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    長(zhǎng)鏈非編碼RNA LINC00671對(duì)肝細(xì)胞肝癌生物學(xué)行為的影響及機(jī)制

    2022-11-27 08:54:40孫玉琪田佳琪孫榕婍蔣英英
    中國(guó)癌癥雜志 2022年10期
    關(guān)鍵詞:濰坊細(xì)胞系甲基化

    郭 濤,宋 寧,孫玉琪,田佳琪,唐 婕,孫榕婍,蔣英英,

    1.濰坊醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病理生理學(xué)教研室,山東 濰坊 261053;2.濰坊醫(yī)學(xué)院口腔醫(yī)學(xué)院,山東 濰坊 261053;3.濰坊醫(yī)學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)院,山東 濰坊 261053;4.濰坊醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院口腔科,山東 濰坊 261035

    肝細(xì)胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是全球常見的腫瘤,也是主要的致死性腫瘤之一[1]。隨著臨床診療技術(shù)水平的不斷提高,HCC的治療和管理取得了顯著進(jìn)展,但其高復(fù)發(fā)率和低生存率的現(xiàn)狀依然如故,且新增病例仍呈上升趨勢(shì)[2]。對(duì)于HCC的病因,目前已知其與多種因素有關(guān),包括乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)感染、非乙醇性脂肪性肝?。╪onalcoholic fatty liver disease,NAFLD)、酗酒等引起的肝纖維化以及吸煙、黃曲霉素接觸等飲食環(huán)境因素[3]。

    另一方面,隨著基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究的深入,HCC進(jìn)展過(guò)程中越來(lái)越多的分子失調(diào)事件被證實(shí),從蛋白到核酸再到小分子化合物。這些物質(zhì)的失調(diào)往往與HCC的發(fā)生、發(fā)展存在密不可分的關(guān)系,有些甚至直接參與HCC發(fā)生、發(fā)展的始終[4]。近年來(lái),長(zhǎng)鏈非編碼RNA(long noncoding RNA,lncRNA)與腫瘤的關(guān)系逐漸成為新的研究熱點(diǎn)。LncRNA是指長(zhǎng)度大于200個(gè)核苷酸的鏈狀RNA分子,其由基因組轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生,但并不具備蛋白翻譯潛能[5]。在HCC中,人們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)多種lncRNA失調(diào)表達(dá)并行使多種分子功能來(lái)調(diào)控HCC的發(fā)生、發(fā)展[6]。其作用涉及基因生命周期的各個(gè)方面,包括轉(zhuǎn)錄、剪接、RNA衰變和翻譯;同時(shí)參與腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移、侵襲、凋亡、血管生成和耐藥性調(diào)節(jié)[7]。

    有研究報(bào)道,作為一種功能性的lncRNA,長(zhǎng)基因間非蛋白編碼RNA 671(long intergenic non-protein coding RNA 671,LINC00671)在腫瘤中具有抑癌潛能,但其對(duì)HCC的具體影響和作用機(jī)制尚未見報(bào)道。本項(xiàng)目擬探討LINC00671對(duì)HCC體外腫瘤生物學(xué)行為的影響并初步了解其作用機(jī)制,旨在為HCC患者尋找新的治療靶點(diǎn)。

    1 材料和方法

    1.1 材料與試劑

    HCC相關(guān)細(xì)胞系購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院典型培養(yǎng)物保藏委員會(huì)細(xì)胞庫(kù)/中國(guó)科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院細(xì)胞資源中心,10%的胎牛血清購(gòu)自美國(guó)Gibco公司,細(xì)胞培養(yǎng)箱和LipofectamineTM2000購(gòu)自美國(guó)ThermoFisher公司,反義寡核苷酸(antisense oligonucleotide,ASO)、過(guò)表達(dá)質(zhì)粒及LINC00671探針均購(gòu)自廣州市銳博生物科技有限公司,碘化丙啶購(gòu)自國(guó)藥(上海)國(guó)際醫(yī)藥衛(wèi)生有限公司,聚偏二氟乙烯(polyvinylidene fluoride,PVDF)膜和transwell小室購(gòu)自美國(guó)Millipore公司,ECM550基質(zhì)膠購(gòu)自美國(guó)Chemicon公司,細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)購(gòu)自日本Dojindo公司。

    所有細(xì)胞均采用高糖DMEM加10%的胎牛血清組成的完全培養(yǎng)基,置于37 ℃、CO2體積分?jǐn)?shù)為5%的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑采用無(wú)血清DMEM混合LipofectamineTM2000進(jìn)行ASO及LINC00671過(guò)表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染。

    1.2 實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)

    使用TRIzol試劑(美國(guó)ThermoFisher公司)進(jìn)行細(xì)胞總RNA分離提取,并用反轉(zhuǎn)錄試劑盒[寶生物工程(大連)有限公司]在體外進(jìn)行R N A 反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)將R N A 反轉(zhuǎn)錄成cDNA。PCR反應(yīng)采用2 μL反應(yīng)模板的20 μL反應(yīng)體系,預(yù)變性參數(shù):95 ℃、5 min;循環(huán)參數(shù):94 ℃變性30 s,59 ℃退火30 s,72 ℃延伸30 s,并進(jìn)行35個(gè)循環(huán)。整個(gè)反應(yīng)在Bio-rad 3.0 PCR儀上進(jìn)行,引物如下:LINC00671上游引物5'-CCTGGGCTTCCTGCTGAGAC-3',LINC00671下游引物5'-CGTCCACACCTCTG CTCCTTC -3 ';c-myc上游引物5'-CAAGAGGCGAACACACAACGTCT-3',c-myc下游引物5'-AACTGTTCTCGTCGTTT CCGCAA-3';選擇GAPDH為內(nèi)參,其上游引物5'-GGTATCGTGGAAGGACTCAT-3',下游引物為5'-CCTTGCCCACAGCCTTG-3';實(shí)驗(yàn)結(jié)果取2-ΔΔCT進(jìn)行比較。

    1.3 蛋白質(zhì)印跡法(Western blot)檢測(cè)

    將提取的細(xì)胞總蛋白加入蛋白緩沖液(美國(guó)Sigma-Aldrich公司),95 ℃變性10 min。蛋白樣品用10%十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(sodium dodecylsulphate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)分離,并轉(zhuǎn)移到PVDF膜上。加入4 ℃一抗(c-myc、GAPDH為1∶2000,武漢三鷹生物技術(shù)有限公司)溫育過(guò)夜,加入對(duì)應(yīng)二抗(1∶2000,武漢三鷹生物技術(shù)有限公司)。暗室中用ECL發(fā)光液(美國(guó)MedChemExpress公司)顯影條帶并壓片曝光。

    1.4 RNA熒光原位雜交(fluorescence in situ hybridization,F(xiàn)ISH)

    細(xì)胞在預(yù)雜交緩沖液處理后,雜交緩沖液中稀釋LINC00671探針混合,并在37 ℃下培養(yǎng)溫育過(guò)夜。DNA在密封前用DAPI染色10 min。在相同的光學(xué)強(qiáng)度條件下,用激光共聚焦成像系統(tǒng)(日本Olympus公司)觀察LINC00671亞細(xì)胞定位。

    1.5 細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)

    采用CCK-8轉(zhuǎn)染細(xì)胞并接種在24孔板中,每孔2×104~5×104個(gè)細(xì)胞,常規(guī)環(huán)境中培養(yǎng),在0、24、48和72 h于450 nm波長(zhǎng)的D值下評(píng)估細(xì)胞增殖情況。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

    1.6 細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)

    對(duì)于凋亡實(shí)驗(yàn),選擇流式細(xì)胞術(shù)分析進(jìn)行定量比較。細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染處理后,利用膜聯(lián)蛋白Ⅴ和碘化丙啶對(duì)培養(yǎng)物進(jìn)行30 min的雙重染色。收集培養(yǎng)物,并通過(guò)配備CellQuest 3.3計(jì)算機(jī)程序的流式細(xì)胞儀檢查細(xì)胞凋亡情況,凋亡率以早期凋亡加晚期凋亡計(jì)算。

    1.7 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)

    細(xì)胞轉(zhuǎn)染處理后,通過(guò)在培養(yǎng)板(1×106)中使用100 μL塑料移液管尖端進(jìn)行垂直劃痕。劃痕后,繼續(xù)培養(yǎng)24 h,觀察劃痕大小并在光學(xué)顯微鏡下拍照。以(0~24 h)/0 h為愈合百分比定量,測(cè)量虛線區(qū)域之間的細(xì)胞垂直遷移寬度比來(lái)評(píng)估腫瘤細(xì)胞遷移情況。

    1.8 細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)

    將轉(zhuǎn)染處理后的細(xì)胞接種于帶有8 μm孔徑聚碳酸酯過(guò)濾器的transwell小室內(nèi),并在此之前于底部鋪上ECM550基質(zhì)膠。將裝有無(wú)血清培養(yǎng)基的小室置于含完全培養(yǎng)基的24孔板中培養(yǎng)24 h后,取出小室,細(xì)胞固定并染色拍照。

    1.9 在線生物信息學(xué)分析系統(tǒng)

    LINC00671在HCC及正常肝組織中的表達(dá)、預(yù)后及相關(guān)性分析在GEPIA(Gene Expression Profiling Interactive Analysis;http://gepia2.cancerpku.cn/#index)及starBase 3.0(Encyclopedia of RNA Interactomes,ENCORI;https://starbase.sysu.edu.cn/)數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行[8-10];LINC00671的亞細(xì)胞定位通過(guò)lncAtlas網(wǎng)站(https://lncatlas.crg.eu/)進(jìn)行預(yù)測(cè)[11];此外,LINC00671下游Hoogsteen堿基配對(duì)DNA則通過(guò)LongTarget網(wǎng)站(http://lncrna.smu.edu.cn/show/DNATriplex)進(jìn)行[12];同時(shí)通過(guò)UCSC網(wǎng)站(http://genome.ucsc.edu/)調(diào)取并查詢下游基因c-myc啟動(dòng)子序列信息[13]。

    1.10 甲基化DNA免疫共沉淀PCR(methylated DNA immunoprecipitation-PCR,MeDIPPCR)

    將細(xì)胞轉(zhuǎn)染處理后,提取基因組DNA,超聲碎裂至0.3-1.0 kb長(zhǎng)度。使用5-甲基胞嘧啶抗體(比利時(shí)Eurogentec公司)進(jìn)行甲基化沉淀,并在VⅡA 7 real-time PCR系統(tǒng)(美國(guó)Applied Biosystems公司)分析純化的DNA。對(duì)應(yīng)啟動(dòng)子甲基化的變化可通過(guò)測(cè)量免疫沉淀DNA的數(shù)量,其PCR所需的c-myc上游引物為5'-CCCATATTCTCCCGTCTAGCAC-3',下游引物為5'-CCAATTTCTCAGCCAGGTTTCA-3';將該值與總input DNA的數(shù)量(MeDIP/input)進(jìn)行比較來(lái)確定。

    1.11 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

    采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,計(jì)數(shù)資料采用表示。采用t檢驗(yàn)分析各組之間的差異,P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié) 果

    2.1 組織及細(xì)胞間LINC00671表達(dá)差異及亞細(xì)胞定位

    我們利用GEPIA數(shù)據(jù)庫(kù)分析了LINC00671在HCC組織中的表達(dá)情況,結(jié)果顯示,與正常肝組織相比,LINC00671在HCC組織中的表達(dá)顯著下調(diào)(圖1A)。隨后我們?cè)趕tarBase數(shù)據(jù)庫(kù)中分析了LINC00671對(duì)生存預(yù)后的影響,我們發(fā)現(xiàn)LINC00671高表達(dá)可能預(yù)示著較好的預(yù)后(P<0.05,圖1B)。而在體外細(xì)胞系中,我們對(duì)比了正常肝細(xì)胞L02細(xì)胞系與HCC細(xì)胞系中LINC00671的表達(dá)差異。RTFQ-PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)LINC00671在HCC細(xì)胞系中顯著下調(diào),同時(shí)在不同的HCC細(xì)胞系中,LINC00671表達(dá)水平存在差異。其在Huh7細(xì)胞中表達(dá)相對(duì)較高,而在HepG2細(xì)胞中表達(dá)水平較低(圖1C)。隨后通過(guò)lncAtlas數(shù)據(jù)庫(kù)在線預(yù)測(cè)發(fā)現(xiàn)LINC00671主要分布于細(xì)胞核內(nèi)(圖1D)。為了進(jìn)一步證實(shí)這一預(yù)測(cè),我們通過(guò)RNA FISH實(shí)驗(yàn)對(duì)LINC00671亞細(xì)胞定位進(jìn)行了分析,結(jié)果提示LINC00671確實(shí)主要集中于細(xì)胞核中(圖1E)。

    圖1 LINC00671在HCC組織及細(xì)胞系中的表達(dá)和亞細(xì)胞定位Fig.1 Expression and subcellular localization of LINC00671 in HCC tissues and hepatoma cell lines

    2.2 LINC00671可以抑制HCC細(xì)胞增殖并促進(jìn)凋亡

    以上結(jié)果證實(shí)了LINC00671在Huh7細(xì)胞中表達(dá)較高而在HepG2細(xì)胞中表達(dá)水平較低,由此我們選取Huh7細(xì)胞系進(jìn)行敲減實(shí)驗(yàn)并選取HepG2細(xì)胞進(jìn)行過(guò)表達(dá)實(shí)驗(yàn)。我們首先在體外對(duì)Huh7進(jìn)行了ASO轉(zhuǎn)染,RTFQ-PCR結(jié)果發(fā)現(xiàn)ASO對(duì)LINC00671敲低效果較好(圖2A)。同時(shí),在HepG2細(xì)胞中轉(zhuǎn)染LINC00671過(guò)表達(dá)質(zhì)粒后,RTFQ-PCR結(jié)果提示過(guò)表達(dá)效果明顯(圖2A)。在此基礎(chǔ)上,我們分別觀察了Huh7和HepG2細(xì)胞的增殖情況,結(jié)果證實(shí)當(dāng)LINC00671敲低后,Huh7細(xì)胞增殖增加(圖2B);而LINC00671過(guò)表達(dá)后,HepG2細(xì)胞增殖明顯受到抑制(圖2C)。此外,流式細(xì)胞式術(shù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,LINC00671被敲低后,Huh7細(xì)胞凋亡顯著減少(圖2D);而在HepG2細(xì)胞中過(guò)表達(dá)LINC00671后,其凋亡率顯著增加(圖2E)。

    圖2 LINC00671能夠影響HCC增殖和凋亡Fig.2 The regulation of LINC00671 on proliferation and apoptosis in hepatoma cells

    2.3 LINC00671抑制HCC遷移和侵襲

    為了進(jìn)一步驗(yàn)證LINC00671對(duì)HCC遷移和侵襲的影響,我們?cè)贖uh7細(xì)胞中轉(zhuǎn)染了ASO并在HepG2細(xì)胞中過(guò)表達(dá)了LINC00671,隨后進(jìn)行細(xì)胞劃痕及transwell實(shí)驗(yàn)觀察細(xì)胞遷移和侵襲能力的變化。結(jié)果顯示,LINC00671敲低后,Huh7細(xì)胞的遷移能力明顯增強(qiáng)(圖3A);而LINC00671表達(dá)增加后,HepG2細(xì)胞遷移能力明顯受到抑制(圖3B)。此外,LINC00671敲降后,Huh7細(xì)胞侵襲能力明顯增加(圖3C);而過(guò)表達(dá)LINC00671后,其可以明顯抑制HepG2細(xì)胞侵襲(圖3D)。

    圖3 LINC00671抑制HCC遷移和侵襲Fig.3 LINC00671 inhibits migration and invasion of hepatoma cells

    2.4 LINC00671可以通過(guò)介導(dǎo)啟動(dòng)子甲基化下調(diào)c-myc表達(dá)

    通過(guò)生物信息學(xué)預(yù)測(cè),我們發(fā)現(xiàn)LINC00671與癌基因c-myc啟動(dòng)子區(qū)可能存在Hoogsteen配對(duì)結(jié)合(圖4A)。這一結(jié)果提示c-myc可能是LINC00671的下游靶基因。我們隨后在以上數(shù)據(jù)庫(kù)中分析了LINC00671與c-myc表達(dá)的相關(guān)性,Spearman分析提示LINC00671與c-myc在HCC組織中的表達(dá)呈現(xiàn)顯著負(fù)相關(guān)(圖4B~4C)。這一結(jié)果提示c-myc可能是LINC00671的靶基因且可能被LINC00671負(fù)向調(diào)控。為了明確c-myc是否是LINC00671下游靶基因,我們?cè)贖uh7細(xì)胞中敲低了LINC00671并在HepG2細(xì)胞中過(guò)表達(dá)了LINC00671。隨后通過(guò)RTFQ-PCR及Western blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn)LINC00671確實(shí)可以下調(diào)c-myc的表達(dá)(圖4D~4E)。已有研究[14-15]指出,核內(nèi)lncRNA可以介導(dǎo)下游靶基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化修飾從而調(diào)控靶基因的表達(dá)。因此,我們用同樣的方法轉(zhuǎn)染上述細(xì)胞后,利用MeDIP-PCR檢測(cè)了c-myc啟動(dòng)子區(qū)甲基化水平變化。結(jié)果提示LINC00671可以顯著升高c-myc啟動(dòng)子甲基化水平(圖4F)。由此可見,LINC00671可能在細(xì)胞核內(nèi)通過(guò)介導(dǎo)c-myc啟動(dòng)子甲基化抑制c-myc表達(dá),從而抑制了HCC的生物學(xué)行為。

    圖4 LINC00671對(duì)c-myc的調(diào)控Fig.4 The regualtion of LINC00671 on c-myc

    3 討 論

    隨著測(cè)序技術(shù)的進(jìn)步和研究的逐漸深入,越來(lái)越多的lncRNA分子被證明在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中扮演著重要角色。雖然目前有關(guān)lncRNA的文章越來(lái)越多,但仍有許多l(xiāng)ncRNA的生物功能未知,并且同一lncRNA在不同腫瘤中的作用和機(jī)制可能也不盡相同。因此對(duì)于這類分子的研究將為未來(lái)腫瘤的分子診斷和分子治療提供理論證據(jù)。

    LINC00671定位于人體第17號(hào)染色體,目前已知僅有一個(gè)轉(zhuǎn)錄本,成熟體由1844個(gè)核苷酸組成。當(dāng)前對(duì)于LINC00671的報(bào)道并不多,在胰腺癌中,LINC00671被證明可能作為臨床分子標(biāo)志與胰腺癌患者預(yù)后相關(guān)[16]。在本研究中,我們同樣發(fā)現(xiàn)GEPIA數(shù)據(jù)庫(kù)提示LINC00671在HCC組織中出現(xiàn)下調(diào),并且starBase數(shù)據(jù)庫(kù)發(fā)現(xiàn)其可能與HCC患者預(yù)后生存有關(guān),即LINC00671高表達(dá)可能預(yù)示著較好的預(yù)后。機(jī)制上,其被證明能夠通過(guò)發(fā)揮內(nèi)源競(jìng)爭(zhēng)性RNA(competing endogenous RNA,ceRNA)作用吸附miRNA分子從而通過(guò)多個(gè)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路抑制胰腺癌進(jìn)展[17-18]。在甲狀腺癌中,LINC00671受到轉(zhuǎn)錄因子STAT3的調(diào)控,同時(shí)通過(guò)抑制糖酵解抑制甲狀腺癌進(jìn)展[19]。近期還有研究[20]報(bào)道了LINC00671在腎癌中同樣通過(guò)ceRNA作用抑制了腎癌的進(jìn)展。以上幾項(xiàng)研究雖然從不同癌種揭示了LINC00671的作用,但僅有一項(xiàng)研究進(jìn)行了LINC00671的亞細(xì)胞定位驗(yàn)證[19]。本研究證明了LINC00671可以顯著抑制HCC的生物學(xué)行為,這與先前的幾篇報(bào)道一致。不同于其他腫瘤,LINC00671在HCC中雖然也發(fā)揮抑癌效應(yīng),但其主要定位于細(xì)胞核內(nèi)。因此,其可能有著與之前完全不同的分子機(jī)制。

    通過(guò)生物信息學(xué)預(yù)測(cè),我們發(fā)現(xiàn)LINC00671可能與癌基因c-myc啟動(dòng)子區(qū)存在Hoogsteen配對(duì)從而介導(dǎo)后者啟動(dòng)子甲基化修飾,這提示c-myc可能是LINC00671的靶基因。而數(shù)據(jù)庫(kù)分析同樣發(fā)現(xiàn)LINC00671與c-myc在HCC組織中的表達(dá)呈顯著負(fù)相關(guān)。進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)也證實(shí):LINC00671可以通過(guò)介導(dǎo)c-myc啟動(dòng)子甲基化從而下調(diào)后者表達(dá)。C-myc基因(又稱MYC)是一個(gè)公認(rèn)的癌基因,其在不同腫瘤中均可扮演促癌基因的角色。從調(diào)控靶基因轉(zhuǎn)錄到影響染色體穩(wěn)定性[21],c-myc幾乎在所有腫瘤中均存在促癌作用而被稱為腫瘤的主宰基因之一[22]。在HCC中,c-myc同樣可以在腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖、遷移及侵襲等多方面影響HCC的生物學(xué)行為[23]。而本研究發(fā)現(xiàn)LINC00671可以在細(xì)胞核內(nèi)介導(dǎo)c-myc啟動(dòng)子甲基化從而下調(diào)c-myc基因的表達(dá),而這直接導(dǎo)致了LINC00671抑制HCC的生物學(xué)行為,即LINC00671抑制HCC進(jìn)展的分子機(jī)制。

    本研究揭示了LINC00671在HCC中發(fā)揮的作用,初步探討了其抑制HCC進(jìn)展的分子機(jī)制。此外,本研究發(fā)現(xiàn)LINC00671在腫瘤中可以發(fā)揮核RNA的作用并可能通過(guò)介導(dǎo)啟動(dòng)子甲基化修飾從而下調(diào)靶基因的表達(dá)。

    本研究也存在部分不足之處:首先,從臨床角度,雖然我們證明了LINC00671在HCC細(xì)胞系中有明顯下調(diào),但數(shù)據(jù)庫(kù)納入的樣本量依舊有限并且其納入病例可能均存在潛在偏倚。因此,關(guān)于LINC00671的臨床意義仍需要大樣本臨床數(shù)據(jù)深入探究。其次,LINC00671對(duì)HCC的影響,包括生長(zhǎng)與轉(zhuǎn)移,仍缺乏體內(nèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的進(jìn)一步驗(yàn)證;最后,在機(jī)制方面,我們雖然發(fā)現(xiàn)LINC00671可能通過(guò)調(diào)控c-myc來(lái)抑制HCC的生物學(xué)行為,但其調(diào)控的深入機(jī)制,包括具體結(jié)合位點(diǎn)、互作的甲基化酶及組蛋白甲基化位點(diǎn)均仍有待未來(lái)進(jìn)一步研究。

    綜上所述,LINC00671可以顯著影響HCC的生物學(xué)行為,即其可以在體外顯著抑制HCC進(jìn)展;同時(shí),其可以介導(dǎo)癌基因c-myc啟動(dòng)子甲基化修飾從而導(dǎo)致后者下調(diào)表達(dá),這可能是LINC00671抑制HCC的重要分子機(jī)制。

    利益沖突聲明:所有作者聲明均不存在利益沖突。

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