花椒葉化學(xué)成分研究

焦鑫陽，李軍,2，孫立秋,2，王金蘭,2，王丹,2，時志春,2，趙明,2，張樹軍,2

花椒葉化學(xué)成分研究

焦鑫陽1，李軍1,2＊，孫立秋1,2，王金蘭1,2，王丹1,2，時志春1,2，趙明1,2，張樹軍1,2

（1.齊齊哈爾大學(xué) 化學(xué)與化學(xué)工程學(xué)院，黑龍江 齊齊哈爾 161006；2.黑龍江省工業(yè)大麻加工技術(shù)創(chuàng)新中心，黑龍江 齊齊哈爾 161006）

將花椒葉甲醇提取物采用硅膠柱色譜、重結(jié)晶、HPLC進行分離純化，得到10個單體化合物，根據(jù)理化性質(zhì)與文獻波譜數(shù)據(jù)對照鑒定所得化合物的結(jié)構(gòu)分別為：表羽扇豆醇(1)、羽扇豆醇(2)、樺木酸(3)、-香樹脂醇(4)，-谷甾醇(5)、齊墩果酸(6)、熊果醇(7)、苯甲酸(8)、-黑麥草素(9)、-黑麥草素(10)。其中化合物5、7、9、10為首次在該植物中分離得到。

花椒葉；黑麥草素；三萜

花椒（Maxim.）屬蕓香科花椒屬落葉小喬木[1]，在我國主產(chǎn)于遼寧、河北、四川、陜西。花椒果殼是中藥材也是生活中最常用調(diào)味品，據(jù)報道花椒果殼中山椒素和多酚含量高，具有多種生理活性[2]，在部分地區(qū)使用花椒葉替代花椒果殼做調(diào)味品，花椒葉化學(xué)成分中含有揮發(fā)油、山椒素、木質(zhì)素和黃酮等，資源豐富，利用較少，大量花椒葉被丟棄或焚燒，造成藥用資源的浪費。目前，國內(nèi)外研究最多的是花椒果皮和花椒籽，而對于花椒葉的研究較少。為進一步開發(fā)研究花椒葉資源的應(yīng)用途徑，本文對花椒葉的化學(xué)成分進行了研究，從中分離得到10個化合物，分別為表羽扇豆醇(1)、羽扇豆醇(2)、樺木酸(3)、-香樹脂醇(4)、-谷甾醇(5)、齊墩果酸(6)、熊果醇(7)、苯甲酸(8)、-黑麥草素(9)、-黑麥草素(10)。化合物5、7、9、10為首次從該植物中分離得到。

1 實驗部分

1.1 材料與儀器

花椒葉于2018年11月10日購自陜西省渭南市韓城市，經(jīng)甘肅省慶陽市農(nóng)業(yè)科學(xué)院高級農(nóng)藝師肖正璐鑒定為花椒葉，標本號為HJ-201811。甲醇記作M，化學(xué)純，安耐吉化學(xué)公司；正己烷記作H，化學(xué)純，安耐吉化學(xué)公司；乙酸乙酯記作E，化學(xué)純，北京伊諾凱科技有限公司。

X-6顯微熔點測定儀，北京泰克儀器有限公司；AV-600核磁共振波譜儀，Bruker公司；HITACHI L-7100半制備高效液相色譜儀，日本日立公司；不銹鋼色譜柱為5m的PREP-SIL（柱參數(shù)：250 mm×10 mm）；200～300目硅膠，青島海洋化工廠；薄層色譜硅膠板，煙臺化工廠。

1.2 提取與分離

取花椒葉3.5kg烘干后，經(jīng)研缽研碎并用M（25.0L）在25℃下浸泡，過濾，得浸提液減壓蒸餾后加水至一定體積，用H萃取4次，減壓蒸餾后得到正己烷萃取物質(zhì)量為106.7g。

取正己烷萃取物30.0g，進行硅膠柱色譜分離，依次用(H)∶(E)=95∶5（3.3 L）, 6∶4（5.5 L）, 3∶7（3.5 L），0∶1（3.2 L），(E)∶(M) = 5∶5（1.5 L）洗脫，經(jīng)TLC檢測合并相同組分，濃縮得到9個組分（H-1～H-9）。H-4（876.0 mg）經(jīng)H重結(jié)晶后得化合物5（230.5 mg）。H-7（683.9 mg）經(jīng)硅膠柱色譜分離，依次用(H)∶(E) = 7∶3（2.0 L）, 5∶5（1.0 L）, 0∶1（1.0 L）洗脫，經(jīng)TLC檢測合并相同流分，濃縮得到5個組分（H-7-1～H-7-5）。H-7-1（56.1 mg）用正相HPLC分離（(H)∶(E) = 85∶15, 流速：4 mL/min）得到化合物2（3.3mg,R= 9.87 min）, 4（1.3mg,R= 12.35 min）。H-7-2（67.1mg）用正相HPLC分離（(H)∶(E) = 85∶15，流速：4mL/min）得到組分H-7-2-6, 化合物1（3.3 mg,R= 11.17 min）, 6（1.3mg,R=14.86min）。H-7-2-6（17.1 mg）用正相HPLC分離（(H)∶(E) = 9∶1, 流速：4mL/min）得到化合物3（2.1mg,R= 27.86min）。H-7-3（322.7mg）用正相高效液相色譜分離（(H)∶(E) = 85∶15, 流速4mL/min），濃縮得到6個組分（H-7-3-1～H-7-3-6）。H-7-3-6（74.4mg）用正相高效液相色譜分離（(H)∶(E) = 8∶2, 流速：4mL/min）, 得化合物8（1.1mg,R= 7.26 min）, 9（2.0 mg,R= 37.34 min）。H-8（752.5 mg）經(jīng)硅膠柱色譜分離，依次用(H)∶(E) = 7∶3（2.0 L）, 5∶5（1.0 L）, 0∶1（1.0 L）洗脫，薄層色譜檢測合并相同組分，得到5個組分（H-8-1～H-8-5）。H-8-2（107.1mg）用正相HPLC分離（(H)∶(E) = 8∶2, 流速：4mL/min）得到化合物7（5.3 mg,R= 9.63 min）, 10（176.2mg,R= 10.37min）。

2 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：白色粉末（乙酸乙酯），mp: 198～201℃;1H-NMR(600 MHz, CDCl3): 4.69(1H, br s, H29a), 4.57(1H, br s, H29b), 3.39(1H, t,= 3.0 Hz, H3）,1.68 (3H, s, H30), 1.03 (3H, s, H26), 0.96 (3H, s, H23), 0.93 (3H, s, H27), 0.84 (3H, s, H25), 0.83 (3H, s, H24), 0.79 (3H, s, H28);13C-NMR (150 MHz, CDCl3): 151.1 (C20), 109.4 (C29), 76.3 (C3), 50.2 (C9), 49.0 (C5), 48.3 (C18), 48.0 (C19), 43.0 (C14), 42.9 (C17), 41.1 (C8), 40.0 (C22), 38.0 (C13), 37.6 (C4), 37.3 (C10), 35.7 (C16), 34.2 (C7), 33.3 (C1), 29.9 (C21), 28.3 (C23), 27.4 (C15), 25.5 (C2), 25.1 (C12), 22.2 (C24), 20.8 (C11), 19.4 (C30), 18.3 (C6), 18.0 (C28), 16.0 (C25), 15.9 (C26), 14.7 (C27)。以上結(jié)果與文獻[3]報道基本一致，鑒定為表羽扇豆醇。

化合物2：白色粉末（乙酸乙酯），mp: 173～175℃;1H-NMR (600 MHz, CDCl3): 4.68 (1H, br s, H29a), 4.56 (1H, br s, H29b), 3.19 (1H, dd,= 11.4, 4.8 Hz, H3), 1.67 (3H, s, H30), 1.03 (3H, s, H26), 0.97 (3H, s, H23), 0.94 (3H, s, H27), 0.83 (3H, s, H25), 0.79 (3H, s, H28), 0.76 (3H, s, H-24);13C-NMR (150 MHz, CDCl3): 151.0 (C20), 109.3 (C29), 79.1 (C3), 55.4 (C5),50.6 (C9), 48.3 (C18), 48.0 (C19), 43.1 (C17), 42.8 (C14), 40.9 (C8), 40.0 (C22), 38.9 (C4), 38.8 (C1), 38.0 (C13), 37.2 (C10), 35.5 (C16), 34.1 (C7), 29.7 (C21), 28.2 (C23), 27.5 (C2), 27.4 (C15), 25.2 (C12) , 20.9 (C11),19.4 (C30), 18.3 (C6), 18.2 (C28), 16.3 (C25), 16.0 (C26), 15.5 (C24), 14.6 (C27)。以上結(jié)果與文獻[4]報道基本一致，鑒定為羽扇豆醇。

化合物3：白色針狀晶體（乙酸乙酯），mp: 285～287℃;1H-NMR (600 MHz, DMSO-6)：4.74 (1H, br s, H29a), 4.61 (1H, br s, H29b), 2.95 (1H, m, H19), 1.64 (3H, s, H30), 0.93 (3H, s, H27), 0.87 (3H, s, H26), 0.85 (3H, s, H23), 0.76 (3H, s, H25), 0.64 (3H, s, H24);13C-NMR (150 MHz, DMSO-6): 177.7 (C28), 150.8 (C20), 110.3 (C29), 77.5 (C3), 56.1 (C17), 55.5 (C5), 50.6 (C9), 49.2 (C19), 47.1 (C18), 42.5 (C14), 40.7 (C8), 39.1 (C1), 38.7 (C4), 38.2 (C13), 37.2 (C10), 36.8 (C22), 34.5 (C7), 32.2 (C16), 30.7 (C15), 29.8 (C21), 28.7 (C23), 27.6 (C2), 25.6 (C12), 21.0 (C11), 19.4 (C30), 18.4 (C6), 16.5 (C25), 16.3 (C26), 16.2 (C24), 15.0 (C27)。以上結(jié)果與文獻[5]報道基本一致，鑒定為樺木酸。

化合物4：白色粉末（乙酸乙酯），mp: 188～189℃;1H-NMR (600 MHz, CDCl3): 5.12 (1H, t,= 3.0 Hz, H12),3.24 (1H, dd,= 11.4, 4.8 Hz, H3), 1.07 (3H, s, H27), 1.00 (3H, s, H26), 0.99 (3H, s, H23), 0.95 (3H, s, H25), 0.92 (3H, d,= 6.0 Hz, H30), 0.80 (3H, s, H24), 0.79 (3H, s, H28), 0.79 (3H, d,= 6.0 Hz, H29);13C-NMR (150 MHz, CDCl3): 139.7 (C13), 124.4 (C12), 79.0 (C3), 59.1 (C18), 55.2 (C5), 47.7 (C9), 42.0 (C14), 41.5 (C22), 40.0 (C8), 39.7 (C19), 39.6 (C20), 38.8 (C1), 38.7 (C4), 36.9 (C10), 33.8 (C17), 32.9 (C7), 31.3 (C21), 28.8 (C15), 28.2 (C23), 28.1 (C28), 26.6 (C2), 26.6 (C16), 23.4 (C11), 23.3 (C27), 21.4 (C30), 18.4 (C6), 17.5 (C29), 16.9 (C26), 15.7 (C25), 15.6 (C24)。以上結(jié)果與文獻[6]報道基本一致，鑒定為-香樹脂醇。

化合物5：白色針狀結(jié)晶（氯仿），mp: 132～134℃; 薄層色譜分析，經(jīng)過不同極性的薄層展開劑顯示，與谷甾醇標準品R值一致, 鑒定為谷甾醇。

化合物6：白色粉末（乙酸乙酯），mp: 259～263℃;1H-NMR (600 MHz, CDCl3): 5.28 (1H, br s, H12), 3.22 (1H, dd,= 11.4, 4.8 Hz, H3), 2.82 (1H, dd,= 13.2, 3.6 Hz, H18), 1.27 (3H, s, H27), 1.15 (3H, s, H25), 1.00 (3H, s, H29), 0.94 (3H, s, H30), 0.93 (3H, s, H24), 0.79 (3H, s, H23), 0.77 (3H, s, H26);13C-NMR (150 MHz, CDCl3): 183.4 (C28), 143.5 (C13), 122.6 (C12), 79.0 (C3), 55.2 (C5), 47.6 (C9), 46.5 (C17), 45.8 (C19), 41.6 (C14), 41.0 (C18), 39.0 (C8), 38.5 (C4), 38.2 (C1), 37.2 (C10), 33.6 (C29), 33.0 (C7), 32.6 (C21), 32.2 (C22), 30.4 (C20), 28.3 (C23), 27.4 (C15), 27.1 (C2), 25.7 (C27), 23.3 (C16), 23.4 (C30), 22.7 (C11), 18.1 (C6), 17.0 (C26), 15.5 (C24), 15.3 (C25)。以上結(jié)果與文獻[7]報道基本一致，鑒定為齊墩果酸。

化合物7：白色粉末（乙酸乙酯），mp: 208～210℃;1H-NMR (600 MHz, CDCl3)：5.13 (1H, t,= 3.6 Hz, H12), 3.54 (1H, d,= 11.0 Hz, H28a), 3.23 (1H, dd,= 11.3, 4.9 Hz, H3), 3.21 (1H, d,= 11.0 Hz, H28b), 0.79 (3H, s, H24), 0.94 (3H, s, H25), 0.97 (3H, s, H26), 1.00 (3H, s, H23), 1.17 (3H, s, H27), 0.95 (3H, d,= 6.1 Hz, H30), 0.82 (3H, d,= 5.9 Hz, H29);13C-NMR (150 MHz, CDCl3):138.7 (C13), 125.1 (C12), 79.0 (C3), 70.0 (C28), 55.2 (C5), 54.0 (C18), 47.7 (C9), 42.2 (C14), 40.0 (C8), 39.4 (C19), 39.4 (C20), 38.8 (C1), 38.0 (C4), 36.9 (C10), 35.2 (C17), 32.7 (C7), 30.6 (C21), 30.6 (C22), 28.1 (C15), 27.4 (C23), 26.0 (C2), 23.4 (C27), 23.3 (C11), 23.3 (C16), 21.3 (C30), 18.3 (C6), 17.4 (C26), 16.8 (C29), 15.7 (C25), 15.6 (C24)。以上結(jié)果與文獻[8]報道基本一致，鑒定為熊果醇。

化合物8：白色針狀晶體（乙酸乙酯），mp: 120～122℃;1H-NMR (600 MHz, CDCl3)：8.13 (2H, d,= 7.2 Hz, H2,6), 7.63 (1H, t,=7.2 Hz, H4), 7.49 (2H, t,= 7.2 Hz, H3,5);13C-NMR (150 MHz, CDCl3)：171.5(C7), 133.8 (C4), 130.2 (C2,6), 129.2 (C1), 128.5 (C3,5)。以上結(jié)果與文獻[9]報道基本一致，鑒定為苯甲酸。

化合物9：白色粉末（乙酸乙酯），mp: 147.3～148.7℃;1H-NMR (600 MHz, CDCl3)：5.69 (1H, s, H7), 4.33 (1H, m, H3), 2.47 (1H, br d,= 13.9 Hz, H2a), 1.96 (1H, br,= 13.9 Hz, H2b), 1.76 (3H, s, H9), 1.45 (3H, s, H11), 1.25 (3H, s, H10);13C-NMR (150 MHz, CDCl3): 182.1 (C8), 172.2 (C6), 112.7 (C7), 86.4 (C1), 66.6 (C3), 47.2 (C2), 45.4 (C4), 35.7 (C5), 30.4 (C9), 27.2 (C10), 26.2 (C11)。以上結(jié)果與文獻[10]報道基本一致，鑒定為-黑麥草素。

化合物10：白色粉末（乙酸乙酯），mp: 147～148℃;1H-NMR (600 MHz, CDCl3): 5.69 (1H, s, H7), 4.33 (1H, m, H3), 2.47 (1H, br d,= 13.9 Hz, H2a), 1.96 (1H, br d,= 13.9 Hz, H2b), 1.76 (3H, s, H9), 1.45 (3H, s, H11), 1.25 (3H, s, H10);13C-NMR (150 MHz, CDCl3)：182.3 (C8), 171.6 (C6), 112.7 (C7), 86.4(C1), 66.6(C3), 47.2(C2), 45.4(C4), 35.7(C5), 30.5 (C9), 27.2 (C10), 26.3 (C11)。以上結(jié)果與文獻[11]報道基本一致，鑒定為-黑麥草素。

3 結(jié)論

本研究從花椒葉中分離鑒定了10個單體化合物，其中化合物5，7，9，10為首次在花椒中分離得到?；衔?有降膽固醇、用于II型高脂血癥[12]。化合物2加速皮膚自愈能力作用[13]、對小鼠的黑色素堆積有一定的抑制作用?；衔?對腦瘤、神經(jīng)外胚層瘤、白血病等惡性腫瘤細胞[14]也有抑制作用，化合物6具有保肝、抗炎、鎮(zhèn)痛、抗腫瘤、抗病毒、抗焦慮等多種生物活性[15]，這些具有活性的成分均可在花椒葉中分離得到，同時證明花椒葉具有較好的藥物開發(fā)前景。

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Chemical constituents from leaves ofMaxim.

JIAO Xin-yang1，LI Jun1,2＊，SUN Li-qiu1,2，SHIZhi-chun1,2，WANG Jin-lan1,2，ZHAO Ming1,2，ZHANG Shu-jun1,2

(1.College of Chemistry and Chemical Engineering, Qiqihar University, Heilongjiang Qiqihar 161006, China;2.Heilongjiang Industrial Hemp Processing Technology Innovation Center, HeilongjiangQiqihar 161006, China)

Ten compounds were isolated and purified from methanol extract of leaves ofMaxim. by silica gel column chromatography, semi preparative high performance liquid chromatography and thin layer chromatography, their structures were identified by literature spectral data and physical and chemical properties: epilupinol(1), lupinol(2), betulinic acid(3),-rosin alcohol(4),-sitosterol(5), oleanolic acid(6), arbutin(7), benzoicacid(8),-ryegrass(9),-ryegrass(10). Compounds 5, 7, 9, 10 was isolated from this plant for the first time.

leaves ofMaxim；ryegrass；triterpene

2020-11-24

黑龍江省屬高等學(xué)?；究蒲袠I(yè)務(wù)費項目（135309301，135109207）

焦鑫陽（1995-），男，黑龍江綏化人，在讀碩士，主要從事天然產(chǎn)物化學(xué)研究，937908934@qq.com。

李軍，男，副教授，碩士生導(dǎo)師，主要從事天然產(chǎn)物化學(xué)研究，837534403@qq.com。

R284.1

A

1007-984X(2022)03-0060-03