規(guī)?；馀霾剪斒蠗U菌病的診斷、凈化以及防控措施

王 娜

(陜西省華陰市動物疫病預(yù)防控制中心，陜西 華陰 714200)

0 引言

近年來，隨著人們生活水平的不斷提高，對牛肉及其相關(guān)產(chǎn)品的需求量不斷上升，為肉牛養(yǎng)殖業(yè)提供了更為廣闊的市場。因此，肉牛養(yǎng)殖業(yè)得到了迅速的發(fā)展，養(yǎng)殖的規(guī)?；c集約化程度逐漸提升，養(yǎng)殖規(guī)模的不斷擴大，同時也增加了多種傳染性疾病流行的概率。其中布魯氏桿菌病是規(guī)模化肉牛場應(yīng)當重點防范的傳染性疾病之一，該病是由布魯氏桿菌感染所引發(fā)的一種人畜共患的傳染性疾病，可對人類和牛群造成較為嚴重的危害，已經(jīng)被我國列為二類動物性傳染病[1]。該病發(fā)生后長期在養(yǎng)殖場區(qū)內(nèi)潛伏，難以凈化，當前還未有特效治療藥物，流行暴發(fā)本病后會給養(yǎng)殖場造成嚴重的經(jīng)濟損失。因此，規(guī)?；馀鰬?yīng)提高對該病危害性的認識，掌握該病的診斷要點，及時對牛場內(nèi)的患牛隔離并做出診療措施，加強對該病的綜合防控，以降低該病所帶來的不必要損失。

1 布魯氏桿菌病的病原及流行特點

1.1 病原學特征

布魯氏桿菌病主要是由于布魯氏桿菌感染所引發(fā)的傳染性疾病，該致病菌具有多個菌屬，牛、羊、豬以及犬等多種動物均可被其感染，當前已知的有6個種19個生物型，布魯氏桿菌的外型主要呈微小球型、短桿以及球桿狀，致病菌的寬度為0.3～0.5 μm，長度為0.6～1.5 μm，其中牛屬菌主要以短桿狀菌為主，無鞭毛、芽孢和莢膜等結(jié)構(gòu)[1]。該病菌屬于細胞內(nèi)寄生菌，具有較強的傳播力和侵襲力，主要對宿主的淋巴系統(tǒng)及生殖系統(tǒng)造成侵害。布魯氏桿菌經(jīng)革蘭氏染色后呈現(xiàn)陰性，經(jīng)柯茲羅夫斯基染色后呈現(xiàn)紅色，涂片鏡檢主要呈單個排布，很少見到短鏈狀排布。布魯氏桿菌體外培養(yǎng)要求較高，需要多種氨基酸和金屬離子，有個別菌種需要加入血清才能生長，并且生長的速度非常緩慢，通常情況需要4～6 d才會長出菌落，有的甚至需要培養(yǎng)21～30 d，培養(yǎng)的溫度應(yīng)維持在20℃～40℃，最好能夠保持37℃培養(yǎng)。該病原菌對外界環(huán)境的抵抗能力較強，能夠在適宜的條件下存活很長時間，在陽光直射的環(huán)境下存活4 h左右，但其對濕熱環(huán)境的抵抗力較低，在60℃的溫度下經(jīng)過30 min，或者在70℃的溫度下經(jīng)過5 min即可被滅活，在煮沸的熱水中可被立即滅活。另外，布魯氏桿菌對多種消毒制劑的敏感性較強，使用濃度為2%的石炭酸、5%的新鮮石灰乳、濃度為2%的福爾馬林或者火堿溶液等作用1～3 h，或者使用濃度為0.5%的洗必泰、0.01%的心潔爾滅等消毒劑作用5 min均可將其滅活[2]。

1.2 流行病學

人類和多種動物均對本病易感，其中以牛、羊和豬的易感性最強，成年動物要比幼齡動物更為易感染，發(fā)病率也更高，母畜比公畜更容易發(fā)病。布魯氏桿菌還能造成犬、馬等動物以及人類的感染。該病一年四季均可發(fā)生，但在春、夏等季節(jié)牛群的發(fā)病率更高一些?；疾〖倚笠约半[性帶菌動物為該病的主要傳染源，病原菌主要存在于母畜流產(chǎn)物、乳汁、公畜的精液以及患畜的排泄物中，致病菌被排出體外后則可污染周圍環(huán)境，當健康牛只接觸后即可發(fā)生感染。尤其以懷孕的母畜最為危險，妊娠母畜在發(fā)生流產(chǎn)或者在分娩的過程中，會流出大量含有致病菌的羊水，導致周圍的環(huán)境受到污染，另外胎兒和胎衣也帶有較多的致病菌，排出后也可造成環(huán)境污染，通常情況下，母羊在流產(chǎn)后的3年之內(nèi)，其陰道內(nèi)的分泌物仍然帶有布魯氏桿菌。致病菌可以通過消化道、呼吸道以及生殖道等途徑感染健康的牛只，破損的皮膚或者黏膜也可傳播感染該病。

2 臨床表現(xiàn)及剖檢病變

2.1 臨床表現(xiàn)

牛只感染該病后會有較長的潛伏期，通常在14～180 d，大部分患牛為隱性感染。該病多呈地方性流行，并且在老疫區(qū)感染發(fā)病后呈慢性經(jīng)過，而在新疫區(qū)患牛多為急性經(jīng)過，并且會在妊娠的牛群中出現(xiàn)暴發(fā)性的流行。其中以頭胎的母畜發(fā)病居多，能夠占到發(fā)病牛只的50%以上，大部分的妊娠母牛通常僅發(fā)生1次流產(chǎn)。老疫區(qū)內(nèi)妊娠母牛感染后一般不會流產(chǎn)，主要以子宮內(nèi)膜炎、乳房炎以及關(guān)節(jié)炎等疾病為主，還會伴有局部腫脹、胎衣不下或者屢配不孕的情況。感染后的母牛多在妊娠5～8個月發(fā)生流產(chǎn)，此后患畜的陰道內(nèi)會持續(xù)的排出褐色并有惡臭氣味的液體。公畜感染發(fā)病后則主要表現(xiàn)為睪丸炎癥，配種能力受到嚴重影響，還有的患牛會出現(xiàn)比較明顯的關(guān)節(jié)炎和淋巴結(jié)炎等癥狀。

2.2 剖檢病變

剖檢病死的患?？梢娖涮ケP病變明顯，呈淡黃色膠凍樣的浸潤，在其表面具有較多的絮狀和膿性的分泌物，病牛的胎膜變厚并且伴有點狀的出血，在妊娠母牛的子宮黏膜以及絨毛膜之間還存在較多的淡灰色的污濁滲出物以及膿塊，胎兒的胃內(nèi)具有黏液性的絮狀物。患牛的胸腔和腹腔中積有大量的紅色積液，脾臟和淋巴結(jié)出現(xiàn)不同程度的腫大，同時存在壞死灶。

3 診斷方法

3.1 顯微鏡鏡檢

無菌條件下采集妊娠母牛流產(chǎn)的胎衣，或者病死牛只的肝臟、脾臟以及淋巴結(jié)等組織，研磨破碎后制備成為涂片，進行柯茲羅夫斯基染色后置于顯微鏡下鏡檢，可以見到呈球桿狀的紅色的小桿菌存在，另外視野中還存在其他的藍色菌。

3.2 病原分離鑒定

將無菌采集的新鮮病料組織研磨后置于選擇性培養(yǎng)基中，在37℃的環(huán)境下連續(xù)培養(yǎng)7 d左右，待菌落長出后，挑去菌落制片、染色后鏡檢，能夠見到革蘭氏染色呈陰性、柯茲羅夫斯基染色呈紅色的球狀小桿菌。由于樣本中必須存活大量的布魯氏桿菌才能分離到足以培養(yǎng)檢測的菌落，并且該病原菌的培養(yǎng)周期過長，上述方法在目前的實驗室檢測中已被淘汰。

3.3 血清學檢測

3.3.1 琥紅平板凝集試驗(RBPT)

采集患病牛只或者疑似感染牛只的血清，準備一塊玻璃板，并在玻璃板上均勻的劃出4 cm的正方形小格，然后取30 μL采集的血清再加等量的診斷抗原在玻璃板上進行混勻，若在4 min之內(nèi)發(fā)生明顯的凝集的則可判斷為陽性，而結(jié)果呈現(xiàn)均勻粉紅色，且無凝集現(xiàn)象發(fā)生的則判斷為陰性。這種方法是實驗室中監(jiān)測布魯氏桿菌病最常用的方法之一。

3.3.2 試管凝集試驗(SAT)

將采集的牛血清按照1：100(含1 000 IU/mL)的比例進行稀釋時，若出現(xiàn)50%(++) 凝集現(xiàn)象時，則可確診為陽性；若將牛血清按照1：50(含50 IU/mL)的比例進行稀釋時，若出現(xiàn)50%(++) 凝集現(xiàn)象時，則可將其判定為可疑反應(yīng)[2]。出現(xiàn)可疑反應(yīng)的牛只，在經(jīng)過21～28 d需要進行重新采血檢測，如果檢測的結(jié)果仍為可疑反應(yīng)，則可判定為陽性患牛[3]。

3.3.3 全乳環(huán)狀試驗(MRT)

MRT檢測法僅需通過牛乳即可對布魯氏桿菌病進行初步的篩選，操作簡便、快捷，是當前監(jiān)測牛布魯氏桿菌病的主要方法之一，但此方法容易受隱性乳房炎的影響發(fā)生假陽性反應(yīng)，因此還需用其他檢測技術(shù)進行復(fù)檢，以保證檢測結(jié)果的可靠性。

3.3.4 補體結(jié)合試驗(CFT)

該檢測方法是國際貿(mào)易中指定的診斷牛、羊布魯氏桿菌病的試驗方法，可作為確診試驗應(yīng)用于檢測中。

3.3.5 酶聯(lián)免疫吸附試驗 (ELISA)

ELISA檢測法與CFT類似，操作簡單，既可用于檢測血清又可用于檢測牛乳，同樣是國際貿(mào)易中指定的診斷牛布魯氏桿菌病的試驗方法，同時還可用于肉牛場進行大規(guī)模篩查陽性牛只。

3.4 PCR檢測技術(shù)

PCR檢測技術(shù)即生物鏈的聚合酶鏈反應(yīng)，以現(xiàn)代生物分子學理論為基礎(chǔ)，對致病原的核酸物質(zhì)進行準確的檢測，若結(jié)果顯示陽性則可確診為布魯氏桿菌感染，該檢測技術(shù)僅通過采集的牛只分泌物等樣品即可完成檢測，準確性和靈敏度較高，是當前實驗室診斷中使用較多、較為先進的一種檢測技術(shù)，但該檢測技術(shù)對成本的要求較高，對操作人員和儀器設(shè)備的要求也比較高，一旦操作出錯，就會影響試驗結(jié)果的準確性。

4 凈化措施

4.1 采血檢測

對整個牛場進行全部采血處理，并按照《動物疫病實驗室檢驗采樣方法》 (NY/ T 541—2002)采集血液樣品，并按要求進行保存，采集的血樣按照順序進行編號記錄，送到實驗室進行血清分離[4]。采集的血清樣本采用RBPT進行初篩，并采用SAT進行復(fù)檢，試驗操作規(guī)程按照《動物布魯氏菌病診斷技術(shù)》(GB / T18646—2018)進行。

4.2 做好凈化分區(qū)工作

根據(jù)檢測的結(jié)果可將牛場合理的劃分為未控制牛群、控制區(qū)牛群、穩(wěn)定以及凈化群，以更好的對牛群進行科學管理，加快牛場凈化的效率。

4.3 凈化

4.3.1 陽性牛只的處理辦法

整個肉牛場必須進行100%檢測，不可采取抽查的方式，連續(xù)2次檢測全部為陰性的即為凈化牛群。若在檢測過程中發(fā)現(xiàn)有呈陽性的牛只，則應(yīng)立即采取撲殺措施并向縣級畜牧獸醫(yī)主管部門報備，對陽性牛只進行撲殺時應(yīng)嚴格按照有關(guān)規(guī)定進行，并且做好無害化處理工作，對患?；顒拥膱鏊?、使用的器具等使用火堿、氯制劑等進行嚴格的消毒處理，并將其污染的飼料、糞便、排泄物等進行焚燒或者深埋等無害化處理，并使用漂白粉對周圍場地進行嚴格的消毒，防止造成周圍環(huán)境的污染。

4.3.2 可疑牛群的處理辦法

對于可疑牛群則應(yīng)立即進行隔離處理，嚴格控制其移動，然后利用實驗室的診斷方法再次進行診斷，若仍判定為可疑牛群，則可將其等同于陽性牛只進行處理；若可疑牛只經(jīng)復(fù)檢確診為陰性，依然不能立即混群飼養(yǎng)，仍需隔離1個月后，再次對其復(fù)檢，若仍為陰性才可以進行混群飼養(yǎng)。

4.4 日常監(jiān)測

對于本場自繁自養(yǎng)的牛群應(yīng)該在每年的春、秋兩季分別進行一次全面檢查，如發(fā)現(xiàn)陽性牛只還需要進行復(fù)查，檢查結(jié)束后按照結(jié)果進行相應(yīng)的分區(qū)管理。一旦牛場內(nèi)檢出了陽性患牛則需改為每月檢查1次，連續(xù)檢查3個月，直至剩余牛群全部為陰性方可恢復(fù)每年檢查2次。如果養(yǎng)殖場需要對外引種，則須嚴格按照相關(guān)規(guī)定，做好檢驗檢疫工作，要求引種須提前30 d對牛群進行布魯氏桿菌病初篩，若發(fā)現(xiàn)陽性患牛，則需要立即停止本次引種工作。對于篩查合格的健康牛群，引進后需要進行45 d的隔離飼養(yǎng)，然后進行布病篩查，結(jié)果全部為陰性，并且經(jīng)檢查無異常后方可混養(yǎng)。飼養(yǎng)滿1年以后可以按照自繁自養(yǎng)牛群的監(jiān)測方法進行常規(guī)監(jiān)測。

5 綜合防控

5.1 加強疫苗接種工作

應(yīng)根據(jù)牛場的實際養(yǎng)殖情況，制定科學合理的免疫計劃，以有效控制布魯氏桿菌病的發(fā)生。目前預(yù)防牛布魯氏桿菌病的常用疫苗有豬型布魯氏桿菌2號疫苗，可在犢牛100～150 d時進行首次免疫，等到第2年的同一時期再進行一次免疫接種，能夠產(chǎn)生良好的免疫效果，保護期長達數(shù)年。但應(yīng)注意使用布魯氏桿菌疫苗時應(yīng)盡量與口蹄疫疫苗分開接種，以免造成免疫抑制發(fā)生，導致免疫失敗。

5.2 提高飼養(yǎng)管理措施

首先，規(guī)?；B(yǎng)殖場應(yīng)該合理控制牛群的飼養(yǎng)密度，并做好飼舍的通風管理，保持牛群的良好生活環(huán)境，防止牛群發(fā)生應(yīng)激反應(yīng)，導致自身免疫能力下降，容易感染各類疾病。

其次，養(yǎng)殖人員應(yīng)確保牛群的飲用水源和飼糧等未被致病原污染，及時打掃清除圈舍內(nèi)的糞便和飼料殘渣等，并且定期開展消毒工作，避免致病菌大量滋生。對于發(fā)生流產(chǎn)的母牛要立即隔離飼養(yǎng)，并且將母牛的胎水，胎兒等送檢，檢查母牛是否發(fā)生布魯氏桿菌感染。對于確診陽性的母牛，應(yīng)該立即與犢牛分開飼養(yǎng)，并且在犢牛5～9月齡時對其開展布病篩查，若檢測為陰性則可進行疫苗免疫接種[5]。

5.3 嚴格消毒管理

規(guī)模化牛場應(yīng)嚴格消毒管理，有效殺滅傳染源，切斷傳播途徑。可以選用2～3種消毒制劑輪換對養(yǎng)殖場內(nèi)外進行消毒處理，以保證良好的消毒效果，常用的消毒劑有火堿、石灰乳以及甲醛等。同時加強對進出車輛、人員的消毒，防止致病原被攜帶入場，另外還可以選用毒性和刺激性較小的消毒劑定期帶牛消毒，常用的有0.1%的心潔爾滅和0.3%的過氧乙酸等。

6 結(jié)語

牛布魯氏桿菌病是牛養(yǎng)殖中一種極為重要的傳染疾病，做好該病的防控和凈化工作對提高養(yǎng)殖場的經(jīng)濟效益，保障人類的生命健康有著重要的意義。相關(guān)工作人員應(yīng)該深入了解該病的流行特點，養(yǎng)殖場出現(xiàn)病例后能夠及時進行相關(guān)處理工作，防止造成更大規(guī)模的危害。