核酸檢測聯(lián)合ELISA檢測技術(shù)在獻(xiàn)血者血液篩查中的應(yīng)用價(jià)值分析

李冰芳，姚映卿

（莆田市中心血站，福建 莆田 351100）

輸血性傳染病的主要傳播載體即為血液及血液制品，檢測血液中病毒標(biāo)記物，可預(yù)防輸血傳播疾?。?］。臨床通過檢測病毒的抗原、抗體進(jìn)行血液篩查，以降低血液傳染性疾病的傳播，但仍無法避免，輸血傳播疾病頻頻發(fā)生，可見單純的檢測抗原、抗體無法完全保證血液安全。相關(guān)研究［2］表明，血液中病毒進(jìn)入人體后，到可檢測到病毒抗原、抗體前需要一段時(shí)間，此時(shí)間被稱為感染的“窗口期”。 “窗口期”血液及血液制品病毒感染經(jīng)酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測無法檢出，檢測結(jié)果為陰性，但實(shí)際上血液中已存在病毒，隨著病毒不斷復(fù)制而出現(xiàn)改變。若能縮短病毒檢測的“窗口期”，可利于提高病毒檢出，預(yù)防疾病傳播。核酸檢測（NAT）是篩查血液的重要方法，具有敏感度高、特異度高等優(yōu)勢，可縮短“窗口期”，降低疾病傳播風(fēng)險(xiǎn)［3］。鑒于此，本研究探討NAT聯(lián)合ELISA檢測技術(shù)在獻(xiàn)血者血液篩查中的應(yīng)用價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本來源選擇2021年1月至2021年10月在本地區(qū)采集的19845份無償獻(xiàn)血標(biāo)本，均經(jīng)至少一種酶免試劑檢測為陰性，各個(gè)獻(xiàn)血者留取2管標(biāo)本，每管5 mL，分別進(jìn)行ELISA、NAT檢測。所有標(biāo)本均進(jìn)行離心操作，4 h內(nèi)完成所有步驟，置入2℃～8℃的冰箱保存待測，若當(dāng)天不能完成檢測，需將標(biāo)本轉(zhuǎn)移至-20℃的冰箱凍存。

1.2 儀器與試劑使用諾華診斷公司生產(chǎn)的Procleix Panther system全自動(dòng)核酸檢測分析系統(tǒng)、上海浩源生物科技有限公司生產(chǎn)的全自動(dòng)核酸純化儀（ChiTaS BSS1200）和ABI7500基因擴(kuò)增儀，所有試劑均為產(chǎn)品配套試劑，嚴(yán)格按照說明書操作。

1.3 方法對所有標(biāo)本均使用兩種不同的ELISA試劑進(jìn)行檢測，對至少有一種試劑結(jié)果為陰性的標(biāo)本進(jìn)行NAT檢測，分別使用浩源檢測系統(tǒng)或諾華檢測系統(tǒng)進(jìn)行同時(shí)檢測。①浩源系統(tǒng)NAT檢測：檢測模式選擇8人份標(biāo)本混合檢測，每份標(biāo)本以200 μL血漿作為取樣量，由自動(dòng)提取儀進(jìn)行提取，并使用擴(kuò)增儀系統(tǒng)進(jìn)行分析，每組檢測均需設(shè)置陰陽性對照，均含室內(nèi)質(zhì)控。檢測結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)：檢測完成是指標(biāo)本判定為NAT非反應(yīng)性；若出現(xiàn)反應(yīng)性，再進(jìn)行拆分檢測，檢測有反應(yīng)性的標(biāo)本即可判定為不合格。②諾華系統(tǒng)NAT檢測：檢測模式選擇單人份標(biāo)本聯(lián)檢，向一級反應(yīng)池提取500 μL血漿，使用全自動(dòng)核酸檢測分析儀進(jìn)行檢測，結(jié)果由服務(wù)器自動(dòng)判讀。所有檢測需設(shè)置陰陽性校準(zhǔn)物，均含室內(nèi)質(zhì)控。若標(biāo)本判定為NAT非反應(yīng)性則提示檢測完成；而若呈反應(yīng)性，則進(jìn)行鑒別檢測，檢測有反應(yīng)性的標(biāo)本即可判定為不合格。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件分析數(shù)據(jù)。計(jì)數(shù)資料以n（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 NAT檢測情況19845份無償獻(xiàn)血標(biāo)本經(jīng)NAT檢測，一級反應(yīng)池共檢測了4205個(gè)，其中出現(xiàn)85個(gè)反應(yīng)性一級反應(yīng)池，反應(yīng)率為2.02%（85／4205）；拆分后進(jìn)行單檢或再鑒別檢測，共有44份標(biāo)本出現(xiàn)反應(yīng)性，總反應(yīng)率為0.22%（44／19845）。

2.2 不同系統(tǒng)NAT檢測情況諾華操作系統(tǒng)共檢測1970份標(biāo)本，出現(xiàn)8個(gè)反應(yīng)性，反應(yīng)率為0.41%（8／1970）；然后再進(jìn)行鑒別檢測，共4份標(biāo)本出現(xiàn)反應(yīng)性，反應(yīng)率為0.20%（4／1970）。浩源操作系統(tǒng)共檢測17875份標(biāo)本，出現(xiàn)77個(gè)反應(yīng)性一級混樣池，反應(yīng)率為0.43%（77／17875）；拆分后進(jìn)行單檢，共40份標(biāo)本出現(xiàn)反應(yīng)性，反應(yīng)率為0.22%（40／17875）。兩種操 作系統(tǒng) 反應(yīng)率 比較無 統(tǒng)計(jì)學(xué)差 異（χ2＝0.004，P＝0.947）。見表1。

表1 不同系統(tǒng)NAT檢測情況

3 討論

輸血治療是多種疾病傳播的重要途徑，雖然在輸血治療前會對血液進(jìn)行基本傳染病化驗(yàn)，但仍會發(fā)生感染，無法完全避免輸血疾病的傳播［4］。目前，大部分血站篩查血液仍采用ELISA檢測技術(shù)對乙肝、丙肝、艾滋病等病毒進(jìn)行篩查，但由于該方法“窗口期”較長，且易出現(xiàn)免疫沉默，導(dǎo)致敏感度較低，漏檢情況頻發(fā)［5］，在輸血臨床中已引起高度重視。

研究［6］表明，ELISA檢測中的血清轉(zhuǎn)化“窗口期”是導(dǎo)致漏檢的主要原因，故若能縮短“窗口期”則可降低漏檢率，提高敏感度。隨著血液檢測技術(shù)不斷發(fā)展，NAT檢測已覆蓋發(fā)達(dá)城市大部分血站，在血液篩查中越來越常用，該項(xiàng)檢測技術(shù)可直擊病毒DNA或RNA結(jié)構(gòu)，檢測血液中有無病毒核酸，判斷血液是否攜帶感染病毒，應(yīng)用價(jià)值較高［7］。NAT檢測在一些發(fā)達(dá)國家已被作為獻(xiàn)血者常規(guī)篩查項(xiàng)目，我國已逐步展開并取得了一定成效，可明顯縮短“窗口期”，彌補(bǔ)ELISA存在的不足［8］。本研究結(jié)果顯示，19845份無償獻(xiàn)血標(biāo)本經(jīng)NAT檢測，一級反應(yīng)池共檢測了4205個(gè)，其中出現(xiàn)85個(gè)反應(yīng)性一級反應(yīng)池，反應(yīng)率為2.02%；拆分后進(jìn)行單檢或再鑒別檢測，共有44份標(biāo)本出現(xiàn)反應(yīng)性，總反應(yīng)率為0.22%。諾華操作系統(tǒng)共檢測1970份標(biāo)本，出現(xiàn)8個(gè)反應(yīng)性，反應(yīng)率為0.41%；然后再進(jìn)行鑒別檢測，共4份標(biāo)本出現(xiàn)反應(yīng)性，反應(yīng)率為0.20%。浩源操作系統(tǒng)共檢測17875份標(biāo)本，出現(xiàn)77個(gè)反應(yīng)性一級混樣池，反應(yīng)率為0.43%；拆分后進(jìn)行單檢，共40份標(biāo)本出現(xiàn)反應(yīng)性，反應(yīng)率為0.22%；兩種操作系統(tǒng)反應(yīng)率相比未見明顯差異。上述結(jié)果表明，獻(xiàn)血者血液篩查中ELISA檢測易出現(xiàn)漏診，若聯(lián)合NAT檢測則可起到補(bǔ)充作用，提高陽性檢出率。究其原因?yàn)?，NAT檢測在人員技術(shù)培訓(xùn)、檢測步驟、質(zhì)量控制等方面已形成一套科學(xué)規(guī)范的流程，具有較高的可行性與操作性，與ELISA檢測聯(lián)用可發(fā)揮不同程度的檢測效能，提高血液陽性檢出率，確保血液質(zhì)量，提高輸血安全。ELISA是檢測輸血傳播性疾病的常用方法，通過檢測血液中病毒或螺旋體的抗體，具有較高靈敏度，但特異度低下，非特異性反應(yīng)升高，導(dǎo)致假陽性頻發(fā)。ELISA與NAT檢測相互補(bǔ)充，病毒從感染人體到體內(nèi)復(fù)制，到發(fā)病的過程，病毒核酸及蛋白，人體抗體蛋白的產(chǎn)生量是個(gè)動(dòng)態(tài)過程，經(jīng)ELISA單試劑檢測陽性標(biāo)本多數(shù)經(jīng)NAT檢測為非反應(yīng)性，可見標(biāo)本可能發(fā)生了非特異性反應(yīng)。

綜上所述，獻(xiàn)血者血液篩查中ELISA檢測易出現(xiàn)漏診，若聯(lián)合NAT檢測則可起到補(bǔ)充作用，提高陽性檢出率。