彝藥野拔子的化學(xué)成分研究

林春燕，董 媛，張赟華，張?chǎng)?/p>

（云南省食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)研究院，工業(yè)與信息化部產(chǎn)業(yè)技術(shù)基礎(chǔ)公共服務(wù)平臺(tái)，云南 昆明 650106）

野拔子為唇形科香薷屬植物野拔子（Elsholtzia rugulosaHemsl.）的干燥地上部分，為常見(jiàn)的彝族藥，彝藥名有“阿能拋”和“爾吾”。2000多年前，野拔子已經(jīng)作為彝藥在使用[1]。成書(shū)于1566年的彝藥書(shū)籍《齊蘇書(shū)》中也記載了野拔子，認(rèn)為其可治療消化不良、胃痛、膈食，治跌打損傷、瘀血內(nèi)停[2]。清代彝族醫(yī)藥書(shū)籍《醫(yī)病好藥書(shū)》中也收載了多個(gè)野拔子的單方或復(fù)方?！吨袊?guó)彝族藥學(xué)》中彝醫(yī)傳統(tǒng)應(yīng)用有“治風(fēng)寒感冒；治蛔蟲(chóng)??；治蛇咬傷；治肚腹寒痛；治跌打損傷；治胃痛；治心情不舒、傷食等”[3]。前期研究表明，野拔子中主要含黃酮類、萜類、苯丙素類、有機(jī)酸、甾體等[4]。

為進(jìn)一步研究野拔子的藥用物質(zhì)基礎(chǔ)，本文采用多種柱色譜方法對(duì)野拔子進(jìn)行了化學(xué)成分研究，得到6個(gè)化合物，其結(jié)構(gòu)分別鑒定為：豆甾醇（I）、perilloxin （II）、熊果酸 （III）、烏蘇酸內(nèi)酯（IV）、2α, 3α, 19α-三羥基熊果酸（V）、白樺脂酸（VI）。其中，化合物II和IV為首次從該屬植物中分離得到，化合物V為首次從該植物中分離得到。

1 儀器與材料

1.1 儀器

島津 LC/MS-IT-TOF質(zhì)譜儀（日本島津公司）；Advance III-400型超導(dǎo)核磁共振儀，III-600型超導(dǎo)核磁共振儀（德國(guó)Bruker公司），以TMS為內(nèi)標(biāo)。

1.2 材料

MCI CHP20P填料（75～150 μm，日本Misubishi Chemical）；GF254薄層硅膠板（煙臺(tái)新諾化工有限公司）；柱色譜硅膠（200～300目，海祥化工有限公司）；Sephadex LH-20（瑞典Pharmacia公司）；乙腈（色譜純，德國(guó)Merck公司）；熊果酸對(duì)照品（批號(hào)：110742-201823，含量：99.9 %，中國(guó)食品藥品檢定研究院）。

野拔子地上部分于2021年11月8日采自云南省玉溪市梁王山，由云南大學(xué)標(biāo)本館王煥沖老師鑒定為野拔子Elsholtzia rugulosaHemsl.，標(biāo)本（編號(hào)：20211108-3-1）存放于云南省食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)研究院。

2 提取與分離

取野拔子地上部分（5 kg），曬干粉碎，用90 %乙醇冷浸提取2次，每次20 L，合并后減壓濃縮，得到浸膏（355 g）。浸膏用適量甲醇溶解，吸附于300 g硅膠（200～300目），進(jìn)行硅膠柱層析，以氯仿、甲醇-氯仿（5:95）、甲醇-氯仿（10:90）、甲醇進(jìn)行梯度洗脫，所得流份經(jīng)薄層色譜（TLC）檢測(cè)后合并，得到流份Fr. A～Fr. L。

Fr. G（8.0 g）經(jīng)硅膠柱層析，以石油醚、丙酮-石油醚（5:95）、丙酮-石油醚（10:90）為洗脫溶劑進(jìn)行梯度洗脫，所得流份經(jīng)TLC檢測(cè)后合并，得到Fr. G-1～ Fr. G-6。Fr. G-1（500 mg）經(jīng)Sephadex LH-20柱層析純化[洗脫劑：甲醇-氯仿（50:50）]，重結(jié)晶后得到化合物I（40 mg）。取Fr.G-1（2.0 g）進(jìn)行硅膠柱層析，用乙酸乙酯-石油醚（5:95）洗脫，所得流份經(jīng)TLC檢測(cè)后合并，得到Fr. G-2-A～Fr. G-2-F。Fr.G-2-D經(jīng)Sephadex LH-20柱層析純化[洗脫劑：甲醇-氯仿（50:50）]，得到化合物II（400 mg）。

Fr. J（120 g）經(jīng)硅膠柱層析，依次用丙酮-石油醚（5:95）、丙酮-石油醚（10:90）、丙酮-石油醚（20:80）、丙酮-石油醚（40:60）、丙酮洗脫，所得流份經(jīng)TLC檢測(cè)后合并，得到Fr. J-1～Fr. J-8。Fr. J-3（3.0 g）經(jīng)硅膠柱層析，甲醇-氯仿（1:300）洗脫，所得流份經(jīng)TLC檢測(cè)后合并，得到4個(gè)流份（Fr. J-3-a～Fr. J-3-d）。Fr. J-3-c（2.0 g）首先經(jīng)MCI gel CHP 20P（75～150 μm）柱層析[洗脫劑：甲醇-氯仿（90:10）]，繼續(xù)經(jīng)硅膠柱層析，洗脫溶劑為乙酸乙酯-石油醚（10:90），所得流份經(jīng)TLC檢測(cè)合并，得到6個(gè)流份（Fr. J-3-c-1～Fr. J-3-c-6）。流份Fr. J-3-c-1（150 mg）和Fr. J-3-c-2（600 mg）進(jìn)一步經(jīng)Sephadex LH-20柱層析純化，得到化合物IV（15 mg）和V（80 mg）。

Fr. J-8經(jīng)硅膠柱層析，甲醇-氯仿（1:100）洗脫，所得流份經(jīng)TLC檢測(cè)合并，得到6個(gè)流份（Fr.J-8-a～Fr. J-8-f）。Fr. J-8-a與熊果酸對(duì)照品進(jìn)行對(duì)照，鑒定為化合物III（1.5 g）。流份Fr. J-8-c（1 g）經(jīng)硅膠柱層析，洗脫溶劑依次為乙酸乙酯-石油醚（20:80）、乙酸乙酯-石油醚（30:70），得到化合物VI（120 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物I：白色針狀結(jié)晶，HR-ESI-MSm/z413.3533[M+H]+（C29H48O，計(jì)算值為 413.3783）；1H NMR（600 MHz，CDCl3）δ：5.34（1H，m，H-6），5.14 （1H，dd，J=15.1，8.7 Hz，H-22），5.01（1H，dd，J=15.1，8.8 Hz，H-23），3.51（1H，m，H-3），1. 05（3H，s，H-19），1.00（3H，d，J=5.1 Hz，H-21），0.91（3H，d，J=6.5 Hz，H-29），0.87～0.77（6H，m，H-26，27），0.67（3H，s，H-18）；13C NMR（150 MHz，CDCl3）δ：37.4（C-1），31.8（C-2），71.9（C-3），42.4（C-4），140.9（C-5），121.8（C-6），32.0（C-7），32.0（C-8），50.3（C-9），36.3（C-10），21.2（C-11），39.9（C-12），42.3（C-13），56.2（C-14），24.4（C-15），28.4（C-16），56.9（C-17），12.0（C-18），19.5（C-19），40.6（C-20），21.2（C-21），138.5（C-22），129.4（C-23），51.4（C-24），32.0（C-25），21.2（C-26），19.2（C-27），25.6（C-28），12.1（C-29）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[5]報(bào)道基本一致，故鑒定該化合物為豆甾醇。

化合物II：黃色粉末，HR-ESI-MSm/z275.1296 [M+H]+（C16H18O4，計(jì)算值為275.1278）；1H NMR（400 MHz，CDCl3）δ：6.46（1H，s，H-4），5.86（1H，d，J=7.1 Hz，H-9），5.79（1H，d，J=7.2 Hz，H-7），5.66（1H，d，J=7.2 Hz，H-6），5.46（1H，d，J=7.1 Hz，H-8），4.50（1H，t，J=9.0 Hz，H-2），3.69（3H，s，H-1’’），3.08（1H，dd，J=16.1，8.7 Hz，H-3），3.00（1H，dd，J=16.1，9.3 Hz，H-3），1.31（3H，s，H-2’），1.18（3H，s，H-3’）；13C NMR（100 MHz，CDCl3）δ：89.07（C-1），31.32（C-2），127.2（C-3），108.6（C-4），150.9（C-5），123.0（C-6），108.6（C-7），145.4（C-8），147.0（C-9），107.4（C-10），118.2（C-11），150.8（C-12），71.8（C-13），26.3（C-14），24.2（C-15），56.9（C-16）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[6]報(bào)道基本一致，故鑒定該化合物為perilloxin。

化合物III：白色粉末。HR-ESI-MSm/z457.3684 [M+H]+（C30H48O3，計(jì)算值為457.3682）；TLC檢查中，與熊果酸對(duì)照品Rf值一致，鑒定該化合物為熊果酸。

化合物IV：白色粉末。HR-ESI-MSm/z455.3527 [M+H]+（C30H46O3，計(jì)算值為455.3525）；1H NMR（600 MHz，CDCl3）δ：5.96（1H，d，J=11.4 Hz，H-12），5.53（1H，dd，J=10.3，3.1 Hz，H-11），3.22（1H，dd，J=11.5，4.8 Hz，H-3），1.16（3H，s，27-Me），1.05（3H，s，26-Me），1.00（3H，d，J=4.3 Hz，29-Me），0.99（3H，s，25-Me），0.93（3H，d，J=2.8 Hz，30-Me），0.91（3H，s，23-Me），0.79（3H，s，24-Me）；13C NMR（150 MHz，CDCl3）δ：38.4（C-1），27.2（C-2），79.0（C-3），39.1（C-4），54.9（C-5），17.8（C-6），31.5（C-7），42.1（C-8），53.2（C-9），36.5（C-10），129.0（C-11），133.6（C-12），89.8（C-13），41.8（C-14），25.7（C-15），22.9（C-16），45.2（C-17），60.7（C-18），40.4（C-19），38.3（C-20），31.0（C-21），31.4（C-22），27.9（C-23），15.1（C-24），19.3（C-25），19.0（C-26），16.2（C-27），180.1（C-28），18.0（C-29），18.1（C-30）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[7]，鑒定化合物IV為烏蘇酸內(nèi)酯。

化合物V：白色粉末。H R-E S I-M Sm/z489.3573 [M+H]+（C30H48O5，計(jì)算值為489.3580）；1H NMR（600 MHz，C5D5N）δ：5.60（1H，brs，H-12），4.32（1H，d，H-2），3.78（1H，d，J=2.3 Hz，H-3），3.05（1H，s，H-18），0.91，0.99，1.12，1.28，1.44，1.65（各3H，s），1.12（d，J=3.8 Hz）。13C NMR（150 MHz，C5D5N）δ：43.3（C-1），66.6（C-2），79.8（C-3），39.0（C-4），49.2（C-5），19.1 （C-6），34.0（C-7），41.1（C-8），48.1（C-9），39.2（C-10），24.6（C-11），128.5 （C-12），140.4（C-13），42.9（C-14），29.7（C-15），26.9（C-16），48.8（C-17），55.1（C-18），73.2（C-19），42.7（C-20），27.4（C-21），39.3（C-22），30.0（C-23），22.8（C-24），17.1（C-25），17.8（C-26），25.1（C-27），181.2（C-28），27.6（C-29），17.3（C-30）。與文獻(xiàn)報(bào)道的數(shù)據(jù)基本一致[8]，鑒定該化合物為2α, 3α, 19α-三羥基熊果酸。

化合物VI：白色粉末。HR-ESI-MSm/z457.3671 [M+H]+（C30H48O3，計(jì)算值為457.3682）；1H NMR（600 MHz，C5D5N）δ：4.97（1H，brs，H-29α），4.79（1H，brs，H-29β），1.81（3H，s，H-23），1.25（3H，s，H-24），1.09（3H，s，H-30），1.08（3H，s，H-26），1.03（3H，s，H-25），0.84（3H，s，H-27）；13C NMR（150 MHz，C5D5N）δ：39.1（C-1），28.8（C-2），78.6（C-3），40.0（C-4），56.4（C-5），19.3（C-6），35.3（C-7），41.6（C-8），51.4（C-9），38.1（C-10），21.7（C-11），26.6（C-12），39.8（C-13），43.3（C-14），30.8（C-15），33.4（C-16），57.1（C-17），48.2（C-18），50.2（C-19），151.8（C-20），31.7（C-21），38.0（C-22），29.2（C-23），16.9（C-24），16.8（C-25），16.9（C-26），15.4（C-27），179.4（C-28），110.4（C-29），20.0（C-30）。與文獻(xiàn)報(bào)道的數(shù)據(jù)基本一致[9]，鑒定該化合物為白樺脂酸。

4 結(jié)論

首先，在對(duì)野拔子地上部分進(jìn)行的植化分離中發(fā)現(xiàn)三萜類成分種類較多且量大，本研究中得到的6個(gè)化合物中4個(gè)為五環(huán)三萜類；其次，文獻(xiàn)中報(bào)道的五環(huán)三萜類成分較多，且得量較大，包括熊果酸、2α-羥基烏蘇酸、2α-羥基齊墩果酸、齊墩果酸、樺木酸、3, 24-二羥基-17, 21-半縮醛基-12(13)齊墩果烯、2, 3-二羥基5(6), 2(13)-二烯熊果酸[9-12]等。因此，五環(huán)三萜類為野拔子中主要化學(xué)成分。