馬齒莧乙酸乙酯萃取物化學(xué)成分研究

張曉輝，張義濤，毛子俊，王金蘭,2，時(shí)志春,2，李軍,2，趙明,2，張樹(shù)軍,2

馬齒莧乙酸乙酯萃取物化學(xué)成分研究

張曉輝1，張義濤1，毛子俊1，王金蘭1,2，時(shí)志春1,2，李軍1,2，趙明1,2，張樹(shù)軍1,2＊

（1.齊齊哈爾大學(xué) 化學(xué)與化學(xué)工程學(xué)院，黑龍江 齊齊哈爾 161006；2.黑龍江省工業(yè)大麻加工技術(shù)創(chuàng)新中心，黑龍江 齊齊哈爾 161006）

采用硅膠柱色譜及HPLC等分離方法對(duì)干燥馬齒莧全草甲醇浸提液乙酸乙酯萃取物進(jìn)行分離純化，共分離得到6個(gè)單體化合物，其中4個(gè)內(nèi)酯類化合物，2個(gè)紫羅蘭酮類化合物，通過(guò)分析波譜數(shù)據(jù)并根據(jù)其理化性質(zhì)等確定其結(jié)構(gòu)，分別為：羥基二氫博伏內(nèi)酯(1)、黑麥草內(nèi)酯(2)、異黑麥草內(nèi)酯(3)、脫氫地芰普內(nèi)酯(4)、3-羥基-5,6-環(huán)氧--紫羅蘭酮(5)、(6,9)-6,9-二羥基-3-酮--紫羅蘭醇(6)。其中化合物5和6為首次從馬齒莧中分離得到。

馬齒莧；內(nèi)酯；紫羅蘭酮

馬齒莧（L.）為馬齒莧科馬齒莧屬植物，又名馬齒草、長(zhǎng)命菜、螞蟻菜等，常長(zhǎng)于菜園、田園、路旁、荒地等，遍布全國(guó)，是傳統(tǒng)中草藥[1]，富含豐富的化學(xué)成分，主要有生物堿類、有機(jī)酸類、萜類、黃酮類、酚類、無(wú)機(jī)鹽類、氨基酸等[2]。在近年來(lái)的藥理研究中發(fā)現(xiàn)，馬齒莧具有降血脂、降血糖、抗動(dòng)脈粥樣硬化、促進(jìn)傷口愈合、鎮(zhèn)痛、抗氧化、抑菌等功效[3]。馬齒莧不僅可以食用，也用于保健品、化妝品等領(lǐng)域[4]。為了更好地開(kāi)發(fā)利用馬齒莧植物資源在各個(gè)領(lǐng)域的應(yīng)用途徑，本文研究分析了干燥馬齒莧全草CH3OH浸提液乙酸乙酯萃取物中所含的化學(xué)成分，從中分離得到4個(gè)內(nèi)酯類化合物，2個(gè)紫羅蘭酮類化合物，通過(guò)分析波譜數(shù)據(jù)并根據(jù)其理化性質(zhì)等確定其結(jié)構(gòu)，分別為：羥基二氫博伏內(nèi)酯(1)、黑麥草內(nèi)酯(2)、異黑麥草內(nèi)酯(3)、脫氫地芰普內(nèi)酯(4)、3-羥基-5,6-環(huán)氧--紫羅蘭酮(5)、(6,9)-6,9-二羥基-3-酮--紫羅蘭醇(6)。其中化合物5～6為首次從馬齒莧中分離得到。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 材料與儀器

實(shí)驗(yàn)原料馬齒莧全草，2017年8月10日采于齊齊哈爾市昂昂溪，洗凈蒸煮10 min后晾干保存。經(jīng)齊齊哈爾大學(xué)沙偉教授鑒定為馬齒莧。

冰乙酸，乙腈，均為99%分析純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)；正己烷為38.8℃的餾分；乙酸乙酯為77.1℃的餾分；甲醇為64.7℃的餾分。

AV-600核磁共振波譜儀，Bruke公司；HITACHI L-7100半制備高效液相色譜儀，日本日立公司；HANGPING JA2003電子天平，上海精科實(shí)業(yè)有限公司；RE-52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，上海亞榮生化儀器廠；X-6熔點(diǎn)測(cè)定儀，北京泰克儀器有限公司；OBD-ODS 19nm×100nm色譜柱，日本島津公司；200～300目柱層析用硅膠，青島海洋化工廠；20cm×20cm薄層層析板，青島海洋化工廠。

1.2 提取與分離

取干燥馬齒莧全草5.3kg，每次量取25.0L CH3OH溶液，在室溫下浸泡3d，過(guò)濾，重復(fù)3次，合并CH3OH 浸提液，將其減壓濃縮至恒重，加水混懸分散，依次用n-Hexane、EtOAC萃取3次，將相同溶劑萃取液合并，蒸餾濃縮至恒重，得到質(zhì)量分別為106.5g, 19.4 g的正己烷和乙酸乙酯2種萃取物。

取乙酸乙酯萃取物19.4 g，選用干法制樣，利用硅膠柱色譜分離，分別用(正己烷)∶(乙酸乙酯) = 4∶6（9.0 L），(乙酸乙酯)∶(甲醇) = 95∶5（7.2 L），9∶1（7.0 L），0∶1（5.6 L）洗脫，經(jīng)TLC檢測(cè)分析，合并相同流分，濃縮共得到11個(gè)組分（PO-1～PO-11）。PO-3（0.9 g）用硅膠柱色譜法分離，分別用(正己烷)∶(乙酸乙酯) = 7∶3（2.3 L），4∶6（0.5 L）洗脫，經(jīng)TLC檢測(cè)分析合并相同流分，濃縮得到7個(gè)組分（PO-3-1～PO-3-7）。PO-3-1（40.5 mg）用RP-HPLC（流動(dòng)相為(甲醇)∶(水) = 65∶35，流速為4 mL/min）純化，得到化合物1（9.8mg，R= 8.7min）。PO-3-2（101.2mg）用RP-HPLC（流動(dòng)相為(甲醇)∶(水) = 4∶6，流速為5 mL/min）分離，得到6個(gè)組分（PO-3-2-1～PO-3-2-6）。PO-3-2-3（16.0 mg）用RP-HPLC（流動(dòng)相為(甲醇)∶(水) = 3∶7，流速為4 mL/min）純化，得到化合物2（3.2 mg，R= 18.6 min）。PO-3-3（116.5 mg）用RP-HPLC（流動(dòng)相為(甲醇)∶(水) = 4∶6，流速為5 mL/min）分離，得到6個(gè)組分（PO-3-3-1～PO-3-3-6）。PO-3-3-3（11.4 mg）用RP-HPLC（流動(dòng)相為(甲醇)∶(乙腈)∶(水) = 25∶15∶60，流速為4 mL/min）純化，得到化合物3（2.1 mg，R= 9.0 min）。PO-4（1.4 g）利用硅膠柱色譜法分離，分別用(正己烷)∶(乙酸乙酯) = 7∶3（2.0 L），5∶5（2.0 L），3∶7（2.0 L），(乙酸乙酯)∶(甲醇) = 0∶1（1.0L）洗脫，經(jīng)TLC檢測(cè)分析合并相同流分，濃縮得到12個(gè)組分（PO-4-1～PO-4-12）。PO-4-10（134.1mg）用RP-HPLC（流動(dòng)相為(甲醇)∶(水) = 65∶35，流速為4mL/min）分離，得到4個(gè)組分（PO-4-10-1～PO-4-10-4）。PO-4-10-2（38.6 mg）用RP-HPLC（流動(dòng)相為(甲醇)∶(水) = 65∶35，流速為4 mL/min）純化，得到化合物4（2.8 mg，R= 5.0 min）。PO-4-11（162.7 mg）用RP-HPLC（流動(dòng)相為(甲醇)∶(乙腈)∶(水) = 34∶21∶45，流速為4mL/min）分離，得到6個(gè)組分（PO-4-11-1～PO-4-11-6）。PO-4-11-1（25.5 mg）用RP-HPLC（流動(dòng)相為(甲醇)∶(乙腈)∶(水) = 25∶15∶60，流速為4 mL/min）純化，得到化合物5（4.1 mg，R= 8.6 min）。PO-4-11-5（45.6 mg）用RP-HPLC（流動(dòng)相為(甲醇)∶(水)∶(冰乙酸) = 6∶4∶0.5%，流速為4 mL/min）純化，得到化合物6（3.2 mg，R= 12.0 min）。

2 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：淡黃色脂狀物；1H-NMR (600 MHz, CDCl3): 1.95 (1H, m, H6), 1.94 (3H, s, H11), 1.82 (3H, s, H12), 1.78 (1H, m, H6), 1.32 (4H, m, H8, H9), 1.25 (1H, m, H7), 1.19 (1H, m, H7), 0.85 (3H, d,= 18 Hz, H10);13C-NMR (150 MHz, CDCl3): 171.5 (C2), 158.0 (C4), 125.3 (C3), 106.7 (C5), 36.1 (C6), 31.4 (C8), 22.5 (C7), 22.3 (C9), 14.0 (C10), 10.8 (C11), 8.5 (C12)。分析數(shù)據(jù)并結(jié)合文獻(xiàn)[5]，經(jīng)鑒定是羥基二氫博伏內(nèi)酯。

化合物2：無(wú)色晶體（甲醇）；mp: 147.7～148.3℃；1H-NMR (600 MHz, CDCl3): 5.71 (1H, s, H7), 4.33 (1H, m, H3), 2.48 (1H, dt,= 13.8Hz, 3.0Hz, H2), 1.97 (1H, dt,= 13.8Hz, 3.0Hz, H2), 1.79 (1H, dd,= 9.0 Hz, 4.2 Hz, H4), 1.78 (3H, s, H11), 1.55 (1H, dd,= 15.0Hz, 3.6Hz, H4), 1.47 (3H, s, H10), 1.28 (3H, s, H9);13C-NMR (150 MHz, CDCl3): 182.2 (C8), 171.7 (C6), 112.8 (C7), 86.5 (C5), 66.7 (C3), 47.1 (C2), 45.8 (C4), 36.0 (C1), 30.9 (C10), 27.2 (C11), 26.4 (C9)。分析數(shù)據(jù)并結(jié)合文獻(xiàn)[6]，經(jīng)鑒定是黑麥草內(nèi)酯。

化合物3：無(wú)色晶體（甲醇）；mp: 149.7～151.6℃；1H-NMR (600 MHz, CDCl3): 5.71 (1H, s, H7), 4.13 (1H, m, H3), 2.57 (1H, dt,= 12.0, 1.8Hz, H4), 2.07 (1H, d,= 12.0, 1.8Hz, H2), 1.59 (3H, s, H11), 1.51 (1H, ddd,= 24.0, 12.0Hz, H4), 1.35 (1H, d,=12.1, 12.0Hz,H2), 1.33 (3H, s, H10), 1.23 (3H, s, H9);13C-NMR (150MHz, CDCl3): 181.0 (C8), 171.2 (C6), 112.8 (C7), 86.2 (C5), 64.7 (C3), 50.0 (C2), 47.9 (C4), 35.1 (C1), 29.9 (C10), 25.6 (C11), 25.1 (C9)。分析數(shù)據(jù)并結(jié)合文獻(xiàn)[7]，經(jīng)鑒定是異黑麥草內(nèi)酯。

化合物4：無(wú)色晶體（甲醇）；mp: 149～153℃；1H-NMR (600 MHz, CDCl3): 5.94 (1H, s, H7), 2.96 (1H, dd,=13.8, 1.8Hz, H4), 2.69 (1H, d,=13.8Hz, H2), 2.49 (1H, dd,=14.4, 1.8Hz, H4), 2.44 (1H, d,= 14.3Hz, H2), 1.61 (3H, s, H11), 1.45 (3H, s, H9), 1.32 (3H, s, H10);13C-NMR (150MHz, CDCl3): 204.6 (C3), 178.6 (C8), 170.5 (C6), 114.8 (C7), 86.2 (C5), 54.0 (C4), 53.7 (C2), 35.8 (C1), 29.8 (C11), 26.7 (C9), 26.1 (C10)。分析數(shù)據(jù)并結(jié)合文獻(xiàn)[8]，經(jīng)鑒定是脫氫地芰普內(nèi)酯。

化合物5：無(wú)色脂狀物；1H-NMR (600 MHz, CDCl3): 7.04 (1H, d,=15.6Hz, H7) ,6.28 (1H, d,=15.6Hz, H8), 3.91 (1H, m, H3), 2.40 (1H, dd,=14.4, 5.0Hz, H4), 2.29 (3H, s, H10), 1.65 (1H, dd,=14.6, 8.8Hz, H4), 1.63 (1H, dd,=14.6, 3.5Hz, H2), 1.28 (1H, m, H2), 1.17 (6H, s, H12, H13), 0.96 (3H, s, H11);13C-NMR (150MHz, CDCl3): 197.0 (C9), 142.2 (C7), 132.3 (C8), 69.3 (C6), 67.5 (C5), 64.3 (C3), 46.2 (C2), 40.4 (C4), 35.4 (C1), 29.2 (C12), 28.4 (C10), 25.1 (C11), 19.8 (C13)。分析數(shù)據(jù)并結(jié)合文獻(xiàn)[9]，鑒定是3-羥基-5,6-環(huán)氧--紫羅蘭酮。

化合物6：無(wú)色脂狀物；1H-NMR (600MHz, CDCl3): 5.87 (2H, m, H4), 5.85 (1H, dd,= 8.4, 5.4Hz, H8), 5.81 (1H, d,=15.5Hz, H7), 4.41 (1H, m, H9), 2.43 (1H, d,=17.9Hz, H2), 2.26 (1H, d,=17.9Hz, H2), 1.90 (1H, d,= 4.8Hz, H13), 1.31 (3H, d,=17.9Hz, H10), 1.06 (3H, s, H11), 1.04 (3H, s, H12);13C-NMR (150MHz, CDCl3): 198.6 (C3), 163.6 (C5), 145.5 (C8), 130.1 (C7), 127.5 (C4), 79.6 (C6), 68.6 (C9), 50.0 (C2), 41.3 (C1), 24.6 (C11), 24.1 (C12), 23.2 (C10), 18.9 (C13)。分析數(shù)據(jù)并結(jié)合文獻(xiàn)[10]，鑒定是(6,9)-6,9-二羥基-3-酮--紫羅蘭醇。

3 結(jié)論

本文從干燥馬齒莧甲醇浸提液乙酸乙酯萃取物中分離鑒定了羥基二氫博伏內(nèi)酯(1)，黑麥草內(nèi)酯(2)，異黑麥草內(nèi)酯(3)，脫氫地芰普內(nèi)酯(4)，3-羥基-5,6-環(huán)氧--紫羅蘭酮(5)，(6,9)-6,9-二羥基-3-酮--紫羅蘭醇(6)等6個(gè)單體化合物的結(jié)構(gòu)。其中，3-羥基-5,6-環(huán)氧--紫羅蘭酮(5)和(6,9)-6,9-二羥基-3-酮--紫羅蘭醇(6)是首次從該植物中分離得到；化合物1屬--不飽和--內(nèi)酯類，具有顯著的抗腫瘤活性以及HIV活性[11]；-紫羅蘭酮不僅是一種天然香料，還是一種重要的中間合成體，被廣泛應(yīng)用于保健品、化妝品等領(lǐng)域[12]，-紫羅蘭酮及其衍生物經(jīng)結(jié)構(gòu)修飾后，對(duì)人肺癌細(xì)胞、人結(jié)腸癌細(xì)胞、人乳腺癌細(xì)胞等具有良好的抑制作用，表現(xiàn)出良好的抗癌等生物活性[13]，化合物5, 6同屬于-紫羅蘭酮類化合物，存在潛在的研究?jī)r(jià)值，為進(jìn)一步研究馬齒莧藥用功能提供新的研究方向。

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Study on chemical constituents of ethyl acetate extract ofL.

ZHANG Xiao-hui1，ZHANG Yi-tao1，MAO Zi-jun1，WANG Jin-lan1,2，SHI Zhi-chun1,2，LI Jun1,2，ZHAO Ming1,2，ZHANG Shu-jun1,2＊

(1.College of Chemistry and Chemical Engineering, Qiqihar University, Heilongjiang Qiqihar 161006, China 2.Heilongjiang Industrial Hemp Processing Technology Innovation Center, Heilongjiang Qiqihar 161006, China)

Six compounds were isolated and purified from ethyl acetate extract of dryL. by silica gel column chromatography, semi preparative high performance liquid chromatography. Among them, four lactones and two ionones were identified. Physicochemical properties and spectral data were used for the structure elucidation of the compounds, hydroxydihydrobovolide (1), loliolide (2), isololiolide (3), dehydrololiolide (4), 3-hydroxy-5,6-epoxy--ionone (5), (6,9)-vomifoliol (6). Compounds5 and 6 were obtained from this plant for the first time.

L.；lactones；ionone

2021-11-25

黑龍江省屬高等學(xué)?；究蒲袠I(yè)務(wù)費(fèi)項(xiàng)目（135309301，135109207）

張曉輝（1994-），男，山西大同人，在讀碩士，主要從事天然產(chǎn)物化學(xué)研究，657383440@qq.com。

張樹(shù)軍（1964-），男，遼寧凌源人，教授，博士，主要從事天然產(chǎn)物化學(xué)研究，chou2035@sina.com。

R284.1

A

1007-984X(2022)03-0063-04