質(zhì)譜導(dǎo)向的腎指海綿Reniochalina sp.中環(huán)肽類成分研究

吳宗梅，吳 瑩，張帥帥，孔 燦，王淑萍，林厚文 （.上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬仁濟(jì)醫(yī)院藥學(xué)部, 上海007；.沈陽(yáng)藥科大學(xué)中藥學(xué)院, 遼寧 沈陽(yáng) 006；.齊魯工業(yè)大學(xué)(山東省科學(xué)院)生物研究所, 山東 濟(jì)南 500）

腎指海綿屬（Reniochalina）海綿為尋常海綿綱（Demospongiae）軟海綿目（Halichondrida）小軸海綿科（Axinellidae）的海洋多細(xì)胞動(dòng)物。目前，針對(duì)該屬海綿進(jìn)行的化學(xué)成分研究主要包括甾類[1]、低極性化合物（如脂肪酸類、鄰苯二甲酸類、烴類）[2]、炔醇[3]和環(huán)肽[4]等類型。其中，環(huán)肽reniochalistatins A-E 由我們課題組獲得，而環(huán)八肽reniochalistatin E 因?qū)θ斯撬枇黾?xì)胞RPMI-8 226 的IC50值為4.90 μmol/L，已有兩個(gè)團(tuán)隊(duì)采用不同策略對(duì)其完成全合成[5-6]。

為進(jìn)一步高效挖掘腎指海綿中的潛在新型活性環(huán)肽，課題組基于環(huán)肽類化合物質(zhì)譜響應(yīng)度好，靈敏度高，二級(jí)質(zhì)譜中存在明顯的氨基酸單元碎裂的b 和y 特征離子，以質(zhì)譜為導(dǎo)向，繼續(xù)追蹤分離該屬海綿中的環(huán)肽類成分。最終，分離鑒定了3 個(gè)環(huán)七肽（圖1），并對(duì)它們進(jìn)行了初步細(xì)胞毒活性評(píng)價(jià)。

圖1 化合物1 ～ 3 的化學(xué)結(jié)構(gòu)

1 材料和方法

1.1 儀器與試劑

600、700 MHz 核磁共振波譜儀（德國(guó)Bruker公司）；Xevo G2-XS QTOF 質(zhì)譜儀（美國(guó)Waters 公司）；質(zhì)譜引導(dǎo)的自動(dòng)純化系統(tǒng)（美國(guó)Waters 公司）；Acquity UPLC 高效液相色譜儀（美國(guó)Waters公司）；Interchim PuriFlash 450 中壓色譜儀（法國(guó)Interchim 公司）；SK5200H 型超聲儀（上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司）；BT224S 電子天平（德國(guó)Sartorius公司）；EYELAN-1 000 型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（日本東京理化公司）；低溫高速離心機(jī)（美國(guó)Thermo Fisher 公司）；XBridge C18半制備型液相色譜柱（10 mm ×250 mm, 5 μm，美國(guó)Waters 公司）；ODS 柱色譜填料（日本YMC 公司）；Sephadex-LH20 柱色譜填料（瑞典Pharmacia 公司）；色譜級(jí)試劑（德國(guó)Merck公司）；分析純?cè)噭ㄉ虾；瘜W(xué)試劑公司）；氘代試劑（美國(guó)Cambridge Isotope 公司）。

1.2 海綿樣本

海綿樣本由課題組顏益珍老師于2021 年4 月采集自中國(guó)南海永樂(lè)群島附近海域（25～30 m 深度）。樣本呈橙黃色，質(zhì)地較硬。經(jīng)課題組楊琪博士鑒定為Reniochalina屬海綿。憑證標(biāo)本（編號(hào)：212604）現(xiàn)保存于上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬仁濟(jì)醫(yī)院海洋藥物實(shí)驗(yàn)室。

1.3 分步萃取

將干重78.5 g 的海綿剪碎成塊，先后加入等體積甲醇、二氯甲烷-甲醇（V/V= 1∶1）分別超聲提取3～5 次，每次30 min，合并提取液經(jīng)減壓濃縮得粗提物23.7 g。先將粗提物混懸于90%的甲醇水中，用等體積石油醚萃取3～5 次，再將90%的甲醇水層加水稀釋至60%，用等體積二氯甲烷萃取3～5 次，合并萃取液經(jīng)減壓濃縮得二氯甲烷層浸膏1.2 g，其經(jīng)LC-MS 分析確認(rèn)富含潛在的大分子量環(huán)肽。而60%的甲醇水層稀釋至30%后再用乙酸乙酯萃取，經(jīng)LC-MS 檢測(cè)已無(wú)大分子量環(huán)肽。故通過(guò)質(zhì)譜導(dǎo)向的分步萃取，潛在的大分子量環(huán)肽主要分布于二氯甲烷層。

1.4 追蹤分離

基于環(huán)肽類化合物分子量大的特點(diǎn)，通過(guò)兩次Sephadex LH-20 凝膠柱色譜分離，并采用質(zhì)譜定位追蹤的方式將潛在環(huán)肽富集。第一次以二氯甲烷-甲醇（V/V= 1∶1）為洗脫劑，二氯甲烷層浸膏經(jīng)凝膠柱色譜分離得到組分Fr.A ～ Fr.C。第二次以正己烷-二氯甲烷-甲醇（V/V/V= 4∶5∶1）為洗脫劑，富含潛在大分子量環(huán)肽的Fr.B 經(jīng)凝膠柱色譜分離得到亞組分Fr.B1 ～ Fr.B5。其中，F(xiàn)r.B2 ～Fr.B4 先后經(jīng)中壓ODS 柱色譜分離（紫外監(jiān)測(cè)波長(zhǎng)設(shè)為210 nm，以甲醇-水為流動(dòng)相，以流速15 ml/min在10 h 內(nèi)梯度洗脫10% ～ 100%），通過(guò)質(zhì)譜定位追蹤分別獲得一系列精細(xì)組分。

上述精細(xì)組分經(jīng)質(zhì)譜引導(dǎo)的自動(dòng)純化系統(tǒng)制備獲得環(huán)肽單體。質(zhì)譜條件：質(zhì)量掃描范圍m/z100～1 250，錐孔電壓 15 V，ES+模式下掃描采集數(shù)據(jù)。色譜條件：以半制備型C18柱為固定相，以乙腈-水（含0.1% 甲酸）為流動(dòng)相，以流速6 ml/min進(jìn)行梯度洗脫。其中，F(xiàn)r.B2-27 在32 min 內(nèi)線性梯度洗脫40%～48%獲得化合物1（2.7 mg,tR=21 min）；Fr.B4-5 在52 min 內(nèi)線性梯度洗脫20%～23%獲得化合物2（3.3 mg,tR=36 min）；Fr.B2-11 在32 min 內(nèi)線性梯度洗脫30%～40%獲得化合物3（3.4 mg,tR=18 min）。

2 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：無(wú)色結(jié)晶固體，茚三酮顯色陰性。HRESIMS 給出準(zhǔn)分子離子峰m/z768.466 1 [M+H]+(calcd 768.466 0)，確定其分子量為767。結(jié)合1H 和13C-NMR 譜確定其分子式為C40H61N7O8，計(jì)算不飽和度為14。1D NMR 譜圖給出典型的肽類化合物特征信號(hào)。其中，1H NMR 譜顯示有5 個(gè)低場(chǎng)區(qū)的酰胺氨基質(zhì)子信號(hào)(δH9.45, 8.90, 8.71, 7.23,7.16)，7 個(gè)α-次甲基質(zhì)子信號(hào)(δH4.69, 4.32, 4.16,4.12, 4.03, 3.89, 3.51)。13C NMR 譜提示有7 個(gè)酰胺羰基碳信號(hào)(δC171.6, 171.1, 170.9, 170.8, 170.6,169.6, 168.5)，7 個(gè)α-次甲基碳信號(hào)(δC60.7, 60.6,59.2, 55.4, 55.1, 55.0, 54.1)。由此推斷該化合物可能為七肽。結(jié)合2D NMR 譜圖，確定該七肽由兩個(gè)脯氨酸殘基、一個(gè)亮氨酸殘基、兩個(gè)異亮氨酸殘基、一個(gè)苯丙氨酸殘基和一個(gè)絲氨酸殘基組成。殘基連接順序由HMBC、ROESY 相關(guān)信號(hào)和ESIMS/MS 質(zhì)譜數(shù)據(jù)確定，絕對(duì)構(gòu)型由高級(jí)Marfey 法確定[7-8]。綜上，該化合物結(jié)構(gòu)為cyclo-(L-Pro-L-Ser-L-Phe-L-Ile-L-Leu-L-Pro-L-Ile)。將核磁共振數(shù)據(jù)歸屬如下：1H NMR (700 MHz, DMSO-d6)δH9.45 (1H,d,J= 8.4 Hz, 36-NH), 8.90 (1H, br s, 7-NH), 8.71(1H, d,J= 6.6 Hz, 25-NH), 7.23 (1H, d,J= 10.3 Hz,19-NH), 7.16 (1H, d,J= 4.8 Hz, 10-NH), 7.31 (2H,d,J= 7.5 Hz, H-13, H-17), 7.25 (2H, t,J= 7.5 Hz, H-14, H-16), 7.20 (1H, t,J= 7.3 Hz, H-15), 4.69 (1H, d,J= 7.8 Hz, H-2), 4.39 (1H, m, H-34a), 4.32 (1H, dd,J= 11.0, 8.4 Hz, H-36), 4.16 (1H, m, H-10), 4.12(1H, t,J= 10.5 Hz, H-19), 4.03 (1H, t,J= 7.8 Hz, H-31), 3.89 (1H, t,J= 7.1 Hz, H-7), 3.57 (1H, m, H-34b), 3.51 (1H, m, H-25), 3.50 (1H, m, H-5a), 3.49(1H, m, H-8a), 3.47 (1H, m, H-8b), 3.36 (1H, m, H-5b), 3.13 (1H, dd,J= 13.1, 2.8 Hz, H-11a), 2.84 (1H,dd,J= 13.0, 9.5 Hz, H-11b), 2.38 (1H, m, H-3a), 2.18(1H, td,J= 12.7, 4.3 Hz, H-26a), 2.08 (1H, m, H-32a), 2.05 (1H, m, H-37), 2.01 (1H, m, H-33a), 1.92(1H, m, H-3b), 1.90 (1H, m, H-4a), 1.79 (1H, m, H-33b), 1.73 (1H, m, H-32b), 1.55 (1H, m, H-26b), 1.53(1H, m, H-39a), 1.52 (1H, m, H-4b), 1.43 (1H, m, H-20), 1.42 (2H, m, H-22a, H-27), 1.15 (1H, m, H-39b),1.09 (1H, m, H-22b), 0.87 (3H, m, H-21), 0.85 (3H,m, H-29), 0.83 (6H, m, H-23, H-38), 0.82 (3H, m, H-28), 0.75 (3H, t,J= 7.3 Hz, H-40)；13C NMR (175 MHz, DMSO-d6)δC171.6 (C-30), 171.1 (C-35),170.9 (C-9), 170.8 (C-1), 170.6 (C-24), 169.6 (C-18),168.5 (C-6), 136.9 (C-12), 129.9 (C-13, C-17), 127.9(C-14, C-16), 126.4 (C-15), 60.7 (C-31), 60.6 (C-2,C-8), 59.2 (C-19), 55.4 (C-7), 55.1 (C-10), 55.0 (C-36), 54.1 (C-25), 48.2 (C-34), 46.3 (C-5), 37.0 (C-11,C-26), 36.7 (C-20), 34.8 (C-37), 30.8 (C-3), 29.4 (C-32), 24.7 (C-27, C-33), 24.2 (C-22), 23.9 (C-39), 23.2(C-29), 22.2 (C-4), 20.8 (C-28), 14.9 (C-40), 14.5 (C-23), 10.1 (C-38), 9.5 (C-21)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[9]基本一致，故將化合物1 鑒定為stylopeptide 1。

化合物2：無(wú)色無(wú)定形粉末，茚三酮顯色陰性。HRESIMS 給出準(zhǔn)分子離子峰m/z770.410 2[M+H]+(calcd 770.408 9)，確定其分子量為769。結(jié)合1H 和13C-NMR 譜確定其分子式為C38H55N7O10，計(jì)算不飽和度為15。1D NMR 譜圖給出典型的肽類化合物特征信號(hào)。其中，1H NMR 譜顯示有5 個(gè)低場(chǎng)區(qū)的酰胺氨基質(zhì)子信號(hào)(δH8.77, 8.43, 8.33,8.03, 7.55)，7 個(gè)α-次甲基質(zhì)子信號(hào)(δH4.53, 4.38,4.34, 4.28, 4.05, 4.03, 3.99)。13C NMR 譜 提 示 有7 個(gè)酰胺羰基碳信號(hào)(δC172.6, 172.4, 170.6, 170.5,170.3, 170.0, 169.9)，7 個(gè)α-次甲基碳信號(hào)(δC62.5,60.4, 57.5, 56.9, 51.6, 49.9, 47.4)。據(jù)此推斷該化合物可能為七肽。結(jié)合2D NMR 譜圖，確定該七肽由兩個(gè)脯氨酸殘基、一個(gè)亮氨酸殘基、一個(gè)酪氨酸殘基、一個(gè)天冬氨酸殘基、一個(gè)丙氨酸殘基和一個(gè)異亮氨酸殘基組成。殘基連接順序由HMBC、ROESY 相關(guān)信號(hào)和ESI-MS/MS 質(zhì)譜數(shù)據(jù)確定，絕對(duì)構(gòu)型由高級(jí)Marfey 法確定。綜上，該化合物結(jié)構(gòu)為cyclo-(L-Pro-L-Asp-L-Tyr-L-Pro-L-Ile-L-Ala-LLeu)。將核磁共振數(shù)據(jù)歸屬如下：1H NMR (700 MHz, DMSO-d6)δH8.77 (1H, br s, 31-NH), 8.43(1H, d,J= 7.5 Hz, 11-NH), 8.33 (1H, br s, 25-NH),8.03 (1H, s, 7-NH), 7.55 (1H, d,J= 6.5 Hz, 34-NH),6.97 (2H, d,J= 8.1 Hz, H-14, H-18), 6.66 (2H, d,J=8.1 Hz, H-15, H-17), 4.53 (1H, m, H-7), 4.38 (1H, m,H-31), 4.34 (1H, m, H-20), 4.28 (1H, d,J= 7.5 Hz,H-34), 4.05 (1H, m, H-11), 4.03 (1H, m, H-2), 3.99(1H, m, H-25), 3.63 (1H, m, H-5a), 3.56 (1H, m, H-5b), 3.26 (2H, m, H-8a, H-23a), 2.99 (1H, m, H-12a),2.88 (1H, m, H-12b), 2.83 (1H, m, H-8b), 2.59 (1H,m, H-23b), 2.22 (1H, m, H-3a), 2.10 (1H, m, H-21a),1.87 (1H, m, H-4a), 1.77 (1H, m, H-4b), 1.68 (1H, m,H-35a), 1.67 (2H, m, H-21b, H-26), 1.58 (1H, m, H-35b), 1.57 (1H, m, H-3b), 1.55 (1H, m, H-36), 1.54(1H, m, H-22a), 1.53 (1H, m, H-28a), 1.24 (1H, m, H-22b), 1.16 (3H, d,J= 6.6 Hz, H-32), 1.10 (1H, m, H-28b), 0.86 (3H, d,J= 5.8 Hz, H-37), 0.82 (3H, m, H-38), 0.80 (6H, m, H-27, H-29);13C NMR (175 MHz,DMSO-d6)δC172.6 (C-1), 172.4 (C-24), 172.1 (C-9),170.6 (C-19), 170.5 (C-10), 170.3 (C-6), 170.0 (C-33), 169.9 (C-30), 155.9 (C-16), 129.6 (C-14, C-18),127.8 (C-13), 115.1 (C-15, C-17), 62.5 (C-2), 60.4(C-20), 57.5 (C-31), 56.9 (C-34), 51.6 (C-7), 49.9 (C-11), 47.4 (C-25), 47.0 (C-5), 45.7 (C-23), 40.4 (C-35), 36.1 (C-8), 35.4 (C-12, C-26), 30.4 (C-3), 29.5(C-21), 25.1 (C-4), 24.7 (C-36), 24.3 (C-28), 22.9 (C-37), 21.4 (C-38), 20.9 (C-22), 15.1 (C-32), 14.9 (C-29), 10.9 (C-27)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10]基本一致，故將化合物2 鑒定為hymenamide D。

化合物3：無(wú)色無(wú)定形粉末，茚三酮顯色陰性。HRESIMS 給出準(zhǔn)分子離子峰：m/z767.446 8[M+H]+(calcd 767.445 6)，確定其分子量為766。結(jié)合1H 和13C-NMR 譜確定其分子式為C39H58N8O8，計(jì)算不飽和度為15。1D NMR 譜圖給出典型的肽類化合物特征信號(hào)。其中，1H NMR 譜顯示有5 個(gè)低場(chǎng)區(qū)的酰胺氨基質(zhì)子信號(hào)(δH8.80, 8.13, 7.98,7.95, 7.25)，7 個(gè)α-次甲基質(zhì)子信號(hào)(δH4.65, 4.28,4.24, 4.19, 4.14, 3.89, 3.83)。13C NMR 譜 提 示 有7 個(gè)酰胺羰基碳信號(hào)(δC171.4, 171.1, 170.9, 170.3,170.2, 170.1, 169.6)，7 個(gè)α-次甲基碳信號(hào)(δC62.3,61.5, 60.2, 57.1, 55.2, 51.0, 49.3)。據(jù)此推斷該化合物可能為七肽。結(jié)合ESI-MS/MS 質(zhì)譜數(shù)據(jù)確定其氨基酸殘基組成為兩個(gè)脯氨酸殘基、一個(gè)亮氨酸殘基、一個(gè)苯丙氨酸殘基、一個(gè)天冬酰胺殘基和兩個(gè)纈氨酸殘基，殘基連接順序?yàn)閏yclo-(Pro-Asn-Val-Pro-Leu-Val-Phe)。通過(guò)高級(jí)Marfey 法確定所有氨基酸殘基均為L(zhǎng) 構(gòu)型。將核磁共振數(shù)據(jù)歸屬如下：

1H NMR (600 MHz, DMSO-d6)δH8.80 (1H, d,J=5.4 Hz, 21-NH), 8.13 (1H, d,J= 9.5 Hz, 32-NH),8.01 (1H, s, 9-NH2), 7.98 (1H, d,J= 8.5 Hz, 11-NH),7.95 (1H, d,J= 6.1 Hz, 7-NH), 7.28 (1H, m, 9-NH2),7.25 (3H, m, 27-NH, H-35, H-39), 7.18 (1H, d,J=7.4 Hz, H-37), 7.14 (2H, d,J= 7.6 Hz, H-36, H-38 ),4.65 (1H, m, H-7), 4.28 (1H, d,J= 7.7 Hz, H-32),4.24 (1H, m, H-16), 4.19 (1H, m, H-21), 4.14 (1H, t,J= 8.6 Hz, H-27), 3.89 (1H, t,J= 8.6 Hz, H-2), 3.83(1H, t,J= 7.9 Hz, H-11), 3.75 (1H, m, H-5a), 3.46(2H, m, H-5b, H19a), 3.26 (1H, m, H19b), 3.06 (1H,m, H-8a), 2.94 (3H, m, H-8b, H33a, H33b), 2.34 (1H,m, H-17a), 2.19 (2H, m, H-3a, H12), 2.02 (1H, m, H-28), 1.96 (1H, m, H-18a), 1.85 (1H, m, H-4a), 1.71(2H, m, H-18b, H-23), 1.61 (1H, m, H-22a), 1.46(1H, m, H-4b), 1.23 (1H, m, H-17b), 1.19 (1H, m, H-22b), 0.99 (1H, m, H-3b), 0.92 (3H, d,J= 6.7 Hz, H-13), 0.89 (3H, d,J= 6.8 Hz, H-14), 0.86 (6H, d,J=6.7 Hz, H-29, H-30), 0.84 (3H, d,J= 6.7 Hz, H-25),0.79 (3H, d,J= 6.4 Hz, H-24);13C NMR (150 MHz,DMSO-d6)δC172.5 (C-9), 171.4 (C-26), 171.1 (C-20), 170.9 (C-31), 170.3 (C-1), 170.2 (C-15), 170.1(C-10), 169.6 (C-6), 138.4 (C-34), 128.9 (C-35, C-39), 128.1 (C-36, C-38), 126.2 (C-37), 62.3 (C-2),61.5 (C-11), 60.2 (C-16), 57.1 (C-27), 55.2 (C-32),51.0 (C-21), 49.3 (C-7), 47.6 (C-5), 45.8 (C-19), 37.9(C-22), 37.0 (C-33), 35.5 (C-8), 30.5 (C-17), 30.1 (C-28), 29.5 (C-12), 29.2 (C-3), 25.1 (C-4), 24.2 (C-23),23.3 (C-24), 21.3 (C-18), 20.6 (C-25), 19.7 (C-13),18.7 (C-14, C-29), 18.3 (C-30)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11]基本一致，故將化合物3 鑒定為axinastatin 2。

3 活性測(cè)試

采用CCK-8 法初步評(píng)估化合物對(duì)6 種人腫瘤細(xì)胞株（A2780、HCT-8、HepG2、NCI-H460、SW480、PC-9）的體外細(xì)胞毒活性。主要步驟為：取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞制成細(xì)胞懸液，約4×103個(gè)細(xì)胞/孔接種至96 孔板內(nèi)，每組設(shè)3 個(gè)復(fù)孔。過(guò)夜培養(yǎng)后，各株細(xì)胞分別加入20 μmol/L 化合物，并設(shè)對(duì)照組（順鉑）和空白組（DMSO），繼續(xù)孵育48 h。隨后，避光情況下每孔加入10 μl CCK-8 溶液。孵育0.5 ～ 2 h后，450 nm 處測(cè)其吸光度，每株細(xì)胞測(cè)3 次以上，并計(jì)算其細(xì)胞活力（%）。對(duì)于腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率大于50%的化合物，進(jìn)一步測(cè)試其活性劑量依賴關(guān)系。結(jié)果顯示，化合物1 對(duì)NCI-H460、HepG2、PC-9、HCT-8、A2780 和SW480 均具細(xì)胞毒性，IC50值分別為6.09、9.31、13.24、14.31、14.38 和17.26 μmol/L。

4 討論

環(huán)肽具有許多獨(dú)特的生化和治療特性，目前已有抗生素類達(dá)托霉素、止痛劑齊考諾肽、抗腫瘤藥帕瑞肽等環(huán)肽類藥物獲批用于臨床[12]。海綿是環(huán)肽類化合物的重要多產(chǎn)來(lái)源，然而，其體內(nèi)環(huán)肽因含量低微、紫外吸收不佳、核磁靈敏度差等，特異識(shí)別和定向獲取極富挑戰(zhàn)。將質(zhì)譜高靈敏度、高準(zhǔn)確度和高選擇性的技術(shù)優(yōu)勢(shì)與環(huán)肽獨(dú)特的質(zhì)譜碎裂模式有機(jī)結(jié)合，有助于提高環(huán)肽發(fā)現(xiàn)的通量和選擇性。

本研究以質(zhì)譜為導(dǎo)向，追蹤分離腎指海綿中的潛在新穎活性環(huán)肽，分離鑒定出3 個(gè)環(huán)七肽，它們均為首次從該屬海綿分離獲得。此外，本研究還發(fā)現(xiàn)化合物1 對(duì)多種人腫瘤細(xì)胞株具有中等抑制活性。而有趣的是，早期由George R.Pettit 課題組分離獲得的源于Stylotella屬和Phakellia屬海綿的同一化合物1，其抑制P388 小鼠白血病細(xì)胞生長(zhǎng)的能力卻相差十倍以上[9,13]。這可能與天然來(lái)源環(huán)肽能與某些僅生物方法才能檢測(cè)到的微量強(qiáng)活性抗腫瘤物結(jié)合[9,13]，或不同溶劑環(huán)境致使環(huán)肽分子構(gòu)象發(fā)生改變有關(guān)[14]。化合物2 先后發(fā)現(xiàn)于Hymeniacidon屬[10]和Stylissa屬[15-16]海綿，對(duì)多種腫瘤細(xì)胞株開展的活性試驗(yàn)顯示其無(wú)明顯細(xì)胞毒性?；衔?此前發(fā)現(xiàn)于Axinella屬海綿，其對(duì)小鼠P388 細(xì)胞和一系列人腫瘤細(xì)胞具有較強(qiáng)的體外細(xì)胞毒性[11]。

不同種屬的海綿能夠產(chǎn)生相同類型的環(huán)肽分子，同一類型的環(huán)肽分子表現(xiàn)出不同的細(xì)胞毒活性，可能和與海綿共生互作的微生物相關(guān)。本研究進(jìn)一步豐富了腎指海綿中環(huán)肽類化合物的多樣性，也為研究特征結(jié)構(gòu)類型的海洋天然產(chǎn)物提供了新思路、新方法。