虎杖清脈飲對(duì)慢性腦缺血小鼠認(rèn)知功能及腸道菌群的影響

郭羽晨，丁華敏，鄧珊珊，章越凡，李鐵軍 （1.安徽中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院, 安徽 合肥 001；.上海市浦東新區(qū)浦南醫(yī)院, 上海 0015；.上海大學(xué)醫(yī)學(xué)院, 上海 00444）

慢性腦缺血(CCI)是指各種原因引發(fā)的長(zhǎng)期大腦血灌流量不足，在血管性癡呆和阿爾茨海默病等神經(jīng)系統(tǒng)疾病的發(fā)展過(guò)程發(fā)揮重要作用[1-2]。長(zhǎng)期慢性腦缺血會(huì)導(dǎo)致慢性神經(jīng)炎癥、海馬自噬異常、腦部神經(jīng)元凋亡[3-4]，為此，CCI 已經(jīng)嚴(yán)重威脅人類的健康。腸道被稱為人類的“第二大腦”，腸道微生物參與周圍神經(jīng)系統(tǒng)和中樞神經(jīng)系統(tǒng)的雙向調(diào)節(jié)，并通過(guò)腦-腸互動(dòng)（即腦-腸軸）與機(jī)體的神經(jīng)系統(tǒng)密切相關(guān)[5]。研究證明中樞系統(tǒng)疾病會(huì)導(dǎo)致腸道菌群失調(diào)[6]，患者發(fā)生腦卒中后，不僅會(huì)出現(xiàn)胃腸道并發(fā)癥，還會(huì)發(fā)生腸道菌群失調(diào)，例如腸道菌群中的阿克曼菌屬（Akkermansia）會(huì)發(fā)生變化[7]。同時(shí)，腸道菌群失調(diào)也推動(dòng)了腦卒中等疾病的發(fā)展，文獻(xiàn)報(bào)道厚壁菌門增加與認(rèn)知功能損傷有一定的關(guān)聯(lián)[8-9]。因此，腸道菌群參與了腦部神經(jīng)系統(tǒng)疾病的進(jìn)展。中藥復(fù)方虎杖清脈飲是上海市著名中醫(yī)脈管病專家奚九一教授數(shù)十年臨床診治經(jīng)驗(yàn)的總結(jié)，臨床上對(duì)辯證屬“熱郁毒聚，脈滯絡(luò)痹”的腦小血管損傷療效顯著。有報(bào)道虎杖清脈飲通過(guò)調(diào)節(jié)p38 和NF-κB 信號(hào)通路，抑制高糖誘導(dǎo)的人視網(wǎng)膜毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷[10]，提示虎杖清脈飲具有抗炎和抗凋亡作用。然而，虎杖清脈飲對(duì)慢性腦缺血的治療作用缺乏臨床前研究，作用機(jī)制尚不清楚。因此，本實(shí)驗(yàn)研究虎杖清脈飲對(duì)慢性腦缺血小鼠認(rèn)知功能的影響，并基于腸道菌群角度初步探討其作用機(jī)制，為防治慢性腦缺血提供新的思路。

1 材料

1.1 動(dòng)物

24 只C57BL/6J 雄性小鼠(20±5) g，購(gòu)自常州卡文斯實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司（動(dòng)物合格證號(hào)：202112546）。飼養(yǎng)于海軍軍醫(yī)大學(xué)藥學(xué)系動(dòng)物房，飼養(yǎng)條件為溫度（24 ± 2）℃，相對(duì)濕度70 %，每天光照時(shí)間為08:00 至20:00，自由進(jìn)食飲水。所有操作均符合海軍軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理要求。

1.2 藥物及試劑

虎杖清脈飲由上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬岳陽(yáng)中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院提供。由虎杖、垂盆草、豨薟草、連翹、黃芪、雞血藤和川芎七味常用中藥制備[10]。所有藥品粉碎成粗粉，蒸餾水浸泡，煮沸2 次，每次40 min，合并濾液，濃縮至0.675 g/ml。銀杏葉提取物由上海阿拉丁生物化學(xué)技術(shù)有限公司提供。

1.3 儀器與設(shè)備

Morris 水迷宮（上海奧爾科特生物科技有限公司）；組織脫水機(jī)、包埋機(jī)（武漢俊杰電子有限公司）；倒置生物顯微鏡（日本尼康）；病理切片機(jī)（上海俫卡儀器有限公司）；DYY-6C 型核酸電泳儀、ND2000 型光度計(jì)、9700 型PCR 儀、Quantus?型高靈敏熒光計(jì)、Miseq PE300 測(cè)序平臺(tái)（美吉生物公司）。

2 方法

2.1 雙側(cè)頸總動(dòng)脈狹窄模型（BCAS）的建立及動(dòng)物分組

24 只小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)7 d 后，隨機(jī)分為4 組：假手術(shù)組、模型組、陽(yáng)性藥組（銀杏葉提取物）、虎杖清脈飲組，每組6 只。小鼠腹腔注射1 %戊巴比妥鈉（10 ml/kg）麻醉，并暴露頸總動(dòng)脈(CCAs)。在體視顯微鏡下，將微型彈簧圈(鋼絲直徑0.08 mm，線圈內(nèi)徑0.18 mm，螺距0.5 mm，總長(zhǎng)度2.5 mm)螺旋旋轉(zhuǎn)固定在雙側(cè)頸總動(dòng)脈上致頸總動(dòng)脈狹窄使腦慢性灌注不足，建立BCAS 模型。然后縫合手術(shù)部位，并對(duì)術(shù)后小鼠進(jìn)行護(hù)理，直到它們意識(shí)清醒。造模6 w 后，各組開始進(jìn)行灌胃給藥12 w。陽(yáng)性藥組給予銀杏葉提取物（GBE）30 mg/kg，虎杖清脈飲組（HZQMY）給予虎杖清脈飲13.5 mg/kg，假手術(shù)組（Sham）和模型組（BCAS）給予等量生理鹽水處理。

2.2 水迷宮實(shí)驗(yàn)

Morris 水迷宮實(shí)驗(yàn)分為前5 d 的定位航行實(shí)驗(yàn)和第6 d 的空間探索實(shí)驗(yàn)。定位航行實(shí)驗(yàn)：主要用于測(cè)試小鼠的空間學(xué)習(xí)能力。實(shí)驗(yàn)歷時(shí)5 d，每天每只小鼠訓(xùn)練3 次。訓(xùn)練時(shí)隨機(jī)選擇一個(gè)象限開始，按順時(shí)針?lè)较蛴?xùn)練3 次。每次將該象限的池壁中點(diǎn)作為入水點(diǎn)，將小鼠面向池壁輕輕放入水中，盡量保持每次入水方式的一致，減少人為影響。小鼠每次分別從不同象限入水尋找逃逸平臺(tái)，若小鼠找到登上平臺(tái)，并停留5 s 以上，則計(jì)時(shí)結(jié)束，水迷宮裝置自動(dòng)記錄小鼠從入水到尋臺(tái)成功的時(shí)間，即為逃避潛伏期。如果在60 s 后仍未登上平臺(tái)，計(jì)時(shí)也將停止，將小鼠人為引上平臺(tái)休息1 min，且當(dāng)次的逃避潛伏期記錄為60 s。

空間探索實(shí)驗(yàn)：主要用于測(cè)試小鼠的空間記憶能力。在定位航行實(shí)驗(yàn)結(jié)束的第2d，撤除平臺(tái)，選擇與第四象限最遠(yuǎn)的第二象限池壁中點(diǎn)為小鼠入水點(diǎn)，將小鼠面向池壁輕輕放入池中，使小鼠自由游泳60 s 并記錄這60 s 內(nèi)小鼠在原平臺(tái)的停留時(shí)間、穿過(guò)原平臺(tái)所在位置的次數(shù)作為判斷小鼠空間記憶能力差異的指標(biāo)。

2.3 LFB 染色

治療結(jié)束后，每組各取6 只小鼠，用1 %戊巴比妥鈉（10 ml/kg）腹腔注射麻醉，4 %多聚甲醛灌注后，取腦石蠟包埋，切片，厚度5 μm，用于LFB(Luxol Fast Blue stain)染色。將石蠟切片常規(guī)脫蠟至水，加入LFB 染色液于60 ℃烤箱染色3 h。95 %乙醇洗去多余染色液，蒸餾水沖洗。Luxol 分化液分化15 s，70 %乙醇分色。重復(fù)分化步驟，直至胼胝體和皮質(zhì)之間形成鮮明對(duì)比。梯度乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片，在顯微鏡下采集圖片。

2.4 腸道菌群測(cè)序分析

末次給藥后禁食12 h，脫頸椎處死小鼠，處死方法符合動(dòng)物福利倫理要求，無(wú)菌條件下取盲腸內(nèi)容物，置于液氮中速凍保存。送至美吉生物技術(shù)股份有限公司進(jìn)行DNA 提取，合格樣品進(jìn)一步進(jìn)行高通量測(cè)序。

2.5 數(shù)據(jù)處理與分析

運(yùn)用美吉生物信息云（https://cloud.majorbio.com/）進(jìn)行數(shù)據(jù)的處理，利用美吉生信云UParse 軟件（v7.0.1090）進(jìn)行OTU（operational taxonomic units）分析、Alpha 多樣性分析、稀釋曲線分析；利用美吉生信云tax_summary_a 文件夾中的數(shù)據(jù)表和R 語(yǔ)言（version 3.3.1）工具統(tǒng)計(jì)和作圖進(jìn)行物種組成分析；利用Qiime 計(jì)算Beta 多樣性距離矩陣；利用美吉生信云進(jìn)行線性判別分析（LEfSe），計(jì)算多級(jí)物種之間的差異。

2.6 統(tǒng)計(jì)分析

采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 19.0、GraphPad 9.0 進(jìn)行分析。符合正態(tài)分布的計(jì)量數(shù)據(jù)以（±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析（One-Way ANOVA)。以P＜0.05 表示有顯著性差異，以P＜0.01 表示有極顯著性差異。

3 結(jié)果

3.1 虎杖清脈飲對(duì)小鼠學(xué)習(xí)記憶能力和白質(zhì)損傷的影響

如圖1A 所示，假手術(shù)組小鼠從水迷宮實(shí)驗(yàn)第1 d 開始到第5 d，逃避潛伏期在不斷減少。而模型組小鼠隨天數(shù)的增加，找到平臺(tái)的時(shí)長(zhǎng)并沒(méi)有明顯縮短，并且與假手術(shù)組相比，第4 天和第5 天逃避潛伏期有顯著性差異（P＜0.05），各給藥組小鼠逃避潛伏期在逐漸減少，第5 天陽(yáng)性藥組、虎杖清脈飲組與模型組之間的逃避潛伏期差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。如圖1B 所示，模型組小鼠的跨越平臺(tái)次數(shù)顯著少于假手術(shù)組（P＜0.01）。而虎杖清脈飲組的跨越平臺(tái)次數(shù)顯著大于模型組（P＜0.01）。如圖1C 所示，模型組小鼠的目標(biāo)象限百分比顯著少于假手術(shù)組（P＜0.05），陽(yáng)性藥組和虎杖清脈飲組的目標(biāo)象限百分比均顯著大于模型組（P＜0.05），提示虎杖清脈飲可以改善慢性腦缺血小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。如圖1D 所示，假手術(shù)組中，小鼠胼胝體的LFB 染色，髓鞘排列整齊，無(wú)水腫、碎裂及空泡的形成。模型組，LFB 著色淺，髓鞘崩解，部分髓鞘空泡化。經(jīng)銀杏葉提取物和虎杖清脈飲治療，髓鞘病變減輕，染色加深，提示虎杖清脈飲可以改善慢性腦缺血小鼠的白質(zhì)損傷。

圖1 虎杖清脈飲對(duì)小鼠學(xué)習(xí)記憶能力和白質(zhì)損傷的影響(n=6，± s)

3.2 小鼠腸道菌群物種注釋與評(píng)估

各組小鼠腸道菌群優(yōu)化后序列數(shù)目為964 830，堿基數(shù)目為398 083 175，平均長(zhǎng)度為412 bp，序列長(zhǎng)度分布在400～440 bp 內(nèi)。圖2A 為3 組小鼠腸道微生物等級(jí)豐度曲線，從豐度曲線可以看到各組在緩慢平穩(wěn)下降，說(shuō)明各組小鼠腸道菌群物種豐富度高并且分布均勻。圖2B、2C 所示，總物種曲線可分析樣本包含的物種總和，共享物種曲線可分析樣本共享物種數(shù)目，本研究各組總數(shù)目和共享項(xiàng)目增加或減少趨勢(shì)均逐步減緩并趨于平坦，表明各組樣本量滿足評(píng)估物種豐富度和核心物種數(shù)的要求。

圖2 各組小鼠腸道菌群物種注釋與評(píng)估(n=6，±s)

3.3 各組小鼠腸道菌群Alpha 多樣性分析

如圖3A、3B、3C 所示，豐富度實(shí)際觀測(cè)值指數(shù)、物種豐富度ACE 指數(shù)和物種豐富度Chao1 指數(shù)可解釋生物群落豐富度。相較于假手術(shù)組，模型組小鼠腸道菌群豐富度顯著下降（P＜0.05）；相較于模型組，虎杖清脈飲組腸道菌群豐富度顯著升高（P＜0.05），說(shuō)明虎杖清脈飲可以提升模型組小鼠腸道菌群的豐富度。如圖3D 所示，3 組小鼠腸道菌群的Shannon 均勻度測(cè)量指數(shù)無(wú)明顯差異。綜上，模型組慢性腦缺血小鼠菌群的物種豐富度明顯下降，虎杖清脈飲可提升慢性腦缺血小鼠菌群的物種豐富度。

圖3 各組小鼠腸道菌群Alpha 多樣性分析(n=6，±s)

3.4 小鼠腸道菌群Beta 多樣性分析

通過(guò)主成分分析（PCA）各組小鼠樣本菌群群落組成差異，運(yùn)用反差分解，在圖中通過(guò)距離反映不同組之間的組成差異，如樣本物種組成越相似，反映在主成分分析圖中的距離越近。假手術(shù)組和模型組聚集在一起，說(shuō)明模型組對(duì)腸道菌群的影響較小。而虎杖清脈飲組與模型組距離較遠(yuǎn)，說(shuō)明慢性腦缺血小鼠腸道菌群改變較小，虎杖清脈飲具有調(diào)控模型組小鼠腸道菌群組成的作用（圖4）。

圖4 各組小鼠腸道菌群Beta 多樣性分析(n=6，±s)

3.5 小鼠腸道菌群物種組成及差異分析

3.5.1 基于門水平差異性分析

門水平上，3 組小鼠腸道中占主導(dǎo)地位的微生物主要有厚壁菌門（Firmicutes）、擬桿菌門（Bacteroidota）、脫硫菌門（Desulfobacterota）、髕骨細(xì)菌門（Patescibacteria）、放線菌門（Actinobacteriota），其中后壁菌門和擬桿菌門為優(yōu)勢(shì)門類（圖5A）。由圖5B 所示，各組小鼠腸道菌群中髕骨細(xì)菌門和彎曲菌門豐度有顯著性差異（P＜0.05）。如圖5C 所示，相較于假手術(shù)組，模型組疣微菌門豐度顯著升高（P＜0.05）。如圖5D 所示，相較于模型組，虎杖清脈飲組小鼠的疣微菌門豐度顯著降低（P＜0.05），髕骨細(xì)菌門豐度顯著增加（P＜0.05）。門水平差異性分析顯示，慢性腦缺血小鼠疣微菌門豐富度增加；虎杖清脈飲降低慢性腦缺血小鼠疣微菌門和增加髕骨細(xì)菌門的群落豐度。

圖5 各組小鼠腸道菌群門水平組成及差異分析(n=6，±s)

3.5.2 基于屬水平差異性分析

屬水平上，3 組小鼠腸道中優(yōu)勢(shì)菌為毛螺菌科_NK4A136_group、norank_f_Muribaculaceae和 乳桿菌屬(Lactobacillus)等（圖6A）。如圖6B 所示，3 組小鼠的腸道菌群中，阿克曼菌屬（Akkermansia）、綠膿桿菌（Turicibacter）、嗜木聚糖真桿菌屬（Eubacterium_xylanoPhilum_group）、異桿菌屬（Allobaculum）、丹毒莢膜菌屬（Erysipelatoclostridium）、回腸桿菌（Ileibacterium）、乳酸球菌屬（Lactococcus）群落豐度具有顯著性差異（P＜0.05，P＜0.01）。如圖6C所示，與假手術(shù)組相比，模型組阿克曼菌屬、丹毒莢膜菌屬豐度顯著上升（P＜0.05）；嗜木聚糖真桿菌屬、異桿菌屬、綠膿桿菌、回腸桿菌和乳酸球菌屬豐度顯著下降（P＜0.05，P＜0.01）。如圖6D 所示，與模型組相比，虎杖清脈飲組的阿克曼菌屬、丹毒莢膜菌屬豐度顯著下降（P＜0.05）；嗜木聚糖真桿菌屬、異桿菌屬、綠膿桿菌、回腸桿菌和乳酸球菌屬豐度顯著上升（P＜0.05，P＜0.01）。

圖6 各組小鼠腸道菌群屬水平組成及差異分析(n=6，±s)

3.6 各組小鼠腸道菌群LEfSe 多級(jí)物種差異判別分析

如表1 所示，LEfSe 可以檢測(cè)各組之間存在顯著豐度差異特征。相較于假手術(shù)組，模型組疣微菌門（P_Verrucomicrobiota）、疣微菌綱（c_Verrucomicrobiae）、疣微菌目（o_Verrucomicrobiales）、阿克曼菌科（f_Akkermansiaceae）等相對(duì)豐度顯著上調(diào)；嗜木聚糖真桿菌屬（g_Eubacterium_xylanophilum_group）、羅氏菌屬（g_Roseburia）、回腸桿菌屬（g_Ileibacterium）等相對(duì)豐度顯著下調(diào)，表明慢性腦缺血小鼠上述腸道菌群豐度發(fā)生顯著性變化。

表1 各組小鼠腸道菌群LEfSe 多級(jí)物種差異判別分析

相較于模型組，虎杖清脈飲組疣微菌綱（c_Verrucomicrobiae）、藍(lán)細(xì)菌綱（c_Cyanobacteriia）、疣微菌門（P_Verrucomicrobiota）、阿克曼菌科（f_Akkermansiaceae）、阿克曼菌屬（g_Akkermansia）、糞芽孢菌屬（g_Coprobacillus）、丹毒莢膜菌屬（g_Erysipelatoclostridium）、副桿菌屬（g_Parabacteroides）等相對(duì)豐度顯著下調(diào)；丹毒絲菌科（f_Erysipelotrichaceae）、消化鏈球菌科（f_PeptostrePtococcaceae）、綠膿桿菌屬（g_Turicibacter）、異桿菌屬（g_Allobaculum）、嗜木聚糖真桿菌屬（g_Eubacterium_xylanophilum_group）等相對(duì)豐度顯著上調(diào)。說(shuō)明虎杖清脈飲通過(guò)調(diào)節(jié)嗜木聚糖真桿菌屬、異桿菌屬、綠膿桿菌、疣微菌、阿克曼菌和丹毒莢膜菌的豐度，達(dá)到治療慢性腦缺血的治療作用。

4 討論

慢性腦缺血會(huì)損害腦血管，導(dǎo)致患者身體殘疾、認(rèn)知障礙或抑郁樣行為。慢性腦缺血(CCI)被認(rèn)為是血管性癡呆的一個(gè)病理生理標(biāo)志[1-2]，它是血管認(rèn)知障礙(VCI)最嚴(yán)重的階段和形式，與推理、學(xué)習(xí)和記憶方面的問(wèn)題有關(guān)[11-12]。

近年來(lái)，大量的研究展示了腸道微生物對(duì)人體的生長(zhǎng)發(fā)育有重要作用，當(dāng)腸道微生物失調(diào)時(shí)，可能造成神經(jīng)功能缺陷，進(jìn)而出現(xiàn)神經(jīng)退行性疾病[13-14]。腸道微生物參與周圍神經(jīng)系統(tǒng)和中樞神經(jīng)系統(tǒng)的雙向調(diào)節(jié)，并通過(guò)腦-腸軸調(diào)節(jié)參與機(jī)體的免疫、代謝、神經(jīng)、內(nèi)分泌等系統(tǒng)，進(jìn)而影響多種神經(jīng)系統(tǒng)疾病的發(fā)生[15-16]。研究顯示，神經(jīng)類疾病如阿爾茲海默癥、抑郁癥、帕金森疾病等都存在宿主腸道菌群紊亂的現(xiàn)象，并且發(fā)現(xiàn)腸道菌群能通過(guò)神經(jīng)內(nèi)分泌和自主神經(jīng)實(shí)現(xiàn)腦-腸信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，從而參與調(diào)節(jié)宿主的神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫網(wǎng)絡(luò)，影響宿主的情緒、認(rèn)知或行為改變[17]。

虎杖清脈飲由虎杖、垂盆草、豨薟草、連翹、黃芪、雞血藤和川芎組成，虎杖為君藥，《藥性論》曰：“虎杖，壓一切熱毒”。虎杖性味苦，寒，在方中起清熱解毒、涼血祛瘀的功效。虎杖對(duì)神經(jīng)具有保護(hù)作用，如虎杖苷可通過(guò)調(diào)控lncRNA-MALAT1 發(fā)揮腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞保護(hù)作用；虎杖苷可以激活SIRT1 信號(hào)通路減輕大鼠創(chuàng)傷性腦損傷[18]。連翹[19]、垂盆草及豨薟草[20-21]共為臣藥。連翹味苦，微寒，屬于清熱解毒藥，《醫(yī)學(xué)衷中參西錄》：連翹具升浮宣散之力，可流通氣血。垂盆草味甘、淡，性涼，豨薟草性味辛、苦，寒，二者具有清熱解毒，祛風(fēng)通絡(luò)之功。三藥聯(lián)用助虎杖清熱解毒，又能增強(qiáng)通絡(luò)的作用。雞血藤[22]、黃芪共為方中佐藥。雞血藤溫而不烈，活血祛瘀兼有補(bǔ)血功效；黃芪甘溫，具有益氣扶正之功，治久病氣虛。三者可治血瘀氣虛兼癥，并能制君藥和臣藥苦寒，保護(hù)脾胃。川芎[23]辛溫，既能祛風(fēng)，又能行氣活血，引諸藥上行巔頂，為佐而兼使之用。其中的川芎嗪、阿魏酸、藁本內(nèi)酯等[24-25]化學(xué)成分有明顯腦保護(hù)作用。諸藥合用，共奏清熱解毒、活血通絡(luò)之功。本研究通過(guò)減少頸總動(dòng)脈的血流量，成功建立慢性腦缺血小鼠的模型。

通過(guò)水迷宮實(shí)驗(yàn)和LFB 染色表明虎杖清脈飲對(duì)小鼠慢性腦缺血具有保護(hù)作用，從腸道菌群的角度觀察發(fā)現(xiàn)慢性腦缺血將會(huì)導(dǎo)致小鼠菌群的物種的豐富度有所下降，并且其中疣微菌門、阿克曼菌屬和丹毒莢膜菌屬相對(duì)豐度上升，而嗜木聚糖真桿菌屬和異桿菌屬的相對(duì)豐度下降；虎杖清脈飲具有增加小鼠腸道菌群物種豐富度的作用，以及回調(diào)因?yàn)槁阅X缺血而導(dǎo)致菌屬變化的作用。阿克曼菌隸屬于疣微菌門，是腸道微生物中唯一一個(gè)來(lái)自疣微菌門的細(xì)菌。阿克曼菌[26]是一種以腸黏膜層中的黏蛋白為食，降解黏蛋白和黏液層。當(dāng)艾克曼菌異常增加時(shí)，會(huì)導(dǎo)致腸道屏障的受損，進(jìn)而誘發(fā)腸道炎癥和LPS 大量進(jìn)入血液影響其他臟器。有相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道[27]，在中風(fēng)患者的腸道艾克曼菌中異常增長(zhǎng)。同時(shí)，丹毒莢膜菌[28]的豐度也隨著帕金森患者胃腸功能障礙增加而增加，這與我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果相符。嗜木聚糖真桿菌和異桿菌[29-30]屬于短鏈脂肪酸產(chǎn)生菌，短鏈脂肪酸[31-32]可以降低腸道的通透性以及加強(qiáng)腸道屏障的防御力，調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞趨化性、活性氧（ROS）釋放以及細(xì)胞因子釋放而具有抗炎功能，短鏈脂肪酸也可以促進(jìn)腦內(nèi)海馬神經(jīng)的發(fā)生和延長(zhǎng)?；⒄惹迕}飲減少阿克曼菌屬的相對(duì)豐度；增加嗜木聚糖真桿菌屬和異桿菌屬的相對(duì)豐度，進(jìn)而維持腸道屏障功能的完整性，降低機(jī)體內(nèi)的炎癥反應(yīng)，保護(hù)血腦屏障[5]。綜上所述，虎杖清脈飲對(duì)慢性腦缺血小鼠的治療作用與其對(duì)慢性腦缺血小鼠腸道菌群失調(diào)的改善作用具有相關(guān)性。