利用流式細(xì)胞術(shù)鑒定樺木染色體倍性和DNA 含量

黃茂根 沈 凝 劉雪羽 吳興盛 陳愛(ài)平 孟 巖 胡現(xiàn)鉻 童再康 黃華宏 樓雄珍

（1. 羅卜巖自然保護(hù)區(qū)管理站，福建 三明 365050；2. 浙江農(nóng)林大學(xué)亞熱帶森林培育國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，浙江 臨安 311300；3. 官莊國(guó)有林場(chǎng)，福建 三明 365050；4. 信陽(yáng)市林業(yè)科學(xué)研究所，河南 信陽(yáng) 464000）

如何有效評(píng)估植物基因組大小是開(kāi)展植物遺傳改良和分子遺傳學(xué)研究的關(guān)鍵問(wèn)題之一。目前，鑒定植物基因組大小的主要方法有流式細(xì)胞術(shù)（FCM）、Feulgen 光密度測(cè)定法（FDM）和全基因組測(cè)序法（WGS）[1]，其中FCM 操作簡(jiǎn)單、檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確、檢測(cè)成本低，是最常用的測(cè)定方法。例如，通過(guò)對(duì)山茶屬和山茶亞屬株的DNA 含量進(jìn)行測(cè)定，識(shí)別出普洱茶（Camellia sinensisvar.assamica）的基因組大小[2]；通過(guò)對(duì)藍(lán)莓（Vacciniumspp.）個(gè)體的測(cè)定，發(fā)現(xiàn)其倍性豐富，包含從2 倍體到6 倍體等不同的種[3]；通過(guò)對(duì)香蕉（Musa nana）的倍性檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)其至少含2 倍體、3 倍體和4 倍體[4]。物種基因組大小的預(yù)估，可以提前預(yù)測(cè)解析其基因組所需要的成本，為后續(xù)的測(cè)序組裝等分析提供重要的理論參考，同時(shí)也為遺傳學(xué)和基因組學(xué)研究奠定基礎(chǔ)。

樺木屬（Betula）的適宜生態(tài)位主要分布于北半球亞熱帶、溫帶以及寒溫帶地區(qū)，約有100 個(gè)種[5]，我國(guó)自然分布約31 個(gè)種和6 個(gè)變種[6]，分布于我國(guó)的橫斷山區(qū)、四川盆地、滇南和新疆等地[7]。樺木屬植物包含很多重要的用材樹(shù)種，例如光皮樺（Betula luminifera）木材被我國(guó)列為一類(lèi)木材，生長(zhǎng)快、抗性強(qiáng)，具有很高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值和廣闊的開(kāi)發(fā)前景。樺木屬植物倍性豐富，從2 倍體到12 倍體不等，1C 值在0.44 pg（430 Mb）到2.67 pg（2 611 Mb）之間，2Cx 值在371 Mb 到616 Mb 之間[8]。當(dāng)前，樺木屬植物的基因組信息還不豐富[9-10]，且缺乏針對(duì)樺木屬植物的基因組評(píng)估測(cè)定方法。因此，建立有效的評(píng)估體系對(duì)樺木屬植物的倍性進(jìn)行鑒定，可快速鑒定樺木種間雜交后代的倍性，可為未來(lái)選育出適應(yīng)性強(qiáng)，生長(zhǎng)速度快，材質(zhì)優(yōu)良的樺木新品種提供重要的技術(shù)支撐。然而，目前國(guó)內(nèi)對(duì)樺木屬植物的研究大部分集中在其基因功能解析，而對(duì)于樺木屬植物倍性與DNA 含量的研究相對(duì)較少，這也限制了我國(guó)樺木屬植物的研究和快速發(fā)展。本研究利用FCM 檢測(cè)不同種類(lèi)樺木屬植物的細(xì)胞染色體的倍性，并針對(duì)不同材料、試劑先進(jìn)行優(yōu)選，篩選適合樺木屬植物的FCM 檢測(cè)體系，為未來(lái)的樺木屬植物的倍性育種和全基因組測(cè)序分析以及多倍體植物的形成機(jī)制探索提供研究基礎(chǔ)和參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 植物材料

7 種樺樹(shù)：河樺（Betula nigra）、光皮樺、光皮樺 × 河樺（Betula luminifera×Betula nigra）、垂枝樺（Betula pendula）、黑樺（Betula dahurica）、岳 樺（Betula ermanii）、堅(jiān) 樺（Betula chinensis）均為浙江農(nóng)林大學(xué)苗圃地所栽培。毛果楊（Populus trichocarpa）組培苗和光皮樺組培苗均為浙江農(nóng)林大學(xué)亞熱帶森林培育國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室組培室培養(yǎng)，其中毛果楊與垂枝樺為本實(shí)驗(yàn)的對(duì)照。

1.1.2 儀器與試劑

流式細(xì)胞儀型號(hào)為CytoFLEX9（美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特有限公司）；熒光染料為碘化丙啶（PI，SIGMA，美國(guó)）；RNaseA 購(gòu)于天根生化科技（北京）有限公司；濾膜、鞘液等試劑均購(gòu)于美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特有限公司；0.22 μm 微孔濾膜購(gòu)于密理博（中國(guó)）有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 裂解液與染料配制

實(shí)驗(yàn)所需細(xì)胞核裂解液的配方見(jiàn)表1，除Otto II 常溫下保存，其余裂解液均使用0.22 μm微孔濾膜進(jìn)行過(guò)濾后冷藏保存。為去除雙鏈RNA可能帶來(lái)的干擾，PI 染液中可以加入適量RNA酶。由于見(jiàn)光易分解，PI 染液配制和保存方法參照弓娜等[11]制定的FCM 在植物學(xué)研究中的應(yīng)用方法，終濃度為50 μg/mL。

表1 細(xì)胞核裂解液配方Table 1 Formula of nuclear dissociation fluid

1.2.2 細(xì)胞核懸浮液制備

選取60 mg 植物新鮮葉片放入9 cm 的一次性培養(yǎng)皿中，加入1 mL 預(yù)冷的細(xì)胞裂解液與500 μL濃度為1% PVP 溶液，用鋒利的雙面刀片快速切碎。利用3 mL 塑料吸管將懸浮液吸取并通過(guò)500 目的濾膜將懸浮液過(guò)濾，濾液收集至2 mL 離心管中，冰上靜置5 min。1 000 r/min 離心5 min，棄上清，加入100 μL 預(yù)冷的裂解液重懸，再加入150 μL 預(yù)冷的含RNase 的PI 染液對(duì)細(xì)胞核進(jìn)行熒光染色，4 ℃避光孵育5 min。用500 目的濾膜再過(guò)濾，移至上樣管，上機(jī)檢測(cè)，低速收集記錄10 000個(gè)顆粒。

1.3 葉片狀態(tài)與保存方式處理

葉片狀態(tài)分為3 種：嫩葉為2 個(gè)月的組培苗從上往下數(shù)第1 或2 片葉片，幼葉為野外1 a 生枝條從上往下數(shù)的第1 至2 片葉，成熟葉為野外1 a 生枝條上第5 片葉片。

當(dāng)天采集幼葉的保存方式分為4 種：保存方式1，將其放入保鮮袋中常溫保存；保存方式2，將其放入保鮮袋中冷藏保存；保存方式3，放入含有1% PVP 的PE 管中常溫保存（3 h）；保存方式4，放入含有1% PVP 的PE 管中常溫保存24 h。

1.4 數(shù)據(jù)分析

1.4.1 倍性及DNA 含量計(jì)算

對(duì)已知DNA 含量的對(duì)照樣本進(jìn)行測(cè)定，根據(jù)通過(guò)PI 染色的細(xì)胞核的相對(duì)熒光強(qiáng)度比值來(lái)計(jì)算出待測(cè)樣本的DNA 含量[12]，再通過(guò)已知倍性為2 倍體的垂枝樺的熒光強(qiáng)度來(lái)計(jì)算出未知樺木屬植物的DNA 倍性。

1.4.2 數(shù)據(jù)收集及分析

PI 熒光激發(fā)波長(zhǎng)為488 nm，上機(jī)后收集通道585/42BP 的熒光，檢測(cè)PI 發(fā)射的熒光強(qiáng)度。變異系數(shù)（CV）值控制在5%以?xún)?nèi)。使用CyExpert軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)收集與分析。參照Huang 等[2]提供的計(jì)算公式計(jì)算樣本的1C 值。每個(gè)樣本檢測(cè)3 次，利用SPSS 22 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)的顯著性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 裂解液種類(lèi)對(duì)檢測(cè)效果的比較

由于目前植物還沒(méi)有通用的細(xì)胞核裂解液，因此篩選出對(duì)該物種細(xì)胞核提取效果最佳的裂解液對(duì)于流式細(xì)胞檢測(cè)而言至關(guān)重要。本實(shí)驗(yàn)利用光皮樺組培苗嫩葉為材料進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果如圖1 所示，Galbraith's、GPB、LB01、Marie's 裂解液雜質(zhì)多，均出現(xiàn)明顯雜質(zhì)峰，其中Marie's 裂解液收集的有效細(xì)胞核數(shù)最少（不足160），通過(guò)散點(diǎn)圖發(fā)現(xiàn)顆粒分布并不集中，大部分為細(xì)胞雜質(zhì)碎片，表明這些裂解液不能較好的提取細(xì)胞核。圖1c、i 中發(fā)現(xiàn)HEPES 與Tris-MgCl2裂解液所得直方圖雖看起來(lái)雜質(zhì)干擾較少，但HEPES 裂解液的CV 值大于5%，結(jié)果不可信，Tris-MgCl2裂解液所得直方圖出現(xiàn)G1+ G2期峰，說(shuō)明出現(xiàn)了細(xì)胞核黏連的情況。圖1h 發(fā)現(xiàn)OTTO 裂解液顯示G1期峰左右不對(duì)稱(chēng)，對(duì)光皮樺而言不是最佳裂解液。圖1f、g 中mGb裂解液與MgSO4裂解液所得G1期峰左右對(duì)稱(chēng)，G2期峰明顯，無(wú)雜峰干擾，mGb 裂解液提取速率為311 個(gè)/秒，MgSO4裂解液提取速率為485 個(gè)/秒，提取速率高，均可作為制備光皮樺組培苗單細(xì)胞懸浮液的裂解液。但MgSO4裂解液提取效果略高，因此，選擇MgSO4裂解液進(jìn)行進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)。

圖1 光皮樺樣品不同裂解液流式細(xì)胞分析直方圖Fig. 1 Histograms of Betula prepared from different nuclear dissociation solutions

2.2 葉片成熟度對(duì)檢測(cè)效果的影響

由圖2c 可知，由于成熟葉次生代謝旺盛，產(chǎn)生大量多糖多酚物質(zhì)易被氧化，使提取液變得濃稠，無(wú)法通過(guò)500 目的濾膜，從而干擾MgSO4裂解液的提取效率，使得收集有效顆粒數(shù)極少，不到20 個(gè)，G1期峰出峰困難，雜峰明顯。圖2b 中幼葉G1期出峰明顯，G2期清晰，收集有效細(xì)胞核數(shù)比嫩葉稍低，結(jié)果清晰可靠。雖然嫩葉的直方圖最好，但由于外植體殺菌進(jìn)行組培培養(yǎng)時(shí)間長(zhǎng)，培養(yǎng)程序復(fù)雜，而幼葉來(lái)源簡(jiǎn)單，采摘方便，更適合野外樣品的快速檢測(cè)，可替代嫩葉制備細(xì)胞核懸浮液進(jìn)行流式檢測(cè)。

圖2 MgSO4 裂解液制備嫩葉、幼葉與成熟葉Fig. 2 The preparation of tender, young and old leaves with MgSO4 buffer

2.3 葉片保存方式對(duì)檢測(cè)效果的影響

由圖3a 可知，常溫保存的G1期峰明顯，雜峰干擾較大。由于常溫保存會(huì)使葉片中多糖多酚類(lèi)物質(zhì)氧化干擾裂解液提取細(xì)胞核而產(chǎn)生較大的雜質(zhì)峰，CV 值為5.00%。圖3b 為冷藏保存， G1和G2 期峰明顯，雜峰較少，CV 值小于5.00%，這種保存方式較好，但野外采樣攜帶冰盒不便。由圖3c 可知，葉片放入1%PVP 液體中也可以減少葉片中多糖多酚物質(zhì)氧化，從而使細(xì)胞核懸浮液檢測(cè)所得直方圖雜質(zhì)峰較小，G1期峰左右對(duì)稱(chēng)，G2期峰明顯，能得到冷藏保存的檢測(cè)效果，且細(xì)胞核提取量較高。由圖3d 可知，保存時(shí)間對(duì)提取效果影響巨大，G1期峰左邊出現(xiàn)明顯雜質(zhì)峰，CV 值為6.84%，大于5%，一般情況下CV值在5%以下為可信，所以結(jié)果不可靠。野外采樣為了減少負(fù)重，增加樣品量將待測(cè)幼葉放入1%PVP 中浸泡常溫保存并及時(shí)上機(jī)檢測(cè)比較好。

圖3 不同保存方式對(duì)檢測(cè)效果的影響Fig. 3 The effect of different preservation methods on detection effect

2.4 樺木屬植物不同倍性間熒光強(qiáng)度比較

利用光皮樺篩選所得的流式細(xì)胞術(shù)體系檢測(cè)對(duì)其余樺木屬植物的適用性。由于對(duì)照樣本楊樹(shù)（Populussp.）與垂枝樺的基因組大小相近，所以采用外標(biāo)法進(jìn)行檢測(cè)。用已知基因組大小的毛果楊作為對(duì)照，檢測(cè)已知倍性和基因組大小的2 倍體樺木垂枝樺，初步確定對(duì)照與待測(cè)樣本的熒光強(qiáng)度范圍，設(shè)定檢測(cè)模板，在同一個(gè)模板下對(duì)其余6 個(gè)樺木屬植物進(jìn)行倍性鑒定。PI 染液可以非特異性結(jié)合堿基，適用于基因組大小測(cè)定與倍性鑒定，為防止RNA 干擾加入RNaseA，此時(shí)的熒光強(qiáng)度可以代表DNA 相對(duì)含量[13]。因此，根據(jù)DNA 含量計(jì)算公式[1]可算出待測(cè)樣品DNA 含量。以毛果楊為參照估測(cè)其余樺木屬植物DNA含量，并以垂枝樺為對(duì)照估測(cè)其余樺木屬植物DNA 倍性。結(jié)合圖4 與表2 發(fā)現(xiàn)河樺與垂枝樺的DNA 倍性均為2 倍體，光皮樺 × 河樺DNA 倍性為3 倍體，光皮樺與岳樺的DNA 倍性為4 倍體，堅(jiān)樺DNA 倍性為6 倍體，黑樺DNA倍性為8 倍體。光皮樺基因組為 (889.29 ± 48.94) Mb，河樺基因 組 大 小 為 (519.78 ± 12.18) Mb，光 皮 樺 × 河樺的DNA 含量在河樺與光皮樺之間，為 (670.66 ±21.81) Mb，估計(jì)為3 倍體，由此可證明光皮樺與河樺之間無(wú)生殖隔離，這可為未來(lái)的倍性育種提供新的依據(jù)。

表2 樺木屬DNA 含量及倍性估計(jì)Table 2 Ploidy and DNA content in Betula

圖4 樺木屬植物DNA 峰值圖Fig. 4 Flow histogram of Betula

分析結(jié)果顯示，垂枝樺基因組大小為 (471.94 ±34.68) Mb，這與Saloj 等[14]發(fā)表的垂枝樺基因組大小（440 Mb）非常相近。此外，岳樺、堅(jiān)樺、黑樺的基因組大小分別為 (822.22 ± 68.79) Mb、(1 563.70 ± 85.50) Mb、(2 139.96 ± 41.56) Mb。同時(shí)，不同倍性樺木的DNA 含量差異顯著（P＜0.05），相同倍性樺木的DNA 含量差異不顯著（表2），由此可以推測(cè)樺木屬植物多倍體可能是由染色體加倍導(dǎo)致，基因組縮小現(xiàn)象也不明顯。為進(jìn)一步研究樺木基因組大小演變，本研究還計(jì)算了1Cx值，其中方差分析發(fā)現(xiàn)1Cx 為0.42～0.55 pg，基本分為垂枝樺與河樺兩大類(lèi)，黑樺單獨(dú)為一類(lèi)，垂枝樺與光皮樺 × 河樺、岳樺、光皮樺、堅(jiān)樺的1Cx 值差異均不顯著，與河樺、黑樺間1Cx 值差異顯著 （P＜0.05）；河樺與黑樺之間1Cx 值差異不顯著；堅(jiān)樺與黑樺之間1Cx 值差異不顯著，黑樺與其余樺木1Cx 值差異均顯著（P＜0.05）。

3 結(jié)論與討論

FCM 檢測(cè)具有速度快、重復(fù)性好、檢測(cè)準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)，但準(zhǔn)確度受植物組織、裂解液、葉片的成熟度和保存方式的影響較大。其中裂解液是FCM 檢測(cè)倍性實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵，它決定了細(xì)胞核能否完整的被分離出來(lái)，細(xì)胞核能否被PI 染料染色。目前，還未發(fā)現(xiàn)植物的通用裂解液，因此需要篩選甚至優(yōu)化裂解液來(lái)獲得最佳的細(xì)胞核懸浮液進(jìn)行上機(jī)檢測(cè)。判斷本實(shí)驗(yàn)結(jié)果可靠性的標(biāo)準(zhǔn)是CV 值[12]，CV 值越小，所得峰值結(jié)果越可靠，一般來(lái)說(shuō)CV 值小于5%可視為可信。本實(shí)驗(yàn)對(duì)9 種裂解液進(jìn)行篩選，最終得出MgSO4裂解液提取效果最佳，CV 值控制在3%以?xún)?nèi)。FCM 方法鑒定倍性的實(shí)驗(yàn)中，不同物種對(duì)應(yīng)的最優(yōu)裂解液也不同，如對(duì)槭屬植物解離效果均較好的是LB01 解 離 液[15]；Galbraith's 解 離 液 對(duì) 蓮 瓣 蘭（Cymbidium tortisepalum）和墨蘭（Cymbidium sinense）樣品解離效果最好[16]；同時(shí)，研究發(fā)現(xiàn)使用Galbraith's 解離液對(duì)金線蓮（Anoectochilus roxburghii）樣品的解離效果也較好[17]。樺木屬植物葉片含有豐富的多糖與多酚物質(zhì)，易被氧化，提取時(shí)加入500 μL 體積濃度為1%PVP 和裂解液中的TritonX-100 可消除糖類(lèi)、酚類(lèi)雜質(zhì)帶來(lái)的影響[18]，MgSO4裂解液含有穩(wěn)定核染色體的Mg2+，KCl 可以維持植物細(xì)胞滲透壓，使細(xì)胞不易破碎，減少胞質(zhì)中的多糖與多酚物質(zhì)游離出來(lái)影響細(xì)胞核懸浮液的質(zhì)量，DTT 的加入使染色質(zhì)得到保護(hù)，進(jìn)一步消除酚類(lèi)物質(zhì)對(duì)DNA 染色的影響[11]。選擇合適的材料與保存方式可提高FCM 的可行性，通常新鮮幼葉更加容易被檢測(cè)。葉片的生長(zhǎng)狀態(tài)直接影響到制備的細(xì)胞核懸浮液能否用于檢測(cè)，一般情況下，老葉中的酚類(lèi)次生代謝產(chǎn)物較多，易被氧化從而破壞細(xì)胞核的結(jié)構(gòu)[19]，例如櫟屬植物老葉的細(xì)胞核提取產(chǎn)率就遠(yuǎn)低于幼葉[20]。本研究得出樺木屬植物新鮮幼葉在1% PVP 溶液中浸泡常溫保存，用MgSO4裂解液制備細(xì)胞懸浮液進(jìn)行檢測(cè)效果較好。

樺木屬植物的材質(zhì)優(yōu)良，經(jīng)濟(jì)價(jià)值高[7]，部分種可作為觀賞樹(shù)種，且種間與種內(nèi)變異豐富，是優(yōu)良的林木遺傳研究材料。然而，樺木屬植物的基因組信息還不豐富[9-10]，目前在植物DNA C 值數(shù)據(jù)庫(kù)中僅包含5 個(gè)樺木樹(shù)種[16]。“1C 值”的概念由Greilhuber 等[21]于2005 年提出，代表一半體細(xì)胞DNA 的含量（2C），是統(tǒng)計(jì)植物基因組大小的有效指標(biāo)。本研究發(fā)現(xiàn)不同倍性樺木DNA 含量存在顯著差異，1C 值在0.42～0.55 pg之間，與Wang 等[8]發(fā)現(xiàn)樺木屬植物從2 倍體到12 倍體的1C 值在0.42～0.57 pg 之間結(jié)果相似。此外，本研究結(jié)果中發(fā)現(xiàn)垂枝樺與光皮樺倍性不同，但它們之間1Cx 值差異不顯著，且堅(jiān)樺與黑樺也屬于類(lèi)似情況，這可能是由于植物體內(nèi)多倍化水平由組織器官和發(fā)育階段差異造成。植物不同器官的多倍化水平不一致現(xiàn)象已經(jīng)在蕓薹屬[22]、紫薇（Lagerstroemia indica）[23]，大麥（Hordeum vulgare）和小麥（Triticum aestivum）[24]等植物中被發(fā)現(xiàn)，但樺木屬植物中還缺乏類(lèi)似的研究，未來(lái)需要更深入的研究。此外，基因組重復(fù)或加倍、DNA 丟失等均是造成基因組C 值差異的重要因素[19]，目前國(guó)內(nèi)關(guān)于樺木屬植物C 值的測(cè)定還未展開(kāi)，還需要更多的研究來(lái)分析樺木屬植物的基因組變化規(guī)律和主要影響因素。

對(duì)樺木植物倍性的鑒定中，本實(shí)驗(yàn)所測(cè)得河樺為2 倍體，但河樺種內(nèi)變異相對(duì)較大，種內(nèi)存在2 倍體、3 倍體和4 倍體等不同倍性變種[25]。本實(shí)驗(yàn)中垂枝樺基因組大小被鑒定為0.48 pg，這與Saloj 等[18]所測(cè)基因組0.45 pg 大小相近。光皮樺 × 河樺雜種的倍性為3 倍體，由此可知2 倍體河樺與4 倍體光皮樺間不存在生殖隔離，能通過(guò)雜交產(chǎn)生新的樺木種質(zhì)。大部分情況下，3 倍體植物一般不育，生殖生長(zhǎng)所需營(yíng)養(yǎng)可供給營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)，使木材的材性更加優(yōu)良，因此，3 倍體林木的繁育更有利于材質(zhì)的改良。FCM 鑒定出光皮樺 × 河樺子代倍性為3 倍體，可以為種間雜種鑒定提供一條新的研究道路。此外，F(xiàn)CM 在其他樺木樹(shù)種上也有成功的應(yīng)用，如冰島的沼樺（Betula nana）被鑒定為2 倍體，西伯利亞銀色樺（B. pubescens）為4 倍體，沼樺 × 西伯利亞銀色 樺（B. nana×B. pubescens）為3 倍 體，平 均1C 值分別為448、666、882 Mb[26]，與本研究中的河樺、光皮樺、光皮樺 × 河樺所測(cè)結(jié)果相似，說(shuō)明FCM 是鑒定樺木倍性的有效手段，且自然界廣泛存在著不同倍性樺木雜交以適應(yīng)新的環(huán)境。相對(duì)于傳統(tǒng)的染色體計(jì)數(shù)法來(lái)確定植物的倍性，F(xiàn)CM 的研究方法相對(duì)簡(jiǎn)單，工作量較小，對(duì)實(shí)驗(yàn)室的條件要求也不高，但顯微鏡以及更先進(jìn)的掃描電鏡對(duì)植物染色體進(jìn)行觀察仍然是確定植物倍性最基本的方法，往往多種方法的結(jié)合運(yùn)用才能更精確的鑒定植物倍性。

本研究發(fā)現(xiàn)，MgSO4裂解液是提取光皮樺細(xì)胞核的最佳裂解液，樺木屬植物幼葉次生代謝產(chǎn)物少，適合作為FCM 的檢測(cè)材料。研究結(jié)果分別揭示了垂枝樺、河樺、光皮樺 × 河樺、岳樺、光皮樺、堅(jiān)樺、黑樺的DNA 倍性和含量，為樺木屬植物的基因組學(xué)研究、細(xì)胞生物學(xué)和種質(zhì)資源研究提供了基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。同時(shí)，有效的FCM 評(píng)估體系的建立，可快速鑒定樺木種間雜交后代的倍性，可為未來(lái)選育出適應(yīng)性強(qiáng)，生長(zhǎng)速度快，材質(zhì)優(yōu)良的樺木新品種提供重要的技術(shù)支撐。