見圖3。

    透明質酸是一種細胞外基質的天然糖胺聚糖,具有良好的保濕功能,能夠改善皮膚干燥粗糙、毛孔粗大等問題[4]。β-葡聚糖是一種以糖苷鍵連接的同型多糖,不僅能作為血漿替代物,還能增強免疫細胞活性,促進傷口愈合,同時可延緩皮膚老化,是一種良好的皮膚填充材料。聚乳酸是從可再生植物中提取發(fā)酵而來的聚合物,對人體無毒無害,且生物相容性良好,可降解,作為一種醫(yī)學高分子材料,常用于組織修復。

    本次三期實驗中發(fā)現(xiàn),所有實驗組均表現(xiàn)出一定的炎細胞及組織反應,但在28 d時均逐漸消退,各組均未表現(xiàn)出明顯的纖維化、組織紊亂、壞死,注射材料引起的免疫反應最后都基本消退,表現(xiàn)出良好的組織相容性。在生物反應性評價平均評分上看,葡聚糖組及聚乳酸組的評分在后兩期實驗中,特別是第二期的表現(xiàn)是要稍微高于其他兩組的,造成這種現(xiàn)象的原因主要是β-葡聚糖由于被免疫活性細胞膜上的受體識別,激活了包括巨噬細胞在內的免疫細胞等,促進細胞釋放白介素,因此白介素的表達水平較高。而聚乳酸在代謝過程中產(chǎn)生乳酸,刺激成纖維母細胞的增殖和膠原蛋白再生,在這個過程中產(chǎn)生了一定的免疫反應。透明質酸會在透明質酸酶及透明質酸降解蛋白(HYAL1和HYAL2)的參與下被降解,但這個過程并不會引起明顯的組織反應。透明質酸注射后能刺激轉化生長因子,結締組織生長因子等細胞因子的產(chǎn)生,促進膠原等細胞外基質的合成,表現(xiàn)出一定的纖維增生。β-葡聚糖在7、14 d實驗中引起免疫反應,一方面激活成纖維細胞,不斷分泌前膠原蛋白,并形成膠原纖維,另一方面使組織中的巨噬細胞數(shù)量增加,巨噬細胞促進組織成EGFR表皮生長因子和VEGF血管生成因子的分泌,兩者共同作用于內皮細胞,促進新生血管的形成。同時,28 d實驗中三組注射部位的IL-1均呈低表達,差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),證實了透明質酸聯(lián)合其他材料注射的安全性良好。

    綜上所述,小分子透明質酸與β-葡聚糖、聚乳酸、羥基磷灰石的聯(lián)合應用具有較好的組織相容性。

    [1] 杜克斯,李澤巧,張寶江,等.面部皮膚衰老的外觀變化及形成因素[J].日用化學工業(yè),2022,52(2):199-206.

    [2] 周劼,陳媛,宋長緒,等.透明質酸注射填充改善中面部輪廓低平的臨床研究[J].中國醫(yī)療美容,2022,12(7):16-19.

    [3] 王露茗,張杰,殷凌覽.590 nm和830 nm低能量光療聯(lián)合透明質酸在面部年輕化治療中的療效觀察[J]. 中國醫(yī)療美容,2022,12(9):15-18.

    [4] 雷曦,張蕊,黃遵錫,等.透明質酸酶的研究進展[J].微生物學通報,2021,48(3):882-895.

    [5] Wang S,F(xiàn)ontana F,Shahbazi MA,et al.Acetalated dextran based nano-and microparticles:synthesis,fabricat ion,and therapeutic applications[J].Chem Commun(Ca mb),2021,57(35):4212-4229.

    編輯 扶田

    猜你喜歡
    透明質酸聚乳酸葡聚糖
    皮脂膜修復貼敷料在皮膚修復中的研究分析
    單葉細辛對寒飲射肺證模型大鼠LN及HA含量的影響
    單葉細辛對寒飲射肺證模型大鼠LN及HA含量的影響
    葡聚糖類抗病誘導劑在水稻上的試驗初報
    聚乳酸的阻燃改性研究進展
    中國塑料(2015年3期)2015-11-27 03:41:38
    可生物降解聚乳酸發(fā)泡材料研究進展
    中國塑料(2015年6期)2015-11-13 03:02:42
    聚乳酸/植物纖維全生物降解復合材料的研究進展
    中國塑料(2015年8期)2015-10-14 01:10:41
    聚乳酸擴鏈改性及其擠出發(fā)泡的研究
    中國塑料(2015年4期)2015-10-14 01:09:19
    小麥麩皮中β-葡聚糖的分離純化及組成研究
    (1,3)-β-D葡聚糖檢測對侵襲性真菌感染早期診斷的意義
    日韩欧美一区二区三区在线观看| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 日韩免费av在线播放| 一进一出好大好爽视频| 亚洲黑人精品在线| 亚洲成国产人片在线观看| 成人欧美大片| 免费在线观看影片大全网站| 亚洲精品粉嫩美女一区| 91国产中文字幕| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 在线观看66精品国产| 久久狼人影院| cao死你这个sao货| 伦理电影免费视频| 麻豆成人av在线观看| 男女下面进入的视频免费午夜 | 欧美成人免费av一区二区三区| netflix在线观看网站| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 欧美午夜高清在线| 在线观看免费日韩欧美大片| 中文在线观看免费www的网站 | 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 日本三级黄在线观看| 99国产精品一区二区三区| 成人av一区二区三区在线看| 视频区欧美日本亚洲| 久99久视频精品免费| 中文字幕久久专区| 好男人电影高清在线观看| 在线天堂中文资源库| 在线观看免费日韩欧美大片| 午夜福利成人在线免费观看| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 日韩欧美一区视频在线观看| 免费人成视频x8x8入口观看| 国产高清videossex| 午夜激情av网站| 一a级毛片在线观看| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 高清在线国产一区| 亚洲电影在线观看av| 亚洲成人国产一区在线观看| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 国产视频内射| 91在线观看av| 欧美又色又爽又黄视频| 黄频高清免费视频| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 中文亚洲av片在线观看爽| 少妇被粗大的猛进出69影院| 日韩大码丰满熟妇| 男女那种视频在线观看| 999久久久国产精品视频| 亚洲精品粉嫩美女一区| 欧美黄色淫秽网站| 白带黄色成豆腐渣| 在线永久观看黄色视频| 后天国语完整版免费观看| 我的亚洲天堂| 午夜福利在线在线| 18禁美女被吸乳视频| 欧美一级毛片孕妇| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 在线天堂中文资源库| 麻豆成人午夜福利视频| 91在线观看av| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 日本a在线网址| 欧美中文日本在线观看视频| 色老头精品视频在线观看| 欧美av亚洲av综合av国产av| 一个人观看的视频www高清免费观看 | 一本综合久久免费| 午夜影院日韩av| 露出奶头的视频| x7x7x7水蜜桃| 看黄色毛片网站| 99国产极品粉嫩在线观看| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| av片东京热男人的天堂| 在线观看舔阴道视频| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 国产高清有码在线观看视频 | 国产aⅴ精品一区二区三区波| 久久香蕉精品热| 国产精品,欧美在线| 禁无遮挡网站| 亚洲中文日韩欧美视频| 国产一区在线观看成人免费| 久久精品成人免费网站| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 大型黄色视频在线免费观看| 黄频高清免费视频| 久久热在线av| 婷婷精品国产亚洲av在线| 日韩视频一区二区在线观看| av片东京热男人的天堂| 国产精品免费视频内射| 欧美激情极品国产一区二区三区| 女人被狂操c到高潮| 岛国在线观看网站| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 久久精品成人免费网站| 久久国产亚洲av麻豆专区| 日韩欧美国产一区二区入口| 国产成人精品久久二区二区91| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 精品不卡国产一区二区三区| 深夜精品福利| 国产视频内射| 国产黄片美女视频| 美女高潮到喷水免费观看| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 日韩精品中文字幕看吧| 一二三四社区在线视频社区8| 成人手机av| 一级毛片精品| 免费看a级黄色片| 日本a在线网址| 久久久久精品国产欧美久久久| 亚洲熟女毛片儿| www.999成人在线观看| 亚洲成人久久爱视频| 国产成人精品久久二区二区免费| 男人舔女人下体高潮全视频| 欧美色视频一区免费| 99久久99久久久精品蜜桃| 无遮挡黄片免费观看| 99国产精品一区二区蜜桃av| 欧美一级a爱片免费观看看 | 90打野战视频偷拍视频| 国产精品永久免费网站| 亚洲 国产 在线| 丝袜美腿诱惑在线| 级片在线观看| 国产精品影院久久| 这个男人来自地球电影免费观看| 亚洲精品av麻豆狂野| 男女午夜视频在线观看| 午夜福利在线观看吧| 成人18禁在线播放| 国产视频一区二区在线看| 波多野结衣高清作品| 老司机午夜十八禁免费视频| 国产精品国产高清国产av| 午夜a级毛片| 麻豆av在线久日| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 国产亚洲av高清不卡| 日本免费a在线| 午夜福利在线观看吧| 母亲3免费完整高清在线观看| e午夜精品久久久久久久| 国产伦一二天堂av在线观看| 欧美+亚洲+日韩+国产| 日韩精品免费视频一区二区三区| 天堂√8在线中文| 亚洲五月婷婷丁香| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 欧美三级亚洲精品| 久久久久亚洲av毛片大全| 99热只有精品国产| 51午夜福利影视在线观看| 欧美zozozo另类| 午夜福利成人在线免费观看| 午夜免费鲁丝| 国产成+人综合+亚洲专区| 免费在线观看影片大全网站| 国产不卡一卡二| 亚洲,欧美精品.| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片 | 一本精品99久久精品77| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 美女大奶头视频| 日韩视频一区二区在线观看| 无人区码免费观看不卡| 国产精品野战在线观看| 一区二区三区高清视频在线| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 18美女黄网站色大片免费观看| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 国产免费男女视频| 久久国产乱子伦精品免费另类| 天天添夜夜摸| 最近最新中文字幕大全电影3 | 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 国产精品亚洲美女久久久| 欧美午夜高清在线| 婷婷丁香在线五月| 午夜福利在线在线| 国产av又大| 日韩国内少妇激情av| 天堂动漫精品| 日本在线视频免费播放| 91成人精品电影| 又大又爽又粗| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 欧美中文综合在线视频| 婷婷精品国产亚洲av在线| 久久精品成人免费网站| 欧美精品啪啪一区二区三区| 久久久久久大精品| 国产精品一区二区免费欧美| 午夜福利18| 欧美成狂野欧美在线观看| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 日本精品一区二区三区蜜桃| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 一边摸一边做爽爽视频免费| 亚洲av熟女| 日韩大尺度精品在线看网址| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 日本一区二区免费在线视频| 久久久久久免费高清国产稀缺| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 窝窝影院91人妻| 欧美黑人精品巨大| 久久久国产成人精品二区| 精品国产亚洲在线| 亚洲av第一区精品v没综合| 我的亚洲天堂| 久久精品国产清高在天天线| 国产亚洲欧美98| 亚洲电影在线观看av| 51午夜福利影视在线观看| 亚洲 欧美一区二区三区| 一a级毛片在线观看| 日本一区二区免费在线视频| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 亚洲自偷自拍图片 自拍| 老汉色av国产亚洲站长工具| 久久久久精品国产欧美久久久| 国产三级在线视频| bbb黄色大片| 国产视频一区二区在线看| 久久中文字幕一级| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 12—13女人毛片做爰片一| 啪啪无遮挡十八禁网站| 无限看片的www在线观看| 天堂√8在线中文| 久久精品国产清高在天天线| 色综合欧美亚洲国产小说| 久久久久久九九精品二区国产 | 黄色丝袜av网址大全| 2021天堂中文幕一二区在线观 | 波多野结衣av一区二区av| 午夜精品在线福利| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 亚洲中文日韩欧美视频| 欧美丝袜亚洲另类 | 欧美三级亚洲精品| 亚洲精品国产一区二区精华液| 精品久久久久久久久久久久久 | 亚洲成人精品中文字幕电影| 国产精品九九99| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 久久精品国产清高在天天线| 给我免费播放毛片高清在线观看| 中出人妻视频一区二区| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 国产真实乱freesex| 99热只有精品国产| av免费在线观看网站| 老司机午夜十八禁免费视频| avwww免费| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 麻豆国产av国片精品| 亚洲激情在线av| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 首页视频小说图片口味搜索| 国产欧美日韩精品亚洲av| 国产乱人伦免费视频| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 国产一卡二卡三卡精品| 少妇 在线观看| 首页视频小说图片口味搜索| 久久精品影院6| 国产精品1区2区在线观看.| 在线看三级毛片| 国产一区二区激情短视频| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 精品日产1卡2卡| 啦啦啦 在线观看视频| 成人一区二区视频在线观看| 国产av一区在线观看免费| 99国产极品粉嫩在线观看| x7x7x7水蜜桃| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 特大巨黑吊av在线直播 | 亚洲国产欧洲综合997久久, | 精品国产国语对白av| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 国产精品电影一区二区三区| 女性生殖器流出的白浆| 亚洲专区字幕在线| 女性被躁到高潮视频| 国产成人精品无人区| 十八禁网站免费在线| 母亲3免费完整高清在线观看| svipshipincom国产片| 亚洲五月色婷婷综合| 国产91精品成人一区二区三区| 午夜免费激情av| 一级毛片精品| 国产男靠女视频免费网站| 久久中文字幕一级| 人妻久久中文字幕网| 欧美精品亚洲一区二区| 丰满的人妻完整版| av视频在线观看入口| 首页视频小说图片口味搜索| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 88av欧美| 人人妻人人澡人人看| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 国产一区在线观看成人免费| 一边摸一边抽搐一进一小说| 淫妇啪啪啪对白视频| 国产男靠女视频免费网站| www.www免费av| 久久亚洲真实| 日韩欧美免费精品| av有码第一页| 一进一出好大好爽视频| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 成人av一区二区三区在线看| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 国产精品野战在线观看| 日韩欧美国产在线观看| 国产亚洲欧美98| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 99国产精品一区二区蜜桃av| 一个人观看的视频www高清免费观看 | 看免费av毛片| 欧美乱色亚洲激情| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 亚洲 国产 在线| avwww免费| 久久久久久国产a免费观看| 91av网站免费观看| 午夜福利在线观看吧| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 又黄又爽又免费观看的视频| 日本黄色视频三级网站网址| 精品久久久久久,| 日韩欧美三级三区| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 亚洲精品国产区一区二| 欧美av亚洲av综合av国产av| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| а√天堂www在线а√下载| tocl精华| 99热这里只有精品一区 | 久久午夜综合久久蜜桃| 9191精品国产免费久久| 久久精品91蜜桃| 精品久久久久久,| 1024香蕉在线观看| 日韩欧美三级三区| 深夜精品福利| 国产黄a三级三级三级人| 天堂√8在线中文| 99在线人妻在线中文字幕| 久久久久九九精品影院| 女性被躁到高潮视频| 国产精品精品国产色婷婷| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 国产精品免费一区二区三区在线| 亚洲免费av在线视频| 日韩中文字幕欧美一区二区| 一个人观看的视频www高清免费观看 | 国产精品香港三级国产av潘金莲| 亚洲专区中文字幕在线| 一夜夜www| 黄色毛片三级朝国网站| 国产91精品成人一区二区三区| 精品久久久久久成人av| 美女午夜性视频免费| e午夜精品久久久久久久| 日韩精品青青久久久久久| 麻豆成人午夜福利视频| 国产一级毛片七仙女欲春2 | 亚洲电影在线观看av| 这个男人来自地球电影免费观看| 亚洲av五月六月丁香网| 男女之事视频高清在线观看| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | 母亲3免费完整高清在线观看| 欧美精品啪啪一区二区三区| 日韩欧美免费精品| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | 又大又爽又粗| 岛国在线观看网站| 久久精品国产亚洲av高清一级| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 嫩草影院精品99| 人人妻人人看人人澡| 黄色视频不卡| 久久久久久久久免费视频了| 久热这里只有精品99| 精品欧美一区二区三区在线| 午夜福利在线在线| 国产成人av教育| 成人av一区二区三区在线看| 成人手机av| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 激情在线观看视频在线高清| 两个人视频免费观看高清| 久久久久久久久中文| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 国产久久久一区二区三区| 亚洲自拍偷在线| 精品一区二区三区四区五区乱码| 一区二区三区激情视频| 国产成人精品无人区| 欧美乱色亚洲激情| 欧美性猛交黑人性爽| 中文字幕久久专区| 亚洲成人国产一区在线观看| 午夜福利一区二区在线看| 亚洲五月天丁香| 亚洲最大成人中文| 一夜夜www| 少妇熟女aⅴ在线视频| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 人人妻人人看人人澡| av有码第一页| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 欧美激情极品国产一区二区三区| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 日本精品一区二区三区蜜桃| 日本一本二区三区精品| 欧美黑人欧美精品刺激| 观看免费一级毛片| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 中亚洲国语对白在线视频| 亚洲色图av天堂| 欧美成人性av电影在线观看| 香蕉久久夜色| 淫秽高清视频在线观看| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 免费电影在线观看免费观看| 亚洲av电影不卡..在线观看| 亚洲国产看品久久| e午夜精品久久久久久久| 精品人妻1区二区| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 亚洲九九香蕉| 中文资源天堂在线| 国产一区二区激情短视频| 可以在线观看毛片的网站| 长腿黑丝高跟| 欧美国产日韩亚洲一区| 男人舔女人下体高潮全视频| 老司机午夜福利在线观看视频| 亚洲真实伦在线观看| 精品熟女少妇八av免费久了| 成人av一区二区三区在线看| 亚洲人成电影免费在线| 午夜福利高清视频| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 丝袜在线中文字幕| 欧美乱妇无乱码| 精品国产亚洲在线| 高清毛片免费观看视频网站| 一二三四在线观看免费中文在| 久久精品成人免费网站| 国产精品免费视频内射| 欧美日韩精品网址| 香蕉av资源在线| 中文字幕最新亚洲高清| 久久精品国产清高在天天线| 亚洲人成网站高清观看| 久久久水蜜桃国产精品网| 窝窝影院91人妻| АⅤ资源中文在线天堂| 高潮久久久久久久久久久不卡| 丰满的人妻完整版| 级片在线观看| 国产欧美日韩一区二区三| 人人澡人人妻人| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 丁香六月欧美| 国产精品九九99| 日日夜夜操网爽| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 精品日产1卡2卡| 国产一区在线观看成人免费| 精品午夜福利视频在线观看一区| 97碰自拍视频| 99在线视频只有这里精品首页| 国产午夜福利久久久久久| 桃红色精品国产亚洲av| 欧美亚洲日本最大视频资源| 黄色片一级片一级黄色片| 午夜福利高清视频| 精品久久久久久久末码| 白带黄色成豆腐渣| 国产成人精品无人区| 欧美成人午夜精品| 亚洲精品久久国产高清桃花| 精品不卡国产一区二区三区| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 欧美中文日本在线观看视频| 一级a爱片免费观看的视频| 国产激情久久老熟女| 欧美黑人精品巨大| 成人亚洲精品av一区二区| 久久狼人影院| 精品日产1卡2卡| 男女下面进入的视频免费午夜 | 真人一进一出gif抽搐免费| 91老司机精品| 久久99热这里只有精品18| 色av中文字幕| 色播在线永久视频| 欧美性猛交黑人性爽| 91大片在线观看| 亚洲成人精品中文字幕电影| 十分钟在线观看高清视频www| 无遮挡黄片免费观看| 成年女人毛片免费观看观看9| 亚洲国产精品sss在线观看| 精品日产1卡2卡| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 国产片内射在线| 欧美激情 高清一区二区三区| 欧美久久黑人一区二区| 十八禁网站免费在线| 黄色毛片三级朝国网站| 成在线人永久免费视频| 国产精品亚洲美女久久久| 最近最新中文字幕大全免费视频| 美女国产高潮福利片在线看| 精品久久久久久久末码| 日韩中文字幕欧美一区二区| 久久九九热精品免费| 一区二区三区高清视频在线| 国产成人av教育| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 免费人成视频x8x8入口观看| 一二三四在线观看免费中文在| 久久久久九九精品影院| 12—13女人毛片做爰片一| 午夜老司机福利片| 午夜福利18| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 免费av毛片视频| 在线播放国产精品三级| 男女床上黄色一级片免费看| 看免费av毛片| 老汉色av国产亚洲站长工具| 国产成人精品久久二区二区免费| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 亚洲一区二区三区色噜噜| 夜夜夜夜夜久久久久| 啦啦啦免费观看视频1| √禁漫天堂资源中文www| 国产一区二区激情短视频| 91在线观看av| 搡老妇女老女人老熟妇| 久久久久九九精品影院| 国产精品99久久99久久久不卡| a级毛片在线看网站| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 男女午夜视频在线观看| 桃色一区二区三区在线观看| 亚洲自拍偷在线| svipshipincom国产片| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 91九色精品人成在线观看| av超薄肉色丝袜交足视频| 999久久久精品免费观看国产| 精品无人区乱码1区二区| 99re在线观看精品视频| 国产激情久久老熟女| 十八禁网站免费在线| 91在线观看av| 精品免费久久久久久久清纯| 老司机深夜福利视频在线观看| 国产成人精品久久二区二区91| 国产免费男女视频| 人成视频在线观看免费观看| 一二三四在线观看免费中文在| a在线观看视频网站| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 悠悠久久av| 国内精品久久久久久久电影| 无遮挡黄片免费观看| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 香蕉av资源在线| 真人做人爱边吃奶动态| 丝袜美腿诱惑在线| 国产精品99久久99久久久不卡| 国产av又大| 欧美日本亚洲视频在线播放| 亚洲男人的天堂狠狠| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 欧美乱码精品一区二区三区|