新型4-三氟甲基-6-甲氧基喹啉-2-胺衍生物的合成及抗腫瘤活性研究

李成，呂夢(mèng)凡，余佳，徐必學(xué)*，徐廣燦*（1. 貴州中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，貴陽(yáng) 550025；2.貴州醫(yī)科大學(xué) 省部共建藥用植物功效與利用國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，貴陽(yáng) 550014；3. 貴州省中國(guó)科學(xué)院天然產(chǎn)物化學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，貴陽(yáng) 550014）

近年來(lái)，癌癥（亦稱惡性腫瘤）的發(fā)病率和病死率呈逐年上升趨勢(shì)[1]，我國(guó)癌癥患者病死率居世界首位。2021年，全球新增癌癥患者數(shù)量約為1930萬(wàn)，因患癌死亡人數(shù)達(dá)1000萬(wàn)人；預(yù)計(jì)到2040年全球?qū)?huì)有超過(guò)2840萬(wàn)新增癌癥患者，相較于2020年，增幅達(dá)47%[2]。由此可見(jiàn)，癌癥已成為威脅人類生命健康的主要疾病之一。目前，抗腫瘤的治療方法主要有手術(shù)治療、化學(xué)藥物治療和免疫治療等[3]。其中，化學(xué)藥物治療是目前針對(duì)惡性腫瘤的主要治療方法，但在臨床應(yīng)用中，現(xiàn)有抗腫瘤藥物往往表現(xiàn)出毒副作用大和易產(chǎn)生耐藥性等缺點(diǎn)[4]。因此，尋找和開(kāi)發(fā)新型高效低毒的抗腫瘤藥物具有重要的科學(xué)意義。

喹啉（quinoline）及其衍生物是一類重要的、具有多種生物活性（如抗瘧疾[5]、抗菌[6]、抗腫瘤[7-9]、調(diào)節(jié)免疫[10]、抗炎癥[11]和抗結(jié)核[12]等）的氮雜環(huán)類化合物，廣泛存在于許多天然產(chǎn)物和合成藥物中[13]：如抗瘧疾藥[14]（奎寧、奎尼丁、氯喹等）、抗真菌藥（氯碘羥喹）和平喘藥（孟魯司特）等已上市銷售藥物[15]。同時(shí)，喹啉作為抗腫瘤藥物研發(fā)中的優(yōu)勢(shì)骨架結(jié)構(gòu)受到了高度的關(guān)注，已有多種含喹啉骨架的抗腫瘤藥物上市銷售，例如伯舒替尼（bosutinib）、樂(lè)伐替尼（lenvatinib）、吡咯替尼（pyrotinib）等[16]（見(jiàn)圖1）。

圖1 伯舒替尼、樂(lè)伐替尼和吡咯替尼結(jié)構(gòu)式Fig 1 Structures of bosutinib，lenvatinib，and pyrotinib

氟原子因具有與氫原子相近的原子半徑以及高電負(fù)性的特性，使得含氟基團(tuán)在許多研究領(lǐng)域，尤其是醫(yī)藥領(lǐng)域得到了廣泛的應(yīng)用[17-19]。三氟甲基（-CF3）是一類常見(jiàn)的含氟基團(tuán)，多項(xiàng)研究表明，三氟甲基的引入能夠顯著改善原化合物的化學(xué)穩(wěn)定性、親脂親油性、生物膜通透性、體內(nèi)代謝穩(wěn)定性和生物利用度等[20]?；卩羌芙Y(jié)構(gòu)和三氟甲基在抗腫瘤藥物研發(fā)應(yīng)用中的優(yōu)勢(shì)，本課題組前期設(shè)計(jì)并合成了系列2-三氟甲基-喹啉-4-胺衍生物，并發(fā)現(xiàn)部分化合物具有較好的抗腫瘤活性[21-23]。在藥物設(shè)計(jì)開(kāi)發(fā)過(guò)程中，藥物分子母核結(jié)構(gòu)上取代基的位置變化往往對(duì)其藥效及生物活性具有較大的影響。因此，探索喹啉類化合物母核上三氟甲基取代位置的變化對(duì)其生物活性的影響，本文在前期研究基礎(chǔ)上設(shè)計(jì)并合成了一系列4-三氟甲基-6-甲氧基喹啉-2-胺衍生物（見(jiàn)圖2），并通過(guò)1H NMR、13C NMR和19F NMR 進(jìn)行了結(jié)構(gòu)確證。采用MTT法測(cè)定目標(biāo)化合物對(duì)K562細(xì)胞（人慢性髓系白血病細(xì)胞）、LNCaP細(xì)胞（前列腺癌細(xì)胞）、PC3細(xì)胞（前列腺癌細(xì)胞）、HeLa細(xì)胞（人宮頸癌細(xì)胞）、A549細(xì)胞（人肺癌細(xì)胞）5種腫瘤細(xì)胞株的體外生長(zhǎng)抑制活性，為進(jìn)一步探討該類化合物的抗腫瘤生物活性提供了研究基礎(chǔ)。

1 儀器與試藥

GB3002型電子天平（METTLER TOLEDO）；MYP19-2型磁力攪拌器（上海梅穎浦儀器儀表制造有限公司）；Rotavaper R-114型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（BUCHI）；XT-4型熔點(diǎn)儀（上海華巖儀器設(shè)備有限公司）；Bruker Avance NEO 600 MHz型核磁共振儀[DMSO-d6或CDCl3為溶劑，四甲基硅烷（TMS）為內(nèi)標(biāo)，瑞士Bruker公司]；恒溫培養(yǎng)箱（美國(guó)Grant 公司）；超低溫冰箱（美國(guó)Beckman公司）；顯微鏡（Olympus Corporation）；多功能酶標(biāo)儀（美國(guó)Biotek公司）。柱層析硅膠（200～300目）和薄層層析硅膠板（煙臺(tái)江友硅膠開(kāi)發(fā)有限公司）；四氮唑藍(lán)（MTT，Sigma公司）；所用試劑均為市售分析純或化學(xué)純；A549細(xì)胞（湖南豐暉生物科技有限公司）；PC3細(xì)胞、LNCaP細(xì)胞、K562細(xì)胞、HeLa細(xì)胞（貴州省中國(guó)科學(xué)院天然產(chǎn)物化學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室）。

2 方法

2.1 目標(biāo)化合物合成路線

如圖2所示合成路線，將4-甲氧基苯胺與三氟乙酰乙酸乙酯在130℃下回流反應(yīng)得化合物2，化合物2經(jīng)多聚磷酸催化環(huán)合反應(yīng)得化合物3，化合物3經(jīng)氯代反應(yīng)得關(guān)鍵中間體4；在酸性條件下，將中間體4與適宜的苯胺類化合物偶聯(lián)得化合物5a～5f；化合物5a～5d經(jīng)N-甲基化得化合物6a～6d；5e～5f經(jīng)鈀碳催化氫化還原得化合物7a～7b，化合物7a～7b與不同的酸酐（乙酸酐、丙酸酐和戊酸酐）或丙烯酰氯反應(yīng)得化合物8a～8e（見(jiàn)圖2）。

圖2 目標(biāo)化合物的合成路線圖Fig 2 Synthesis route of target compounds

2.2 化學(xué)合成

2.2.1N-（4-甲氧基苯基）-三氟乙酰乙酰胺（化合物2[24]）的合成 取對(duì)甲氧基苯胺（10 g，81.2 mmol）、三氟乙酰乙酸乙酯（23.75 mL，162.4 mmol）于100 mL反應(yīng)瓶中，130℃攪拌回流，每隔30 min加水0.36 mL，6 h反應(yīng)完畢[25]。待反應(yīng)液冷卻至室溫后，將反應(yīng)液分散至200 mL 正己烷和200 mL 冰水混合液中并且迅速攪拌，可見(jiàn)大量固體析出，過(guò)濾，濾餅以正己烷少量多次洗滌后于60℃減壓烘干，得16.58 g白色固體化合物2，收率為78.2%。所得樣品未經(jīng)進(jìn)一步純化直接用于下一步反應(yīng)。

2.2.2 4-三氟甲基-2-羥基-6-甲氧基-喹啉（化合物3[24]）的合成 取多聚磷酸（85.8 g，253.9 mmol）置于250 mL反應(yīng)瓶中，氬氣置換，于100℃攪拌0.5 h，加入化合物2（16.58 g，63.48 mmol）后繼續(xù)攪拌1 h至反應(yīng)完全。將反應(yīng)液分散至400 mL冰水中，攪拌下加入NaOH調(diào)節(jié)pH至弱堿性，可見(jiàn)大量固體析出，過(guò)濾，濾餅于80℃減壓烘干，得12.47 g白色固體化合物3，收率為80.8%。所得樣品未經(jīng)進(jìn)一步純化直接用于下一步反應(yīng)。1H NMR（600 MHz，DMSO-d6）δ：12.25（s，1H），7.41（d，J＝9.1 Hz，1H），7.35（dd，J＝9.1，2.7 Hz，1H），7.05（s，1H），6.98（s，1H），3.80（s，3H）。

2.2.3 4-三氟甲基-6-甲氧基-2-氯-喹啉（化合物4[26]）的合成 取化合物3（12.47 g，5.62 mmol）放于500 mL反應(yīng)瓶中，加入DMF 150 mL溶解完全，氬氣置換，于100℃攪拌下緩慢注入三氯氧磷（9.56 mL，102 mmol），繼續(xù)攪拌4.5 h至反應(yīng)完全。將反應(yīng)液分散至水中，有固體析出，過(guò)濾，濾餅于80℃減壓烘干，得11.46 g白色固體化合物4，收率為85.4%。所得樣品直接用于下一步反應(yīng)。1H NMR（600 MHz，CDCl3）δ：8.00（d，J＝9.2 Hz，1H），7.65（s，1H），7.46（dd，J＝9.3，2.7 Hz，1H），7.31（s，1H），3.95（s，3H）。

2.2.4 化合物5的合成（以化合物5a為例） 取化合物4（200 mg，0.76 mmol）、對(duì)三氟甲基苯胺（148 mg，0.92 mmol）置于10 mL反應(yīng)瓶中，加入異丙醇3 mL將其溶解，氬氣置換后加入HCl（36%）200 μL，于80℃攪拌反應(yīng)41 h。將反應(yīng)液分散于乙酸乙酯與水中，萃取，有機(jī)相依次以飽和NaCl洗滌，無(wú)水MgSO4干燥，減壓蒸干，所得濃縮物經(jīng)硅膠柱層析純化，得252 mg白色固體化合物5a，收率為90.9%。

N-（4-三氟甲基苯基）-4-三氟甲基-6-甲氧基喹啉-2-胺（化合物5a）：收率為90.9%。白色固體，m.p. 157～162℃，1H NMR（600 MHz，CDCl3）δ：7.84（d，J＝9.1 Hz，1H），7.80（d，J＝8.4 Hz，2H），7.61（d，J＝8.4 Hz，2H），7.37（dd，J＝9.2，2.7 Hz，1H），7.27（s，1H），7.22（s，1H），6.87（s，1H），3.93（s，3H）；13C NMR（151 MHz，CDCl3）δ：156.95，150.50，144.13，143.29，135.25（q，J＝31.5 Hz），129.53，126.60（q，J＝3.8 Hz），124.51（q，J＝271.1 Hz），124.26（q，J＝32.9 Hz），123.40（q，J＝274.3 Hz），122.81，119.90，118.41，110.79（q，J＝5.5 Hz），103.12（q，J＝2.4 Hz），55.71；19F NMR（565 MHz，CDCl3）δ：-61.8，-62.7。

參考上述方法合成化合物5b～5f。N-（3-乙炔基苯基）-4-三氟甲基-6-甲氧基喹啉-2-胺（化合物5b）：收率為90.9%。白色固體，m.p.147～156℃，1H NMR（600 MHz，CDCl3）δ：7.81（d，J＝9.2 Hz，1H），7.77（t，J＝1.9 Hz，1H），7.65～7.62（m，1H），7.34（dd，J＝9.2，2.8 Hz，1H），7.32（t，J＝8.0 Hz，1H），7.25（s，1H），7.22（dt，J＝7.6，1.3 Hz，1H），7.19（s，1H），6.74（s，1H），3.92（s，3H），3.10（s，1H）；13C NMR（151 MHz，CDCl3）δ：156.62，151.18，144.29，140.14，135.08（q，J＝31.4 Hz），129.39，129.35，126.86，123.46（q，J＝274.6 Hz），123.15，123.10，122.60，120.27，119.62，110.33（q，J＝5.6 Hz），103.14（q，J＝2.6 Hz），83.62，77.47，55.67；9F NMR（565 MHz，CDCl3）δ：-62.7。

N-（4-甲基苯基）-4-三氟甲基-6-甲氧基喹啉-2-胺（化合物5c）：收率為84.6%。白色固體，m.p. 155～159℃，1H NMR（600 MHz，CDCl3）δ：7.75（d，J＝9.1 Hz，1H），7.40（d，J＝8.3 Hz，2H），7.32（dd，J＝9.2，2.8 Hz，1H），7.25（d，J＝2.4 Hz，1H），7.24（s，1H），7.19（d，J＝8.1 Hz，2H），6.83（s，1H），3.91（s，3H），2.36（s，3H）；13C NMR（151 MHz，CDCl3）δ：156.25，152.31，144.58，137.24，134.95（q，J＝31.1 Hz），133.48，130.06，128.99，123.56（q，J＝274.4 Hz），122.45，121.04，119.38，109.64（q，J＝5.7 Hz），103.22（q，J＝2.3 Hz），55.65，21.00；19F NMR（565 MHz，CDCl3）δ：-62.7。

N-（3-氟-4-氯苯基）-4-三氟甲基-6-甲氧基喹啉-2-胺（化合物5d）： 收率為93.2%。白色固體，m.p. 120～123℃，1H NMR（600 MHz，CDCl3）δ：7.90（dd，J＝6.5，2.7 Hz，1H），7.80（d，J＝9.2 Hz，1H），7.43～7.39（m，1H），7.35（dd，J＝9.2，2.7 Hz，1H），7.26～7.24（m，1H），7.14～7.10（m，2H），6.64（s，1H），3.92（s，3H）；13C NMR（151 MHz，CDCl3）δ：156.71，154.15（d，J＝244.5 Hz），150.98，144.11，136.79（d，J＝3.0 Hz），135.22（q，J＝31.2 Hz），129.33，123.40（q，J＝274.4 Hz），122.69，121.83，121.31（d，J＝18.4 Hz），119.39（d，J＝6.7 Hz），116.89（d，J＝22.2 Hz），110.29（q，J＝5.6 Hz），103.18（q，J＝2.5 Hz），55.69；19F NMR（565 MHz，CDCl3）δ：-62.7，-122.6。

N-（3-硝基-4-甲氧基苯基）-4-三氟甲基-6-甲氧基喹啉-2-胺（化合物5e）：收率為99.0%。黃色固體，m.p. 224～235℃，1H NMR（600 MHz，DMSO-d6）δ：9.85（s，1H），8.70（d，J＝2.7 Hz，1H），7.90（dd，J＝9.1，2.8 Hz，1H），7.66（d，J＝9.1 Hz，1H），7.38～7.33（m，2H），7.29（d，J＝9.2 Hz，1H），7.06（s，1H），3.84（s，3H），3.79（s，3H）；13C NMR（151 MHz，DMSO-d6）δ：155.81，151.20，146.78，143.09，138.62，134.13，132.64（q，J＝30.9 Hz），128.94，124.36，123.34（q，J＝273.9 Hz），121.73，118.01，115.01，114.09，112.49（q，J＝5.8 Hz），102.98，56.79，55.45；19F NMR（565 MHz，DMSO-d6）δ：-61.9。

N-（4-硝基苯基）-4-三氟甲基-6-甲氧基喹啉-2-胺（化合物5f）：收率為68.7%。黃色固體，m.p. 270～274℃，1H NMR（600 MHz，DMSO-d6）δ：10.35（s，1H），8.18（d，J＝9.0 Hz，2H），8.10（d，J＝9.2 Hz，2H），7.85（d，J＝9.1 Hz，1H），7.50（s，1H），7.44（dd，J＝9.1，2.7 Hz，1H），7.12（s，1H），3.85（s，3H）；13C NMR（151 MHz，DMSO-d6）δ：156.49，150.50，147.22，142.88，140.20，132.86（q，J＝30.8 Hz），129.51，125.21，123.27（q，J＝274.0 Hz），122.06，118.71，117.29，112.83（q，J＝5.8 Hz），102.72，55.49；19F NMR（565 MHz，DMSO-d6）δ：-61.9。

2.2.5 化合物6的合成（以化合物6a為例） 取化合物5a（80 mg，0.21 mmol）于10 mL反應(yīng)管中，加入DMF 5 mL使其完全溶解，加入NaH（10 mg，0.42 mmol），氬氣置換，攪拌下緩慢注入碘甲烷（26 μL，0.42 mmol），室溫反應(yīng)1 h至反應(yīng)完畢。將反應(yīng)液分散于乙酸乙酯與水中，萃取，有機(jī)相依次以飽和NaCl洗滌，無(wú)水MgSO4干燥，減壓蒸干，所得殘留物經(jīng)硅膠柱層析純化，得80.0 mg黃色固體化合物6a，收率96.5%。

N-甲基-N-（4-三氟甲基苯基）-4-三氟甲基-6-甲氧基喹啉-2-胺（化合物6a）：收率為96.5%。黃色固體，m.p. 104～115℃，1H NMR（600 MHz，CDCl3）δ：7.82（d，J＝9.2 Hz，1H），7.67（d，J＝8.3 Hz，2H），7.37（d，J＝8.4 Hz，2H），7.35（dd，J＝9.2，2.8 Hz，1H），7.26～7.22（m，2H），3.92（s，3H），3.66（s，3H）；13C NMR（151 MHz，CDCl3）δ：156.59，153.93，149.40，144.58，134.32（q，J＝31.0 Hz），129.43，127.14（q，J＝3.8 Hz），126.93（q，J＝32.7 Hz），124.51，124.19（q，J＝271.5 Hz），123.54（q，J＝274.6 Hz），122.48，119.28，110.59（q，J＝5.8 Hz），103.08（q，J＝2.6 Hz），55.68，38.67；19F NMR（565 MHz，CDCl3）δ：-62.18，-62.64。

參考上述方法合成化合物6b～6e。N-甲基-N-（3-乙炔基苯基）-4-三氟甲基-6-甲氧基喹啉-2-胺（化合物6b）：收率為99.7%。黃色固體，m.p. 102～110℃，1H NMR（600 MHz，CDCl3）δ：7.79（d，J＝9.1 Hz，1H），7.44～7.40（m，1H），7.43～7.36（m，2H），7.32（dd，J＝9.2，2.8 Hz，1H），7.27（dt，J＝6.9，2.4 Hz，1H），7.23～7.19（m，1H），7.07（s，1H），3.91（s，3H），3.60（s，3H），3.13（s，1H）；13C NMR（151 MHz，CDCl3）δ：156.09，154.39，146.26，144.64，134.09（q，J＝31.0 Hz），130.17，129.89，129.76，129.17，126.87，124.17，123.59（q，J＝274.5 Hz），122.19，118.69，109.98（q，J＝6.0 Hz），103.19（q，J＝2.3 Hz），82.90，78.31，55.65，38.86；19F NMR（565 MHz，CDCl3）δ：-62.7。

N-甲基-N-（4-甲基苯基）-4-三氟甲基-6-甲氧基喹啉-2-胺（化合物6c）：收率為96.5%。黃色固體，m.p. 79～84℃，1H NMR（600 MHz，CDCl3）δ：7.78（d，J＝9.1 Hz，1H），7.31（dd，J＝9.2，2.8 Hz，1H），7.25（d，J＝8.2 Hz，2H），7.20（s，1H），7.16（d，J＝8.2 Hz，2H），7.04（s，1H），3.90（s，3H），3.58（s，3H），2.40（s，3H）；13C NMR（151 MHz，CDCl3）δ：155.73，154.90，144.73，143.44，136.34，133.78（q，J＝30.9 Hz），130.84，128.95，126.45，123.68（q，J＝274.7 Hz），121.90，118.29，110.02（q，J＝5.8 Hz），103.32（q，J＝2.5 Hz），55.62，38.96，21.2；19F NMR（565 MHz，CDCl3）δ：-62.7。

N-甲基-N-（3-氟-4-氯苯基）-4-三氟甲基-6-甲氧基喹啉-2-胺（化合物6d）：收率為96.4%。黃色固體，m.p. 108～110℃，1H NMR（600 MHz，CDCl3）δ：7.78（d，J＝9.2 Hz，1H），7.35（dd，J＝6.5，2.6 Hz，1H），7.33（dd，J＝9.2，2.8 Hz，1H），7.24～7.20（m，2H），7.18～7.14（m，1H），7.01（s，1H），3.91（s，3H），3.56（s，3H）；13C NMR（151 MHz，CDCl3）δ：156.39（d，J＝248.8 Hz），156.21，154.27，144.56，142.89（d，J＝3.7 Hz），134.33（d，J＝31.0 Hz），129.23，128.84，126.38（d，J＝7.3 Hz），123.55（q，J＝274.6 Hz），122.39，122.27，118.73，117.87（d，J＝22.0 Hz），109.46（d，J＝5.8 Hz），103.11（d，J＝2.4 Hz），55.66，39.14；19F NMR（565 MHz，CDCl3）δ：-62.7，-117.7。

2.2.6 化合物7的合成（以化合物7a為例） 取化合物5e（50 mg，127 μmol）于10 mL反應(yīng)瓶中，加入3 mL甲醇使其溶解，加入鈀碳（5 mg），氫氣置換，室溫?cái)嚢?2 h至反應(yīng)完全。反應(yīng)液經(jīng)300～400目硅膠墊濾除鈀碳，并以甲醇少量多次洗滌，濃縮濾液，殘留物經(jīng)柱層析純化，得白色固體化合物7a，收率為82.6%。

N-（3-氨基-4-甲氧基苯基）-4-三氟甲基-6-甲氧基喹啉-2-胺（化合物7a）：收率為82.6%。白色固體，m.p. 176～212℃，1H NMR（600 MHz，CDCl3）δ：7.71（d，J＝9.2 Hz，1H），7.31（dd，J＝9.2，2.8 Hz，1H），7.24～7.22（m，1H），7.20（s，1H），6.85（d，J＝2.2 Hz，1H），6.78～6.77（m，2H），6.73（s，1H），3.90（s，3H），3.87（s，3H）；13C NMR（151 MHz，CDCl3）δ：156.04，153.23，144.65，144.63，137.22，134.89（q，J＝31.2 Hz），133.08，128.71，123.59（q，J＝274.5 Hz），122.39，119.20，112.28，111.22，109.73，109.26（q，J＝5.8 Hz），103.29（q，J＝2.4 Hz），55.95，55.65。

參考上述方法合成。N-（4-氨基苯基）-4-三氟甲基-6-甲氧基喹啉-2-胺（化合物7b）：收率為90.7%。黃色固體，m.p. 273～286℃，1H NMR（600 MHz，CD3OD）δ：7.94（d，J＝9.1 Hz，1H），7.87（d，J＝7.9 Hz，2H），7.64（s，1H），7.62（d，J＝7.5 Hz，2H），7.56（dd，J＝9.1，2.5 Hz，1H），7.37（s，1H），3.96（s，3H）；13C NMR（151 MHz，CD3OD）δ：159.18，151.99，138.42，136.38（q，J＝31.6 Hz），130.20，126.02，125.99，124.58，123.92（q，J＝274.7 Hz），122.81，119.67，114.89，109.11（q，J＝5.8 Hz），106.03（q，J＝2.5 Hz），56.41；19F NMR（565 MHz，CD3OD）δ：-64.7。

2.2.7 化合物8a～8d的合成（以化合物8a為例） 取化合物7a（80 mg，0.20 mmol）于10 mL反應(yīng)瓶中，加入DCM 3 mL使其完全溶解，加入K2CO3（138 mg，1.00 mmol），氬氣置換，緩慢注入乙酸酐（38 μL，0.40 mmol），室溫繼續(xù)攪拌1 h至反應(yīng)完畢。將反應(yīng)液分散于乙酸乙酯與水中，萃取，有機(jī)相依次以飽和NaCl洗滌，無(wú)水MgSO4干燥，減壓蒸干，所得殘留物經(jīng)硅膠柱層析純化，得81.1 mg黃色固體化合物8a，收率為42.7%。

N-（3-乙酰氨基-4-甲氧基苯基）-4-三氟甲基-6-甲氧基喹啉-2-胺（化合物8a）：收率為42.7%。黃色固體，m.p. 220～230℃，1H NMR（600 MHz，DMSO-d6）δ：9.51（s，1H），9.08（s，1H），8.48（d，J＝2.6 Hz，1H），7.85（dd，J＝8.8，2.6 Hz，1H），7.71（d，J＝9.1 Hz，1H），7.45（s，1H），7.38（dd，J＝9.1，2.8 Hz，1H），7.11（s，1H），7.00（d，J＝8.9 Hz，1H），3.83（s，3H），3.81（s，3H），2.11（s，3H）；13C NMR（151 MHz，DMSO-d6）δ：168.49，155.36，151.77，144.21，143.55，133.94，132.23（q，J＝30.2 Hz），128.78，127.56，123.43（q，J＝274.0 Hz），121.40，117.56，113.82，112.61，111.16，103.01，79.19，55.94，55.40，24.06；19F NMR（565 MHz，DMSO-d6）δ：-61.9。

參考上述方法合成化合物8b～8d（化合物8a～8c以7a為原料，化合物8d以7b為原料）。N-（3-丙酰氨基-4-甲氧基苯基）-4-三氟甲基-6-甲氧基喹啉-2-胺（化合物8b）：收率為56.0%。黃色固體，m.p. 194～205℃，1H NMR（600 MHz，DMSO-d6）δ：9.51（s，1H），8.97（s，1H），8.46（s，1H），7.88（dd，J＝9.0，2.5 Hz，1H），7.71（d，J＝9.1 Hz，1H），7.45（s，1H），7.38（dd，J＝9.3，2.7 Hz，1H），7.11（d，J＝2.9 Hz，1H），7.00（d，J＝8.8 Hz，1H），3.83（s，3H），3.81（s，3H），2.41（q，J＝7.6 Hz，2H），1.08（t，J＝7.6 Hz，3H）；13C NMR（151 MHz，DMSO-d6）δ：172.14，155.35，151.78，144.28，143.56，133.96，132.24（q，J＝30.4 Hz），128.76，127.55，123.44（q，J＝274.2 Hz），121.38，117.57，113.79，112.69，112.61（q，J＝5.7 Hz），111.14，103.02，79.19，55.95，29.46，9.88；19F NMR（565 MHz，DMSO-d6）δ：-61.9。

N-（3-戊酰氨基-4-甲氧基苯基）-4-三氟甲基-6-甲氧基喹啉-2-胺（化合物8c）：收率為27.6%。黃色固體，m.p. 167～171℃，1H NMR（600 MHz，CDCl3）δ：8.48（d，J＝2.7 Hz，1H），7.80（s，1H），7.75（d，J＝9.2 Hz，1H），7.58（dd，J＝8.8，2.7 Hz，1H），7.28（dd，J＝9.2，2.7 Hz，1H），7.23～7.19（m，1H），7.13（s，1H），7.07（s，1H），6.85（d，J＝8.8 Hz，1H），3.89（s，3H），3.86（s，3H），2.41（t，J＝7.7 Hz，2H），1.72（p，J＝7.7 Hz，2H），1.41（h，J＝7.4 Hz，2H），0.94（t，J＝7.4 Hz，3H）；13C NMR（151 MHz，CDCl3）δ：171.66，156.02，152.37，144.45，144.17，134.55（q，J＝31.0 Hz），133.53，129.01，128.19，123.57（q，J＝274.3 Hz），122.08，119.11，115.76，113.24，110.41，110.31（q，J＝5.6 Hz），103.24（q，J＝2.5 Hz），56.08，55.60，38.02，27.87，22.49，13.91；19F NMR（565 MHz，CDCl3）δ：-62.6。

N-（4-丙酰氨基苯基）-4-三氟甲基-6-甲氧基喹啉-2-胺（化合物8d）：收率為50.0%。黃色固體，m.p. 243～270℃，1H NMR（600 MHz，DMSO-d6）δ：9.74（s，1H），9.52（s，1H），7.81（d，J＝8.7 Hz，2H），7.72（dd，J＝9.1，1.9 Hz，1H），7.53（d，J＝8.7 Hz，2H），7.41（s，1H），7.35～7.30（m，1H），7.08（s，1H），3.80（s，3H），2.27（q，J＝7.6 Hz，2H），1.05（t，J＝7.5 Hz，3H）；13C NMR（151 MHz，DMSO-d6）δ：171.54，155.45，151.61，143.51，136.26，133.50，132.34（q，J＝30.6 Hz），128.90，123.43（q，J＝274.1 Hz），121.38，119.68，118.62，117.69，112.64（q，J＝6.0 Hz），103.01，55.38，29.47，9.80；19F NMR（565 MHz，DMSO-d6）δ：-61.9。

2.2.8N-（3-丙烯酰氨基-4-甲氧基苯基）-4-三氟甲基-6-甲氧基喹啉-2-胺（化合物8e）的合成

取化合物7a（160 mg，0.40 mmol）于10 mL反應(yīng)瓶中，加入DCM 3 mL使其完全溶解，加入K2CO3（276 mg，2.00 mmol），氬氣置換，0℃下攪拌5 min后緩慢注入丙烯酰氯（65 μL，0.80 mmol），繼續(xù)攪拌1 h至反應(yīng)完畢。將反應(yīng)液分散于乙酸乙酯與水中，萃取，有機(jī)相依次以飽和NaCl洗滌，無(wú)水MgSO4干燥，減壓蒸干，所得殘留物經(jīng)硅膠柱層析純化，得65.6 mg黃色固體化合物8e，收率為39.3%。黃色固體，m.p.180～191℃，1H NMR（600 MHz，CDCl3）δ：8.56（s，1H），7.95（s，1H），7.76（d，J＝9.2 Hz，1H），7.61（dd，J＝8.8，2.6 Hz，1H），7.30（dd，J＝9.2，2.8 Hz，1H），7.21（s，1H），7.14（s，1H），6.88（d，J＝8.7 Hz，1H），6.42（dd，J＝16.9，1.3 Hz，1H），6.31（dd，J＝16.9，10.2 Hz，1H），5.77（dd，J＝10.2，1.3 Hz，1H），3.89（s，3H），3.89（s，3H）；13C NMR（151 MHz，CDCl3）δ：163.58，156.09，152.36，144.42，144.33，134.72（q，J＝31.2 Hz），133.51，131.60，128.90，128.03，127.77，123.54（q，J＝274.3 Hz），122.19，119.16，116.30，113.43，110.51，110.28（q，J＝5.7 Hz），103.28（q，J＝2.5 Hz），56.15，55.63；19F NMR（565 MHz，CDCl3）δ：-62.7。

2.3 抗腫瘤活性測(cè)試

以紫杉醇為陽(yáng)性對(duì)照，目標(biāo)化合物和陽(yáng)性對(duì)照藥物用DMSO完全溶解后以無(wú)血清的培養(yǎng)基稀釋至濃度為5 μmol·L-1。采用MTT法測(cè)試目標(biāo)化合物對(duì)K562、LNCaP、PC3、HeLa和A5495種腫瘤細(xì)胞株的體外生長(zhǎng)抑制活性，以評(píng)估該類化合物的抗腫瘤活性。分別取上述處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的腫瘤細(xì)胞株，接種于96孔板中，培養(yǎng)24 h，隨后每孔加入目標(biāo)化合物或陽(yáng)性對(duì)照藥物100 μL，每組設(shè)3個(gè)平行孔，在孵箱中繼續(xù)培養(yǎng)48 h。再加入20 μL質(zhì)量濃度為5 mg·mL-1的MTT溶液繼續(xù)培養(yǎng)4 h。離心，棄去上清液，加入150 μL DMSO，避光、低速振蕩至完全溶解。在570 nm波長(zhǎng)處用酶標(biāo)儀測(cè)量吸光度（OD）值，計(jì)算抑制率，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 目標(biāo)化合物的體外抗腫瘤活性Tab 1 Antitumor activities of the target compounds in vitro

3 結(jié)果

本文通過(guò)以4-甲氧基苯胺為起始原料，通過(guò)氨解、環(huán)化、氯代、偶聯(lián)、烷基化等反應(yīng)，設(shè)計(jì)合成新型4-三氟甲基-6-甲氧基喹啉-2-胺衍生物17個(gè)。以MTT法對(duì)合成所得目標(biāo)化合物進(jìn)行了體外抗腫瘤活性測(cè)試，發(fā)現(xiàn)部分化合物對(duì)腫瘤細(xì)胞的增殖具有一定的抑制活性。其中，在5 μmol·L-1濃度下，化合物5b對(duì)LNCaP細(xì)胞的增殖抑制率為42.61%，化合物5e對(duì)K562細(xì)胞的增殖抑制率為41.29%。

4 討論

4.1 合成部分

在本文采用的4-三氟甲基-6-甲氧基喹啉-2-胺衍生物合成路線中，部分中間體的制備僅需簡(jiǎn)單的后處理，未經(jīng)柱層析純化即可直接用于下一步反應(yīng)，操作簡(jiǎn)便，收率較高。在喹啉環(huán)2-位引入不同取代芳胺的偶聯(lián)反應(yīng)中，參照文獻(xiàn)[23]，曾嘗試過(guò)堿性條件（K2CO3或NaH）和中性條件下反應(yīng)，但均未取得較好的結(jié)果，最終發(fā)現(xiàn)在酸性條件下[21，23]，本文涉及的偶聯(lián)反應(yīng)較好，收率均在68%以上。

4.2 活性測(cè)試結(jié)果分析

化合物5b的2-位N原子上烷基化后的化合物6b對(duì)K562細(xì)胞、LNCaP細(xì)胞和HeLa細(xì)胞的增殖抑制活性均有所降低；化合物5e和5f的硝基還原為氨基后的化合物7a和7b對(duì)腫瘤細(xì)胞的增殖抑制活性均有所降低。該研究結(jié)果可為喹啉類衍生物抗腫瘤作用進(jìn)一步的結(jié)構(gòu)優(yōu)化提供參考。