COVID-19疫情下加熱前處理漿膜腔積液標本的制作體會

脫穎，趙雙龍 ，黃蕾蕾

（1中山大學附屬第一醫(yī)院病理科，廣州 510080；2山西醫(yī)科大學汾陽學院，汾陽 032200）

新型冠狀病毒肺炎( coronavirus disease 2019，COVID-19) 是一種急性呼吸道傳染病，傳播途徑主要為飛沫傳播、接觸傳播、氣溶膠等方式。病理科細胞室操作人員在日常工作中，會接觸確診或疑似COVID-19患者的痰液、胸腔積液、腹腔積液等標本，這些標本在離心包埋過程中易產(chǎn)生氣溶膠污染以及液體飛濺導致的體液污染，因此細胞學檢查被認定為病理科重點防護環(huán)節(jié)之一[1]。本文擬探討新冠疫情常態(tài)化下，漿膜腔積液標本在60 ℃ 30 min加熱處理與室溫常規(guī)處理后，在大體觀、細胞涂片及細胞蠟塊HE和免疫組織化學染色的差異，并明確診斷結(jié)果是否一致，從而探討一種既不影響細胞學診斷，又能阻斷細胞學環(huán)節(jié)的生物安全隱患的前處理方式。

材料與方法

1 材料

選取2022年3月中山大學附屬第一醫(yī)院病理科細胞室接收的漿膜腔積液標本15例作為研究對象。

2 方法

將接收的標本分為加熱組和對照組；加熱組對細胞學標本行烤箱60 ℃加熱 30 min的前處理，對照組無前處理。隨后，兩組同步觀察大體，按傳統(tǒng)方式離心沉淀后，直接行細胞涂片、液基制片和細胞蠟塊HE染色，觀察細胞形態(tài)。若染色中查見不典型細胞，同步行免疫組織化學染色進一步明確診斷。

免疫組織化學染色采用Leica BOND Ⅲ全自動免疫儀法， 一抗Ki-67（MIB-1）、pan CK（AE1/AE3）、Vimentin（3B4）均購自DAKO公司，二抗檢測顯色系統(tǒng)為機器配套試劑。兩名經(jīng)驗豐富的細胞病理醫(yī)師按《中國漿膜腔積液細胞病理學檢查專家共識(2020年版)》對染色結(jié)果進行評估和判讀[2]。

結(jié)果

兩組胸腹水標本肉眼觀察顏色、質(zhì)地無明顯差異（圖1A、B）。在涂片和液基制片上，染色后兩組細胞輪廓均清晰可見，核、質(zhì)及細胞團結(jié)構(gòu)清晰，兩組無明顯區(qū)別。但在細胞數(shù)量上，加熱后的涂片標本細胞密度均略微變低，細胞團有一定程度的散開（圖1C—F）。

兩組細胞蠟塊HE染色均可見保存良好的淋巴細胞、組織細胞、間皮細胞等。其中可疑含腫瘤細胞的4例，均至少有1個含5個及以上腫瘤細胞的細胞團或者單張切片可辨認的腫瘤細胞數(shù)量＞50個（圖2A、B）；兩組CK、Ki-67、vimentin）免疫組織化學染色結(jié)果一致（圖2C—H）。

兩組標本的最終病理診斷結(jié)果一致：11/15未見腫瘤細胞，4/15可見腫瘤細胞。

討論

新型冠狀病毒( severe acute respiratory syndrome coronavirus 2，SARS-CoV-2) 屬于冠狀病毒β屬，是有包膜的單鏈RNA病毒，當包膜被破壞后，RNA容易被降解，從而使病毒失活。因此，病毒對紫外線和熱敏感。56 ℃ 30 min、75% 乙醇、含氯消毒劑等脂溶劑均可有效滅活病毒[3]。目前加熱滅活新冠病毒的前處理方式，對于分子檢測結(jié)果和血清生化指標檢測結(jié)果的影響，已進行初步探討[4,5]。對于病理科細胞學標本預處理方式，目前國內(nèi)報道的為福爾馬林固定滅活和加熱滅活兩種方法。但通過福爾馬林固定后的細胞學標本常常發(fā)生細胞固縮，尤其是細胞學涂片標本細胞固縮較為嚴重，對診斷影響較大[6]。通過對新型冠狀病毒肺炎患者肺泡灌洗液，行水浴鍋中56 ℃滅活 30 min，認為在生物安全二級防護措施下進行細胞蠟塊制作，未發(fā)生實驗室人員感染，加熱滅活的安全性得到了確認[7]，但此實驗未和加熱前的常規(guī)處理標本進行比較，無法判斷加熱前后各項指標的一致性。

隨著2021年我國疫情防控措施不斷優(yōu)化和推進、疫苗廣泛接種，我國疫情防控已經(jīng)逐步平穩(wěn)。但新突變型病毒的出現(xiàn)，使得防疫限制措施可能會持續(xù)或間歇實施，仍對我國細胞病理學工作產(chǎn)生了巨大影響[8]。因此不斷探索安全有效的細胞學標本的前處理方式阻斷病毒傳播尤為重要。在新冠疫情常態(tài)化的環(huán)境下，本文對細胞學標本前處理方進行了探討，通過比較加熱前后漿膜腔積液標本的大體觀、細胞涂片及細胞蠟塊HE和免疫組織化學染色，最終的病理診斷結(jié)果均一致。需指出，加熱也會對細胞形態(tài)略有影響，低倍鏡下細胞形態(tài)無明顯差異，但高倍鏡可查見核膜稍皺縮，核仁稍不清，但對最終診斷無影響。

我們探索的加熱預處理對于類似高傳染性體液標本的轉(zhuǎn)運及制片均具有借鑒意義，能降低醫(yī)務(wù)人員操作中病毒傳播的危險，減少院內(nèi)感染，是一種簡單易行的切斷新冠病毒傳播的有效方式之一，值得借鑒。