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    基于AMPK/mTOR信號通路研究膝痹寧方對膝骨關(guān)節(jié)炎模型大鼠的改善作用機(jī)制 Δ

    2023-01-14 07:20:14廖太陽張力楊楠魏義保呂璟先徐波丁亮王培民張立南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院江蘇省中醫(yī)院骨傷科南京009南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬蘇州市中醫(yī)醫(yī)院骨傷科江蘇蘇州5007
    中國藥房 2023年1期
    關(guān)鍵詞:磷酸化批號軟骨

    廖太陽 ,張力 ,楊楠 ,魏義保 ,呂璟先 ,徐波 ,丁亮 ,王培民 ,張立 (.南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院/江蘇省中醫(yī)院骨傷科,南京 009;.南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬蘇州市中醫(yī)醫(yī)院骨傷科,江蘇 蘇州 5007)

    膝骨關(guān)節(jié)炎(knee osteoarthritis,KOA)是一種全關(guān)節(jié)疾病,該病病因復(fù)雜,軟骨退變是其核心病理環(huán)節(jié)[1]。軟骨退變主要是由于軟骨細(xì)胞合成代謝及細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix,ECM)分解代謝平衡失調(diào)所致,因此,維持軟骨組織自身的代謝平衡在KOA的治療中具有十分關(guān)鍵的作用,對于延緩KOA發(fā)展進(jìn)程至關(guān)重要[2]。研究顯示,以血小板反應(yīng)蛋白解整合素金屬肽酶4(disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs 4,ADAMTS-4)、ADAMTS-5、基質(zhì)金屬蛋白酶3(matrix metalloproteinase3,MMP-3)、MMP-13為代表的膠原水解酶,對關(guān)節(jié)軟骨具有破壞作用[3—4];而聚集蛋白聚糖(Aggrecan)對關(guān)節(jié)軟骨具有保護(hù)作用[5—6]。另外,越來越多的研究表明,調(diào)控腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)/哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信號通路對軟骨具有保護(hù)效應(yīng)[7—9]。

    基于KOA中醫(yī)學(xué)“寒、瘀、虛”的病機(jī)特點(diǎn),南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院骨傷科王培民教授研制了中藥復(fù)方——膝痹寧方(XBN),該方由制狗脊、山萸肉、生薏苡仁、川牛膝、制何首烏、生甘草等11味中藥組成,且已獲國家專利(專利號為CN201010514325),在臨床上主要用于治療骨關(guān)節(jié)退行性疾病導(dǎo)致的慢性疼痛,療效顯著[10—11]。本課題組前期研究也發(fā)現(xiàn),XBN可改善KOA模型大鼠的滑膜炎癥和疼痛[12],但具體作用機(jī)制尚不明確?;诖?,筆者擬基于AMPK/mTOR信號通路探討XBN改善KOA的作用機(jī)制,以期為XBN的臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

    1 材料

    1.1 主要儀器

    本研究所用主要儀器包括AB7500型熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(qPCR)系統(tǒng)(美國ABI公司),HistoCore型組織切片機(jī)、TP1020型組織脫水機(jī)、KD-BMⅢ型組織包埋機(jī)、MI-3000B型倒置顯微鏡(德國Leica公司),BioPhotometer-Plus型多功能核酸蛋白檢測系統(tǒng)(德國Eppendorf公司),170-3930型垂直凝膠電泳及轉(zhuǎn)膜系統(tǒng)(美國Bio-Rad公司),LAS4000型凝膠成像發(fā)光系統(tǒng)(美國GE公司)等。

    1.2 主要藥品與試劑

    制狗脊、山萸肉、生薏苡仁、川牛膝、制何首烏、生甘草藥材均購自康美藥業(yè)股份有限公司(批號分別為211201171、220101031、220202271、220200041、211003211、211200251),巴戟天、炒白芍(批號分別為220100129、220400529)購自康美(亳州)世紀(jì)國藥有限公司,淡附片(批號22030206)購自康美滕王閣(四川)制藥有限公司,桂枝(批號220101)購自普寧市澤群中藥飲片有限公司,紫河車(批號211001)購自安徽道源堂中藥飲片有限公司。上述藥材經(jīng)南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院骨傷科王培民教授鑒定為真品。二甲雙胍(AMPK激動(dòng)劑,批號R000310)購自上海易恩化學(xué)技術(shù)有限公司;番紅O-固綠染色試劑盒(批號YM1011)購自南京伊爾美生物科技有限公司;兔源ADAMTS-4多克隆抗體、兔源ADAMTS-5多克隆抗體(批號分別為A02899、A02802-1)均購自美國Boster公司;兔源Aggrecan多克隆抗體、兔源MMP-3多克隆抗體、兔源MMP-13多克隆抗體、小鼠源GAPDH單克隆抗體(批號分別為13880-1-AP、17873-1-AP、18165-1-AP、60004-1-Ig)均購自美國 Proteintech公司;兔源AMPK單克隆抗體、兔源磷酸化AMPK(p-AMPK)單克隆抗體、mTOR單克隆抗體、兔源磷酸化mTOR(p-mTOR)單克隆抗體(批號分別為2532S、50081S、2983S、5536S)均購自美國CST公司;辣根酶素標(biāo)記的山羊抗兔免疫球蛋白G(IgG)二抗(批號K1223)均購自美國APExBIO公司;BCA試劑盒(批號P0012)購自上海Beyotime公司;青霉素鈉(批號F0112104)購自華北制藥股份有限公司。

    1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

    本研究所用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為SPF級SD雄性大鼠,共36只,體質(zhì)量190~200 g,2月齡,由浙江省醫(yī)學(xué)科學(xué)院提供,動(dòng)物生產(chǎn)許可證號為SCXK(浙)2019-0002。所有大鼠均分籠飼養(yǎng)于光/暗各12 h、室溫(25±2) ℃、相對濕度(60±5)%的動(dòng)物房內(nèi),自由攝食、飲水。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方案經(jīng)南京中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn),批準(zhǔn)號為ACU210101。

    2 方法

    2.1 藥物制備

    按照文獻(xiàn)[10]方法將XBN的11味中藥按處方比例稱取適量,將除淡附片、紫河車的其余9味中藥加8倍量(g/mL,下同)水浸泡30 min。用武火將淡附片煎至沸騰,再以文火煎30 min,加入上述浸泡后的中藥,煎至沸騰后繼續(xù)煎煮30 min,濾過;再加6倍量水,煎至沸騰后再煎30 min,濾過;合并2次濾液,最后加入研磨成粉的紫河車,濃縮成質(zhì)量濃度為1.2 g/mL(以生藥量計(jì))的XBN溶液。

    2.2 動(dòng)物分組、給藥與造模

    將大鼠隨機(jī)分為空白組、模型組、XBN組(12.56 g/kg,劑量為臨床等效劑量)和XBN+二甲雙胍組(12.56 g/kg XBN+100 mg/kg二甲雙胍,二甲雙胍劑量參考文獻(xiàn)[13]設(shè)置),每組9只。空白組大鼠僅切開皮膚而不開放膝關(guān)節(jié)腔,其余各組大鼠采用離斷前交叉韌帶的方法建立KOA模型[14],具體方法如下:用2%戊巴比妥鈉(50 mg/kg)腹腔注射麻醉大鼠后,備皮、消毒,縱向切口打開膝關(guān)節(jié)腔,髕骨脫位后用手術(shù)刀離斷前交叉韌帶,然后逐層縫合;術(shù)后連續(xù)肌內(nèi)注射青霉素鈉3 d以預(yù)防感染。造模14 d后,大鼠前抽屜試驗(yàn)陽性,表明造模成功??瞻捉M與模型組大鼠灌胃等體積生理鹽水,各給藥組大鼠給予相應(yīng)藥物,XBN和生理鹽水每天灌胃1次,二甲雙胍隔天腹腔注射1次,連續(xù)4周。

    2.3 大鼠軟骨組織病理形態(tài)學(xué)觀察

    采用番紅O-固綠染色法進(jìn)行檢測。末次給藥24 h后,將各組大鼠處死,剖取軟骨組織。取3只大鼠的軟骨組織(其余大鼠軟骨組織于-80 ℃下保存?zhèn)溆茫┣謇砀蓛艉罅魉疀_洗,置于4%多聚甲醛中固定3~5 d,再以10% EDTA溶液脫鈣4周;經(jīng)梯度濃度的乙醇脫水、二甲苯透明、浸蠟包埋后,切片(厚度為5 μm);將切片脫蠟至水后,進(jìn)行番紅O-固綠染色,以自來水沖洗后,用1%冰醋酸分色3 s,經(jīng)無水乙醇脫水、二甲苯透明及中性樹膠封片后,觀察各組大鼠軟骨組織的病理學(xué)形態(tài)并拍照,參照Mankin評分標(biāo)準(zhǔn)評估大鼠軟骨組織的病理形態(tài)學(xué)變化[15]。

    2.4 大鼠軟骨組織中Aggrecan蛋白表達(dá)水平的檢測

    采用免疫熒光染色法進(jìn)行測定。每組隨機(jī)取3只大鼠凍存的軟骨組織,按“2.3”項(xiàng)下方法制備石蠟切片,使用二甲苯和梯度濃度的乙醇分別進(jìn)行脫蠟和水合后,滴加適量的EDTA完成抗原修復(fù),滴加3%BSA溶液封閉30 min;加入Aggrecan一抗(稀釋度為1∶500),于4 ℃孵育過夜;滴加二抗,于室溫孵育1 h;滴加DAPI染色液,于室溫下靜置15 min;用水沖洗后,滴加適量抗熒光淬滅劑,轉(zhuǎn)移組織切片于顯微鏡下進(jìn)行觀察(Aggrecan蛋白的陽性表達(dá)呈紅色熒光),使用Image J v1.53f軟件分析各組蛋白的熒光強(qiáng)度(熒光強(qiáng)度越大,表示蛋白表達(dá)水平越高)。

    2.5 大鼠軟骨組織中分解代謝相關(guān)基因mRNA表達(dá)水平的檢測

    采用qPCR方法進(jìn)行檢測。每組隨機(jī)取3只大鼠凍存的軟骨組織,經(jīng)液氮研磨裂解后,常規(guī)提取軟骨組織總RNA,再逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。以cDNA為模板,進(jìn)行PCR(PCR引物序列和產(chǎn)物長度見表1)。PCR反應(yīng)體系為上、下游引物各0.4 μL,cDNA 1 μL,2×SYBR qPCR Master Mix 10 μL,ddH2O 8.2 μL。PCR 反應(yīng)條件為95 ℃預(yù)變性5 min;95 ℃變性10 s,60 ℃退火20 s,72 ℃延伸20 s,共40個(gè)循環(huán)。以GAPDH為內(nèi)參,采用2-ΔΔCt法計(jì)算各目的基因mRNA的表達(dá)水平。

    表1 PCR引物序列和產(chǎn)物長度

    2.6 大鼠軟骨組織中分解代謝和AMPK/mTOR信號通路相關(guān)蛋白表達(dá)水平的檢測

    采用Western blot法進(jìn)行測定。每組隨機(jī)取3只大鼠凍存的軟骨組織,經(jīng)液氮研磨裂解后,離心,取上清液15 μL測定蛋白含量,其余上清液煮沸變性,然后進(jìn)行十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳,轉(zhuǎn)膜,以5%脫脂奶粉封閉1 h;加入GAPDH、ADAMTS-4、ADAMTS-5、MMP-3、MMP-13、AMPK、p-AMPK、mTOR、p-mTOR一抗(稀釋度分別為1∶50 000、1∶1 000、1∶1 000、1∶1 000、1∶2 000、1∶1 000、1∶1 000、1∶1 000、1∶1 000),4 ℃孵育過夜;以TBST洗膜10 min×3次,加入二抗(稀釋度為1∶5 000),室溫孵育1 h;以TBST溶液洗膜10 min×3次,加入ECL顯色,采用凝膠成像發(fā)光系統(tǒng)顯影曝光。采用Image J v1.53f軟件對各組蛋白條帶進(jìn)行分析,以ADAMTS-4、ADAMTS-5、MMP-3、MMP-13與內(nèi)參GAPDH灰度值的比值表示其表達(dá)水平;以p-AMPK與AMPK、p-mTOR與mTOR的灰度值比值表示AMPK、mTOR的磷酸化水平。

    2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

    采用SPSS 20.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,使用GraphPad 7.04軟件繪圖。數(shù)據(jù)以±s表示,多組間比較采用單因素方差分析,組間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

    3 結(jié)果

    3.1 XBN對模型大鼠軟骨組織病理學(xué)形態(tài)的影響

    空白組大鼠軟骨結(jié)構(gòu)完整,層次分明,呈現(xiàn)均勻紅色,軟骨淺表層光滑完整,軟骨細(xì)胞規(guī)律排列,潮線清晰可見,軟骨下骨呈現(xiàn)藍(lán)色,軟骨下骨板厚度正常。模型組大鼠軟骨組織結(jié)構(gòu)分層紊亂,軟骨損傷至輻射層,軟骨層明顯變薄且軟骨淺表層不平滑,軟骨層基質(zhì)淡染,軟骨細(xì)胞排列紊亂,潮線出現(xiàn)扭曲或中斷,軟骨下骨與軟骨層難以區(qū)分。XBN組大鼠軟骨退變程度位于空白組與模型組之間,軟骨淺表層較為光滑、缺損減少,軟骨結(jié)構(gòu)分層較為清晰,基質(zhì)染色相對均勻,軟骨細(xì)胞排列較為規(guī)則,潮線尚完整。XBN+二甲雙胍組大鼠軟骨病變程度較XBN組進(jìn)一步減輕。結(jié)果見圖1。

    圖1 各組大鼠軟骨組織病理形態(tài)學(xué)顯微圖(番紅O-固綠染色,×200)

    Mankin評分結(jié)果顯示,與空白組比較,模型組大鼠Mankin評分顯著升高(P<0.05);與模型組比較,各給藥組大鼠Mankin評分均顯著降低(P<0.05);與XBN組比較,XBN+二甲雙胍組大鼠Mankin評分顯著降低(P<0.05)。結(jié)果見表2。

    3.2 XBN對模型大鼠軟骨組織中Aggrecan蛋白表達(dá)的影響

    與空白組比較,模型組大鼠軟骨組織中Aggrecan蛋白表達(dá)水平顯著降低(P<0.05)。與模型組比較,各給藥組大鼠軟骨組織中Aggrecan蛋白表達(dá)水平均顯著升高(P<0.05)。與XBN組比較,XBN+二甲雙胍組大鼠軟骨組織中Aggrecan蛋白表達(dá)水平均顯著升高(P<0.05)。結(jié)果見圖2、表2。

    表2 各組大鼠Mankin評分和軟骨組織中Aggrecan蛋白表達(dá)水平測定結(jié)果(±s,n=3)

    表2 各組大鼠Mankin評分和軟骨組織中Aggrecan蛋白表達(dá)水平測定結(jié)果(±s,n=3)

    a:與空白組比較,P<0.05;b:與模型組比較,P<0.05;c:與XBN組比較,P<0.05

    組別空白組模型組XBN組XBN+二甲雙胍組Mankin評分1.16±0.55 8.33±0.82a 3.25±0.61b 2.08±0.66c Aggrecan蛋白表達(dá)水平44.75±0.96 3.80±0.89a 24.19±0.92b 29.92±0.42c

    圖2 各組大鼠軟骨組織中Aggrecan蛋白表達(dá)的免疫熒光圖(×200)

    3.3 XBN對模型大鼠軟骨組織中分解代謝相關(guān)基因mRNA表達(dá)的影響

    與空白組比較,模型組大鼠軟骨組織中ADAMTS-4、ADAMTS-5、MMP-3、MMP-13 mRNA的表達(dá)水平均顯著升高(P<0.05);與模型組比較,各給藥組大鼠軟骨組織中上述指標(biāo)水平均顯著降低(P<0.05);與XBN組比較,XBN+二甲雙胍組大鼠軟骨組織中上述指標(biāo)水平均顯著降低(P<0.05)。結(jié)果見表3。

    表3 各組大鼠軟骨組織中分解代謝相關(guān)基因mRNA的表達(dá)水平測定結(jié)果(±s,n=3)

    表3 各組大鼠軟骨組織中分解代謝相關(guān)基因mRNA的表達(dá)水平測定結(jié)果(±s,n=3)

    a:與空白組比較,P<0.05;b:與模型組比較,P<0.05;c:與XBN組比較,P<0.05

    組別空白組模型組XBN組XBN+二甲雙胍組ADAMTS-4 mRNA 1.00±0.00 1.91±0.08a 1.48±0.07b 1.23±0.04c ADAMTS-5 mRNA 1.00±0.00 1.61±0.08a 1.37±0.06b 1.19±0.08c MMP-3 mRNA 1.00±0.00 2.57±0.06a 1.91±0.04b 1.66±0.11c MMP-13 mRNA 1.00±0.00 2.23±0.07a 1.62±0.07b 1.38±0.05c

    3.4 XBN對模型大鼠軟骨組織中分解代謝相關(guān)蛋白表達(dá)的影響

    與空白組比較,模型組大鼠軟骨組織中ADAMTS-4、ADAMTS-5、MMP-3、MMP-13蛋白的表達(dá)水平均顯著升高(P<0.05);與模型組比較,各給藥組大鼠軟骨組織中上述指標(biāo)水平均顯著降低(P<0.05);與XBN組比較,XBN+二甲雙胍組上述指標(biāo)水平均顯著降低(P<0.05)。結(jié)果見圖3、表4。

    圖3 各組大鼠軟骨組織中分解代謝相關(guān)蛋白表達(dá)的電泳圖

    表4 各組大鼠軟骨組織中分解代謝相關(guān)蛋白的表達(dá)水平測定結(jié)果(±s,n=3)

    表4 各組大鼠軟骨組織中分解代謝相關(guān)蛋白的表達(dá)水平測定結(jié)果(±s,n=3)

    a:與空白組比較,P<0.05;b:與模型組比較,P<0.05;c:與XBN組比較,P<0.05

    MMP-13/GAPDH 0.43±0.07 1.66±0.07a 1.37±0.06b 0.89±0.13c組別空白組模型組XBN組XBN+二甲雙胍組ADAMTS-4/GAPDH 0.21±0.09 1.33±0.07a 0.48±0.03b 0.33±0.04c ADAMTS-5/GAPDH 0.28±0.06 1.21±0.16a 0.65±0.07b 0.36±0.06c MMP-3/GAPDH 0.53±0.12 1.83±0.11a 1.25±0.09b 0.81±0.08c

    3.5 XBN對模型大鼠軟骨組織中AMPK/mTOR信號通路相關(guān)蛋白表達(dá)的影響

    與空白組比較,模型組大鼠軟骨組織中AMPK蛋白的磷酸化水平顯著降低(P<0.05),mTOR蛋白的磷酸化水平顯著升高(P<0.05);與模型組比較,各給藥組大鼠軟骨組織上述指標(biāo)水平均顯著逆轉(zhuǎn)(P<0.05);與XBN組比較,XBN+二甲雙胍組大鼠軟骨組織中AMPK蛋白的磷酸化水平顯著升高(P<0.05),mTOR蛋白的磷酸化水平顯著降低(P<0.05)。結(jié)果見圖4、表5。

    圖4 各組大鼠軟骨組織中AMPK/mTOR信號通路相關(guān)蛋白表達(dá)的電泳圖

    表5 各組大鼠軟骨組織中AMPK/mTOR信號通路相關(guān)蛋白的磷酸化水平測定結(jié)果(±s,n=3)

    表5 各組大鼠軟骨組織中AMPK/mTOR信號通路相關(guān)蛋白的磷酸化水平測定結(jié)果(±s,n=3)

    a:與空白組比較,P<0.05;b:與模型組比較,P<0.05;c:與XBN組比較,P<0.05

    p-mTOR/mTOR 0.21±0.03 2.56±0.09a 1.62±0.09b 0.88±0.11c組別空白組模型組XBN組XBN+二甲雙胍組p-AMPK/AMPK 1.98±0.13 0.32±0.05a 0.71±0.07b 1.19±0.06c

    4 討論

    KOA歸屬于中醫(yī)“痹證”“痿證”“骨痹”“筋痹”等范疇,病機(jī)多為本虛標(biāo)實(shí),肝腎不足為本,風(fēng)寒濕邪氣外侵為標(biāo)[1]。XBN具有補(bǔ)益肝腎、溫經(jīng)散寒、柔肝養(yǎng)血的功效[10]。本課題組前期研究顯示,XBN對KOA具有較好的治療作用[10—12],但具體作用機(jī)制至今尚未完全闡明。本研究通過對KOA模型大鼠的軟骨組織進(jìn)行番紅O-固綠染色發(fā)現(xiàn),與空白組相比,模型組大鼠軟骨組織結(jié)構(gòu)分層紊亂,表面不平整,軟骨細(xì)胞分布不均勻,軟骨層基質(zhì)淡染,潮線出現(xiàn)中斷,且Mankin評分顯著升高;經(jīng)過XBN或XBN+二甲雙胍干預(yù)后,大鼠軟骨上述病理改變均明顯減輕,且Mankin評分明顯降低。這表明XBN能明顯改善大鼠軟骨組織的病理損傷。

    KOA最顯著的病理變化是關(guān)節(jié)軟骨漸進(jìn)式的降解、退變和破壞,表現(xiàn)為軟骨蛋白合成酶減少而分解酶大量釋放,從而導(dǎo)致軟骨膠原亞型發(fā)生改變,軟骨厚度變薄、破損,進(jìn)而失去正常的生物學(xué)功能[3—6]。本研究通過檢測各組大鼠軟骨合成和分解代謝指標(biāo)發(fā)現(xiàn),模型組大鼠軟骨組織中合成代謝指標(biāo)Aggrecan蛋白表達(dá)水平顯著降低,分解代謝指標(biāo)ADAMTS-4、ADAMTS-5、MMP-3、MMP-13蛋白和mRNA的表達(dá)水平均顯著升高。經(jīng)過XBN或XBN+二甲雙胍干預(yù)后,大鼠軟骨組織中上述指標(biāo)水平均顯著逆轉(zhuǎn)。這說明XBN可促進(jìn)軟骨合成Aggrecan,減少軟骨降解,從而發(fā)揮改善KOA的作用。

    AMPK是一種保守的異質(zhì)三聚體蛋白激酶,能通過影響細(xì)胞物質(zhì)代謝的多個(gè)環(huán)節(jié)維持細(xì)胞能量供求平衡,被稱為人體代謝的“總開關(guān)”和“能量感受器”[16]。相關(guān)研究顯示,在小鼠骨關(guān)節(jié)炎軟骨和衰老的軟骨細(xì)胞中均觀察到AMPK活性的降低[8]。在異常應(yīng)力、氧化應(yīng)激等因素的作用下,軟骨細(xì)胞可激活A(yù)MPK,阻斷mTOR的磷酸化,并通過調(diào)節(jié)核轉(zhuǎn)錄因子κB/沉默信息調(diào)節(jié)因子1等信號通路,降低白細(xì)胞介素6、腫瘤壞死因子α等炎癥因子表達(dá),保護(hù)軟骨細(xì)胞并抑制炎癥[9]。二甲雙胍是一種AMPK激動(dòng)劑,被證明可通過調(diào)控AMPK/mTOR信號通路,減輕小鼠內(nèi)側(cè)半月板失穩(wěn)術(shù)后的關(guān)節(jié)軟骨破壞[7]。本研究結(jié)果顯示,經(jīng)XBN或XBN+二甲雙胍干預(yù)后,大鼠軟骨組織中AMPK蛋白的磷酸化水平顯著升高,mTOR蛋白的磷酸化水平顯著降低。這表明,XBN可通過激活A(yù)MPK/mTOR信號通路改善KOA。

    綜上所述,XBN可改善KOA模型大鼠的軟骨損傷,促進(jìn)軟骨合成,減少軟骨降解,其作用機(jī)制可能與激活A(yù)MPK/mTOR信號通路有關(guān)。

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