原料藥甘油穩(wěn)定性試驗(yàn)研究

張延超，劉 帥，劉 菁，吳 燕

（天津市藥品檢驗(yàn)研究院，天津 300070）

甘油分子式為C3H8O3，分子量為92.09，CAS號(hào)：56-81-5，甘油最早由斯柴爾（Scheel）于1779年首先發(fā)現(xiàn)，1823年人們逐漸認(rèn)識(shí)到油脂成分中含有Chevreul，希臘語(yǔ)為甘甜的意思，因此命名為甘油（glycerol）。在一戰(zhàn)期間，曾作為制造火藥的原料而大量生產(chǎn)。此后，甘油作為潤(rùn)滑性瀉藥或藥用輔料，溶劑和助懸劑等，被廣泛應(yīng)用在原料藥和藥用輔料中。

藥品的穩(wěn)定性是指原料藥及其制劑保持其物理、化學(xué)、生物學(xué)和微生物學(xué)性質(zhì)的能力。穩(wěn)定性特性也是藥品質(zhì)量控制研究的重要內(nèi)容，與藥品質(zhì)量研究和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立緊密相關(guān)［1-2］。藥品的穩(wěn)定性直接關(guān)系到臨床用藥安全，通常條件下，隨著儲(chǔ)存時(shí)間的延長(zhǎng)，化學(xué)藥品會(huì)出現(xiàn)降解，導(dǎo)致有效成分的減少和有害物質(zhì)的增加，有的藥品生產(chǎn)企業(yè)無(wú)法厘清留樣、穩(wěn)定性試驗(yàn)與持續(xù)穩(wěn)定性考查三種行為之間的關(guān)系和區(qū)別，不同程度地存在著概念不清、措施混淆、質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)和法律風(fēng)險(xiǎn)并存等情形［3］。

因此，通過(guò)對(duì)藥品穩(wěn)定性研究，對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定性的確定，對(duì)推測(cè)產(chǎn)品的有效期都具有實(shí)際指導(dǎo)意義［2］。本文按照國(guó)家新藥注冊(cè)管理辦法中藥品穩(wěn)定研究指導(dǎo)原則，以及《中國(guó)藥典》原料藥與藥物制劑穩(wěn)定性試驗(yàn)指導(dǎo)原則，對(duì)甘油原料藥進(jìn)行穩(wěn)定性考查。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 電子天平（METTLER）；折光儀（RUDOLPH J257）；紅外光譜儀（BRUKER TENSOR 27）；氣相色譜儀（Agilent 7890A）；水分儀（METTLER V20）；高溫爐（Thermo BF51794JC-1）；加熱板（萊玻特瑞）；紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)（島津UV-2450）；pH計(jì)（METTLER Seveneasy）；電熱恒溫水浴鍋（HBYQ HHS型）；純水儀（MillAdvantage A10）。

1.2 試藥 原料藥甘油（廠家A，批號(hào)072703-01、072803-01、072903-01）；氫氧化鈉（天津市化學(xué)試劑三廠）；重鉻酸鉀（天津市華東試劑廠）；甲醇（Merck，色譜純）；硝酸（Merck，色譜純）；鹽酸（天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司）；硫酸銅（天津市贏達(dá)稀貴化學(xué)試劑廠）；氫氧化鉀（天津市化學(xué)試劑三廠）；二甘醇（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)101127-201302）；乙二醇（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)101111-201904）；1，2-丙二醇（Dr.Ehrenstorfer GmbH，批號(hào)G1007429）；正己醇（Dr.Ehrenstorfer GmbH，批號(hào)G1021183）；鐵單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液（國(guó)家有色金屬及電子材料分析測(cè)試中心，國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)樣品編號(hào)：GSB 04-1762-2004，批號(hào)16031）；草酸銨（天津市風(fēng)帆化學(xué)試劑科技有限公司）；鉛單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液（國(guó)家有色金屬及電子材料分析測(cè)試中心，國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)樣品編號(hào)：GSB 04-1742-2004，批號(hào)208021-1）。

2 方法與結(jié)果

2.1 穩(wěn)定性試驗(yàn)

2.1.1 性狀 按照《中國(guó)藥典》方法［1］，本品為無(wú)色、澄清的黏稠液體。相對(duì)密度：本品在25℃時(shí)的相對(duì)密度為1.258~1.268。折光率：本品的折光率為1.470~1.475。

2.1.2 酸堿度 按照《中國(guó)藥典》方法［1］，取本品25.0 g，用水稀釋至50 ml，搖勻，加酚酞指示劑0.5 ml，溶液應(yīng)無(wú)色，加0.l mol/L氫氧化鈉溶液0.2 ml，溶液應(yīng)顯粉紅色。

2.1.3 顏色 按照《中國(guó)藥典》方法［1］，取本品50 ml，置50 ml納氏比色管中，與對(duì)照液（取比色用重鉻酸鉀溶液0.2 ml，加水稀釋至50 ml制成）比較，不得更深。

2.1.4 糖 按照《中國(guó)藥典》方法［1］，采用滴加硫酸銅試液的顯色反應(yīng)，應(yīng)為藍(lán)色澄清溶液，繼續(xù)在水浴上加熱5 min，溶液應(yīng)仍為藍(lán)色，無(wú)沉淀產(chǎn)生。

2.1.5 脂肪酸與脂類(lèi) 按照《中國(guó)藥典》方法［1］，采用氫氧化鈉滴定法，進(jìn)行測(cè)定，消耗的氫氧化鈉滴定液（0.1 mol/L）不得過(guò)4.0 ml。

2.1.6 丙烯醛與銨鹽 按照《中國(guó)藥典》方法［1］，不得顯黃色或發(fā)生氨臭。

2.1.7 易炭化物 按照《中國(guó)藥典》方法［1］，結(jié)果應(yīng)符合規(guī)定。

2.1.8 有關(guān)物質(zhì) 按照《中國(guó)藥典》方法［1］，采用氣相色譜加內(nèi)標(biāo)方法，扣除內(nèi)標(biāo)峰按面積歸一化法計(jì)算，單個(gè)未知雜質(zhì)不得過(guò)0.1%；雜質(zhì)總量（包含二甘醇、乙二醇和1，2-丙二醇）不得過(guò)1.0%。

2.1.9 水分 按照《中國(guó)藥典》方法［1］，含水分不得過(guò)2.0%。

2.1.10 含量測(cè)定 按照《中國(guó)藥典》方法［1］，采用滴定法，按無(wú)水物計(jì)算，甘油含量不得少于98.0%。

2.2 影響因素試驗(yàn) 此項(xiàng)試驗(yàn)是在比加速試驗(yàn)更激烈的條件下進(jìn)行。其目的是探討藥物的固有穩(wěn)定性、了解影響其穩(wěn)定性的因素及可能的降解途徑與降解產(chǎn)物，為制劑生產(chǎn)工藝、包裝、貯存條件和建立降解產(chǎn)物分析方法提供科學(xué)依據(jù)［4］。

2.2.1 光照試驗(yàn) 取072703-01、072803-01、072903-01共3批樣品，開(kāi)口放在光照箱中，以4 500 lx光照射10 d，分別在5和10 d取樣測(cè)定。結(jié)果本品經(jīng)強(qiáng)光照射后，外觀性狀、相對(duì)密度、折光率、酸堿度、顏色、糖、脂肪酸與脂類(lèi)、丙烯醛與銨鹽、易炭化物、有關(guān)物質(zhì)、含量測(cè)定均未見(jiàn)明顯變化，水分稍有增加，表明本品對(duì)光照較穩(wěn)定。見(jiàn)表1。

2.2.2 高溫試驗(yàn) 取072703-01、072803-01、072903-01共3批樣品，開(kāi)口放在恒溫箱中，于60℃溫度下放置30 d，在第5、10和30 d取樣測(cè)定。結(jié)果經(jīng)60℃高溫試驗(yàn)后，外觀性狀、相對(duì)密度、折光率、酸堿度、顏色、糖、脂肪酸與脂類(lèi)、丙烯醛與銨鹽、易炭化物、有關(guān)物質(zhì)、含量測(cè)定均未見(jiàn)明顯變化，雜質(zhì)總量為0.05%，最大單個(gè)未知雜質(zhì)含量為0.04%，水分稍有增加，說(shuō)明本品對(duì)熱較穩(wěn)定。見(jiàn)表1。

2.2.3 高濕試驗(yàn) 取072703-01、072803-01、072903-01共3批樣品，開(kāi)口置恒濕密閉容器中，于相對(duì)濕度75%RH和92.5%RH下，室溫放置5 d，取樣測(cè)定。結(jié)果經(jīng)75%RH和92.5%RH高濕試驗(yàn)后，外觀性狀、相對(duì)密度、折光率、酸堿度、顏色、糖、脂肪酸與脂類(lèi)、丙烯醛與銨鹽、易炭化物、有關(guān)物質(zhì)未見(jiàn)明顯變化，有關(guān)物質(zhì)中雜質(zhì)總量為0.05%，最大單個(gè)未知雜質(zhì)含量為0.04%，無(wú)明顯變化。由于本品極具引濕性，高濕條件下水分和含量測(cè)定試驗(yàn)無(wú)法繼續(xù)進(jìn)行，說(shuō)明本品對(duì)高濕環(huán)境極不穩(wěn)定。見(jiàn)表1。

2.3 加速試驗(yàn) 藥品穩(wěn)定性加速試驗(yàn)屬于藥品上市后階段的穩(wěn)定性研究，其考查條件一般等同于長(zhǎng)期穩(wěn)定性試驗(yàn)樣品放置條件，供試品在溫度（40±2）℃、相對(duì)濕度75%±5%的條件下放置6個(gè)月［4］。通過(guò)考查產(chǎn)品在高于長(zhǎng)期貯藏溫度和濕度條件下的穩(wěn)定性，根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果確定是否需要進(jìn)行中間條件下的穩(wěn)定性試驗(yàn)及確定長(zhǎng)期試驗(yàn)的放置條件。本試驗(yàn)取3批樣品，在溫度為40℃，相對(duì)濕度為RH75%的恒溫恒濕箱中放置，于3和6個(gè)月取樣測(cè)定?？疾闃悠吠庥^性狀、相對(duì)密度、折光率、酸堿度、顏色、糖、脂肪酸與脂類(lèi)、丙烯醛與銨鹽、易炭化物、有關(guān)物質(zhì)、含量測(cè)定的變化。結(jié)果經(jīng)40℃加速試驗(yàn)6個(gè)月后，外觀性狀、酸堿度、顏色、糖、脂肪酸與脂類(lèi)、丙烯醛與銨鹽、易炭化物考查指標(biāo)均符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求，相對(duì)密度、折光率、有關(guān)物質(zhì)、水分、含量測(cè)定均未見(jiàn)明顯變化，有關(guān)物質(zhì)有所增加，3批樣品總雜質(zhì)分別為0.11%、0.12%和0.12%，仍符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求。見(jiàn)表2。

表2 原料藥甘油加速試驗(yàn)結(jié)果（40℃，RH75%）

3 討論

穩(wěn)定性研究是基于對(duì)原料藥或制劑及其生產(chǎn)工藝的系統(tǒng)研究和理解，通過(guò)設(shè)計(jì)試驗(yàn)獲得原料藥或制劑的質(zhì)量特性在各種環(huán)境因素（如溫度、濕度、光線照射等）的影響下隨時(shí)間變化的規(guī)律，并據(jù)此為藥品的處方、工藝、包裝、貯藏條件和有效期的確定提供信息支持［5］。

影響因素試驗(yàn)表明，經(jīng)60℃高溫試驗(yàn)后，水分稍有增加，其余項(xiàng)目未見(jiàn)明顯變化，說(shuō)明本品對(duì)熱較穩(wěn)定。本品對(duì)高濕環(huán)境極不穩(wěn)定，極具引濕性，高濕條件下水分和含量變化明顯。經(jīng)強(qiáng)光照射后，水分稍有增加，其余項(xiàng)目未見(jiàn)明顯變化，表明本品對(duì)光照較穩(wěn)定。

加速試驗(yàn)表明，本品經(jīng)40℃加速試驗(yàn)6個(gè)月后，外觀性狀、相對(duì)密度、折光率、酸堿度、顏色、糖、脂肪酸與脂類(lèi)、丙烯醛與銨鹽、易炭化物、有關(guān)物質(zhì)、水分和含量測(cè)定均未見(jiàn)明顯變化，有關(guān)物質(zhì)有所增加，3批樣品總雜質(zhì)分別為0.11%、0.12%和0.12%，仍符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求。

本試驗(yàn)通過(guò)對(duì)原料藥甘油穩(wěn)定性和加速試驗(yàn)研究，考查原料藥甘油在質(zhì)量周期內(nèi)的變化，為其制備、包裝、貯藏條件和有效期的確定與質(zhì)量控制提供技術(shù)支持。也為藥品生產(chǎn)企業(yè)梳理清留樣、穩(wěn)定性試驗(yàn)與持續(xù)穩(wěn)定性考查三種行為之間的關(guān)系和區(qū)別提供技術(shù)參考。