液相質(zhì)譜聯(lián)用測定豬肉中氯霉素殘留量

黃仁貴 王潔 馬龍 蔣麗 陳丹 陳彥霖 周海旭

摘要：為提高豬肉中氯霉素殘留分析效率，在重慶市永川區(qū)4個農(nóng)貿(mào)市場各購選5組新鮮豬肉，各自混合均勻制備成4組分析樣品，經(jīng)乙酸乙酯提取后使用氮吹儀濃縮至近干，殘渣用水溶解，然后以正己烷脫脂，采用甲醇—水進行洗脫，經(jīng)色譜柱分離后，采用多反應(yīng)監(jiān)測ESI-模式進行定性及同位素內(nèi)標(biāo)法定量分析。結(jié)果顯示，氯霉素在0.1～0.8 ng/mL范圍內(nèi)線性良好，相關(guān)系數(shù)R2>0.999，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為4.2%～8.2%，回收率為82.7%～117.5%。所選樣品檢測結(jié)果均為陰性，表明永川區(qū)所選區(qū)域抽檢豬肉品質(zhì)良好。該法雖不能針對每一組樣品進行獨立檢測分析并出具檢測報告，但可在大批量樣品中初步篩選殘留氯霉素的樣品，縮小篩查范圍，提高豬肉中氯霉素殘留物監(jiān)控效率。

關(guān)鍵詞：液相質(zhì)譜；測定；氯霉素；豬肉；殘留量

中圖分類號：TS251.7 文獻標(biāo)志碼：A DOI：10.16465/j.gste.cn431252ts.20230524

Determination of chloramphenicol residues in pork by liquid chromatography-mass spectrometry

Huang Rengui1， Wang Jie2， Ma Long1， Jiang Li1， Chen Dan3， Chen Yanlin3， Zhou Haixu4

（ 1. Chongqing SIIE Product Quality Inspection Co.， Ltd.， Chongqing 401120； 2. Chongqing Energy Institute Food Testing Co.， Ltd.， Chongqing 402200； 3. Saiwang Inspection and Certification Co.， Ltd.， Chongqing 400000； 4. Henan University of Science and Technology， Xinxiang， Henan 453003 ）

Abstract： In order to improve the efficiency of analysis of the chloramphenicol residues in pork， five groups of fresh pork were purchased from each of the four agricultural markets in Yongchuan District， Chongqin Province and then mixed uniformly to prepare four analytical samples. After extracted with alkaline ethyl acetate， the residue was concentrated to nearly dry with a nitrogen blowing instrument. The residue was dissolved in water， then degreased with n-hexane， eluted with methanol-water， and separated by a chromatographic column， the multi-reaction monitoring ESI mode was used for qualitative analysis and the isotope internal standard method for quantitative analysis. The results showed that the linearity of chloramphenicol was good in the range of 0.1～0.8 ng/mL， the correlation coefficient was greater than 0.999（R2>0.999）， the relative standard deviation was 4.2%～8.2%， the recovery rate was 82.7%～117.5%， and the test results of the selected samples were negative， indicating that the quality of the pork in the selected areas of Yongchuan District was good. This method couldnt conduct independent detection and issued a detection report， but it could initially screen residual chloramphenicol sample in a large number of samples， which narrowed the scope of screening， and improved the monitoring efficiency of chloramphenicol residues in pork.

Key words： liquid chromatography-mass spectrometry， detection， chloramphenicol， pork， residual

畜牧業(yè)中獸藥殘留常有報道，常見超標(biāo)獸藥有驅(qū)蟲藥、抗原蟲藥[1]、生長促進或者抑制劑、抗菌類或者抗生素類物質(zhì)[2]等，其中氯霉素是一種常見獸藥殘留物。氯霉素為一種廣譜抗生素，具備顯著抗菌效果，臨床上對家禽副傷寒、幼畜副傷寒等多種腸道感染及傳染性角膜炎、乳腺炎等局部感染均有較好的治療作用[3]。隨著研究逐步深入，發(fā)現(xiàn)氯霉素雖然具備較好抗菌效果，但會損害人體骨髓造血功能，引起再生障礙性貧血癥[4]，目前已被中國、歐盟、美國等禁止使用。

對氯霉素的檢測，有氣相色譜法[5]、高效液相色譜法[6]、酶免疫分析法[7]、聯(lián)用技術(shù)[8-9]等檢測方法，目前應(yīng)用最為普遍的為液相質(zhì)譜聯(lián)用法。吳基任等[10]利用超高相液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定動物源性食品中氯霉素含量，結(jié)果顯示在研究濃度范圍內(nèi)線性良好，0.2、2、20 μg/kg 3個水平的回收率達到80.3%～94.7%，該方法具有操作簡便、環(huán)保、準(zhǔn)確及靈敏等特點。

本試驗以重慶市永川區(qū)4個農(nóng)貿(mào)市場選購的新鮮豬肉為樣品，檢測其氯霉素殘留量，旨在為探索測定豬肉中氯霉素殘留量高效篩選分析方法提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

在重慶市永川區(qū)1、2、3、4號4個農(nóng)貿(mào)市場，隨機選取5個攤位購買豬后腿肉，將每個農(nóng)貿(mào)市場5組豬肉粉碎混勻后制備為測試樣品，依次編號為豬肉-1、豬肉-2、豬肉-3、豬肉-4，于-18 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

甲醇（色譜純）、乙酸乙酯（色譜純）、正己烷（色譜純）、氫氧化銨（分析純）：重慶川東化工（集團）有限公司；氯霉素、氯霉素-D5：上海安譜實驗科技有限公司。

1.2 儀器設(shè)備

Xevo TQD型液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀：美國沃特斯公司；BSA124S-CW型分析天平：德國賽多利斯公司；TG16.5型離心機：上海盧湘儀離心機儀器有限公司；YMSH-JJ-2型絞肉機：北京中西華大科技有限公司；TSNC150-2型氮吹儀：天津泰斯特儀器有限公司；SHQT11/QT-2型渦旋器：南京威美特科學(xué)儀器有限公司。

1.3 試驗方法

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線建立

將氯霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液以流動相逐步稀釋至質(zhì)量濃度為0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、5.0、8.0 ng/mL的工作液，氯霉素-D5質(zhì)量濃度0.5 ng/mL，待上機分析。

1.3.2 樣品提取

稱取5 g樣品于離心管中，分別加入50 μL氯霉素-D5中間濃度內(nèi)標(biāo)（10 ng/mL）溶液，加入5 mL乙酸乙酯于渦旋器上渦旋1 min，超聲5 min后，在4 000 r/min條件下離心5 min，將上清液移入氮吹管中，殘渣重復(fù)提取一次后，合并上清液，于45 ℃濃縮至近干待凈化。按照樣品提取方法操作以測定加標(biāo)回收率。

1.3.3 凈 化

在氮吹管中加入1.0 mL水，超聲5 min，樣品溶解之后加入1 mL正己烷進行液液脫脂，渦旋混合，靜置分層后棄掉上層正己烷，在4 000 r/min、4 ℃條件下離心5 min，過0.22 μm濾膜后供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測定分析。加標(biāo)樣品凈化操作同上。

1.3.4 儀器條件

（1） 液相色譜條件：色譜柱為Waters ACQμ-ITY μPLC？ BEH C18 （2.1 mm×50 mm，1.7 μm）；柱溫40 ℃；流動相為水—甲醇；流速0.3 mL/min；進樣量5 μL。

（2） 質(zhì)譜條件：離子源為電噴霧離子源；掃描方式為負(fù)離子掃描；檢測方式為MRM；電噴霧電壓4 500 V；輔助器溫度550 ℃。質(zhì)譜參數(shù)見表1。

2.1 定性分析

在氯霉素殘留分析過程中，選擇表2定量定性離子對，在相同的試驗條件下，將樣品與標(biāo)準(zhǔn)溶液峰保留時間進行比較分析，其偏差應(yīng)滿足表2要求。

由圖1可知，豬肉-1、豬肉-2、豬肉-3、豬肉-4樣品均無氯霉素殘留，表明4個農(nóng)貿(mào)市場購選的相應(yīng)批次樣品均無氯霉素檢出。

2.2 定量分析

以標(biāo)準(zhǔn)溶液氯霉素峰面積和氯霉素-D5峰面積的比值為縱坐標(biāo)，氯霉素濃度與氯霉素-D5濃度的比值為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線如圖2，回歸方程y = 0.973 52x + 0.026 10，相關(guān)性系數(shù)0.999 95，在0.1～0.8 ng/mL范圍內(nèi)線性良好。

式中：X為豬肉樣品中氯霉素殘留量，μg/kg；c為從標(biāo)準(zhǔn)曲線上得到的氯霉素組分的質(zhì)量濃度，ng/mL；V為待測液最終定容體積，mL；m為試樣溶液所代表的試樣質(zhì)量，g。

由表3可知，4組樣品均未檢出氯霉素殘留。由表4可知，陰性樣品中添加0.1、0.5、1.0 μg/kg 3水平氯霉素，測得加標(biāo)回收率為82.7%～117.5%，精密度為4.2%～8.2%。其中1.0 μg/kg水平的回收率偏高，與趙浩軍等[11]研究結(jié)果一致，可能是基體效應(yīng)所致。液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用中基體效應(yīng)是由于樣品基體導(dǎo)致質(zhì)譜檢測中標(biāo)準(zhǔn)溶液和分析樣品中目標(biāo)物的響應(yīng)值出現(xiàn)差異，從而致使校準(zhǔn)結(jié)果不準(zhǔn)確[12]。另外，吳基任等[10]采用基體標(biāo)準(zhǔn)工作曲線校正加標(biāo)樣品，回收率為80.3%～94.7%，結(jié)果更為理想。

此法將5組樣品經(jīng)過制樣混勻后進行檢測，大大縮減了樣品檢測耗材用量，提高了豬肉中氯霉素檢測效率，雖然無法針對每一組樣品獨立檢測分析并出具檢測報告，但可作為大樣品量目標(biāo)物質(zhì)的初步篩選，以縮小篩查范圍，在一定程度上提高監(jiān)控效率。

3 結(jié) 論

將4個農(nóng)貿(mào)市場豬肉樣品分別制樣混勻后標(biāo)記為豬肉-1、豬肉-2、豬肉-3、豬肉-4，進行處理后以同位素內(nèi)標(biāo)法定量分析，結(jié)果顯示氯霉素在0.1～0.8 ng/mL范圍內(nèi)線性良好，相關(guān)系數(shù)達到0.999 95，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為4.2%～8.2%，高濃度水平加標(biāo)回收率偏高，可能是基體效應(yīng)所致，分析樣品未檢出氯霉素殘留物。此方法雖不能針對每一組樣品進行獨立檢測分析并出具檢測報告，但可在大批量樣品中初步篩選風(fēng)險物質(zhì)，縮小篩查范圍，提高豬肉中氯霉素殘留物監(jiān)控效率。此外，豬肉成分復(fù)雜，基體效應(yīng)對氯霉素殘留物分析影響較為明顯，后續(xù)可對比研究基體標(biāo)準(zhǔn)工作曲線校正對氯霉素分析檢測低限、精密度及不同加標(biāo)水平回收率的影響。

參 考 文 獻

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