沙棘醋飲的安全性初步研究

王晨堯，張 昕，司 霞，朱瑞芳，曹 妍，馮耀清，韓世范，*

1.山西醫(yī)科大學(xué)護(hù)理學(xué)院，山西 030001；2.山西醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院；3.山西醫(yī)學(xué)期刊社有限責(zé)任公司

非酒精性脂肪性肝?。╪on-alcoholic fatty liver disease， NAFLD）是一種與胰島素抵抗和遺傳易感密切相關(guān)的代謝應(yīng)激性肝損傷[1]。大多數(shù)非酒精性脂肪性肝病病人伴有多種病理學(xué)表現(xiàn)，2020年初，一項(xiàng)國(guó)際專(zhuān)家共識(shí)建議將其改為代謝相關(guān)脂肪性肝?。╩etabolic associated fatty liver disease，MAFLD)[2]。MAFLD 患 病 率 較 高且呈年輕化發(fā)展趨勢(shì)，使得MAFLD 防治工作面臨嚴(yán)峻挑戰(zhàn)。飲食干預(yù)對(duì)MAFLD 的防治具有重要作用。受飲食特點(diǎn)及飲食習(xí)慣制約，MAFLD 病人對(duì)傳統(tǒng)飲食干預(yù)的依從性較低。飲食護(hù)理是護(hù)士日常工作中的一項(xiàng)重要內(nèi)容，護(hù)士有責(zé)任對(duì)護(hù)理對(duì)象進(jìn)行安全的飲食推薦及飲食指導(dǎo)。面對(duì)MAFLD 防治工作的嚴(yán)峻挑戰(zhàn)，選擇一種簡(jiǎn)單易行的飲食方式尤為重要。我國(guó)古代就有關(guān)于藥食兩用植物的研究，人們常利用藥食兩用植物進(jìn)行膳食補(bǔ)充、飲食調(diào)味、營(yíng)養(yǎng)保健等[3]。沙棘是一種國(guó)家公認(rèn)的傳統(tǒng)藥食同源植物，含有多種人體必需但不能自身合成的活性化合物[4]，由其再加工所制成的新型食品沙棘醋飲內(nèi)含豐富的沙棘功能因子沙棘黃酮和沙棘總有機(jī)酸，沙棘黃酮作為有效活性成分，具有降血脂、減輕體重、抗動(dòng)脈粥樣硬化、抗腫瘤、降血糖等藥理學(xué)功能[5]；而沙棘有機(jī)酸則具有增強(qiáng)毛細(xì)血管抗凝、緩解藥物毒性、預(yù)防應(yīng)激反應(yīng)、促進(jìn)細(xì)胞代謝、改善肝臟功能等作用[6]。課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，沙棘醋飲聯(lián)合苦蕎醋飲可改善脂肪肝分級(jí)[7]。為進(jìn)一步明確沙棘醋飲的功效性及安全性，本研究選取美國(guó)癌癥研究所（ICR）小鼠和Sprague-Dawley（SD）大鼠為試驗(yàn)對(duì)象，并參照相關(guān)食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)[8-9]，進(jìn)行急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)和28 d 經(jīng)口毒性試驗(yàn)，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 對(duì)象與方法

1.1 試驗(yàn)對(duì)象 ①急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)：ICR 小鼠40只，清潔級(jí)，體重18～24 g，雌雄各半。②28 d 經(jīng)口毒性試驗(yàn)：SD 大鼠80 只，清潔級(jí)，體重50～100 g，雌雄各半。受試動(dòng)物由山西醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，合格證編號(hào)：SCXK（晉）2019-0004。維持飼料由斯貝福（北京）生物技術(shù)有限公司提供，許可證號(hào)：SCXK（京）2019-0010。受試動(dòng)物飼養(yǎng)于屏障實(shí)驗(yàn)環(huán)境，合格證號(hào)：SYXK（晉）2019-0007，溫度控制在20～26 ℃，相對(duì)濕度控制在40%～70%。ICR 小鼠按組分性別分籠飼養(yǎng)，每籠5～6 只，SD 大鼠單籠飼養(yǎng)。2 d 更換1 次墊料，7 d 更換1 次鼠籠。晝夜明暗交替時(shí)間為12 h/12 h，受試動(dòng)物飼喂基礎(chǔ)飼料、可自由獲取飲用水。所有受試動(dòng)物在正式試驗(yàn)前均需3 d 適應(yīng)性飼養(yǎng)。

1.2 試驗(yàn)樣品 沙棘醋飲的定型產(chǎn)品為淡黃色液體，瓶裝。生產(chǎn)批次：20200604；生產(chǎn)商：山西梁汾醋業(yè)有限公司；生產(chǎn)許可證號(hào)：SC10314070112628。

1.3 主要儀器與設(shè)備 烏拉坦溶液、解剖器械、載玻片、堿性磷酸酶測(cè)定試劑盒（批號(hào)：20211014）、血清清蛋白檢測(cè)試劑盒（批號(hào)：20211018）、總蛋白檢測(cè)試劑盒（批號(hào)：20210111）等。試劑盒均由雷杜生命科學(xué)股份有限公司提供。DM1000 LED 顯微鏡、D3024R 離心機(jī)、ME203E/02 電子天平、Chemray800 全自動(dòng)生化分析儀及全自動(dòng)血液分析儀等。

1.4 試驗(yàn)方法

1.4.1 急性經(jīng)口毒性試驗(yàn) 選用清潔級(jí)ICR 小鼠40只，雌雄各半。將其隨機(jī)分為劑量組與對(duì)照組，每組20 只，雌雄各半。按照人體推薦攝入量的100 倍將沙棘醋飲以冷凍濃縮的方法濃縮至原體積的4/7 后灌胃。正式試驗(yàn)前ICR 小鼠禁食6 h，自由飲水。灌胃前逐只稱(chēng)量并記錄空腹體重。劑量組：將處理后的沙棘醋飲按20 mL/kg 分2 次灌胃，間隔時(shí)間為6 h，灌胃后需禁食1～2 h，其余時(shí)間常規(guī)飼養(yǎng)。對(duì)照組：給予等量蒸餾水灌胃。第2 次灌胃后連續(xù)觀察14 d，并記錄ICR小鼠中毒表現(xiàn)及死亡情況，每天固定時(shí)間逐只測(cè)量ICR 小鼠體重。

1.4.2 28 d 經(jīng)口毒性試驗(yàn) 選用清潔級(jí)SD 大鼠80只，雌雄各半。將其隨機(jī)分為高劑量組、中劑量組、低劑量組、對(duì)照組 4 組，每組20 只，雌雄各半。高劑量組：按照人體推薦攝入量的100 倍將沙棘醋飲以冷凍濃縮的方法濃縮至原體積的2/7 后進(jìn)行灌胃。中劑量組：按照人體推薦攝入量的50 倍將沙棘醋飲以冷凍濃縮的方法濃縮至原體積的4/7 后進(jìn)行灌胃。低劑量組：按照人體推薦攝入量的25 倍使用沙棘醋飲進(jìn)行灌胃。對(duì)照組：給予等量蒸餾水灌胃。每日09：00 按照10 mL/kg 灌胃，其余時(shí)間自由攝食及飲水。連續(xù)灌胃28 d（4 周）。

1.5 觀察指標(biāo)

1.5.1 急性經(jīng)口毒性試驗(yàn) 觀察期每天需觀察ICR小鼠的日?；顒?dòng)、攝食飲水情況、是否出現(xiàn)中毒癥狀，是否出現(xiàn)死亡現(xiàn)象。若ICR 小鼠表現(xiàn)出嚴(yán)重的中毒癥狀，人道處死小鼠并進(jìn)行病理學(xué)檢查。ICR 小鼠中毒表現(xiàn)的觀察包括中樞神經(jīng)系統(tǒng)及軀體運(yùn)動(dòng)、自主神經(jīng)系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)、消化系統(tǒng)、生殖系統(tǒng)等。試驗(yàn)結(jié)束后對(duì)所有ICR 小鼠稱(chēng)重并進(jìn)行解剖檢查，肉眼觀察并記錄病理學(xué)變化。準(zhǔn)確稱(chēng)量ICR 小鼠各臟器重量（g）并計(jì)算心臟、肝臟、脾臟、腎臟和胃的臟器系數(shù)（臟器系數(shù)=臟器重量/動(dòng)物體重×100%），出現(xiàn)病理學(xué)改變時(shí)需詳細(xì)記錄變化特征并進(jìn)行組織病理學(xué)檢查。

1.5.2 28 d 經(jīng)口毒性試驗(yàn) 試驗(yàn)期間至少每天觀察1次動(dòng)物的一般臨床表現(xiàn)，并記錄出現(xiàn)中毒的體征、程度及死亡情況。觀察內(nèi)容包括被毛、皮膚、眼、分泌物、排泄物、自主活動(dòng)等。每周記錄SD 大鼠體重，每周固定時(shí)間測(cè)定2 次SD 大鼠攝食量。根據(jù)SD 大鼠體重及攝食量計(jì)算SD 大鼠食物利用率。食物利用率（%）為同期體重增長(zhǎng)量與同期攝食量的比值。末次灌胃后，SD大鼠需禁食16 h（禁食期間不限制飲水）。在血液學(xué)檢查及血生化檢查前進(jìn)行SD 大鼠空腹體重的測(cè)量，血液學(xué)檢查包括紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、血細(xì)胞比容、血紅蛋白濃度、血小板計(jì)數(shù)、白細(xì)胞計(jì)數(shù)、淋巴細(xì)胞百分比、中性粒細(xì)胞百分比。血生化檢查包括丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、堿性磷酸酶（ALP）、尿素（UREA）、肌酐（Cr）、血糖（GLU）、總蛋白（TP）、血清清蛋白（ALB）、膽固醇（TC）、三酰甘油（TG）。SD 大鼠死亡后進(jìn)行解剖檢查，取心臟、肝臟、脾臟、腎臟和胃組織，稱(chēng)量臟器重量（g）并計(jì)算心臟、肝臟、脾臟、腎臟和胃的臟器系數(shù)，肉眼觀察每只SD 大鼠的解剖器官大體病理學(xué)變化，將高劑量組和對(duì)照組SD 大鼠的心臟、肝臟、脾臟、腎臟和胃的組織切片置于光學(xué)顯微鏡下觀察，若在高劑量組和對(duì)照組中發(fā)現(xiàn)病變，則需對(duì)中劑量組和低劑量組進(jìn)行組織病理學(xué)檢查。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 28.0 統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，正態(tài)分布的定量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（-±s）表示，組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)、單因素方差分析及Dunnett 檢驗(yàn)分析，定性資料以頻數(shù)表示，以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)

2.1.1 ICR 小鼠一般臨床表現(xiàn) 將處理后的沙棘醋飲以20 mL/kg 灌胃后，對(duì)照組及劑量組小鼠生長(zhǎng)情況良好，其日?；顒?dòng)、常規(guī)狀態(tài)及各臟器組織均未發(fā)現(xiàn)異?，F(xiàn)象。14 d 觀察期內(nèi)所有ICR 小鼠皮毛光潔、自主活動(dòng)正常，常規(guī)狀態(tài)未見(jiàn)異常，各系統(tǒng)和器官未見(jiàn)異常，無(wú)死亡情況出現(xiàn)，未能測(cè)出半數(shù)致死量（LD50）。

2.1.2 兩組ICR 小鼠體重比較 兩組小鼠生長(zhǎng)發(fā)育狀況良好，雌雄小鼠的體重隨時(shí)間推移均有所增長(zhǎng)，劑量組第1 天、第7 天、第14 天ICR 小鼠的體重與對(duì)照組比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。見(jiàn)表1。

表1 兩組ICR 小鼠體重比較（±s） 單位：g

表1 兩組ICR 小鼠體重比較（±s） 單位：g

性別雄性只數(shù)10 10第1 天19.03±2.43 19.60±1.80-0.595雌性組別對(duì)照組劑量組t 值P對(duì)照組劑量組t 值P 10 10 0.559 18.87±1.22 19.39±1.08-1.012 0.325第7 天29.89±2.34 28.36±1.28 1.813 0.087 23.35±1.20 23.11±0.77 0.531 0.602第14 天32.78±2.53 31.28±1.45 1.629 0.121 25.33±1.21 25.08±0.63 0.581 0.569

2.1.3 兩組ICR 小鼠臟器系數(shù)比較 人道處死所有ICR 小鼠進(jìn)行解剖檢查，其心臟、肝臟、脾臟、腎臟、胃等主要器官肉眼觀察均未見(jiàn)異常。對(duì)ICR 小鼠的主要臟器稱(chēng)重并計(jì)算其臟器系數(shù)，結(jié)果顯示，劑量組主要器官的臟器系數(shù)與對(duì)照組比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 兩組ICR 小鼠臟器系數(shù)比較（±s）

表2 兩組ICR 小鼠臟器系數(shù)比較（±s）

性別雄性只數(shù)10 10心臟系數(shù)（%）0.68±0.15 0.75±0.20-0.933雌性組別對(duì)照組劑量組t 值P對(duì)照組劑量組t 值P 10 10空腹體重（g）32.33±2.32 30.94±1.51 1.587 0.130 25.41±1.62 25.10±0.79 0.543 0.594 0.363 0.73±0.15 0.71±0.07 0.248 0.807肝臟系數(shù)（%）6.03±0.41 5.71±0.72 1.205 0.244 5.94±0.36 5.65±0.28 1.983 0.063脾臟系數(shù)（%）0.48±0.05 0.42±0.08 1.680 0.110 0.55±0.14 0.46±0.11 1.583 0.131腎臟系數(shù)（%）1.63±0.15 1.56±0.23 0.789 0.440 1.29±0.09 1.28±0.08 0.513 0.614胃系數(shù)（%）1.00±0.08 0.94±0.07 1.692 0.108 1.12±0.11 1.05±0.17 1.013 0.324

2.2 28 d 經(jīng)口毒性試驗(yàn)

2.2.1 SD 大鼠一般臨床表現(xiàn) 各組SD 大鼠生長(zhǎng)情況良好，日?；顒?dòng)及常規(guī)狀態(tài)均未表現(xiàn)出異常，各系統(tǒng)及器官均未發(fā)現(xiàn)中毒特征，在整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程中無(wú)SD大鼠發(fā)生中毒、死亡現(xiàn)象。

2.2.2 沙棘醋飲對(duì)SD 大鼠體重的影響 試驗(yàn)過(guò)程中，各組大鼠的體重均有增長(zhǎng)，各劑量組第1 天、第1周、第2 周、第3 周、第4 周的體重與對(duì)照組比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 沙棘醋飲對(duì)SD 大鼠體重的影響（±s） 單位：g

性別雄性只數(shù)10 10 10 10雌性組別高劑量組中劑量組低劑量組對(duì)照組F 值P高劑量組中劑量組低劑量組對(duì)照組F 值P 10 10 10 10第1 天73.41±5.81 78.64±6.20 78.82±5.65 76.65±7.28 1.609 0.204 78.36±7.34 78.44±5.85 80.18±8.77 78.08±5.91 0.183 0.907第1 周136.16±6.00 146.96±14.37 147.30±9.79 141.61±17.32 1.732 0.178 126.40±7.08 135.43±15.53 135.62±8.78 137.15±12.63 1.815 0.162第2 周205.05±18.21 211.65±18.88 221.91±13.22 219.29±23.29 1.663 0.192 171.75±7.99 175.01±14.34 177.64±11.13 182.68±18.07 1.185 0.329第3 周272.11±27.38 278.53±30.90 286.61±19.74 274.02±23.67 0.627 0.602 203.15±9.10 206.70±17.99 200.96±11.65 214.70±20.35 1.522 0.225第4 周348.49±28.32 344.95±43.40 347.14±25.50 366.42±27.75 0.953 0.426 228.83±11.90 233.33±19.23 225.58±14.86 238.95±21.39 1.131 0.350

2.2.3 沙棘醋飲對(duì)SD 大鼠攝食量的影響 分析各組大鼠同期攝食量，結(jié)果表明各劑量組第1 周、第2 周、第3 周、第4 周的攝食量與對(duì)照組比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 沙棘醋飲對(duì)SD 大鼠攝食量的影響（±s） 單位：g

表4 沙棘醋飲對(duì)SD 大鼠攝食量的影響（±s） 單位：g

性別雄性只數(shù)10 10 10 10雌性組別高劑量組中劑量組低劑量組對(duì)照組F 值P高劑量組中劑量組低劑量組對(duì)照組F 值P 10 10 10 10第1 周120.26±6.01 119.56±6.48 124.50±4.46 121.10±3.39 1.748 0.175 112.29±8.28 114.38±10.26 115.06±4.94 118.10±3.16 1.112 0.357第2 周162.91±9.78 161.12±6.93 167.59±8.96 168.33±5.24 1.976 0.135 139.53±4.66 135.71±6.18 133.71±7.11 137.30±6.98 1.523 0.225第3 周186.53±7.82 182.19±9.32 183.42±9.85 187.23±8.46 0.741 0.535 157.97±4.36 159.14±7.48 153.18±6.23 157.01±7.90 1.514 0.227第4 周210.53±8.29 206.45±13.02 207.83±5.83 213.75±7.79 1.247 0.307 168.94±7.68 171.89±2.40 167.19±6.75 167.26±6.19 1.302 0.289

2.2.4 沙棘醋飲對(duì)SD 大鼠食物利用率的影響 分析各組大鼠同期食物利用率，結(jié)果表明，各劑量組第1周、第2 周、第3 周、第4 周的食物利用率與對(duì)照組比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），結(jié)果見(jiàn)表5。

表5 沙棘醋飲對(duì)SD 大鼠食物利用率的影響（±s） 單位：%

表5 沙棘醋飲對(duì)SD 大鼠食物利用率的影響（±s） 單位：%

性別雄性只數(shù)10 10 10 10雌性組別高劑量組中劑量組低劑量組對(duì)照組F 值P高劑量組中劑量組低劑量組對(duì)照組F 值P 10 10 10 10第1 周52.18±5.70 56.88±9.86 54.80±8.94 53.50±8.83 0.558 0.646 43.16±4.94 49.24±8.34 48.02±4.87 49.10±5.17 2.277 0.096第2 周41.99±6.39 39.99±7.31 44.41±3.90 46.14±4.23 2.291 0.095 32.49±2.34 29.19±4.98 31.33±5.35 33.12±3.47 1.687 0.187第3 周34.43±4.73 36.47±6.47 35.17±3.14 30.84±6.27 2.052 0.124 19.53±3.51 20.03±3.50 16.80±2.22 20.33±3.90 2.329 0.091第4 周35.42±3.20 32.11±5.19 31.39±3.96 34.74±2.45 2.628 0.065 15.23±2.42 16.38±2.88 14.69±3.60 15.83±4.04 0.492 0.690

2.2.5 沙棘醋飲對(duì)SD 大鼠血液學(xué)指標(biāo)的影響 與對(duì)照組相比，低劑量組雄性大鼠的白細(xì)胞計(jì)數(shù)偏高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），但仍在正常范圍[（4.10～29.65）×109/L][10]，因此不具有臨床意義。各劑量組的其余血液學(xué)指標(biāo)與對(duì)照組比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。沙棘醋飲對(duì)SD 大鼠血液學(xué)指標(biāo)的影響見(jiàn)表6。

表6 沙棘醋飲對(duì)SD 大鼠血液學(xué)指標(biāo)的影響（±s）

表6 沙棘醋飲對(duì)SD 大鼠血液學(xué)指標(biāo)的影響（±s）

各劑量組與對(duì)照組比較，① P＜0.05。

性別雄性只數(shù)10 10 10 10雌性組別高劑量組中劑量組低劑量組對(duì)照組F 值P高劑量組中劑量組低劑量組對(duì)照組F 值P 10 10 10 10紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（×1012/L）7.09±0.42 6.97±0.70 7.11±0.29 7.10±0.64 0.159 0.923 7.14±0.21 7.52±0.75 7.26±0.84 7.07±0.38 1.082 0.369血紅蛋白（g/L）217.90±10.80 219.60±9.18 220.00±9.79 215.50±14.10 0.338 0.798 215.40±10.69 222.00±29.00 215.20±13.51 214.20±15.72 0.369 0.776血細(xì)胞比容（%）46.46±2.69 45.34±1.86 46.46±1.74 45.48±2.71 0.702 0.557 47.00±2.09 49.54±5.89 47.37±4.09 47.75±2.68 0.805 0.499血小板計(jì)數(shù)（×109/L）899.90±92.23 855.40±184.92 871.20±95.01 760.10±139.67 2.060 0.123 775.90±114.12 796.50±131.00 833.50±166.93 796.10±221.77 0.215 0.885白細(xì)胞計(jì)數(shù)（×109/L）13.84±2.21 14.80±2.75 15.54±3.16①12.61±1.81 2.501 0.075 11.89±3.70 11.52±2.22 12.01±2.09 11.21±1.31 0.214 0.886淋巴細(xì)胞百分比（%）72.82±5.84 71.67±5.46 73.95±6.84 74.16±4.10 0.414 0.744 78.99±2.80 77.51±5.50 78.76±3.46 77.23±4.16 0.461 0.711中性粒細(xì)胞百分比（%）10.98±2.34 11.34±1.58 10.82±2.85 13.30±2.35 2.435 0.081 8.70±1.53 8.36±1.81 8.81±1.76 10.37±2.29 2.290 0.095

2.2.6 沙棘醋飲對(duì)SD 大鼠肝臟功能相關(guān)指標(biāo)的影響 各劑量組肝臟功能指標(biāo)與對(duì)照組比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，結(jié)果見(jiàn)表7。

表7 沙棘醋飲對(duì)SD 大鼠肝臟功能相關(guān)指標(biāo)的影響（-±s）

表7 沙棘醋飲對(duì)SD 大鼠肝臟功能相關(guān)指標(biāo)的影響（-±s）

性別雄性只數(shù)10 10 10 10 ALT（U/L）42.86±8.43 50.56±7.52 48.57±5.76雌性組別高劑量組中劑量組低劑量組對(duì)照組F 值P高劑量組中劑量組低劑量組對(duì)照組F 值P 10 10 10 10 AST(U/L)146.99±29.74 187.29±26.98 176.86±24.02 166.12±44.51 2.839 0.052 163.05±25.56 157.79±24.83 148.07±25.13 169.35±23.73 1.315 0.285 ALB（g/L）32.81±1.97 35.03±1.75 33.92±2.50 33.47±2.89 1.624 0.201 36.29±2.80 37.00±2.65 34.75±1.79 36.13±1.79 1.658 0.193 44.51±11.83 1.684 0.188 38.69±3.97 42.50±1.93 40.31±3.30 39.35±4.05 2.356 0.088 ALP（U/L）294.68±76.85 311.36±48.19 297.20±50.31 269.83±49.06 0.906 0.448 176.90±30.85 167.29±35.94 177.86±38.80 195.58±51.45 0.870 0.466 TP（g/L）48.99±4.18 52.52±4.17 50.28±6.68 48.00±5.34 1.409 0.256 52.45±6.22 55.24±1.99 50.64±4.82 51.48±3.51 2.044 0.125

2.2.7 沙棘醋飲對(duì)SD 大鼠腎臟功能指標(biāo)及其他生化指標(biāo)的影響 各劑量組腎臟功能指標(biāo)及其他生化指標(biāo)與對(duì)照組比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，結(jié)果見(jiàn)表8。

表8 沙棘醋飲對(duì)SD 大鼠腎臟功能指標(biāo)及其他生化指標(biāo)的影響（±s）

表8 沙棘醋飲對(duì)SD 大鼠腎臟功能指標(biāo)及其他生化指標(biāo)的影響（±s）

性別雄性只數(shù)10 10 10 10雌性組別高劑量組中劑量組低劑量組對(duì)照組F 值P高劑量組中劑量組低劑量組對(duì)照組F 值P 10 10 10 10 TC（mmol/L）1.57±0.37 1.50±0.27 1.74±0.43 1.73±0.41 1.037 0.388 1.93±0.30 1.80±0.32 1.89±0.49 1.99±0.33 0.451 0.718 TG(mmol/L)0.86±0.29 0.76±0.23 0.74±0.26 0.89±0.32 0.696 0.561 0.43±0.13 0.36±0.08 0.49±0.13 0.42±0.14 1.745 0.175 Cr(μmol/L)36.71±4.04 38.18±3.26 36.73±6.97 33.32±4.29 1.805 0.164 38.43±4.58 40.53±2.03 38.83±5.54 37.45±6.31 0.693 0.563 UREA(mmol/L)4.60±0.50 4.62±0.55 4.77±0.67 4.50±0.86 0.285 0.836 4.87±0.71 4.77±0.69 4.18±0.54 4.36±0.68 2.467 0.078 GLU(mmol/L)9.92±2.49 8.34±1.77 8.95±1.32 9.47±2.82 0.982 0.412 9.90±1.42 9.02±2.05 9.34±2.84 8.32±2.91 0.760 0.524

2.2.8 沙棘醋飲對(duì)SD 大鼠各臟器系數(shù)的影響 試驗(yàn)結(jié)束后對(duì)80只SD 大鼠進(jìn)行檢查，解剖后肉眼觀察心臟、肝臟、脾臟、腎臟和胃等主要臟器，其顏色、大小、形態(tài)結(jié)構(gòu)等均未見(jiàn)異常。各劑量組大鼠的心臟、肝臟、腎臟、脾臟和胃的臟器系數(shù)與對(duì)照組比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。沙棘醋飲對(duì)SD 大鼠臟器系數(shù)的影響見(jiàn)表9。

表9 沙棘醋飲對(duì)SD 大鼠各臟器系數(shù)的影響（±s）

表9 沙棘醋飲對(duì)SD 大鼠各臟器系數(shù)的影響（±s）

性別雄性只數(shù)10 10 10 10雌性組別高劑量組中劑量組低劑量組對(duì)照組F 值P高劑量組中劑量組低劑量組對(duì)照組F 值P 10 10 10 10空腹體重（g）349.59±32.30 342.21±47.52 338.92±34.68 365.95±28.37 1.093 0.365 226.23±13.24 224.06±15.80 220.27±17.06 229.96±18.03 0.631 0.600心臟系數(shù)（%）0.38±0.04 0.36±0.02 0.36±0.03 0.36±0.03 1.061 0.378 0.39±0.04 0.38±0.04 0.41±0.04 0.40±0.03 1.077 0.371肝臟系數(shù)（%）3.28±0.26 3.37±0.13 3.38±0.26 3.51±0.21 1.822 0.161 3.47±0.39 3.35±0.14 3.48±0.54 3.54±0.24 0.472 0.703脾臟系數(shù)（%）0.22±0.04 0.22±0.03 0.23±0.03 0.25±0.05 0.906 0.448 0.22±0.03 0.23±0.02 0.22±0.02 0.22±0.04 0.162 0.921腎臟系數(shù)（%）0.73±0.07 0.72±0.02 0.73±0.06 0.75±0.05 0.562 0.644 0.76±0.07 0.72±0.05 0.77±0.04 0.75±0.06 1.877 0.151胃系數(shù)（%）0.53±0.05 0.53±0.03 0.52±0.03 0.52±0.03 0.429 0.734 0.56±0.01 0.56±0.04 0.57±0.03 0.58±0.02 1.066 0.375

2.2.9 組織病理學(xué)檢查 試驗(yàn)結(jié)束取高劑量組及對(duì)照組雌雄兩種性別SD 大鼠的心臟、肝臟、脾臟、腎臟、胃進(jìn)行組織病理學(xué)檢查，鏡下觀察其顯微形態(tài)。①心臟切片顯示：心臟被膜完整，心肌細(xì)胞完整排列，心間質(zhì)正常。②肝臟切片顯示：肝小葉結(jié)構(gòu)清楚，被膜完整，未出現(xiàn)炎性浸潤(rùn)、點(diǎn)狀壞死、出血、空泡變性等異常改變。 ③腎臟切片顯示：腎小管與腎小球結(jié)構(gòu)正常，被膜完整，皮質(zhì)與髓質(zhì)部未出現(xiàn)管型、顆粒變性、蛋白質(zhì)滲出等異常改變。④脾臟切片顯示：脾小梁結(jié)構(gòu)正常，被膜完整，未出現(xiàn)炎性浸潤(rùn)、結(jié)締組織增生等異常改變。⑤胃部切片顯示：各層結(jié)構(gòu)清楚，胃黏膜上層結(jié)構(gòu)完整，黏膜下層未見(jiàn)異常，未出現(xiàn)黏膜下出血、水腫、萎縮、增生等異常改變。

3 討論

3.1 沙棘醋飲對(duì)改善MAFLD 分級(jí)的作用 MAFLD是與目前已知代謝功能障礙相關(guān)的肝病的新定義[2]，在我國(guó)患病率高達(dá)29.2%[11]。采取結(jié)構(gòu)化的干預(yù)方案從而改變病人生活方式是MAFLD 治療的首要方法與基石[12]，尤其是飲食干預(yù)對(duì)MAFLD 的預(yù)防與治療具有重要意義[13]。課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，通過(guò)連續(xù)服用沙棘醋飲、苦蕎醋飲組合3 個(gè)月可有效改善MAFLD的脂肪肝分級(jí)情況，部分受試者服用沙棘醋飲、苦蕎醋飲組合后睡眠質(zhì)量提升、便秘改善、血壓降低、疲勞緩解[7]。沙棘醋飲中含有豐富的沙棘黃酮和沙棘有機(jī)酸等功能因子，其中沙棘總黃酮的含量較高，可以改善肝功能，發(fā)揮護(hù)肝作用[14]。Xiao 等[15]通過(guò)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)對(duì)沙棘黃酮改善高脂血癥的機(jī)制進(jìn)行探討，結(jié)果表明，沙棘黃酮可以促進(jìn)膽固醇代謝，抑制膽固醇合成，加快脂肪酸氧化，從而改善高脂血癥。Jiao 等[16]通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究沙棘黃酮對(duì)高脂血癥大鼠的降血脂作用及抗氧化活性，結(jié)果表明，沙棘黃酮能顯著降低高膽固醇飲食大鼠肝臟氧化。一項(xiàng)針對(duì)沙棘活性成分調(diào)節(jié)肝星狀細(xì)胞活化和肝纖維化的研究表明，沙棘果實(shí)中的活性物質(zhì)可顯著減輕肝損傷和炎癥程度，并以劑量依賴(lài)性方式恢復(fù)肝功能[17]。

3.2 沙棘醋飲急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)結(jié)果分析 急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)是檢測(cè)與評(píng)價(jià)受試物毒性作用中最基本、最重要的一項(xiàng)試驗(yàn)[18]。本研究以沙棘醋飲對(duì)ICR 小鼠的作用探究其毒性強(qiáng)度，主要對(duì)ICR 小鼠的一般臨床表現(xiàn)、體重情況及臟器系數(shù)進(jìn)行分析。①一般臨床表現(xiàn)：觀察期內(nèi)ICR 小鼠生長(zhǎng)良好，日常活動(dòng)和常規(guī)狀態(tài)未見(jiàn)異常，各系統(tǒng)和器官未見(jiàn)異常，無(wú)死亡情況出現(xiàn)。說(shuō)明人體推薦攝入量100 倍的沙棘醋飲并未對(duì)ICR 小鼠產(chǎn)生毒性效應(yīng)。②體重情況：在動(dòng)物研究中，體重是衡量動(dòng)物生長(zhǎng)健康和代謝狀態(tài)的重要指標(biāo)[19]，觀察期間劑量組與對(duì)照組ICR 小鼠生長(zhǎng)發(fā)育狀況均良好，劑量組第1 天、第7 天、第14 天的體重與對(duì)照組比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。說(shuō)明人體推薦攝入量100 倍的沙棘醋飲并未對(duì)ICR 小鼠體重產(chǎn)生不良影響。③臟器系數(shù)：動(dòng)物臟器系數(shù)可以反映并評(píng)估受試物對(duì)受試動(dòng)物臟器的損傷情況[20]。觀察期間ICR 小鼠心臟、肝臟、脾臟、腎臟和胃等主要器官未觀察到異常變化，臟器形態(tài)、顏色、質(zhì)地均正常，劑量組主要器官的臟器系數(shù)與對(duì)照組比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。說(shuō)明人體推薦攝入量100 倍的沙棘醋飲對(duì)ICR小鼠各主要臟器無(wú)損害作用。總體來(lái)看，在本試驗(yàn)條件下，沙棘醋飲對(duì)ICR 小鼠沒(méi)有產(chǎn)生急性毒性作用，為進(jìn)一步的毒性試驗(yàn)提供了參考依據(jù)，為初步確定沙棘醋飲的安全劑量奠定了基礎(chǔ)。

3.3 沙棘醋飲28 d 經(jīng)口毒性試驗(yàn)分析 28 d 經(jīng)口毒性試驗(yàn)作為食品安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)的重要內(nèi)容之一，旨在為確定食用安全劑量提供參考。本研究主要對(duì)SD 大鼠的一般臨床表現(xiàn)、體重及攝食情況、血液學(xué)指標(biāo)、血生化指標(biāo)、臟器系數(shù)及組織病理學(xué)進(jìn)行分析。①一般臨床表現(xiàn)：試驗(yàn)過(guò)程中各組SD 大鼠的生長(zhǎng)情況良好，日?；顒?dòng)及常規(guī)狀態(tài)均無(wú)異常表現(xiàn)，各系統(tǒng)及器官均未發(fā)現(xiàn)中毒特征，無(wú)中毒、死亡現(xiàn)象。說(shuō)明人體推薦攝入量100 倍、50 倍、25 倍的沙棘醋飲并未對(duì)SD 大鼠產(chǎn)生毒性效應(yīng)。②體重及攝食情況：體重及食物利用率是毒理學(xué)安全性評(píng)價(jià)和試驗(yàn)動(dòng)物生長(zhǎng)評(píng)價(jià)中客觀且易于判斷的指標(biāo)[21]。試驗(yàn)過(guò)程中各組SD 大鼠的體重均有增長(zhǎng)，各劑量組第1 天、第1 周、第2 周、第3 周、第4 周體重與對(duì)照組比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，個(gè)別SD 大鼠體重增長(zhǎng)異常，可能與灌胃初期SD 大鼠易出現(xiàn)抗拒現(xiàn)象，灌胃方式產(chǎn)生的機(jī)械因素對(duì)SD 大鼠心理狀況產(chǎn)生一定影響[22]，灌胃初期SD 大鼠不適感易造成心理壓力有關(guān)。隨著SD 大鼠體重增加及灌胃周期延長(zhǎng)，初期不良反應(yīng)消失。SD 大鼠體重變化受個(gè)體因素、飼養(yǎng)環(huán)境等影響，結(jié)合一般指標(biāo)及統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果，認(rèn)為人體推薦攝入量100 倍、50 倍、25 倍的沙棘醋飲對(duì)SD 大鼠體重的變化未產(chǎn)生不良影響。食物利用率變化情況可以反映受試動(dòng)物的消化吸收情況。各劑量組第1 周、第2 周、第3 周、第4 周攝食量及食物利用率與對(duì)照組比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。提示，人體推薦攝入量100 倍、50 倍、25 倍的沙棘醋飲對(duì)SD 大鼠的攝食量和食物利用率未產(chǎn)生影響。③血液學(xué)指標(biāo)：血液在促進(jìn)新陳代謝和維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)方面起著重要作用，血液成分變化在一定程度上反映了組織的病理學(xué)改變[23]。分析各組SD 大鼠的血液學(xué)指標(biāo)，結(jié)果顯示，低劑量組雄性大鼠的白細(xì)胞計(jì)數(shù)偏高，與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，分析具體數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)其符合文獻(xiàn)報(bào)道的正常范圍，結(jié)合臟器解剖觀察及組織病理學(xué)檢查綜合分析認(rèn)為低劑量組雄性大鼠的白細(xì)胞計(jì)數(shù)升高不具有臨床意義。各劑量組其余血液學(xué)指標(biāo)與對(duì)照組比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。提示人體推薦攝入量100 倍、50 倍、25倍的沙棘醋飲對(duì)SD 大鼠血液學(xué)指標(biāo)未產(chǎn)生影響。④血生化指標(biāo)：肝臟是機(jī)體代謝臟器，ALT、AST、TP、ALB 及ALP 反映了肝臟功能基本狀況，其中，ALT 是肝臟損傷的敏感指標(biāo)[24]。各劑量組肝臟功能指標(biāo)與對(duì)照組比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。腎臟主要功能是清除代謝產(chǎn)物并維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)。腎臟容易受代謝產(chǎn)物損害，因其具有較強(qiáng)的代償作用，腎臟損害早期不易被發(fā)現(xiàn)。Cr、UREA 作為反映腎臟功能的指標(biāo)，各劑量組與對(duì)照組比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。其余代謝相關(guān)指標(biāo)無(wú)異常。說(shuō)明人體推薦攝入量100 倍、50 倍、25 倍的沙棘醋飲對(duì)SD 大鼠血生化指標(biāo)暫無(wú)不良影響。⑤臟器系數(shù)：臟器系數(shù)改變能夠充分反映受試物對(duì)該臟器的毒性作用。各劑量組SD大鼠的心臟、肝臟、腎臟、脾臟和胃的臟器系數(shù)與對(duì)照組比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。⑥組織病理學(xué)：顯微鏡下觀察高劑量組與對(duì)照組心臟、肝臟、脾臟、腎臟、胃部的組織切片，結(jié)果顯示，組織學(xué)切片均無(wú)病變，組織結(jié)構(gòu)和形態(tài)完整。提示人體推薦攝入量100倍、50 倍、25 倍的沙棘醋飲對(duì)SD 大鼠各主要臟器無(wú)損害作用?？傮w來(lái)看，沙棘醋飲經(jīng)口安全性較高，不具有短期毒性。

4 小結(jié)

本研究通過(guò)急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)和28 d 經(jīng)口毒性試驗(yàn)對(duì)沙棘醋飲的安全性進(jìn)行初步研究，結(jié)果表明沙棘醋飲無(wú)急性與短期毒性效應(yīng)和毒作用特征，初步驗(yàn)證沙棘醋飲安全無(wú)毒。在現(xiàn)代醫(yī)學(xué)模式影響下，“藥食同源”思想與“醫(yī)養(yǎng)結(jié)合”理念相契合，藥食同源食品逐漸得到人們的認(rèn)可與推崇[25]。針對(duì)沙棘醋飲的安全性研究及功效性研究尤為重要。服用沙棘醋飲作為一種促進(jìn)健康、改善代謝的新型養(yǎng)生方式，為防治糖脂代謝異常提供了新思路。沙棘醋飲的安全性研究為沙棘醋飲的日常飲食推薦提供了試驗(yàn)證據(jù)，后續(xù)還可繼續(xù)進(jìn)行沙棘醋飲的遺傳毒性試驗(yàn)、生殖毒性試驗(yàn)等研究。