西藏地區(qū)非特殊型浸潤(rùn)性乳腺癌雄激素受體的表達(dá)及其與不同分子分型及臨床病理特征的相關(guān)性

羅含歡，姜 英，邊巴扎西，王 倩，尼瑪卓瑪，王 寒，魏 倩，廖瑞倩，次仁曲珍

1西藏自治區(qū)人民醫(yī)院病理科，拉薩 850000 2中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)院病理科，北京 100730 3西藏自治區(qū)人民醫(yī)院普外科，拉薩 850000

近幾十年來，乳腺癌發(fā)病率越來越高，已經(jīng)躍居女性惡性腫瘤第1位[1]，致死原因中僅次于肺癌，居第2位[2-3]。乳腺癌具有高度異質(zhì)性，其組織形態(tài)、生物學(xué)行為、免疫表型及治療反應(yīng)都存在較大差異[4]。乳腺癌雄激素受體(androgen receptor，AR)作為類固醇受體家族，在乳腺癌中的作用已受到廣泛關(guān)注。乳腺浸潤(rùn)性癌中最常見的類型是非特殊型浸潤(rùn)性乳腺癌(invasive breast carcinoma of no special type，IBC-NST)，目前關(guān)于西藏地區(qū)藏族女性IBC-NST 中AR的表達(dá)及其與分子分型及臨床病理學(xué)特征相關(guān)性的研究報(bào)道較少。本研究回顧性分析西藏自治區(qū)人民醫(yī)院2015年12月至2021年3月所有手術(shù)切除病理確診為IBC-NST的藏族女性病例臨床病理資料，旨在總結(jié)分析西藏地區(qū)藏族女性IBC-NST中AR的表達(dá)及其與不同分子分型及臨床病理特征的相關(guān)性。

資料和方法

資料來源收集西藏自治區(qū)人民醫(yī)院病理科2015年12月至2021年3月存檔的全部經(jīng)手術(shù)切除病理確診為IBC-NST的藏族女性病例，查閱患者臨床及病理資料，共有54例，年齡35～76歲，平均(50.0±9.2)歲，左側(cè)20例、右側(cè)34例。全部病例的病理切片均由兩名醫(yī)師閱片，并采用雙盲法進(jìn)行判讀，本研究通過西藏自治區(qū)人民醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)(審查編號(hào)：ME-TBHP-21-KJ-012)。

方法所有標(biāo)本經(jīng)10%的中性福爾馬林液固定，石蠟包埋，常規(guī)制片，蘇木素-伊紅染色，光鏡觀察。免疫組織化學(xué)方法均采用EnVision兩步法，一抗AR(克隆號(hào)：RM175)、雌激素受體(estrogen receptor，ER)(克隆號(hào)：SP1)、孕激素受體(progesterone receptor，PR)(克隆號(hào)：Kit-0013)均購(gòu)自福州邁新生物科技開發(fā)有限公司，細(xì)胞增殖標(biāo)志抗原(Ki-67，克隆號(hào)：MIB-1)購(gòu)自安必平醫(yī)藥科技股份有限公司，實(shí)驗(yàn)步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。人類表皮生長(zhǎng)因子受體2(human epidermal growth factor receptor 2，HER-2)抗體購(gòu)自羅氏診斷產(chǎn)品(上海)有限公司(克隆號(hào)：4B5)，HER-2基因檢測(cè)試劑盒(熒光原位雜交法)購(gòu)自雅培貿(mào)易(上海)有限公司。

結(jié)果判斷AR以≥10%的腫瘤細(xì)胞核內(nèi)呈現(xiàn)黃色、棕黃色或褐色顆粒為陽性[5]。ER和PR的判讀依據(jù)2010年美國(guó)臨床腫瘤學(xué)會(huì)與美國(guó)病理學(xué)家學(xué)會(huì)公布的乳腺癌ER與PR免疫組織化學(xué)檢測(cè)指南[6]，均以≥1%的腫瘤細(xì)胞核內(nèi)呈現(xiàn)黃色、棕黃色或褐色顆粒為陽性。HER-2的判讀根據(jù)2019版檢測(cè)指南[7]：無著色或≤10%的腫瘤細(xì)胞出現(xiàn)不完整的、微弱的細(xì)胞膜著色為(0)，>10%的腫瘤細(xì)胞出現(xiàn)不完整的、微弱的細(xì)胞膜著色為(1+)，>10%的腫瘤細(xì)胞出現(xiàn)弱～中等強(qiáng)度的、完整的細(xì)胞膜著色或≤10%的腫瘤細(xì)胞出現(xiàn)強(qiáng)而完整的細(xì)胞膜著色為(2+)，>10%的腫瘤細(xì)胞出現(xiàn)強(qiáng)而完整且均勻的細(xì)胞膜著色為(3+)；(0)或(1+)被認(rèn)為是HER-2 陰性(HER-2-)；(3+)被認(rèn)為是HER-2 陽性(HER-2 +)；(2+)為 HER-2 可疑陽性，需結(jié)合熒光原位雜交結(jié)果進(jìn)一步明確HER-2是否擴(kuò)增。根據(jù)2019年 St.Gallen 專家共識(shí)[8]，Ki-67≥20%腫瘤細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)棕色或深棕色顆粒為高表達(dá)，反之為低表達(dá)。

分子分型根據(jù)2019年 St.Gallen 專家共識(shí)[8]，分為4型。管腔 A 型：ER、PR 均為陽性(且PR>20%)，HER-2 陰性，Ki-67低表達(dá)。管腔B型：(1)ER和HER-2均為陽性，PR與Ki-67為任意值；(2)ER陽性，HER-2陰性，至少存在下面任意 1個(gè)條件：PR陰性或低表達(dá)(<20%)、Ki-67高表達(dá)。HER-2過表達(dá)型：HER-2陽性，ER和PR均為陰性。三陰性乳腺癌：ER、PR、HER-2均為陰性。

統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 25.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，計(jì)數(shù)資料以百分率[n(%)]表示。相關(guān)性分析采用Spearman 等級(jí)相關(guān)分析，比較采用t檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

藏族女性IBC-NST的臨床病理特點(diǎn)54例患者腫瘤平均直徑(3.3±2.0)cm，≤2 cm者15例(27.8%)，>2 cm者39例(72.2%)；組織學(xué)分級(jí)中Ⅰ級(jí)5例(9.3%)(圖1)、Ⅱ級(jí)29例(53.7%)(圖2)、Ⅲ級(jí)20例(37.0%)(圖3)；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者31例(57.4%)、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者23例(42.6%)；臨床分期Ⅰ+Ⅱ期占 63.0%，Ⅲ+Ⅳ期占 37.0%；AR 陽性率53.7%(圖4)；ER陽性率76.0%(圖5)；PR陽性率68.5%；HER-2(3+)者5例(圖6)；管腔A型、管腔B型、HER-2過表達(dá)型、三陰性乳腺癌分別占16.7%、59.3%、3.7%、20.3%(表1)。

表1 雄激素受體與相關(guān)參數(shù)之間的關(guān)系

圖1 組織學(xué)分級(jí)Ⅰ級(jí)(HE)

圖2 組織學(xué)分級(jí)Ⅱ級(jí)(HE)

圖3 組織學(xué)分級(jí)Ⅲ級(jí)(HE)

圖4 雄激素受體在乳腺癌中陽性表達(dá)(免疫組織化學(xué)染色)

圖5 雌激素受體在乳腺癌中陽性表達(dá)(免疫組織化學(xué)染色)

HER-2：人類表皮生長(zhǎng)因子受體2

AR與IBC-NST的臨床病理特征及分子分型的關(guān)系A(chǔ)R在藏族女性IBC-NST的表達(dá)與 ER(χ2=8.200，P=0.004)、PR(χ2=9.900，P=0.003)、分子分型(χ2=11.690，P=0.009)相關(guān)，與腫瘤部位(χ2=0.020，P=0.880)、年齡(χ2=1.470，P=0.230)、大小(χ2=3.220，P=0.073)、組織學(xué)分級(jí)(χ2=5.738，P=0.057)、淋巴結(jié)有無轉(zhuǎn)移(χ2=0.040，P=0.850)、脈管有無瘤栓(χ2=0.000，P=0.980)、臨床分期(χ2=0.970，P=0.330)、HER-2(χ2=0.058，P=0.809)及Ki-67(χ2=2.239，P=0.135)的表達(dá)不相關(guān)。

不同分子分型的IBC-NST病理特征藏族女性IBC-NST的分子分型與組織學(xué)分級(jí)(χ2=24.970，P=0.001)、臨床分期(χ2=9.035，P=0.029)及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(χ2=9.691，P=0.021)均相關(guān)(表2)。

表2 不同分子分型非特殊型浸潤(rùn)性乳腺癌的臨床病理特點(diǎn)比較[n(%)]

討 論

乳腺癌是我國(guó)女性中發(fā)病率最高的惡性腫瘤，具有較高的病死率，嚴(yán)重影響女性生命健康[9]。目前，乳腺癌的病因尚未明確，普遍認(rèn)為可能與家族史、卵巢內(nèi)分泌紊亂、未生育、未哺乳、腺體致密、乳腺增生及高脂飲食等相關(guān)[10]。乳腺癌的生物學(xué)行為具有高度異質(zhì)性，即使病理分期相同的患者，療效及預(yù)后也存在差異，對(duì)傳統(tǒng)的病理形態(tài)學(xué)診斷與分期提出挑戰(zhàn)。Perou等[11]在2000 年通過研究乳腺癌的基因表達(dá)，首先提出了分子分型的概念，認(rèn)為不同的分子分型與乳腺癌的治療方案以及預(yù)后相關(guān)。分子分型以檢測(cè)腫瘤的基因表達(dá)譜系作為金標(biāo)準(zhǔn)，但由于檢測(cè)技術(shù)較復(fù)雜，未廣泛應(yīng)用于臨床。目前以ER、PR、HER-2及Ki-67的免疫組織化學(xué)檢測(cè)進(jìn)行分子分型，有效地補(bǔ)充了基于組織形態(tài)學(xué)的分類。在乳腺癌患者治療方案?jìng)€(gè)體化的選擇、預(yù)后評(píng)估方面發(fā)揮了積極的作用[12-13]。近年來，關(guān)于AR在乳腺癌中的作用機(jī)制進(jìn)行了大量研究，結(jié)果顯示AR是乳腺癌的抑癌基因[14]。有報(bào)道AR在ER陽性的乳腺癌可競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合雌激素反應(yīng)元件，降低雌激素的增殖作用，從而誘導(dǎo)抗增殖作用；而ER與雄激素反應(yīng)元件結(jié)合，具有相反的效果[15]。在ER和PR陰性的乳腺癌，AR可能抑制細(xì)胞生長(zhǎng)。有報(bào)道60%～80%的乳腺癌患者AR呈陽性，甚至高于ER、PR的陽性率[16-17]。本研究顯示AR在藏族女性IBC-NST中的陽性表達(dá)率為54.3%，偏低于以往文獻(xiàn)中報(bào)道的數(shù)據(jù)，推測(cè)在不同種族間是否存在一定差異，尚需進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量研究。本研究顯示AR的陽性表達(dá)率與ER、PR的表達(dá)率呈正相關(guān)，與以往研究[18-19]報(bào)道相一致。此外，多項(xiàng)研究表明AR陽性表達(dá)率與分子分型呈正相關(guān)[20-22]，與本研究相符。有報(bào)道在HER-2陽性腫瘤中，AR可激活Wnt/β-catenin通路，引起HER-3上調(diào)，從而在乳腺癌的發(fā)生中發(fā)揮一定作用；通過HER-2/HER-3異源二聚體，AR可引起磷酸酰肌醇3激酶/蛋白激酶B通路的激活，并可能通過髓細(xì)胞組織增生病毒癌基因同源物誘導(dǎo)細(xì)胞增殖[23]。在三陰性乳腺癌中，AR可能通過表皮生長(zhǎng)因子受體、血小板源性生長(zhǎng)因子和磷酸酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信號(hào)通路參與癌變過程[23]。大多數(shù)研究結(jié)果顯示AR在乳腺癌各型中表達(dá)程度不同，在三陰性乳腺癌中的表達(dá)顯著低于其他分子分型[22，24]。任曉燕等[22]研究顯示，635例浸潤(rùn)性乳腺癌中三陰性乳腺癌占19.1%，而在三陰性乳腺癌中AR的表達(dá)率為32.2%。袁小慶等[21]報(bào)道，在60例浸潤(rùn)性乳腺癌中三陰性乳腺癌占15.0%，AR在管腔A、管腔B、HER-2過表達(dá)、三陰性乳腺癌中陽性率分別為85.71%、80.65%、50.0%、33.33%。王春等[25]比較漢族與少數(shù)民族之間分子分型的差異，結(jié)果顯示維吾爾族HER-2過表達(dá)型與三陰性乳腺癌比例較高，尤其是三陰性。本研究顯示三陰性乳腺癌在54例藏族女性IBC-NST中占20.3%，AR在管腔A、管腔B、HER-2過表達(dá)、三陰性IBC-NST中陽性率分別為77.8%、62.5%、50.0%、9.1%。AR在三陰性乳腺癌中的表達(dá)率明顯低于相關(guān)報(bào)道，可能與本研究病例數(shù)較少有關(guān)，今后需積累病例、增加樣本量，進(jìn)一步完善研究。分子分型以基因的差異為依據(jù)，而組織學(xué)分級(jí)反映的是癌細(xì)胞的分化程度，雖然是形態(tài)學(xué)分類，但研究顯示組織學(xué)分級(jí)與基因表達(dá)具有相關(guān)性，但兩者無絕對(duì)對(duì)應(yīng)關(guān)系[26-27]，分子分型和組織學(xué)分級(jí)雖然不能彼此取代，但卻相互補(bǔ)充，彼此印證，所以采取病理診斷乳腺癌患者的過程中，需將分子分型與組織學(xué)分級(jí)聯(lián)合使用[28]，在日常診斷如發(fā)現(xiàn)嚴(yán)重不相符時(shí)，應(yīng)核查兩者結(jié)果的可靠性，確保診斷的客觀性。乳腺癌是一種激素受體依賴性的惡性腫瘤，腋窩淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致患者遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移并死亡的最主要原因，而腫瘤的大小、分化的程度、病灶的范圍、淋巴結(jié)有無轉(zhuǎn)移以及TNM 分期是臨床判斷預(yù)后及制定治療方案的主要依據(jù)[29]。不同分子分型乳腺癌的組織學(xué)分級(jí)、臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀況的相關(guān)性，各文獻(xiàn)報(bào)道不盡相同。崔力方等[30]研究顯示乳腺癌不同分子分型的組織學(xué)分級(jí)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與臨床分期無相關(guān)性。而本研究顯示藏族女性IBC-NST不同分子分型的組織學(xué)級(jí)別、臨床分期與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與馬建萍等[31]的報(bào)道一致。

綜上，本研究顯示AR在西藏地區(qū)藏族女性IBC-NST中的三陰性乳腺癌中的表達(dá)率顯著降低，而在ER、PR陽性的病例中有較高的陽性表達(dá)率，且分子分型與組織學(xué)分級(jí)、臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移具有相關(guān)性。因此，在日常診斷過程中，需把分子分型與組織學(xué)分級(jí)二者相結(jié)合，并常規(guī)檢測(cè)AR，可能為臨床判斷預(yù)后及選擇治療方案提供線索。