無魚粉飼料中補(bǔ)充限制性氨基酸對鯉生長、消化及蛋白質(zhì)代謝相關(guān)理化指標(biāo)的影響

彭祖想， 嚴(yán) 林， 衛(wèi)力博， 王悅晗，

高 欣1，2， 王 偉1，2，3， 任同軍1，2，3， 韓雨哲1，2，3*

（1.大連海洋大學(xué)水產(chǎn)與生命學(xué)院，遼寧 大連 116023；2.大連海洋大學(xué)，水產(chǎn)動物營養(yǎng)與飼料實(shí)驗(yàn)室，遼寧 大連 116023；3.大連海洋大學(xué)，遼寧省北方魚類應(yīng)用生物學(xué)與增養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，遼寧 大連 116023）

魚粉是一種氨基酸組成合理的優(yōu)質(zhì)動物蛋白，被水產(chǎn)飼料行業(yè)廣泛使用。然而近年來由于魚粉資源的匱乏和高昂的價(jià)格導(dǎo)致了魚粉資源的不穩(wěn)定性，一定程度上限制了水產(chǎn)養(yǎng)殖行業(yè)的可持續(xù)發(fā)展。當(dāng)今迫切的需要開發(fā)一種蛋白含量高、價(jià)格低廉、易獲得且供應(yīng)穩(wěn)定的新型飼料蛋白源以滿足水產(chǎn)飼料行業(yè)的需求。家禽副產(chǎn)品粉（PBM）是家禽屠宰之后的下腳料，經(jīng)提煉油脂和粉碎后得到的粉狀產(chǎn)品，在營養(yǎng)組成上與魚粉相似且價(jià)格低廉，與植物性蛋白源相比不含抗?fàn)I養(yǎng)因子，因此被認(rèn)作是一種潛在的魚粉替代源（Thompson等，2007）。國內(nèi)外對草魚（Thompson和Butt，2012）、鯰（Giri等，2010）、駝背鱸（Shapawi等，2007）、軍曹魚（Zhou等，2011）和大口黑鱸（馬利等，2021）等水產(chǎn)動物上的研究結(jié)果表明，PBM可在一定程度上替代魚粉。但PBM的原料組成較為多樣，包括頸部、腳部、腸道及未發(fā)育蛋等，因此PBM的質(zhì)量取決于原料的質(zhì)量和加工方式并且因批次和供應(yīng)公司而異，可能存在某些必需氨基酸的不足（Chaklader等，2020、2019；Hill等，2019）。雞腸粉（CGM）是PBM的一種，是以新鮮雞腸為單一原料，經(jīng)沖洗、蒸煮、噴霧干燥和粉碎等工序加工而成的新型優(yōu)質(zhì)飼料蛋白源。優(yōu)質(zhì)的雞腸粉粗蛋白質(zhì)和粗脂肪含量與魚粉接近，部分氨基酸含量甚至高于魚粉，但仍缺乏一些必需氨基酸如賴氨酸（Lys）和蛋氨酸（Met）。研究人員在尋找合適的魚粉替代物時通常是從普通動植物蛋白源中選擇的，但普通動植物蛋白源普遍缺乏一些必需氨基酸，因此補(bǔ)充晶體氨基酸以平衡飼料中氨基酸的組成，成為獲得理想蛋白源的一種重要途徑（劉韜，2018；陳庭，2015；冷向軍等，2009），但目前鮮見有關(guān)于以雞腸粉作為飼料動物蛋白源并補(bǔ)充必需氨基酸應(yīng)用到水產(chǎn)動物上的相關(guān)報(bào)道。

鯉（Cyprinus carpio）屬于雜食性魚類，是我國重要的淡水經(jīng)濟(jì)養(yǎng)殖品種，在水產(chǎn)養(yǎng)殖中占有很大比重。據(jù)《2021中國漁業(yè)統(tǒng)計(jì)年鑒》統(tǒng)計(jì)，2020年我國鯉養(yǎng)殖產(chǎn)量達(dá)到289.67萬t，較2019年增加1.14萬t，增幅0.92%。本試驗(yàn)基于鯉的營養(yǎng)基礎(chǔ)，在不添加魚粉的條件下，以雞腸粉作為飼料中主要動物蛋白源并補(bǔ)充賴氨酸和蛋氨酸，探究不同添加水平的限制性氨基酸對鯉生長、消化及蛋白質(zhì)代謝相關(guān)理化指標(biāo)的影響，以期為雞腸粉在淡水魚飼料中的應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)和管理 試驗(yàn)所用的鯉購自遼寧省丹東市某養(yǎng)殖場，在4.3 m×1.5 m×1.2 m的水泥池中暫養(yǎng)2周以熟悉試驗(yàn)環(huán)境，期間投喂對照組飼料。養(yǎng)殖試驗(yàn)在大連海洋大學(xué)遼寧省北方魚類生物學(xué)及增養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室循環(huán)水池（4.3 m×3.0 m×1.4 m）進(jìn)行，采用網(wǎng)箱進(jìn)行養(yǎng)殖。選取初始體重為（55.54±0.2）g的鯉150尾隨機(jī)分為5組，每組3個重復(fù)，每個重復(fù)10尾，置于15個1.3 m×0.8 m×0.7 m的聚乙烯網(wǎng)箱中。養(yǎng)殖周期為8周（2021年6月19日~2021年8月14日），每日投喂2次（9：00和17：00）表觀飽食，每日吸底1次、換水1次，換水量約為1/5。試驗(yàn)水體為曝氣24 h以上的自來水，試驗(yàn)期間光照為自然光照，水體溫度為（27.0±1.0）℃，溶氧為（7.0±0.5）mg/L，pH為（7.6±0.5）。

1.2 試驗(yàn)飼料 雞腸粉由遼寧省鞍山裕豐飼料有限公司提供，粗蛋白質(zhì)65.47%，粗脂肪14.80%，其他試驗(yàn)飼料原料均購自于大連當(dāng)?shù)厥袌觥ｋu腸粉和魚粉營養(yǎng)水平及氨基酸含量見表1，以雞腸粉、豆粕等為主要蛋白源，豆油為主要脂肪源配制5組等氮等脂的飼料，標(biāo)記為G1、G2、G3、G4、G5（表2）。參考鯉的營養(yǎng)需求（美國科學(xué)院國家研究委員會，2015），依據(jù)蛋氨酸與賴氨酸比值為0.318，配制限制性氨基酸，限制性氨基酸（Met：Lys=0.318）添加量分別為0%（G1組、對照組）、0.5%（G2組）、1.0%（G3組）、1.5%（G4組）、2.0%（G5組）。飼料原料過60目篩，混合均勻后經(jīng)制粒機(jī)制成2 mm的顆粒飼料，放入42℃烘箱中，烘干至水分含量為10%，放入自封袋中于-20℃冰箱中保存。

表1 雞腸粉和魚粉的營養(yǎng)水平及氨基酸組成 %

表2 試驗(yàn)飼料組成及營養(yǎng)水平（干物質(zhì)基礎(chǔ)） %

1.3 樣品采集及指標(biāo)測定 試驗(yàn)結(jié)束后，試驗(yàn)魚停食24 h，使用50 mg/L的MS-222溶液麻醉，稱重測量體長、體重，計(jì)算肥滿度和生長指標(biāo)。每個網(wǎng)箱取6尾魚，剝離內(nèi)臟團(tuán)和肝臟并稱重，用于計(jì)算臟體比和肝體比，并全部取肝臟、前中腸，同組混樣裝管，樣品保存于-80℃保存待測。每個網(wǎng)箱取4尾魚用注射器吸取肝素鈉靜脈采血，將采集到的血液樣本注入10 mL離心管中，于4℃條件下，5000 r/min離心10 min，取上清液保存于-80℃?zhèn)溆?，用于血清生化指?biāo)分析。每個網(wǎng)箱隨機(jī)取2尾魚，剪下1 cm左右的中腸，使用生理鹽水洗凈后置于4%的多聚甲醛中固定，用于腸道組織切片的制作。腸道和肝臟樣品分別注入質(zhì)量體積比1：9的生理鹽水，經(jīng)4℃、4000 r/min、10 min高速離心后，取上清液，4℃保存，用于腸道消化酶、肝臟蛋白質(zhì)代謝酶活性的測定。生長計(jì)算公式如下：

特定生長率/（%/d）=（ln終末體質(zhì)量-ln初始體質(zhì)量）/56×100；

增重率/%=（平均終末體質(zhì)量-平均初始體質(zhì)量）/平均初始體質(zhì)量×100；

飼料系數(shù)=平均飼料攝入量/（終末平均體質(zhì)量-初始平均體質(zhì)量）；

肥滿度/（g/cm3）=終末體質(zhì)量/體長3×100；

成活率/%=（終末個體數(shù)/初始個體數(shù)）×100；

臟體比/%=內(nèi)臟團(tuán)重/體質(zhì)量×100；

肝體比/%=肝臟重/體質(zhì)量×100。

1.3.1 飼料、雞腸粉和秘魯魚粉常規(guī)營養(yǎng)成分的測定 飼料中水分含量采用105℃烘箱烘干至恒重測定（GB/T6435-2006）；粗蛋白質(zhì)含量采用凱氏定氮法測定（GB/T6432-2018）；粗脂肪含量采用索氏抽提法測定（GB/T6433-2006）；粗灰分采用馬弗爐550℃高溫灼燒法測定（GB/T6438-2007）。

1.3.2 飼料、雞腸粉和秘魯魚粉氨基酸測定 前處理參考國標(biāo)法（GB 5009.124 2016），使用全自動氨基酸分析儀（L-8900型，日立制作所）測定。

1.3.3 腸道消化酶活性的測定 胃蛋白酶（PEP）、淀粉酶（AMS）和脂肪酶（LPS）均采用南京建成生物工程研究所試劑盒進(jìn)行測定。

1.3.4 肝臟蛋白質(zhì)代謝酶活性的測定 谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）和谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）采用南京建成生物工程研究所試劑盒進(jìn)行測定。

1.3.5 血清生化指標(biāo)的測定 總蛋白（TP）、總膽固醇（T-CHO）、甘油三酯（TG）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）和谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）均采用南京建成生物工程研究所試劑盒進(jìn)行測定。

1.3.6 腸道切片 鯉中腸樣本使用多聚甲醛固定24 h，并使用一系列分級乙醇濃度脫水，然后使用標(biāo)準(zhǔn)石蠟包埋方法制備蘇木精-伊紅（HE）切片。采用顯微鏡進(jìn)行觀察中腸組織切片，S-viewer軟件進(jìn)行測量并拍照。每張切片取10個完整的絨毛高度（VH）、肌層厚度（MT）、絨毛寬度（VW），取平均值作為測定結(jié)果。

1.4 數(shù)據(jù)處理 試驗(yàn)數(shù)據(jù)用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示，采用SPSS 25.0軟件（IBM，USA）進(jìn)行單因素方差分析（one-way ANOVA），并用Duncan’s法進(jìn)行多重比較來分析各處理組間的顯著性，設(shè)置P＜0.05為差異顯著。

2 結(jié)果

2.1 無魚粉飼料中補(bǔ)充限制性氨基酸對鯉生長性能的影響 由表3可知，無魚粉飼料中補(bǔ)充限制性氨基酸對鯉成活率無顯著影響（P>0.05）。G3、G4和G5組鯉的終末體質(zhì)量、增重率和特定生長率均顯著高于對照組（P＜0.05）。G3、G4和G5組鯉的終末體質(zhì)量較對照組分別上升12.01%、16.64%和17.04%（P＜0.05）；G3、G4和G5組鯉的增重率較對照組分別上升17.56%、24.18%和24.94%（P＜0.05）；G3、G4和G5組鯉的特定生長率較對照組分別上升9.95%、13.43%和13.93%（P＜0.05）。隨著限制性氨基酸補(bǔ)充水平的增加，鯉的臟體比和肝體比呈下降趨勢，G3、G4和G5組臟體比與對照組相比分別下降16.69%、27.35%和27.10%（P＜0.05），G4和G5組肝體比與對照組相比分別下降13.55%和16.13%（P＜0.05）。隨著限制性氨基酸補(bǔ)充水平的增加，鯉飼料系數(shù)呈下降趨勢，與對照組相比，G3、G4和G5組飼料系數(shù)分別下降5.06%（P>0.05）、8.23%（P＜0.05）和4.43%（P>0.05）。

表3 無魚粉飼料中補(bǔ)充限制性氨基酸對鯉生長性能的影響

2.2 無魚粉飼料中補(bǔ)充限制性氨基酸對鯉腸道消化酶活性的影響 由表4可知，無魚粉飼料中補(bǔ)充限制性氨基酸后鯉腸道胃蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶活性呈上升趨勢，G2組胃蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶活性與對照組差異不顯著（P>0.05），G3、G4、G5組胃蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶活性均顯著高于對照組（P＜0.05），并在G5組達(dá)到峰值。G3、G4、G5組胃蛋白酶活性較對照組分別上升61.07%、74.93%和164.57%（P＜0.05）；G3、G4、G5組淀粉酶活性較對照組分別上升55.56%、60.68%和71.79%（P＜0.05）；G3、G4、G5組脂肪酶活性較對照組分別上升90.55%、113.58%和124.61%（P＜0.05）。

表4 無魚粉飼料中補(bǔ)充限制性氨基酸對鯉腸道消化酶活性的影響

2.3 無魚粉飼料中補(bǔ)充限制性氨基酸對鯉腸道組織形態(tài)的影響 由表5可知，無魚粉飼料中補(bǔ)充限制性氨基酸后鯉腸道肌層厚度、絨毛高度、絨毛寬度呈上升趨勢，G2組肌層厚度、絨毛高度、絨毛寬度與對照組差異不顯著（P>0.05），G3、G4、G5組肌層厚度、絨毛高度、絨毛寬度均顯著高于對照組（P＜0.05），并在G5組達(dá)到峰值。G3、G4、G5組肌層厚度較對照組分別上升22.98%、29.13%和29.32%（P＜0.05）；G3、G4、G5組 絨 毛高度較對照組分別上升8.61%、13.33%和16.90%（P＜0.05）；G3、G4、G5組絨毛寬度較對照組分別上升27.09%、39.58%和51.28%（P＜0.05）。各組腸道切片見圖1。

圖1 無魚粉飼料中補(bǔ)充限制性氨基酸對鯉中腸組織形態(tài)的影響

表5 無魚粉飼料中補(bǔ)充限制性氨基酸對鯉腸道組織形態(tài)的影響 μm

2.4 無魚粉飼料中補(bǔ)充限制性氨基酸對鯉肝臟代謝酶活性的影響 由表6可知，無魚粉飼料中補(bǔ)充限制性氨基酸后鯉肝臟谷草轉(zhuǎn)氨酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性均呈上升趨勢，G2組谷草轉(zhuǎn)氨酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性與對照組差異不顯著（P>0.05），G3、G4、G5組谷草轉(zhuǎn)氨酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性均顯著高于對照組（P＜0.05）。G3、G4、G5組谷草轉(zhuǎn)氨酶活性較對照組分別上升4.28%、5.34%和6.99%（P＜0.05）；G3、G4、G5組谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性較對照組分別上升6.88%、9.12%和11.21%（P＜0.05）。

表6 無魚粉飼料中補(bǔ)充限制性氨基酸對鯉肝臟代謝酶活性的影響 U/mg prot

2.5 無魚粉飼料中補(bǔ)充限制性氨基酸對鯉血清生化指標(biāo)的影響 由表7可知，鯉血清總蛋白水平呈上升趨勢，G2組總蛋白水平與對照組差異不顯著（P>0.05），G3、G4、G5組總蛋白水平較對照組分別上升0.21%、0.85%和0.95%（P＜0.05）。鯉血清總膽固醇、甘油三酯水平及谷草轉(zhuǎn)氨酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性在各組間均無顯著差異（P>0.05）。

表7 無魚粉飼料中補(bǔ)充限制性氨基酸對鯉血清生化指標(biāo)的影響

3 討論

3.1 無魚粉飼料中補(bǔ)充必需氨基酸對鯉生長性能的影響 賴氨酸和蛋氨酸作為必需氨基酸，通常被認(rèn)作是水產(chǎn)動物的第一、第二限制性氨基酸，對于維持水產(chǎn)動物的生長和正常的生理代謝有著重要的作用（Machado，2020；李小軍，2019；Coutinho等，2017；劉夢梅，2016）。研究發(fā)現(xiàn)，在飼料中補(bǔ)充賴氨酸能夠不同程度地提升團(tuán)頭魴（廖英杰等，2013）、勃氏雅羅魚 （牛小天等，2019）、雅 羅 魚（左 亞 男，2017）、草 魚（劉 夢 梅，2016）、克氏原螯蝦（張微微等，2013）和雜交石斑魚（Li等，2019）的增重率、飼料效率和蛋白效率。類似的，飼料中補(bǔ)充蛋氨酸也能夠改善大菱鲆（Gao等，2019）、軍曹魚（Chi等，2020）、尼羅羅非魚（Guo等，2020）和吉富羅非魚（向梟等，2014）的生長性能。相關(guān)研究也表明，在低魚粉或無魚粉飼料中補(bǔ)充賴氨酸和蛋氨酸能夠在一定程度上改善水產(chǎn)動物的生長性能和提高飼料效率（黃文文等，2015；Rawles等，2013；宋宏斌等，2011）。在本研究結(jié)果中，鯉的終末體重量、增重率、特定生長率隨必需氨基酸補(bǔ)充水平的增加呈先增加后趨于平穩(wěn)的趨勢，G3、G4和G5組終末體重量、增重率、特定生長率均顯著高于對照組，說明雞腸粉飼料蛋白源添加必需氨基酸后能夠顯著提升鯉的生長性能。申斌（2014）研究發(fā)現(xiàn)，飼料中補(bǔ)充賴氨酸和蛋氨酸，能夠使飼料氨基酸組成趨于平衡，從而促進(jìn)水產(chǎn)動物生長。馮勇軼等（2020）研究表明，飼料中補(bǔ)充適量的賴氨酸和蛋氨酸能夠改善珍珠龍膽石斑魚的生長性能，過量則會影響飼料氨基酸的合理組成從而降低飼料利用效果。張玲等（2021）研究結(jié)果也表明，飼料中添加賴氨酸和蛋氨酸較未添加能夠顯著提高鯉的生長性能，但進(jìn)一步增加添加水平鯉生長性能未發(fā)生顯著改善，趨于平穩(wěn)狀態(tài)，類似的情況也在麥?zhǔn)贤蓄^石首魚（Madrid等，2019）、團(tuán)頭魴（宋長友等，2016）和斜帶石斑魚 （楊烜懿等，2020）中發(fā)生。在本研究結(jié)果中，無魚粉飼料中補(bǔ)充賴氨酸和蛋氨酸對鯉的肥滿度無顯著影響，但顯著降低了G3、G4和G5組鯉的臟體比和肝體比，說明雞腸粉飼料蛋白源補(bǔ)充賴氨酸和蛋氨酸后能夠促進(jìn)內(nèi)臟脂肪和糖原的轉(zhuǎn)化。這也與在團(tuán)頭魴（廖英杰等，2013）、草魚（Jiang等，2016）和吉富羅非魚（向梟等，2014）上的研究結(jié)果相似，適宜的賴氨酸和蛋氨酸能夠降低魚體的臟體比和肝體比，促進(jìn)脂肪和糖原向蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)化。本試驗(yàn)中，當(dāng)飼料中必需氨基酸補(bǔ)充水平較低時，鯉生長速度較慢、飼料系數(shù)較高，隨著必需氨基酸補(bǔ)充水平的增加鯉增重率顯著增加，飼料系數(shù)顯著降低。吉富羅非魚（向梟等，2014）、雅羅魚（左亞男，2017）和勃氏雅羅魚（牛小天等，2019）上的研究也表明，飼料中添加適量的賴氨酸和蛋氨酸能夠降低飼料系數(shù)，提高飼料效率和蛋白質(zhì)效率。

3.2 無魚粉飼料中補(bǔ)充限制性氨基酸對鯉腸道消化酶活性的影響 消化酶是由消化器官和消化系統(tǒng)分泌的一種具有高度的催化性和專一性的酶類，消化酶的活性直接說明了水產(chǎn)動物對其營養(yǎng)物質(zhì)消化吸收的能力（唐黎等，2007）。相關(guān)研究表明，飼料中添加適量的賴氨酸和蛋氨酸，能夠在一定程度上提高水產(chǎn)的消化酶活性，促進(jìn)營養(yǎng)物質(zhì)的消化和吸收（張微微等，2013；王光花，2007；趙春蓉，2005）。李雪吟（2017）研究表明，飼料中添加適量的賴氨酸能夠影響草魚TOR和4E-BP基因的表達(dá)，調(diào)控消化酶基因的轉(zhuǎn)錄，提高魚類的消化酶活性。Li等（2014）研究結(jié)果表明，飼料中補(bǔ)充適量的賴氨酸能夠提高草魚腸道胰蛋白酶、糜蛋白酶和脂肪酶活性，認(rèn)為賴氨酸能夠刺激魚胰腺中消化酶的合成和促進(jìn)消化酶的分泌及釋放。類似的，Noor等（2021）研究結(jié)果也表明，飼料中補(bǔ)充適宜的蛋氨酸能夠提高南亞野鯪的腸道消化酶活性，改善南亞野鯪的消化和吸收能力。與前人的研究結(jié)果相似，本研究結(jié)果中，無魚粉飼料中補(bǔ)充賴氨酸和蛋氨酸后鯉腸道胃蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活性呈上升趨勢，G3、G4、G5組胃蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活性顯著高于對照組，說明無魚粉飼料中補(bǔ)充適量的賴氨酸和蛋氨酸能夠提高鯉的消化酶活性，促進(jìn)鯉腸道對營養(yǎng)物質(zhì)的消化和吸收。

3.3 無魚粉飼料中補(bǔ)充限制性氨基酸對鯉腸道組織形態(tài)的影響 魚類的腸道是魚類消化和吸收的主要器官和場所，腸道肌層厚度、絨毛高度、絨毛寬度是評價(jià)魚類腸道組織變化的重要指標(biāo)（Li等，2019）。絨毛高度和絨毛寬度的增加通常被視為腸道營養(yǎng)物質(zhì)吸收表面積的增加，肌層厚度的增加可以促進(jìn)腸道的消化和吸收能力（Tan等，2018）。在本試驗(yàn)中，鯉腸道肌層厚度、絨毛高度、絨毛寬度隨著賴氨酸和蛋氨酸添加水平的增加呈上升趨勢，G3、G4、G5組肌層厚度、絨毛高度、絨毛寬度顯著高于對照組，表明無魚粉飼料中補(bǔ)充適宜的賴氨酸和蛋氨酸能夠增加腸道營養(yǎng)物質(zhì)吸收表面積和改善鯉腸道的消化功能。本試驗(yàn)研究結(jié)果與李小軍（2019）和Gao等（2019）研究結(jié)果相似，飼料補(bǔ)充適量的賴氨酸和蛋氨酸能夠增加虎龍雜交斑和大菱鲆腸道肌層厚度、絨毛高度、絨毛寬度，改善腸道發(fā)育情況。

3.4 無魚粉飼料中補(bǔ)充限制性氨基酸對鯉肝臟代謝酶活性的影響AST和ALT是肝臟內(nèi)參與氨基酸代謝的轉(zhuǎn)氨酶，是評價(jià)肝臟功能代謝健康最重要的指標(biāo)之一，AST和ALT活性的高低反映出了魚類肝臟氨基酸和蛋白質(zhì)代謝的狀態(tài)（段晶等，2019）。王香麗等（2015）研究表明，飼料中添加適量的蛋氨酸能夠提高瓦氏黃顙魚肝臟AST和ALT活性，增強(qiáng)機(jī)體氨基酸代謝能力。張新黨等（2021）使用缺乏蛋氨酸的飼料飼喂絲尾鳠發(fā)現(xiàn)，絲尾鳠肝臟AST和ALT活性異常，導(dǎo)致肝臟氨基酸代謝不平衡和蛋白質(zhì)代謝紊亂。向梟等（2016）研究結(jié)果也表明，飼料中添加適量的蛋氨酸能夠增強(qiáng)羅非魚肝臟AST和ALT活性，促進(jìn)羅非魚體內(nèi)氨基酸的代謝和蛋白質(zhì)的合成。劉夢梅（2016）研究表明，低蛋白飼料中補(bǔ)充賴氨酸和蛋氨酸能夠提高草魚肝臟AST活性，促進(jìn)轉(zhuǎn)氨作用。與前人的研究結(jié)果相似，在本試驗(yàn)結(jié)果中，無魚粉飼料中補(bǔ)充限制性氨基酸后鯉肝臟AST、ALT活 性 均 呈 上 升 趨 勢，G3、G4、G5組AST、ALT活性均顯著高于對照組，表明無魚粉飼料中補(bǔ)充適量的賴氨酸和蛋氨酸有利于機(jī)體正常的氨基酸代謝和蛋白質(zhì)的合成。以上結(jié)果的出現(xiàn)，很可能是由于無魚粉飼料中補(bǔ)充適量的賴氨酸和蛋氨酸后，飼料中氨基酸的組成趨于平衡，增強(qiáng)了AST、ALT的轉(zhuǎn)氨作用，促進(jìn)了機(jī)體對蛋白質(zhì)的周期代謝（王香麗等，2015）。

3.5 無魚粉飼料中補(bǔ)充限制性氨基酸對鯉血清生化指標(biāo)的影響 血清生化指標(biāo)可以反映組織細(xì)胞通透性和機(jī)體生理代謝狀態(tài)，在一定程度上可以作為評價(jià)動物健康狀態(tài)的指標(biāo)之一。血清總蛋白是在肝臟合成的，反映了機(jī)體蛋白質(zhì)代謝和肝臟功能狀態(tài)，血清總蛋白含量增加可以促進(jìn)機(jī)體蛋白質(zhì)沉積，促進(jìn)生長（陳曉瑛等，2019）。在本試驗(yàn)結(jié)果中，鯉血清總蛋白水平呈上升趨勢，G3、G4、G5組總蛋白水平均顯著高于對照組，與鯉肝臟AST、ALT活性趨勢一致，表明無魚粉飼料中補(bǔ)充適量的賴氨酸和蛋氨酸能夠改善機(jī)體蛋白質(zhì)代謝狀態(tài)，這一結(jié)果也與前人對草魚（劉夢梅，2016）、鳡（楊威，2012）、點(diǎn)帶石斑魚（Luo等，2016）和黑鯛（周凡，2011）的研究結(jié)果相似。甘油三酯和總膽固醇反映了機(jī)體脂肪代謝狀態(tài)（向梟等，2016）。在本試驗(yàn)結(jié)果中，鯉血清甘油三酯和總膽固醇水平與對照組差異不顯著，表明飼料中補(bǔ)充適量的賴氨酸和蛋氨酸不會對鯉脂肪代謝產(chǎn)生有害影響。關(guān)于飼料中添加賴氨酸和蛋氨酸，對水產(chǎn)動物血清甘油三酯和總膽固醇水平變化的相關(guān)研究，結(jié)果并不相同。周凡（2011）研究表明，飼料中添加不同水平的賴氨酸后，黑鯛血清總膽固醇水平呈下降趨勢，甘油三酯水平無顯著變化。林郁蔥（2012）研究表明，胭脂魚血清總膽固醇和甘油三酯水平隨著飼料中蛋氨酸水平的增加而顯著增加。向梟等（2016）研究表明，羅非魚血清膽固醇和甘油三酯含量隨著飼料中蛋氨酸水平的增加呈先升高后穩(wěn)定的變化趨勢。目前針對賴氨酸和蛋氨酸調(diào)節(jié)脂肪代謝機(jī)理的研究較少，以上結(jié)果的出現(xiàn)，很可能是由于品種、食性、規(guī)格、養(yǎng)殖環(huán)境、飼料配方及對賴氨酸和蛋氨酸利用能力的不同所導(dǎo)致的水產(chǎn)動物脂肪代謝水平的差異。正常情況下血清中AST、ALT活性很低，當(dāng)肝臟受到損傷時才會釋放到血液之中導(dǎo)致活性顯著升高（陳晨等，2010）。在本試驗(yàn)結(jié)果中，鯉血清AST、ALT活性均較低且無顯著變化，表明無魚粉飼料中補(bǔ)充適量的賴氨酸和蛋氨酸并不會對鯉肝臟造成損傷。研究發(fā)現(xiàn)，在飼料中蛋氨酸含量不足時瓦氏黃顙魚（王香麗等，2015）、建鯉（Feng等，2011）會出現(xiàn)蛋白質(zhì)代謝異常，肝臟受損的情況。

4 結(jié)論

在本試驗(yàn)條件下，無魚粉飼料中添加1.0%、1.5%和2.0%的限制性氨基酸均能夠顯著提高鯉的生長性能和消化酶活性，改善鯉腸道發(fā)育情況和肝臟蛋白質(zhì)代謝狀態(tài)，并對鯉血清生化指標(biāo)無有害影響，且以2.0%的添加量效果最好。