• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    達(dá)格列凈對(duì)糖尿病大鼠血管內(nèi)皮功能及PTEN/PI3K/Akt信號(hào)通路的影響*

    2022-12-17 08:07:54史麗胡婷婷李紅張三明劉智慧左惠玲胡利梅任衛(wèi)東
    關(guān)鍵詞:糖尿病

    史麗,胡婷婷,李紅,張三明,劉智慧,左惠玲,胡利梅,任衛(wèi)東

    (1.河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院 內(nèi)分泌科,河北 張家口 075000;2.河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院 國(guó)際醫(yī)療部,河北 張家口 075000;3.張家口市衛(wèi)生健康項(xiàng)目管理中心,河北張家口 075000;4.河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院 核醫(yī)學(xué)科,河北 張家口 075000)

    糖尿病是一種常見(jiàn)的代謝紊亂性疾病,發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì),糖尿病大血管病變是其常見(jiàn)的嚴(yán)重并發(fā)癥之一,也是患者死亡的主要原因,目前尚無(wú)有效措施預(yù)防及控制糖尿病大血管病變[1]。有研究顯示,微血管病變導(dǎo)致血管內(nèi)皮功能障礙是糖尿病大血管病變發(fā)生、發(fā)展的病理基礎(chǔ)[2]。因此探尋有效防治糖尿病血管內(nèi)皮損傷的藥物對(duì)于防治糖尿病大血管病變有重要臨床意義。達(dá)格列凈是一種新型降糖藥物,屬于鈉-葡萄糖協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2 抑制劑,能夠降低血糖、血脂,延緩糖尿病進(jìn)展[3]。陳姣等[4]研究顯示,達(dá)格列凈能夠改善糖尿病合并心力衰竭患者的心功能和血管內(nèi)皮功能,從而降低再入院率。武衛(wèi)黨等[5]研究顯示,達(dá)格列凈能夠改善糖尿病心肌缺血大鼠心肌及血管功能。然而達(dá)格列凈對(duì)糖尿病患者血管內(nèi)皮功能的作用機(jī)制尚未明確。既往研究顯示,上調(diào)人張力蛋白同源物基因(phosphate and tension homology deleted on chromsometen,PTEN)表達(dá),可抑制磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(phosphoinositide 3-kinase/protein kinase B,PI3K/Akt)信號(hào)通路活化,減輕2 型糖尿病大鼠血管病變,抑制主動(dòng)脈血管內(nèi)皮損傷[6]。目前有關(guān)達(dá)格列凈對(duì)糖尿病血管內(nèi)皮功能的影響是否與調(diào)控PTEN/PI3K/Akt 信號(hào)通路有關(guān),少見(jiàn)報(bào)道。因此,本研究探究達(dá)格列凈對(duì)糖尿病大鼠血管內(nèi)皮功能的影響,并分析其可能機(jī)制,以期為有效防治糖尿病大血管病變提供一定的理論依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

    30 只SPF 級(jí)SD 雄性大鼠,6 周齡,體重180~210 g,平均(195±15)g,購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào):SCXK(京)2016-0006,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào):SYXK(京)2021-0029。

    1.2 主要試劑及儀器

    1.2.1 主要試劑達(dá)格列凈片(國(guó)藥準(zhǔn)字J20170040,瑞典Astra Zeneca AB 公司),蛋白提取試劑盒、鏈脲佐菌霉素(Streptozotocin,STZ)(上海吉至生化科技有限公司),高脂飼料(江蘇省協(xié)同醫(yī)藥生物工程有限公司),蘇木精-伊紅(hematoxylin-eosin staining,HE)染色試劑盒(北京百奧萊博科技有限公司),內(nèi)皮素1(Endothelin-1,ET-1)、缺氧誘導(dǎo)因子1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)試劑盒(江西艾博因生物科技有限公司),兔抗鼠人張力蛋白同源物基因(phosphate and tension homology deleted on chromsometen,PTEN)、磷脂酰肌醇3-激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)、p-PI3K、Akt、p-Akt、β-actin 抗體、山羊抗兔HRP 二抗(上海經(jīng)科化學(xué)科技有限公司)。

    1.2.2 主要儀器Optima?XPN 超速離心機(jī)(美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特生物科技有限公司),BD-SW50 光學(xué)顯微鏡(深圳市博視達(dá)光學(xué)儀器有限公司)。

    1.3 方法

    1.3.1 動(dòng)物模型的復(fù)制及分組30 只大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組、達(dá)格列凈組,各10 只。模型組、達(dá)格列凈組給予高脂高糖飼料喂養(yǎng),對(duì)照組給予普通飼料喂養(yǎng)。12 周后大鼠禁食不禁水12 h,模型組和達(dá)格列凈組一次性尾靜脈注射30 mg/kg STZ溶液(以pH 4.5 的0.1 mol/L 檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖溶液現(xiàn)用現(xiàn)配);對(duì)照組一次性尾靜脈注射等量檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖溶液。72 h 后經(jīng)尾靜脈測(cè)大鼠空腹血糖,空腹血糖≥16.7 mmol/L 為2 型糖尿病模型復(fù)制成功[7]。

    1.3.2 給藥方式達(dá)格列凈組大鼠模型復(fù)制成功后予以1 mg/(kg·d)[8]達(dá)格列凈灌胃,連續(xù)4 周。模型組、對(duì)照組大鼠分別于同時(shí)間灌胃等量檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖溶液。

    1.3.3 標(biāo)本采集3 組大鼠均在末次給藥結(jié)束后,用4%多聚甲醛麻醉。于腹主動(dòng)脈取血2 mL,3 000 r/min 離心10 min,離心半徑8 cm,取上清液置入-80℃冰箱冷凍保存?zhèn)溆谩?/p>

    取血結(jié)束后立即處死大鼠,打開胸腔剝離胸主動(dòng)脈及腹主動(dòng)脈血管,取血管外膜組織,分為兩部分。一部分乙醇脫水、透明、石蠟包埋過(guò)夜,連續(xù)切片(6 μm 厚),用于HE 染色;另一部分保存于液氮中,用于Western blotting 檢測(cè)。

    1.3.4 ELISA 檢測(cè)血清ET-1、HIF-1α、VEGF 水平

    取各組大鼠腹主動(dòng)脈取血的血清,嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行操作,采用ELISA 檢測(cè)血清ET-1、HIF-1α、VEGF 水平[9]。

    1.3.5 HE 染色觀察大鼠主動(dòng)脈血管組織病理變化取各組大鼠主動(dòng)脈血管組織切片,脫蠟,經(jīng)梯度乙醇脫水,二甲苯透明后,按照HE 染色試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行染色,中性樹膠封片。采用光學(xué)顯微鏡觀察并采集圖片,使用Image-Pro Plus 6.0 軟件觀察主動(dòng)脈血管組織病理變化。

    1.3.6 Western blotting 檢測(cè)大鼠血管內(nèi)皮組織PTEN/PI3K/Akt 信號(hào)通路蛋白的表達(dá)分別取3 組剩余主動(dòng)脈血管組織標(biāo)本制備組織勻漿,提取總蛋白并檢測(cè)濃度及純度,電泳、轉(zhuǎn)膜、5%脫脂奶粉室溫封閉2 h,分別加入一抗(PTEN、p-PI3K、PI3K、p-Akt、Akt)及內(nèi)參β-actin,按1∶500 稀釋,次日加入HRP 標(biāo)記山羊抗兔二抗(1∶1 000),室溫孵育2 h,顯色、顯影定影,以各蛋白條帶灰度值的比值計(jì)算蛋白相對(duì)表達(dá)量[10]。

    1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

    數(shù)據(jù)分析采用SPSS 19.0 統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差()表示,多組比較用單因素方差分析,進(jìn)一步兩兩比較用SNK-q檢驗(yàn),P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 各組大鼠一般情況比較

    對(duì)照組小鼠每日飲水,尿量均正常,皮毛光滑、柔順有光澤,精神狀態(tài)良好,活動(dòng)量大,反應(yīng)敏捷;模型組小鼠精神萎靡,皮毛暗黃無(wú)光澤,活動(dòng)量減少,出現(xiàn)典型的多飲、多食、多尿及體形消瘦現(xiàn)象;與模型組比較,達(dá)格列凈組大鼠上述一般情況有所改善。

    2.2 各組大鼠主動(dòng)脈血管組織病理變化

    對(duì)照組大鼠血管內(nèi)皮完整,中層可見(jiàn)梭形平滑肌細(xì)胞,彈力纖維清晰、完整,呈環(huán)形排列;模型組大鼠主動(dòng)脈內(nèi)膜增厚,血管內(nèi)皮中層平滑肌細(xì)胞增生,彈力纖維排列紊亂;與模型組比較,達(dá)格列凈組大鼠主動(dòng)脈上述病理變化有所改善。見(jiàn)圖1。

    圖1 各組大鼠主動(dòng)脈血管組織病理學(xué)變化(HE×200)

    2.3 各組大鼠ET-1、HIF-1α、VEGF水平比較

    3組大鼠血清ET-1、HIF-1α、VEGF水平比較,經(jīng)方差分析,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。進(jìn)一步兩兩比較結(jié)果:與對(duì)照組比較,模型組、達(dá)格列凈組大鼠血清ET-1、HIF-1α、VEGF 水平升高(P<0.05),但達(dá)格列凈組大鼠血清ET-1、HIF-1α、VEGF水平低于模型組(P<0.05)。見(jiàn)表1。

    表1 各組大鼠ET-1、HIF-1α、VEGF水平比較(n=10,)

    表1 各組大鼠ET-1、HIF-1α、VEGF水平比較(n=10,)

    注:①與對(duì)照組比較,P <0.05;②與模型組比較,P <0.05。

    2.4 各組大鼠血管內(nèi)皮組織PTEN/PI3K/Akt 信號(hào)通路蛋白相對(duì)表達(dá)量比較

    3 組大鼠血管內(nèi)皮組織PTEN、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt 蛋白相對(duì)表達(dá)量比較,經(jīng)方差分析,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。進(jìn)一步兩兩比較結(jié)果:與對(duì)照組比較,模型組、達(dá)格列凈組大鼠血管內(nèi)皮組織PTEN 蛋白相對(duì)表達(dá)量降低(P<0.05),p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt 蛋白相對(duì)表達(dá)量升高(P<0.05);但達(dá)格列凈組較模型組大鼠血管內(nèi)皮組織PTEN蛋白相對(duì)表達(dá)量升高(P<0.05),p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt 蛋白相對(duì)表達(dá)量降低(P<0.05)。見(jiàn)表2。

    表2 各組大鼠PTEN/PI3K/Akt信號(hào)通路蛋白相對(duì)表達(dá)量比較(n=10,)

    表2 各組大鼠PTEN/PI3K/Akt信號(hào)通路蛋白相對(duì)表達(dá)量比較(n=10,)

    注:①與對(duì)照組比較,P <0.05;②與模型組比較,P <0.05。

    圖2 各組大鼠血管內(nèi)皮組織PTEN/PI3K/Akt信號(hào)通路蛋白的表達(dá)

    3 討論

    糖尿病大血管病變是糖尿病長(zhǎng)期慢性并發(fā)癥,已成為糖尿病患者死亡的主要原因之一,嚴(yán)重影響患者生活質(zhì)量及生命健康,目前仍缺乏理想的防治手段。糖尿病大血管病變發(fā)病機(jī)制復(fù)雜,研究證實(shí),血管內(nèi)皮功能損傷是其主要病理基礎(chǔ)之一[11]。達(dá)格列凈是新型口服降糖藥,廣泛應(yīng)用于2 型糖尿病的治療,對(duì)糖尿病血管病變有一定治療作用。孫娟等[12]研究顯示,達(dá)格列凈能夠改善胰島功能并緩解糖尿病患者血管病變。史曉荻等[13]研究顯示,達(dá)格列凈對(duì)糖尿病患者血管內(nèi)皮功能有一定改善作用,對(duì)防止并發(fā)癥有積極作用。

    ET-1、HIF-1α、VEGF 是由血管內(nèi)皮細(xì)胞分泌的活性物質(zhì)。有研究顯示,在持續(xù)高血糖狀態(tài)下,微血管內(nèi)皮細(xì)胞受損,發(fā)生血管內(nèi)皮功能障礙,促使ET-1、HIF-1α、VEGF 分泌增加,3 者可一定程度反映血管內(nèi)皮功能損傷程度[14]。本研究結(jié)果顯示,與對(duì)照組比較,模型組大鼠主動(dòng)脈內(nèi)膜增厚,血管內(nèi)皮中層平滑肌細(xì)胞增生,彈力纖維排列紊亂,而經(jīng)達(dá)格列凈處理后,大鼠主動(dòng)脈上述病理變化有所改善;且與對(duì)照組比較,模型組、達(dá)格列凈組大鼠血清ET-1、HIF-1α、VEGF 水平升高,但經(jīng)達(dá)格列凈藥物處理后,大鼠血清ET-1、HIF-1α、VEGF 水平降低,說(shuō)明達(dá)格列凈可對(duì)糖尿病大鼠血管內(nèi)皮功能發(fā)揮保護(hù)作用。

    PI3K/Akt 信號(hào)通路是調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)、代謝的重要信號(hào)通路。有研究顯示,持續(xù)高血糖能夠刺激PI3K/Akt 信號(hào)通路活化,使PIP2 轉(zhuǎn)化為第二信使PIP3,從而促進(jìn)Akt 磷酸化和下游效應(yīng)基因HIF-1α表達(dá),引起VEGF 的表達(dá),而血管內(nèi)皮細(xì)胞異常增殖、遷移,促進(jìn)糖尿病血管病變的發(fā)生[15]。PTEN是一種具有雙重脂質(zhì)磷酸酶活性的抑癌基因,有研究顯示其能負(fù)向調(diào)控PI3K/Akt 信號(hào)通路[16]。韓利平等[17]研究顯示,上調(diào)PTEN 表達(dá)可抑制PI3K/Akt信號(hào)通路活化,改善糖尿病大鼠血管病變損傷程度。本研究結(jié)果顯示,與對(duì)照組比較,模型組、達(dá)格列凈組大鼠血管內(nèi)皮組織PTEN 蛋白相對(duì)表達(dá)量降低,p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt 蛋白相對(duì)表達(dá)量升高;但達(dá)格列凈組大鼠血管內(nèi)皮組織PTEN 蛋白相對(duì)表達(dá)量升高,p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt 蛋白相對(duì)表達(dá)量降低,與既往研究結(jié)果相似,說(shuō)明達(dá)格列凈可能通過(guò)上調(diào)PTEN 表達(dá),抑制PI3K/Akt 信號(hào)通路活化,從而改善糖尿病大鼠血管內(nèi)皮功能損傷,為防治糖尿病大血管病變提供一定理論依據(jù)。

    綜上所述,達(dá)格列凈對(duì)糖尿病大鼠血管內(nèi)皮功能損傷發(fā)揮保護(hù)作用,可能是通過(guò)促進(jìn)PTEN/PI3K/Akt 信號(hào)通路活化來(lái)實(shí)現(xiàn)的。然而本研究并未能明確達(dá)格列凈對(duì)PTEN/PI3K/Akt 信號(hào)通路的具體調(diào)控作用,后期將進(jìn)行深入闡述。

    猜你喜歡
    糖尿病
    糖尿病知識(shí)問(wèn)答
    中老年保健(2022年5期)2022-08-24 02:35:42
    糖尿病知識(shí)問(wèn)答
    中老年保健(2022年1期)2022-08-17 06:14:56
    糖尿病知識(shí)問(wèn)答
    中老年保健(2021年5期)2021-08-24 07:07:20
    糖尿病知識(shí)問(wèn)答
    中老年保健(2021年9期)2021-08-24 03:51:04
    糖尿病知識(shí)問(wèn)答
    中老年保健(2021年7期)2021-08-22 07:42:16
    糖尿病知識(shí)問(wèn)答
    中老年保健(2021年3期)2021-08-22 06:49:56
    糖尿病知識(shí)問(wèn)答
    糖尿病離你真的很遙遠(yuǎn)嗎
    糖尿病離你真的很遠(yuǎn)嗎
    得了糖尿病,應(yīng)該怎么吃
    国产人伦9x9x在线观看| 国产成人欧美| av免费在线观看网站| 麻豆久久精品国产亚洲av| 男人舔女人下体高潮全视频| 亚洲av熟女| 日本一区二区免费在线视频| 久久青草综合色| 国产精品1区2区在线观看.| 亚洲 国产 在线| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 亚洲人成77777在线视频| 国产精品久久视频播放| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 精品电影一区二区在线| 长腿黑丝高跟| 欧美色视频一区免费| 黄色丝袜av网址大全| 色婷婷久久久亚洲欧美| 亚洲第一av免费看| 日本a在线网址| e午夜精品久久久久久久| 香蕉国产在线看| 日韩有码中文字幕| 午夜免费鲁丝| 国产av又大| 国产亚洲精品久久久久5区| 亚洲熟妇熟女久久| 亚洲,欧美精品.| 在线永久观看黄色视频| 亚洲熟妇熟女久久| 他把我摸到了高潮在线观看| 一区二区日韩欧美中文字幕| 久久中文字幕一级| 丝袜在线中文字幕| 咕卡用的链子| 免费无遮挡裸体视频| 日韩精品中文字幕看吧| 精品日产1卡2卡| 成人精品一区二区免费| 久久青草综合色| 在线播放国产精品三级| 中文字幕色久视频| 一级片免费观看大全| 国产伦人伦偷精品视频| а√天堂www在线а√下载| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 亚洲激情在线av| 欧美午夜高清在线| 在线观看一区二区三区| 亚洲片人在线观看| 97人妻精品一区二区三区麻豆 | 老司机福利观看| 少妇的丰满在线观看| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 日韩大尺度精品在线看网址 | 可以在线观看的亚洲视频| 黄色a级毛片大全视频| 国产乱人伦免费视频| 欧美激情久久久久久爽电影 | av网站免费在线观看视频| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 男人操女人黄网站| 久久精品人人爽人人爽视色| 999久久久国产精品视频| 久久青草综合色| 最近最新中文字幕大全电影3 | 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 日本免费一区二区三区高清不卡 | 99国产极品粉嫩在线观看| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 黄色丝袜av网址大全| 桃红色精品国产亚洲av| 一进一出抽搐gif免费好疼| 国产熟女xx| 一级毛片精品| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 国产精品久久电影中文字幕| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 精品一区二区三区av网在线观看| 丁香六月欧美| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 9191精品国产免费久久| 手机成人av网站| 97人妻天天添夜夜摸| 一区二区三区高清视频在线| 午夜福利欧美成人| 99国产精品免费福利视频| 亚洲国产精品成人综合色| 99香蕉大伊视频| 国产成人欧美在线观看| 久久久久精品国产欧美久久久| 一进一出抽搐动态| 欧美成人免费av一区二区三区| 麻豆一二三区av精品| 亚洲色图av天堂| 日本五十路高清| 黄色女人牲交| 久久久久久久午夜电影| 女性被躁到高潮视频| 亚洲成人免费电影在线观看| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 国产精品乱码一区二三区的特点 | 一本综合久久免费| 亚洲午夜理论影院| 女性被躁到高潮视频| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 日韩精品青青久久久久久| 又紧又爽又黄一区二区| 在线观看舔阴道视频| 亚洲在线自拍视频| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 午夜精品在线福利| 757午夜福利合集在线观看| 国产成人免费无遮挡视频| 制服丝袜大香蕉在线| 国产精品野战在线观看| 最新在线观看一区二区三区| 成人免费观看视频高清| 久久精品影院6| 国产精品98久久久久久宅男小说| 国产成人欧美| 黄片小视频在线播放| 久久久久久大精品| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| x7x7x7水蜜桃| www.熟女人妻精品国产| 不卡av一区二区三区| 亚洲电影在线观看av| 国产野战对白在线观看| 久久久久九九精品影院| 一级毛片精品| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 午夜福利在线观看吧| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 大型黄色视频在线免费观看| cao死你这个sao货| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 久久欧美精品欧美久久欧美| 久久亚洲真实| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 亚洲一码二码三码区别大吗| 国产精品久久电影中文字幕| 日本免费一区二区三区高清不卡 | 亚洲av五月六月丁香网| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 久久这里只有精品19| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 日韩欧美一区视频在线观看| 久99久视频精品免费| 91在线观看av| 精品国产美女av久久久久小说| 嫁个100分男人电影在线观看| 啦啦啦观看免费观看视频高清 | 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 亚洲五月色婷婷综合| 变态另类丝袜制服| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 日韩欧美一区视频在线观看| 好男人在线观看高清免费视频 | 精品电影一区二区在线| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | 欧美国产日韩亚洲一区| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 最近最新免费中文字幕在线| 午夜日韩欧美国产| 国产高清激情床上av| 黄片大片在线免费观看| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 午夜福利欧美成人| 日韩大码丰满熟妇| 国产精品亚洲美女久久久| 一区福利在线观看| bbb黄色大片| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 国产高清激情床上av| 男人操女人黄网站| 9热在线视频观看99| 亚洲成人国产一区在线观看| 成人国语在线视频| 12—13女人毛片做爰片一| 黑丝袜美女国产一区| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 一个人免费在线观看的高清视频| 成人三级做爰电影| ponron亚洲| 一夜夜www| 欧美大码av| 久久久久亚洲av毛片大全| 欧美在线一区亚洲| 精品高清国产在线一区| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 久久香蕉精品热| 成人亚洲精品一区在线观看| 久久午夜综合久久蜜桃| 欧美+亚洲+日韩+国产| cao死你这个sao货| 国产亚洲精品av在线| 一区二区日韩欧美中文字幕| 操美女的视频在线观看| 亚洲精品国产区一区二| 亚洲国产精品成人综合色| 免费观看精品视频网站| 久久亚洲精品不卡| aaaaa片日本免费| 亚洲av五月六月丁香网| 在线天堂中文资源库| 久久精品国产99精品国产亚洲性色 | 国产精品国产高清国产av| 久热这里只有精品99| 1024视频免费在线观看| 欧美大码av| 午夜福利视频1000在线观看 | 狂野欧美激情性xxxx| 热re99久久国产66热| 黄色 视频免费看| av视频免费观看在线观看| av超薄肉色丝袜交足视频| 久99久视频精品免费| 久久热在线av| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 一区福利在线观看| 香蕉丝袜av| 99香蕉大伊视频| 啦啦啦韩国在线观看视频| 一级黄色大片毛片| 精品人妻在线不人妻| 国产成人精品无人区| 国产区一区二久久| 看黄色毛片网站| 国产高清视频在线播放一区| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 黄片大片在线免费观看| 久久午夜综合久久蜜桃| 精品不卡国产一区二区三区| 久热这里只有精品99| 一个人观看的视频www高清免费观看 | 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 久热爱精品视频在线9| or卡值多少钱| 国内精品久久久久精免费| 美女免费视频网站| 很黄的视频免费| 亚洲五月色婷婷综合| 俄罗斯特黄特色一大片| 黄色毛片三级朝国网站| 18禁国产床啪视频网站| 亚洲av电影不卡..在线观看| 国产男靠女视频免费网站| 十八禁人妻一区二区| 美国免费a级毛片| 88av欧美| 午夜久久久久精精品| 午夜免费成人在线视频| 欧美日韩一级在线毛片| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 亚洲国产欧美一区二区综合| www日本在线高清视频| 啦啦啦 在线观看视频| 色尼玛亚洲综合影院| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 国产成人影院久久av| 成人永久免费在线观看视频| 国产成人精品在线电影| xxx96com| 1024香蕉在线观看| svipshipincom国产片| 亚洲精品在线观看二区| 女警被强在线播放| 老汉色∧v一级毛片| 欧美在线一区亚洲| 天天一区二区日本电影三级 | 亚洲国产精品合色在线| 俄罗斯特黄特色一大片| 看黄色毛片网站| 黄色女人牲交| 久9热在线精品视频| 丝袜美足系列| 久久热在线av| 精品熟女少妇八av免费久了| 久久精品国产99精品国产亚洲性色 | 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 身体一侧抽搐| 国产成人精品久久二区二区免费| 久久国产乱子伦精品免费另类| 亚洲专区中文字幕在线| 亚洲精品在线观看二区| 人成视频在线观看免费观看| 亚洲激情在线av| 在线永久观看黄色视频| 美女高潮到喷水免费观看| 一夜夜www| 一区在线观看完整版| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 两个人看的免费小视频| 亚洲av片天天在线观看| 精品不卡国产一区二区三区| 久久久久亚洲av毛片大全| 色综合亚洲欧美另类图片| 俄罗斯特黄特色一大片| tocl精华| 日韩欧美在线二视频| 国产伦一二天堂av在线观看| 激情视频va一区二区三区| 国产又色又爽无遮挡免费看| 欧美日韩乱码在线| 久久国产精品人妻蜜桃| 国产一卡二卡三卡精品| 最新美女视频免费是黄的| 亚洲片人在线观看| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 日韩欧美一区视频在线观看| 日韩欧美在线二视频| 欧美在线黄色| 精品日产1卡2卡| 亚洲成人精品中文字幕电影| 夜夜夜夜夜久久久久| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 无人区码免费观看不卡| 乱人伦中国视频| av福利片在线| 亚洲 国产 在线| 精品欧美国产一区二区三| 亚洲三区欧美一区| 一本久久中文字幕| 亚洲中文字幕日韩| 午夜福利视频1000在线观看 | 国产亚洲精品久久久久5区| 色综合婷婷激情| 黄色视频不卡| 一级毛片高清免费大全| 一个人免费在线观看的高清视频| 精品高清国产在线一区| videosex国产| 精品卡一卡二卡四卡免费| 国产三级黄色录像| 中文字幕久久专区| 天堂动漫精品| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 国产精品一区二区三区四区久久 | 久久人人爽av亚洲精品天堂| 男女床上黄色一级片免费看| 一级毛片女人18水好多| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 一二三四社区在线视频社区8| 黑人欧美特级aaaaaa片| 国产精品久久久人人做人人爽| 色av中文字幕| 欧美黑人精品巨大| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 欧美一级毛片孕妇| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 亚洲avbb在线观看| av欧美777| 99久久综合精品五月天人人| 在线观看一区二区三区| 在线播放国产精品三级| 黄片小视频在线播放| 亚洲天堂国产精品一区在线| 亚洲,欧美精品.| 在线播放国产精品三级| 欧美黄色片欧美黄色片| 中文字幕久久专区| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 国产成人免费无遮挡视频| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 看免费av毛片| 亚洲无线在线观看| 欧美乱色亚洲激情| 亚洲七黄色美女视频| 又黄又粗又硬又大视频| 搡老妇女老女人老熟妇| 一级毛片高清免费大全| 亚洲视频免费观看视频| 欧美国产精品va在线观看不卡| 日本免费一区二区三区高清不卡 | 视频区欧美日本亚洲| a级毛片在线看网站| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 亚洲国产欧美网| 神马国产精品三级电影在线观看 | 久久这里只有精品19| 看片在线看免费视频| 亚洲 国产 在线| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | 国产精品免费一区二区三区在线| 亚洲七黄色美女视频| 欧美另类亚洲清纯唯美| 97人妻天天添夜夜摸| 日本 av在线| videosex国产| 精品国产乱码久久久久久男人| 999久久久国产精品视频| 亚洲第一av免费看| 丝袜美腿诱惑在线| 亚洲专区国产一区二区| 在线观看免费视频网站a站| 淫秽高清视频在线观看| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 国产亚洲欧美98| 黑人操中国人逼视频| 国产一区在线观看成人免费| 一级作爱视频免费观看| www日本在线高清视频| 男女午夜视频在线观看| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 9色porny在线观看| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 国产成人av教育| 久久香蕉精品热| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 丁香六月欧美| 免费av毛片视频| 亚洲成国产人片在线观看| 久久婷婷成人综合色麻豆| 满18在线观看网站| 满18在线观看网站| 国产精品一区二区在线不卡| 日韩精品青青久久久久久| 国产色视频综合| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 国产午夜精品久久久久久| 亚洲精品国产一区二区精华液| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| www.www免费av| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 亚洲av熟女| 欧美日本中文国产一区发布| 女警被强在线播放| 激情视频va一区二区三区| 老鸭窝网址在线观看| 亚洲av成人一区二区三| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 亚洲一区高清亚洲精品| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 亚洲黑人精品在线| 精品国产国语对白av| 免费无遮挡裸体视频| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 色av中文字幕| 一级a爱片免费观看的视频| 欧美激情高清一区二区三区| 久久性视频一级片| 亚洲三区欧美一区| 日韩高清综合在线| 久久精品国产综合久久久| videosex国产| 成人精品一区二区免费| 欧美日本中文国产一区发布| 久久久久久久久免费视频了| 精品乱码久久久久久99久播| 最近最新中文字幕大全电影3 | 777久久人妻少妇嫩草av网站| 两个人视频免费观看高清| 美国免费a级毛片| 国产av精品麻豆| 黑人操中国人逼视频| 大陆偷拍与自拍| 精品卡一卡二卡四卡免费| 午夜福利一区二区在线看| 国产成人啪精品午夜网站| 午夜福利欧美成人| 亚洲avbb在线观看| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 操出白浆在线播放| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 真人一进一出gif抽搐免费| 免费在线观看影片大全网站| 精品欧美国产一区二区三| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 国产精华一区二区三区| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 免费搜索国产男女视频| 超碰成人久久| 午夜亚洲福利在线播放| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 久久中文字幕一级| 亚洲中文日韩欧美视频| 90打野战视频偷拍视频| 亚洲情色 制服丝袜| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 中文字幕最新亚洲高清| 国产私拍福利视频在线观看| 少妇的丰满在线观看| 国产男靠女视频免费网站| 日本一区二区免费在线视频| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 欧美成狂野欧美在线观看| 999久久久精品免费观看国产| 十八禁人妻一区二区| 少妇 在线观看| 老鸭窝网址在线观看| 欧美激情久久久久久爽电影 | 国产1区2区3区精品| 十八禁网站免费在线| 天堂影院成人在线观看| 一a级毛片在线观看| 中出人妻视频一区二区| 老熟妇仑乱视频hdxx| 丝袜人妻中文字幕| 中文字幕高清在线视频| 日韩三级视频一区二区三区| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 美女午夜性视频免费| 极品人妻少妇av视频| 国产一区二区三区视频了| 香蕉国产在线看| 一二三四在线观看免费中文在| 久久久久久久精品吃奶| 午夜福利影视在线免费观看| 大陆偷拍与自拍| 男男h啪啪无遮挡| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 午夜福利欧美成人| 大码成人一级视频| 亚洲成人精品中文字幕电影| 国产成人啪精品午夜网站| АⅤ资源中文在线天堂| 欧美国产精品va在线观看不卡| 男人的好看免费观看在线视频 | 亚洲精品中文字幕在线视频| 性欧美人与动物交配| 欧美激情 高清一区二区三区| 黑人操中国人逼视频| 在线观看午夜福利视频| 亚洲伊人色综图| 级片在线观看| av在线天堂中文字幕| 国产精品免费视频内射| 极品人妻少妇av视频| 亚洲激情在线av| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | 久久中文字幕人妻熟女| 午夜两性在线视频| 欧美黄色淫秽网站| 亚洲av美国av| 老司机深夜福利视频在线观看| 一本久久中文字幕| 精品久久久久久,| 9色porny在线观看| 男女之事视频高清在线观看| 欧美日韩黄片免| 精品久久蜜臀av无| 天堂动漫精品| 美女国产高潮福利片在线看| 欧美日韩一级在线毛片| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 99国产精品99久久久久| 最近最新免费中文字幕在线| 久久欧美精品欧美久久欧美| 亚洲精品国产色婷婷电影| 黑丝袜美女国产一区| 亚洲中文字幕日韩| 国产成人欧美在线观看| 久久精品影院6| 激情在线观看视频在线高清| 精品熟女少妇八av免费久了| 精品人妻在线不人妻| 亚洲国产欧美网| 国产成人影院久久av| 无遮挡黄片免费观看| 久久久久久久久免费视频了| 51午夜福利影视在线观看| 黄色 视频免费看| 亚洲男人的天堂狠狠| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | 91成人精品电影| 人人澡人人妻人| 精品免费久久久久久久清纯| 一区二区三区高清视频在线| 亚洲国产精品久久男人天堂| 亚洲人成77777在线视频| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 国产麻豆69| 午夜福利,免费看| 搞女人的毛片| 久99久视频精品免费| 丰满的人妻完整版| 黑人操中国人逼视频| 成年人黄色毛片网站| 男女下面进入的视频免费午夜 | 超碰成人久久| 亚洲人成电影观看| 18禁观看日本| 精品久久蜜臀av无| 宅男免费午夜| 丝袜美足系列| 亚洲一码二码三码区别大吗| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 大型黄色视频在线免费观看| www国产在线视频色| 丰满的人妻完整版| 亚洲 欧美一区二区三区| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 国产精品一区二区精品视频观看| tocl精华| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 国产精品 欧美亚洲| avwww免费| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 亚洲性夜色夜夜综合| 九色亚洲精品在线播放| 一级作爱视频免费观看| 波多野结衣av一区二区av| 亚洲第一电影网av|