興安蒲公英乙酸乙酯萃取物化學(xué)成分研究

李雨澤，時(shí)志春,2，孫立秋,2，李軍,2，王金蘭,2，趙明,2，張樹(shù)軍,2

興安蒲公英乙酸乙酯萃取物化學(xué)成分研究

李雨澤1，時(shí)志春1,2＊，孫立秋1,2，李軍1,2，王金蘭1,2，趙明1,2，張樹(shù)軍1,2

（1.齊齊哈爾大學(xué) 化學(xué)與化學(xué)工程學(xué)院，黑龍江 齊齊哈爾 161006；2.黑龍江省工業(yè)大麻加工技術(shù)創(chuàng)新中心，黑龍江 齊齊哈爾 161006）

采用薄層色譜、硅膠柱層析和半制備反相高效液相色譜等分離方法對(duì)興安蒲公英甲醇提取液乙酸乙酯萃取物進(jìn)行分離純化，得到6個(gè)單體化合物，依據(jù)波譜數(shù)據(jù)分析及理化性質(zhì)鑒定了化合物1～6的結(jié)構(gòu)分別為：對(duì)羥基苯乙酸甲酯(1)、對(duì)羥基苯甲酸(2)、辛二酸二甲酯(3)、對(duì)香豆酸(4)、黑麥草內(nèi)酯(5)、苯甲酸(6)，化合物3和5為第一次從興安蒲公英中分離得到。

菊科；興安蒲公英；酚酸

蒲公英（）為菊科蒲公英屬多年生草本植物，別名婆婆丁、華花郎、黃花地丁等，性味甘、微苦、寒，全草可入藥，有清熱解毒與利尿散結(jié)等功效，用于治療急性結(jié)膜炎、急性乳腺炎、急性扁桃體炎、淋巴腺炎、療毒瘡腫、腫囊炎、感冒發(fā)熱、急性支氣管炎、肝炎及尿路感染等各種疾病[1]。蒲公英屬植物含有多種化學(xué)成分——黃酮類(lèi)、酚酸類(lèi)及倍半萜類(lèi)等[2-4]，有明顯抗炎、抗氧化和抗腫瘤等生物活性[5]。興安蒲公英（Kitag.）屬于蒲公英屬植物中的一種，在大興安嶺地區(qū)有廣泛分布，資源豐富[6]。為了進(jìn)一步完善蒲公英化學(xué)成分研究。本文對(duì)Kitag.進(jìn)行化學(xué)成分研究，依據(jù)波譜數(shù)據(jù)等分析方法確定了化合物1～6的化學(xué)結(jié)構(gòu)分別為：對(duì)羥基苯乙酸甲酯(1)、對(duì)羥基苯甲酸(2)、辛二酸二甲酯(3)、對(duì)香豆酸(4)、黑麥草內(nèi)酯(5)、苯甲酸(6)。辛二酸二甲酯(3)和黑麥草內(nèi)酯(5)為首次從興安蒲公英中分離得到。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 材料與儀器

興安蒲公英于2018年6月2日采自?xún)?nèi)蒙古根河市，經(jīng)齊齊哈爾大學(xué)沙偉教授鑒定為興安蒲公英，標(biāo)本（No. Ts-20180602）收藏于齊齊哈爾大學(xué)天然產(chǎn)物研究室。正己烷（n-Hexane）為市售正己烷，在68.8℃收集的餾分，記為H；乙酸乙酯（EtOAc）為市售乙酸乙酯，在77.1℃收集的餾分，記為E；甲醇（MeOH）為市售甲醇，在64.7℃收集的餾分，記為M，冰乙酸（AcOH, 記為HAc），乙腈（CH3CN，記為ACN），均為分析純（≥99.5%），為遼寧泉瑞試劑有限公司生產(chǎn)。

AV-600核磁共振波譜儀，Bruker公司；HITACHI L-7100高效液相色譜儀，日本日立公司；PREP-ODS 10×250 mm色譜柱，日本日立公司；RE-52 AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，上海亞榮生化儀器廠；X-6熔點(diǎn)測(cè)定儀，北京泰克儀器有限公司；HANGPING JA2003電子天平，上海精科實(shí)業(yè)有限公司；AUTOPOL V旋光儀，美國(guó)魯?shù)婪蚬尽?00～300目柱層析用硅膠，青島海洋化工廠；20 cm×20 cm薄層層析板，煙臺(tái)化工廠。

1.2 提取分離

取1.6kg干燥的興安蒲公英地上部分，在室溫條件下用8L甲醇浸泡3d后過(guò)濾，重復(fù)3次，將得到的甲醇提取液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸發(fā)濃縮至小體積，加水將甲醇提取液混懸，依次用正己烷、乙酸乙酯萃取3次，合并相同溶劑萃取液分別用旋蒸濃縮至恒重，得到正己烷萃取物57.7g，乙酸乙酯萃取物18.2g。

取乙酸乙酯萃取物17.5g，用硅膠柱色譜法分離，依次用(正己烷)∶(乙酸乙酯) = 5∶5（6.5 L），2∶8（6.0 L），(乙酸乙酯)∶(甲醇) = 8∶2（6.0 L），5∶5（5.0 L），0∶1（5.0 L）洗脫，經(jīng)TLC檢測(cè)合并相同流分，減壓濃縮得到10個(gè)組分（F1～F10）。F3（1.6 g）用硅膠柱層析分離，依次用(正己烷)∶(乙酸乙酯) = 7∶3（1.7 L），5∶5（0.9 L），0∶1（1.0L），(乙酸乙酯)∶(甲醇) = 5∶5（0.9 L）洗脫。經(jīng)TLC檢測(cè)合并相同流分，減壓濃縮得到9個(gè)組分（F3-1～F3-9）。其中F3-4（210.1 mg）用RP-HPLC（流動(dòng)相為(甲醇)∶(水)=4∶6，流速為5mL/min）純化，得到化合物1（1.5 mg,R= 7.5 min）。F3-5（83.9 mg）用RP-HPLC（流動(dòng)相為(甲醇)∶(水)= 4∶6，流速為5mL/min）純化，得到化合物2（3.8 mg，R= 6.5 min）。F3-6（83.9 mg）用RP-HPLC（流動(dòng)相為(甲醇)∶(水)∶(冰乙酸) = 6∶4∶0.3%，流速為4 mL/min）純化，得到化合物3（2.5 mg,R=10.5 min）。F4（1.5 g）用硅膠柱層析分離，依次用(正己烷)∶(乙酸乙酯) = 5∶5（2.0 L）, 2∶8（0.5 L）, 0∶1（0.5 L）,(乙酸乙酯)∶(甲醇) = 0∶1（0.5 L）洗脫。經(jīng)TLC檢測(cè)合并相同流分，減壓濃縮得到6個(gè)組分（F4-1～F4-6）。其中F4-2（150.2 mg）用RP-HPLC（流動(dòng)相為(甲醇)∶(水)= 9∶1，流速為4mL/min）分離，得到6個(gè)組分（F4-2-1～F4-2-6），F(xiàn)4-2-1（83.8 mg）用RP-HPLC（流動(dòng)相為(甲醇)∶(乙腈)∶(水)∶(冰乙酸) = 25∶10∶65∶0.5%，流速為4 mL/min）分離純化，得化合物4（2.4mg,R= 12.0min）。F4-6（413.5mg）用硅膠柱層析分離，依次用(正己烷)∶(乙酸乙酯) = 7∶3（0.5 L）, 5∶5（0.5 L）,(乙酸乙酯)∶(甲醇) = 5∶5（0.5 L）, 0∶1（0.2 L）洗脫。經(jīng)TLC檢測(cè)合并相同流分，濃縮得到4個(gè)組分（F4-6-1～F4-6-4）。F4-6-2（57.5 mg）用RP-HPLC（流動(dòng)相為(甲醇)∶(水)= 65∶35，流速為4mL/min）純化，得到化合物5（4.5mg,R=4 .8min）和其它3個(gè)組分（F4-6-2-1～F4-6-2-3）。F4-6-2-1（19.6mg）用RP-HPLC（流動(dòng)相為(甲醇)∶(乙腈)∶(水)∶(冰乙酸) = 12∶8∶80∶0.5%，流速為4 mL/min）分離純化，得到化合物6（9.5 mg,R=15.0min）。

2 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：淺黃色油狀物（甲醇），mp: 110～119.8℃；1H-NMR (600 MHz, CDCl3)：7.12 (2H, d,= 8.4Hz,H2,6), 6.78 (2H, d,= 8.4Hz, H3,5), 3.54 (2H, s, H7), 3.69 (3H, s, -OCH3)；13C-NMR (150MHz, CDCl3)：125.8 (C1), 130.4 (C2,6), 115.4 (C3,5), 155.1 (C4), 40.3 (C7), 177.6 (C8), 52.0 (C1')。數(shù)據(jù)與參考文獻(xiàn)[7]基本一致，鑒定為對(duì)羥基苯乙酸甲酯。

化合物2：白色粉末（甲醇），mp: 212～215℃;1H-NMR (600 MHz, DMSO-6)：7.79 (2H, d,= 8.4 Hz, H2, 6), 6.81 (2H, d,= 8.4 Hz, H3,5);13C-NMR (150 MHz, DMSO-6)：167.1 (-COOH), 161.8 (C4), 131.9 (C2,6), 130.6 (C1), 115.4 (C3,5)。數(shù)據(jù)與參考文獻(xiàn)[8]基本一致，鑒定為對(duì)羥基苯甲酸。

化合物3：無(wú)色油狀物，1H-NMR (600 MHz, CDCl3)：3.67 (6H, s, -OCH3), 2.30 (4H, t,= 7.2 Hz, H2,7), 1.62 (4H, m, H3,6), 1.32 (4H, m, H4,5);13C-NMR (150 MHz, CDCl3): 174.3 (C1,8), 51.5 (C1',8'), 34.0 (C2,7), 28.9 (C3,6), 24.8 (C4,5)。數(shù)據(jù)與參考文獻(xiàn)[9]基本一致，鑒定為辛二酸二甲酯。

化合物4：白色粉末（甲醇），mp: 210～213℃;1H-NMR (600 MHz, DMSO-6)：7.51 (2H, d,= 8.4Hz, H2,6),7.49 (2H, d,= 18.0 Hz, H7),6.79 (2H, d,= 8.4 Hz H3,5), 6.29 (1H, d,= 18.0 Hz, H8);13C-NMR (150 MHz, DMSO-6)：168.5 (-COOH), 160.0 (C4), 144.5 (C7), 132.7 (C2,6), 125.8 (C1), 116.2 (C3,5), 115.3 (C8)。數(shù)據(jù)與參考文獻(xiàn)[10]基本一致，鑒定為對(duì)香豆酸。

化合物5：無(wú)色晶體（甲醇），mp: 147～148℃;1H-NMR (600 MHz, CDCl3)：5.69 (1H, s, H7), 4.34 (1H, m, H3), 2.47 (1H, dt,= 13.8 Hz, 3.0 Hz, H4), 1.98 (1H, dt,= 13.8Hz, 3.0Hz, H2), 1.79 (1H, dd,= 9.0Hz, 4.2 Hz, H4), 1.78 (3H, s, H11), 1.53 (1H, dd,= 15.0Hz, 3.6Hz, H2), 1.47 (3H, s, H10), 1.28 (3H, s, H9);13C-NMR (150MHz, CDCl3)：182.4 (C8), 171.9 (C6), 112.9 (C7), 86.6 (C5), 66.9 (C3), 47.3 (C2), 45.6 (C4), 35.9 (C1), 30.7 (C10), 27.0 (C11), 26.5 (C9)。數(shù)據(jù)與參考文獻(xiàn)[11]基本一致，鑒定為黑麥草內(nèi)酯。

化合物6：白色粉末（丙酮），mp: 122～123℃;1H-NMR (600 MHz,CDCl3)：8.14 (2H, d,= 7.6 Hz, H2,6), 7.62 (1H, t,= 7.6 Hz, H4), 7.48 (2H, t,= 7.6 Hz, H3,5);13C-NMR (CDCl3, 150MHz)：171.9 (C7), 133.7 (C4), 130.1 (C1), 129.2 (C2,6), 128.5 (C3,5)。數(shù)據(jù)與參考文獻(xiàn)[12]對(duì)照基本一致，鑒定為苯甲酸。

3 結(jié)論

本文對(duì)興安蒲公英甲醇提取液乙酸乙酯萃取物進(jìn)行化學(xué)成分研究，依據(jù)波譜數(shù)據(jù)等分析方法確定了化合物1～6的結(jié)構(gòu)分別為：對(duì)羥基苯乙酸甲酯(1)、對(duì)羥基苯甲酸(2)、辛二酸二甲酯(3)、對(duì)香豆酸(4)、黑麥草內(nèi)酯(5)、苯甲酸(6)。其中辛二酸二甲酯(3)和黑麥草內(nèi)酯(5)為第一次從蒲公英中分離得到，該研究結(jié)果進(jìn)一步豐富了蒲公英中化學(xué)成分的結(jié)構(gòu)類(lèi)型。本文分離得到的化合物大多屬于酚酸類(lèi)成分。由于酚酸具有良好的抗氧化活性和抑菌活性等，可做食品的抗氧化劑和防腐劑[13]。興安蒲公英作為藥食兩用植物，具有資源豐富，價(jià)格低廉等優(yōu)勢(shì)，本文的研究結(jié)果也可為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用興安蒲公英資源提供理論依據(jù)。

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Chemical constituents of ethyl acetate extract ofKitag.

LI Yu-ze1，SHI Zhi-chun1,2＊，SUN Li-qiu1,2，LI Jun1,2，WANG Jin-lan1,2，ZHAO Ming1,2，ZHANG Shu-jun1,2

(1.College of Chemistry and Chemical Engineering, Qiqihar University, Heilongjiang Qiqihar 161006, China;2.Heilongjiang Industrial Hemp Processing Technology Innovation Center, HeilongjiangQiqihar 161006, China)

Six compounds were isolated and purified from ethyl acetate fraction in the methanol extract ofKitag. by thin layer chromatography, silica gel column chromatography and semi preparative reversed-phase high performance liquid chromatography. The structures of compounds 1～6were identified by analysis on their spectral data and physicochemical properties as methyl 4-hydroxyphenylacetate(1),-hydroxybenzoic acid(2), dimethyl suberate(3),-coumaric acid(4), loliolode(5) and benzoic acid(6), Compounds 3 and 5 were isolated from this plant for the first time.

Compositae；Kitag.；phenolic acid

2021-11-24

黑龍江省屬高等學(xué)校基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)項(xiàng)目（135309301，135109207）

李雨澤（1996-），男，黑龍江大慶人，在讀碩士，主要從事天然產(chǎn)物化學(xué)研究，1269678067@qq.com。

時(shí)志春（1986-），男，講師，博士，主要從事天然產(chǎn)物化學(xué)研究，shizhichun1008@163.com。

R284.1

A

1007-984X(2022)03-0057-03