重組乳酸菌用于疾病治療和預(yù)防的研究進(jìn)展

林炫財(cái),陳希玲,許森寶,白楊,張亞歷

【提要】 乳酸菌在食品工業(yè)中有著悠久的使用歷史，并且由于其安全性、內(nèi)在的有益健康效應(yīng)和巨大的生物技術(shù)潛力，在治療中也呈現(xiàn)越來(lái)越大的吸引力。隨著黏膜免疫的發(fā)展，對(duì)乳酸菌表達(dá)系統(tǒng)的研究主要集中在不同位置抗原表達(dá)的遺傳工具的產(chǎn)生上。目前已知的能夠使用乳酸菌作為載體來(lái)遞送各種的治療分子，主要是通過(guò)分泌或表面展示，它們被用于治療或預(yù)防多種疾?。貉装Y性腸病、感染、自身免疫性疾病，甚至癌癥。本文回顧了有關(guān)使用重組乳酸菌作為黏膜遞送載體和相關(guān)健康益處的相關(guān)數(shù)據(jù)，討論了它們用于遞送治療性蛋白質(zhì)的用途，同時(shí)也關(guān)注了治療性肽的遞送，重點(diǎn)是最常用的乳球菌屬和乳酸桿菌屬。

乳酸菌(lactic acid bacteria，LAB)是一類能分解碳水化合物產(chǎn)生大量乳酸的細(xì)菌統(tǒng)稱，主要包括雙歧桿菌屬(Bifidobacterium)、乳酸桿菌屬(Lactobacillus)、乳球菌屬(Lactococcus)、片球菌屬(Pediococcus)、明串珠菌屬(Leuconostoc)及鏈球菌屬(Streptococcus)等43個(gè)屬。由于在人類營(yíng)養(yǎng)中的長(zhǎng)期安全使用，它們已被美國(guó)食品和藥物管理局認(rèn)可為安全的，并且通常用作食品工業(yè)中的發(fā)酵劑。它們的安全狀態(tài)、益生菌活性和通過(guò)胃腸道(gastrointestinal tract，GIT)的存活能力使這些細(xì)菌成為治療分子黏膜靶向給藥的極好候選者。LAB的特定菌株被用作人類和動(dòng)物健康的益生菌，因?yàn)樗鼈兛梢酝ㄟ^(guò)產(chǎn)生生物活性代謝物、調(diào)節(jié)黏膜免疫和腸道通透性，在維持胃腸道穩(wěn)態(tài)和影響其他器官方面發(fā)揮著至關(guān)重要的作用[1]。重組LAB介導(dǎo)的黏膜疫苗遞送，特別是通過(guò)鼻腔或口服免疫，比傳統(tǒng)全身疫苗的靜脈或肌肉注射更適用和方便，同時(shí)，通過(guò)黏膜遞送可以增強(qiáng)慢性疾病和黏膜感染治療蛋白的效力和特異性。這種方法也可以減少與此類蛋白質(zhì)的經(jīng)典全身給藥途徑造成的相關(guān)潛在副作用[2]。

1 乳酸菌作為黏膜遞送載體的優(yōu)勢(shì)

近年來(lái)，黏膜給藥免疫因其卓越的特性和針對(duì)多種微生物病原體的應(yīng)用而備受關(guān)注。除了激活適應(yīng)性免疫反應(yīng)外，它們還可以保護(hù)黏膜表面免受感染、防止抗原降解并促進(jìn)GIT的吸收?？诜虮莾?nèi)施用的可溶性蛋白質(zhì)的免疫原性通常較低，而通過(guò)將蛋白質(zhì)耦聯(lián)至細(xì)菌表面或通過(guò)基因工程細(xì)菌產(chǎn)生所需抗原可顯著增強(qiáng)免疫原性。LAB是非病原微生物，被認(rèn)為比某些減毒載體更安全，這使它們成為開(kāi)發(fā)黏膜疫苗的有利候選者[3]。LAB可以在三個(gè)不同的細(xì)胞位置產(chǎn)生所需的抗原：①細(xì)胞內(nèi)，這使蛋白質(zhì)能夠逃脫惡劣的外部環(huán)境條件(例如極酸的胃液環(huán)境)，但需要細(xì)胞裂解才能使蛋白質(zhì)釋放和遞送，②細(xì)胞外，允許將蛋白質(zhì)釋放到外部介質(zhì)中，并且與環(huán)境(食品或消化道)直接相互作用，③細(xì)胞壁錨定，結(jié)合了其他兩個(gè)位置的優(yōu)點(diǎn)(即細(xì)胞壁錨定蛋白與環(huán)境之間的相互作用，以及防止蛋白降解)[4]。研究表明，通過(guò)暴露于LAB表面的細(xì)胞壁錨定抗原獲得的免疫反應(yīng)較其他兩種方式更優(yōu)[5]?？诜﨤AB可以在暴露于胃酸和與膽汁接觸后存活下來(lái)，從而被吸收到黏膜免疫系統(tǒng)的誘導(dǎo)位點(diǎn)，例如派爾集合淋巴結(jié)。此外，通過(guò)口腔、鼻內(nèi)或生殖器途徑對(duì)LAB進(jìn)行黏膜給藥可以刺激黏膜和全身免疫反應(yīng)。它們引發(fā)分泌型IgA產(chǎn)生的能力是LAB作為黏膜疫苗的主要優(yōu)勢(shì)之一[6-7]。目前，許多抗原和/或細(xì)胞因子已在重組LAB中成功表達(dá)，并且這些重組LAB的黏膜給藥已被證明可引發(fā)全身和黏膜免疫。

2 重組乳酸菌應(yīng)用于疾病治療和預(yù)防

2.1 炎癥性腸病

炎癥性腸病(inflammation bowel disease，IBD)，包括潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerative colitis，UC)和克羅恩病(crohn's disease，CD)，是一種慢性炎癥性疾病，其特征是胃腸道中的免疫反應(yīng)失調(diào)，癥狀包括腹痛、腸痙攣、腹瀉、疲勞、發(fā)燒、體重減輕和食欲不振等。皮質(zhì)類固醇、硫嘌呤和具有免疫調(diào)節(jié)作用的抗腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α ,TNF-α)抗體可用于治療IBD。其中TNF-α是最有效的，但會(huì)導(dǎo)致嚴(yán)重的副作用并且成本高。第一次報(bào)道使用重組LAB治療IBD是2000發(fā)表的，Steidler等[8]人描述了分泌型白介素(Interleukin，IL)-10重組乳球菌在兩種結(jié)腸炎小鼠模型中的應(yīng)用，而后有幾項(xiàng)研究同樣使用重組乳球菌遞送IL-10。結(jié)果共同表明，口服重組乳球菌分泌IL-10可降低腸道通透性、改善腸道功能障礙并增強(qiáng)小鼠的免疫功能，重組乳球菌顯著緩解了結(jié)腸炎小鼠的腸道炎癥[9-10]。Henri Braat等[11]人使用IL-10重組乳球菌進(jìn)行了小型I期臨床試驗(yàn)，結(jié)果表明該策略對(duì)患者來(lái)說(shuō)既安全又具有生物學(xué)意義。Motta等[12]人的研究表明，在急性和慢性結(jié)腸炎的小鼠模型中，口服表達(dá)絲氨酸蛋白酶抑制劑-彈性蛋白酶抑制劑(Elafin)的乳酸菌可降低腸道炎癥并恢復(fù)腸道穩(wěn)態(tài)。Humaran等[9]人比較了分泌①IL-10或TGF-β1作為抗炎細(xì)胞因子，以及分泌②Elafin或白細(xì)胞蛋白酶抑制劑(SLPI)作為絲氨酸蛋白酶抑制劑的不同重組乳球菌對(duì)IBD模型小鼠的功效，結(jié)果表明，在該IBD模型小鼠中，使用表達(dá)抗蛋白酶(Elafin或SLPI)的乳球菌比使用表達(dá)抗炎細(xì)胞因子(IL-10或TGF-β1)的乳球菌在減少腸道炎癥方面更有效。krlec等[13]人研究發(fā)現(xiàn)，分泌BPC-157的乳球菌能顯著降低成纖維細(xì)胞模型中活性氧簇的產(chǎn)生，表明其在治療腸道炎癥方面的潛在益處。Wong等[14]人發(fā)現(xiàn)，在乳球菌中表達(dá)的組織蛋白酶抑制素(Cathelicidin)可以有效地恢復(fù)結(jié)腸炎小鼠的黏膜完整性并增強(qiáng)炎癥結(jié)腸組織的黏膜修復(fù)。Shigemori等[15]的研究發(fā)現(xiàn)，口服分泌白細(xì)胞介素-1受體拮抗劑(IL-1Ra)的重組乳球菌可抑制急性結(jié)腸炎小鼠的體重減輕和降低疾病活動(dòng)指數(shù)評(píng)分。Liu等[16]人發(fā)現(xiàn)，口服分泌胰島素樣生長(zhǎng)因子I(IGF-I)的重組LAB可減輕結(jié)腸炎模型小鼠的癥狀和疾病發(fā)展。

2.2 感染

重組LAB介導(dǎo)的黏膜疫苗遞送，特別是通過(guò)鼻腔或口服免疫，比傳統(tǒng)全身疫苗的靜脈或肌肉注射更適用和方便，同時(shí)，通過(guò)黏膜遞送可以增強(qiáng)慢性疾病和黏膜感染治療蛋白的效力和特異性。在過(guò)去的研究中已經(jīng)構(gòu)建了不同的重組LAB來(lái)傳遞來(lái)自病毒、細(xì)菌、真菌或寄生蟲(chóng)病原體的抗原，目的是針對(duì)感染進(jìn)行黏膜接種[17]。Wells等[18-19]人使用活的乳球菌遞送疫苗抗原。他們構(gòu)建了表達(dá)破傷風(fēng)毒素片段C(TTC)的重組乳球菌，通過(guò)比較口服和鼻腔給藥產(chǎn)生TTC的活乳球菌，觀察對(duì)小鼠產(chǎn)生的保護(hù)效果。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，雖然保護(hù)功效相同，但鼻腔免疫比口服給藥引起更高水平的血清IgG和黏膜IgA。Wang等[20]人研究表明，將表達(dá)高致病性禽流感病毒蛋白血凝素-1(HA-1)的乳酸桿菌口服給藥于正常小鼠，最終提高了黏膜中特異性抗HA-1 IgA抗體和血清中IgG的產(chǎn)生，以及脾臟T淋巴細(xì)胞的增殖反應(yīng)。在一項(xiàng)針對(duì)禽流感病毒(AIV)的口服疫苗試驗(yàn)中，Shi等人通過(guò)將表達(dá)H9N2 AIV的HA基因的重組乳酸桿菌(NC8)口服給藥于小鼠，發(fā)現(xiàn)重組NC8菌株能誘導(dǎo)小鼠黏膜和全身免疫反應(yīng)，促使sIgA、IgG和血凝抑制抗體的產(chǎn)生，并對(duì)小鼠遭受H9N2病毒攻擊時(shí)提供免疫保護(hù)[21]。Zhou等[22]人通過(guò)給雞口服表達(dá)H9N2 M1-HA2融合蛋白的乳球菌菌株，最終發(fā)現(xiàn)該重組菌株可以很好的誘導(dǎo)黏膜保護(hù)功能和全身免疫。Belkis Marelli等[23]人構(gòu)建了產(chǎn)生輪狀病毒刺突蛋白亞基VP8的重組乳球菌菌株，給小鼠口服后其體內(nèi)產(chǎn)生顯著水平的腸道IgA抗體，并且觀察到實(shí)驗(yàn)組小鼠比對(duì)照組明顯阻斷了輪狀病毒感染。Berlec等人[24]構(gòu)建了表達(dá)高免疫原性HAV抗原VP1-P2a的乳球菌，結(jié)果表明該抗原在乳球菌中成功表達(dá)，并在小鼠口服后引起顯著的全身體液免疫反應(yīng)，但實(shí)驗(yàn)組小鼠體內(nèi)產(chǎn)生的IgG不能中和HAV，表明特定的IgG不能結(jié)合病毒顆粒并阻止它們感染靶細(xì)胞，這需要進(jìn)行后續(xù)的研究。Lin等人[25]構(gòu)建了分泌外源性導(dǎo)管素的重組乳球菌，研究結(jié)果表明口服重組菌小鼠顯著增加了黏膜導(dǎo)管素水平并減少了幽門螺桿菌(Helicobacterpylori，H.pylori)感染和相關(guān)炎癥。Zhang等人[26]構(gòu)建了攜帶來(lái)自H.pylori的Lpp20基因的工程化乳球菌，并且證明該工程菌株誘導(dǎo)血清IgG水平顯著升高，表明Lpp20通過(guò)重組乳球菌傳遞，可以有效地轉(zhuǎn)移到黏膜免疫位點(diǎn)并引發(fā)顯著的免疫反應(yīng)。Soodabeh等人[27]構(gòu)建了分泌I型菌毛黏附素(FimH)的重組乳球菌，體外實(shí)驗(yàn)表明重組乳球菌的生物膜可以顯著減少泌尿病原體生物膜的形成，并且體內(nèi)實(shí)驗(yàn)表明經(jīng)尿道給予重組乳球菌能明顯抑制尿路致病性大腸桿菌定植和降低尿路感染的風(fēng)險(xiǎn)。盡管黏膜疫苗接種作為針對(duì)多種抗原的抗感染方法具有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，但這些疫苗中的大多數(shù)仍處于實(shí)驗(yàn)階段，目前只有少數(shù)被批準(zhǔn)用于人類和動(dòng)物用途。

2.3 自身免疫性疾?。哼^(guò)敏和糖尿病

LAB在治療過(guò)敏癥和I型糖尿病中的應(yīng)用已得到廣泛研究。通過(guò)黏膜途徑致敏比皮下注射有兩個(gè)優(yōu)點(diǎn)，即口服給藥和提高有效性。過(guò)敏原特異性免疫療法是目前治療過(guò)敏性疾病的有效治療方法，但它需要在3～5年內(nèi)重復(fù)施用過(guò)敏原提取物，并且通常會(huì)引起不良事件的發(fā)生。許多益生菌菌株在過(guò)敏性疾病的治療中顯示出有益的作用，目前已陸續(xù)出現(xiàn)了表達(dá)相關(guān)過(guò)敏原的重組LAB，用于產(chǎn)生和/或遞送過(guò)敏原或過(guò)敏原衍生肽至黏膜表面以誘導(dǎo)耐受性[28]。在Kayo等人[29]的一項(xiàng)研究中，表達(dá)日本雪松花粉過(guò)敏原Cryj1的重組乳酸桿菌口服給雪松花粉癥的小鼠模型，結(jié)果表明，使用攜帶Cryj1的乳酸桿菌進(jìn)行口服疫苗接種可改善雪松花粉癥小鼠模型的鼻部癥狀以及產(chǎn)生過(guò)敏原特異性IgE反應(yīng)。而Minic[30]等人則將Fes p1過(guò)敏原共價(jià)連接到植物乳桿菌細(xì)胞壁上，其在小鼠模型中的作用評(píng)估表明，口服重組和非重組活植物乳桿菌都減少外周血嗜酸性粒細(xì)胞并增加血清IgG2a水平，這可能是植物乳桿菌本身的作用，而用重組乳桿菌治療的小鼠血清IgA水平明顯增加，表明重組植物乳桿菌表達(dá)的Fes p1可作為特異性過(guò)敏原并增強(qiáng)了有益的治療效果。同樣，一項(xiàng)研究將塵螨過(guò)敏原Der p2重組到乳球菌上，并通過(guò)口服重組菌的方式在Der p2致敏BALB/c小鼠模型中評(píng)估了它們的保護(hù)作用。結(jié)果實(shí)驗(yàn)組小鼠明顯降低IgE水平并減少了由Der p2引起的肺部炎癥反應(yīng)。同時(shí)也說(shuō)明血清中特定IgG2a的增加和腸系膜淋巴結(jié)中調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的增殖與保護(hù)性黏膜反應(yīng)相關(guān)[31]。

除了過(guò)敏，重組LAB被認(rèn)為是I型糖尿病現(xiàn)有療法的潛在替代品，I型糖尿病也是一種自身免疫性疾病，其特征是致病性自身反應(yīng)性T細(xì)胞選擇性破壞產(chǎn)生胰島素的胰腺β細(xì)胞。它通常通過(guò)基于抗體的免疫療法和免疫抑制藥物進(jìn)行管理。然而，這些藥物無(wú)法區(qū)分自身和非自身免疫效應(yīng)物。因此，基于抗原的免疫療法被認(rèn)為是治療自身免疫疾病最有潛力的方法，此療法可選擇性地作用于疾病相關(guān)的T細(xì)胞并具有保護(hù)免疫系統(tǒng)的功能[32]。Ma等人[33]發(fā)現(xiàn)，口服表達(dá)融合蛋白HSP65-6P277重組乳球菌的非肥胖糖尿病小鼠，可預(yù)防高血糖、改善葡萄糖耐量和減少胰島炎癥。Robert等人[34]的研究中，他們構(gòu)建了分泌谷氨酸脫羧酶(GAD)-65和IL-10的乳球菌，通過(guò)口服給藥，最終穩(wěn)定了近期發(fā)病的非肥胖糖尿病小鼠的胰島炎癥、保留了功能性β細(xì)胞質(zhì)量，并使小鼠恢復(fù)了正常血糖。 另一項(xiàng)研究中，Takiishi等人[35]構(gòu)建了分泌人胰島素原(PINS)和IL-10的重組乳球菌，給新發(fā)病的糖尿病小鼠口服重組乳球菌并給予亞治療劑量的抗CD3抗體，結(jié)果表明，66%的小鼠在治療后恢復(fù)正常血糖，該效果顯著優(yōu)于僅用抗CD3治療的的小鼠(43%)，而單純口服重組乳球菌的實(shí)驗(yàn)組則為17%，其中對(duì)照組小鼠為0%。總之，使用重組乳球菌菌株是治療自身免疫性疾病的潛在有效策略，但仍需行進(jìn)一步的研究。

2.4 癌癥

癌癥是威脅人類健康的一大殺手，嚴(yán)重影響人類生活質(zhì)量。癌癥的進(jìn)展與慢性炎癥有關(guān)；因此，用于治療癌癥的重組LAB主要旨在減少炎癥的進(jìn)展?；钚匝跷镔|(zhì)例如過(guò)氧化氫，參與結(jié)腸癌(colorectal cancer，CRC)發(fā)展的各個(gè)方面。降低它們的水平可能是預(yù)防結(jié)腸癌的一種有效方法，Alejandra等人[36]進(jìn)行一項(xiàng)研究，目的是評(píng)估分泌過(guò)氧化氫酶的重組乳球菌對(duì)預(yù)防實(shí)驗(yàn)性小鼠1,2-二甲基肼誘導(dǎo)的結(jié)腸癌的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)口服重組菌能夠增加實(shí)驗(yàn)小鼠體內(nèi)的過(guò)氧化氫酶活性，從而減少結(jié)腸炎癥和損傷。Tina等人[37]構(gòu)建了表達(dá)癌癥相關(guān)上皮細(xì)胞黏附分子(EpCAM)和人表皮生長(zhǎng)因子受體2(HER2)融合蛋白的重組乳球菌，并在體外證實(shí)了重組乳球菌黏附在具有過(guò)度表達(dá)腫瘤抗原的HEK293細(xì)胞，另一方面，沒(méi)有觀察到該重組菌與沒(méi)有腫瘤抗原表達(dá)的HEK293細(xì)胞結(jié)合，證實(shí)了工程化乳球菌的選擇性。Carmen等人[38]構(gòu)建了表達(dá)抗氧化酶(過(guò)氧化氫酶或超氧化物歧化酶)或IL-10的重組LAB，并通過(guò)體內(nèi)實(shí)驗(yàn)證明，口服重組菌的結(jié)腸癌模型小鼠顯示出較少的微觀腸道損傷，說(shuō)明該輔助治療可用于緩解與結(jié)直腸癌相關(guān)的炎癥環(huán)境。E.Bohlul等人[39]構(gòu)建了表達(dá)腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(TRAIL)蛋白的重組乳球菌。研究表明，產(chǎn)生TRAIL蛋白的重組乳酸球菌可誘導(dǎo)人結(jié)腸癌細(xì)胞系SW480和HCT116細(xì)胞凋亡。且Kaczmarek等人[40]后續(xù)研究發(fā)現(xiàn)，口服二甲雙胍進(jìn)一步增強(qiáng)了重組乳球菌分泌TRAIL的這種體內(nèi)抗腫瘤活性。另一方面，針對(duì)宮頸癌，Li等人[41]構(gòu)建了攜帶人乳頭瘤病毒E7蛋白和IL-12 DNA的乳球菌，通過(guò)鼻內(nèi)給藥的方式，發(fā)現(xiàn)在注射了表達(dá)E7的腫瘤細(xì)胞系(TC-1)的小鼠中，實(shí)驗(yàn)組比對(duì)照組腫瘤生長(zhǎng)明顯受抑制，說(shuō)明重組菌能夠有效引發(fā)抗原特異性免疫反應(yīng)。Kawana等人[42-44]通過(guò)口服分泌突變的HPV16 E7蛋白的重組乳酸桿菌進(jìn)行了為期8周的觀察性1/2a期臨床試驗(yàn)，結(jié)果表明，口服分泌HPV16 E7重組菌可增加血清HPV16 E7特異性抗體的產(chǎn)生，從而誘導(dǎo)保護(hù)性體液免疫，并且該免疫方式是安全的。Mohseni等人[45]則構(gòu)建了分泌突變的HPV16 E7蛋白的乳球菌，并且證明了口服重組菌的C57BL/6小鼠體內(nèi)，抗原刺激的脾細(xì)胞和腸黏膜淋巴細(xì)胞中分泌HPV-16 E7特異性IL-2和IFN-γ的T細(xì)胞顯著高于對(duì)照組，說(shuō)明接種重組菌的小鼠能夠?qū)C-1細(xì)胞的攻擊產(chǎn)生有效的保護(hù)作用。Sedigheh等人[46]構(gòu)建了分泌突變的HPV16 E6蛋白的乳球菌，實(shí)驗(yàn)證明，乳球菌展示的E6蛋白可以誘導(dǎo)體液和細(xì)胞免疫，對(duì)腫瘤大小進(jìn)展具有一定抑制作用。

2.5 其他疾病

近年來(lái)，也有研究者嘗試用重組LAB作為藥物分子的投遞載體防治2型糖尿病。胰高血糖素樣肽-1(GLP-1)是一種由腸細(xì)胞產(chǎn)生的腸促胰島素，以葡萄糖依賴性方式刺激胰腺分泌胰島素，外源供應(yīng)的GLP-1類似物用于治療2型糖尿病。Agarwal等人[47]構(gòu)建了表達(dá) GLP-1的重組乳球菌，該重組菌灌胃大鼠后的2～11 h，大鼠的胰島素水平顯著增加，血糖水平顯著降低，表明重組的乳球菌表達(dá)出了具有功能活性的GLP-1。Exendin-4是一種GLP-1受體激動(dòng)劑，Zeng等[48]使用了重組乳球菌載體表達(dá)Exendin-4，研究發(fā)現(xiàn)重組乳球菌能夠顯著促進(jìn)胰島β細(xì)胞INS-1分泌胰島素和促進(jìn)胰島細(xì)胞增殖。此外，Kaja等人[49]運(yùn)用重組乳球菌治療多發(fā)性硬化癥，他們構(gòu)建了產(chǎn)生髓鞘肽的重組乳球菌，通過(guò)口服給藥過(guò)敏性腦脊髓炎模型大鼠，結(jié)果發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組大鼠血清IL-1b、IL-10和TNF-α的水平明顯降低。Guilherme等人[50]構(gòu)建了分泌Hsp65的重組乳球菌，Hsp65在炎癥組織中過(guò)度表達(dá)，能夠誘導(dǎo)免疫調(diào)節(jié)機(jī)制，實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，用產(chǎn)Hsp65的乳球菌口服治療可防止模型小鼠關(guān)節(jié)炎的發(fā)展。這種效應(yīng)與通過(guò)喂食Hsp65在腸道中觸發(fā)的耐受機(jī)制有關(guān)。

3 總結(jié)

LAB表達(dá)系統(tǒng)的發(fā)展促進(jìn)了旨在確定表達(dá)抗原(細(xì)胞質(zhì)、分泌或細(xì)胞壁錨定)的細(xì)胞定位以及定位對(duì)其免疫原能力的影響的研究。在表面表達(dá)抗原的LAB可能比那些表達(dá)細(xì)胞質(zhì)抗原的LAB表現(xiàn)出更顯著的免疫學(xué)效應(yīng)，因?yàn)榧?xì)胞表面抗原具有直接與環(huán)境相互作用并避免蛋白水解降解的能力。在某些情況下，由于避免暴露于惡劣的環(huán)境條件，細(xì)胞內(nèi)抗原比在其他位置表達(dá)的抗原更具免疫原性[1, 51]。在給藥方式上，不同的黏膜給藥途徑引起不同的免疫作用。大多數(shù)研究表明鼻內(nèi)給藥比胃內(nèi)途徑能更有效地誘導(dǎo)全身反應(yīng)，滅活的重組LAB更適合鼻內(nèi)接種[52-53]。胃內(nèi)免疫則更方便、經(jīng)濟(jì)，更適用于動(dòng)物飼料業(yè)務(wù)。盡管重組LAB應(yīng)用前景廣闊，仍存在安全性、穩(wěn)定性、持久性等問(wèn)題亟待解決。為了改進(jìn)使用LAB作為載體的療法設(shè)計(jì)，未來(lái)應(yīng)解決以下問(wèn)題：①不同治療分子在重組LAB中的共表達(dá)；②選擇持久性LAB物種，尤其是乳酸桿菌屬；③開(kāi)發(fā)合適的黏膜遞送系統(tǒng)，包括理想的抗原遞送系統(tǒng)和特定佐劑；④高效表達(dá)系統(tǒng)的設(shè)計(jì)。在不久的將來(lái)，更多的研究和臨床試驗(yàn)將促進(jìn)重組LAB作為一種新的治療方法來(lái)預(yù)防和治療各種人類疾病。