發(fā)酵飼料對雛雞生長性能、免疫性能、抗氧化能力及肝功能的影響

徐 翡， 劉 震， 田 勇， 盧永勝， 楊家新，屠炳江， 武洪志， 楊鵬強(qiáng)， 盧志望， 刁新平， 盧立志*

（1.農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全危害因子與風(fēng)險防控國家重點(diǎn)實驗室，浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，浙江 杭州 310000；2.東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，黑龍江 哈爾濱 150030；3.江西棲嶺農(nóng)牧有限公司，江西 贛州 342300；4.湖州動物疫病預(yù)防控制中心，浙江 湖州 313002；5.中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶作物品種資源研究所，海南 海口 571101）

近年來，隨著家禽業(yè)集約化、規(guī)?；畈l(fā)展，諸多問題也逐漸凸顯，在飼料行業(yè)全面禁抗和國際貿(mào)易摩擦引發(fā)飼料原料價格攀升的背景下（王蕾蕾等，2021；Dao等，2021），糧食谷物深加工后剩余的副產(chǎn)物、廢渣等雖然含有豐富的營養(yǎng)成分，卻不能得到充分利用（田波，2013）。因此通過技術(shù)研發(fā)、科技創(chuàng)新等手段，利用微生物發(fā)酵工業(yè)邊角料、副產(chǎn)物和廢渣等生產(chǎn)發(fā)酵飼料，引起科研人員的關(guān)注。研究表明，發(fā)酵飼料富含營養(yǎng)成分如碳水化合物、蛋白肽、揮發(fā)性脂肪酸、氨基酸、大豆肽等（馮海峰，2020），通過發(fā)酵可降低抗原蛋白、胰蛋白酶抑制劑以及致甲狀腺腫素等抗?fàn)I養(yǎng)物質(zhì)的含量（李繼彬，2019），發(fā)酵飼料不但能夠維持動物腸道健康，調(diào)節(jié)腸道菌群平衡（胡新旭，2013），而且能提高自身的適口性，增加動物的采食量，進(jìn)而提高動物生產(chǎn)性能，降低企業(yè)生產(chǎn)成本，提高經(jīng)濟(jì)效益。雖然目前對微生物的認(rèn)知已經(jīng)非常全面，但不同的原料經(jīng)過不同微生物、益生菌以及不同的發(fā)酵工藝會產(chǎn)生不同比例的營養(yǎng)物質(zhì)（劉澤等，2021）。本研究以乳酸菌、酵母菌等益生菌發(fā)酵豆渣并將其添加到雛雞日糧中，探究發(fā)酵飼料對雛雞的作用效果，旨在為發(fā)酵飼料在畜禽日糧中的應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗設(shè)計 選擇1日齡黃羽肉雞雛雞240只，隨機(jī)分為2組，每組6個重復(fù)，每個重復(fù)20只雛雞。對照組飼喂基礎(chǔ)日糧，發(fā)酵飼料組飼喂基礎(chǔ)日糧+2%發(fā)酵飼料，試驗基礎(chǔ)飼糧為玉米-小麥型，參照NRC（1994）營養(yǎng)需要進(jìn)行配制。基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平見表1。雛雞飼養(yǎng)模式為地面平鋪稻殼散養(yǎng)，24 h光照，自由采食、飲水，按照正常免疫程序進(jìn)行接種，試驗期共22 d。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平（風(fēng)干基礎(chǔ)）

1.2 發(fā)酵飼料的制備 發(fā)酵飼料選用價格便宜的豆腐渣，以麩皮和稻殼粉為輔料，添加乳酸菌、酵母菌（活菌數(shù)均為2.0×107CFU/g），在常溫下混勻、裝袋、密閉，經(jīng)控溫發(fā)酵3~5 d，最終經(jīng)過檢測合格后，在基礎(chǔ)日糧中，按2%的比例額外添加。飼料均由盛和集團(tuán)江西棲嶺農(nóng)牧有限公司提供。

1.3 樣品的采集 試驗期結(jié)束后，禁食12 h，每個重復(fù)中隨機(jī)抽取一只雛雞，頸動脈采血10 mL，3500 r/min離心20 min，將析出的上清液用移液槍轉(zhuǎn)移到離心管中，在-80℃的冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆谩Ｇ逅驖裼鹈?，快速打開腹腔，取肝臟、脾臟、法氏囊、胸腺，稱重。

1.4 測定指標(biāo)及方法

1.4.1 生長性能 試驗期間，每天記錄每個重復(fù)雛雞的采食量，并在第1、11、22天空腹稱量體重，用于計算平均日增重（ADG）、平均日采食量（ADFI）、料肉比（F/G）。

1.4.2 免疫性能 每重復(fù)隨機(jī)選取1只雛雞，取肝臟、脾臟、法氏囊、胸腺等器官并稱重，計算各器官指數(shù)。免疫指標(biāo)包括：免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白M（IgM）、白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-4（IL-4）、白細(xì)胞介素-10（IL-10）。用酶聯(lián)免疫吸附測定。使用華衛(wèi)德朗DR-200BS酶標(biāo)分析儀（無錫華衛(wèi)德朗儀器有限公司）。試劑盒由北京華英生物有限公司提供。

器官指數(shù)/%=（器官重量/體重）×100。

1.4.3 抗氧化指標(biāo) 抗氧化指標(biāo)包括：超氧化物歧化酶（SOD）、總抗氧能力（T-AOC）、過氧化氫酶（CAT）。用酶聯(lián)免疫吸附測定。使用華衛(wèi)德朗DR-200BS酶標(biāo)分析儀（無錫華衛(wèi)德朗儀器有限公司）。試劑盒由北京華英生物有限公司提供。

1.4.4 肝功能 肝功能指標(biāo)包括：總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、堿性磷酸酶（ALP）。采用比色法。儀器型號為邁瑞B(yǎng)S-420全自動生化儀（深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司）。試劑盒由中生北控股份有限公司提供。

1.4.5 血清其他指標(biāo) 血清其他指標(biāo)包括：總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白（HDL）、低密度脂蛋白（LDL）、尿素（UREA）、尿酸（Ua）、血氨（AN）、游離脂肪酸（NEFA）。采用比色法。儀器型號為邁瑞B(yǎng)S-420全自動生化儀（深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司）。試劑盒由中生北控股份有限公司提供。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析 采用SPSS 26.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，首先檢驗數(shù)據(jù)的方差齊性，服從正態(tài)分布的數(shù)據(jù)再進(jìn)行單因子方差分析（one-wayANOVA），運(yùn)用t檢驗進(jìn)行組間比較，結(jié)果用“標(biāo)準(zhǔn)差±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示，P<0.05表示差異顯著，P<0.01表示差異極顯著。

2 結(jié)果

2.1 添加發(fā)酵飼料對生長性能的影響 由表2可知，與對照組相比，添加發(fā)酵飼料后雛雞的ADG在1~11、12~22 d和1~22 d階段分別提高了9.52%、4.5%、6.26%（P>0.05），ADFI在0~11、12~22 d和0~22 d階段分別降低2.11%、0.38%、0.99%（P>0.05），F(xiàn)/G在1~11、12~22 d和1~22 d階段分別降低了10.7%、4.44%、6.56%（P>0.05）。這說明發(fā)酵飼料能降低雛雞的料肉比，提高生長性能，但差異不顯著。

表2 發(fā)酵飼料對雛雞生長性能的影響

2.2 添加發(fā)酵飼料對雛雞免疫性能的影響

2.2.1 對免疫器官的影響 由表3可知，與對照組相比，發(fā)酵飼料組的肝臟指數(shù)、脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)提高，其中肝臟指數(shù)提高了11.21%，差異極顯著（P<0.01），脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)分別提高了29.31%、2.38%，但差異不顯著（P>0.05）。

表3 發(fā)酵飼料對雛雞免疫器官指數(shù)的影響 g/kg

2.2.2 對血清免疫指標(biāo)的影響 由表4可知，與對照組相比，添加發(fā)酵飼料組的血清中免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白M（IgM）、以及抗炎因子白細(xì)胞介素-4（IL-4）和白細(xì)胞介素-10（IL-10）含量極顯著高于對照組 （P<0.01），分別提高了30.1%、26.79%、50.3%和40.7%，免疫球蛋白G（IgG）顯著高于對照組（P<0.05），提高了14.3%；添加發(fā)酵飼料組雛雞血清中促炎因子白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）和腫瘤壞死因子-α（TNF-α）的含量極顯著低于對照組（P<0.01），分別降低了41.1%、50.84%和41.67%。

表4 發(fā)酵飼料對雛雞血清免疫指標(biāo)的影響

2.3 添加發(fā)酵飼料對雛雞抗氧化能力的影響由表5可知，發(fā)酵飼料組中的抗氧化指標(biāo)，超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化氫酶（CAT）活性和總抗氧能力（T-AOC）極顯著高于對照組（P<0.01），分別提高78.81%、46.86%、28.95%。

表5 發(fā)酵飼料對雛雞抗氧化指標(biāo)的影響 U/mL

2.4 添加發(fā)酵飼料對雛雞肝功能的影響 由表6可知，與對照組相比，發(fā)酵飼料組的堿性磷酸酶（ALP）、總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）含量均降低，分別降低了51.13%、17.02%、21.89%（P<0.05）

表6 發(fā)酵飼料對雛雞肝功能的影響

2.5 添加發(fā)酵飼料對雛雞血清生化指標(biāo)的影響由表7可知，與對照組相比，添加發(fā)酵飼料組的雛雞血清中總膽固醇（TC）、高密度脂蛋白（HDL）、尿素（UREA）、血氨（AN）含量顯著下降，分別降低26.5%、36.15%、15.63%、26.4%（P<0.05），其中高密度脂蛋白（HDL）、血氨（AN）極顯著低于對照組（P<0.01）；添加發(fā)酵飼料組的甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL）、尿酸（UA）、游離脂肪酸（NEFA）含量降低10.9%、8.1%、4.59%、9.3%，但差異不顯著（P>0.05）。

表7 發(fā)酵飼料對雛雞血清生化指標(biāo)的影響

3 討論

3.1 發(fā)酵飼料對雛雞生長性能的影響 研究表明，發(fā)酵飼料中含有多種利于動物生長發(fā)育的有益成分（喬艷明，2016），如酶、有機(jī)酸、多糖、維生素、粗蛋白質(zhì)、低分子量肽及總氨基酸等（王佰濤等，2020；吳逸飛，2016），飼料通過發(fā)酵還能降低抗?fàn)I養(yǎng)因子的含量（張秀林等，2017；桑靜超，2014），從而提高飼料的適口性，提高動物機(jī)體腸胃對營養(yǎng)物質(zhì)的分解、消化、吸收和利用。彭蕭等（2020）研究表明，在飼糧中添加發(fā)酵飼料，可顯著提高蛋雞產(chǎn)蛋期的產(chǎn)蛋率，有效降低死亡率。孫波等（2021）研究表明，與對照組相比，發(fā)酵飼料組40日齡的納雍土雞ADFI、ADG顯著提高，F(xiàn)/D顯著降低。周露等（2019）研究表明，發(fā)酵飼料能夠提高育肥期文昌雞的日增重和成活率，降低料肉比，但差異不顯著。本試驗結(jié)果分析得出，與對照組相比，添加發(fā)酵飼料能夠提高雛雞的ADG，降低ADFI和F/G，但發(fā)酵飼料對雛雞ADG、ADFI和F/G等數(shù)據(jù)指標(biāo)的改善效果僅表現(xiàn)出良好趨勢，未達(dá)到顯著性差異。本研究結(jié)果原因：（1）由于8月天氣炎熱潮濕，對雛雞的采食量有一定影響；（2）可能由于雛雞剛出生，其消化系統(tǒng)發(fā)育不完善，對營養(yǎng)物質(zhì)的吸收不完全；（3）由于黃羽肉雞相比別的品種生長速度快，采食量大，白天禁止過多添加飼料，避免積食導(dǎo)致窒息。

3.2 發(fā)酵飼料對雛雞免疫性能的影響 動物機(jī)體的免疫水平可以通過免疫器官指數(shù)來評價（朱孟玲等，2010），在動物機(jī)體健康狀態(tài)下，免疫器官指數(shù)越大，表明機(jī)體的免疫水平越高。免疫器官主要包括肝臟、脾臟、法氏囊、胸腺等。肝細(xì)胞內(nèi)含有大量的巨噬細(xì)胞，可以吞噬毒素、清除細(xì)菌，干細(xì)胞還能產(chǎn)生抗體，消滅侵入機(jī)體的病原體（侯彥茹等，2021）。脾臟作為中樞免疫器官，是動物機(jī)體體液免疫和細(xì)胞免疫的中心（張雪等，2021；張凱歌等，2021）。法氏囊是禽類特有的中樞免疫器官，是B細(xì)胞誘導(dǎo)、分化、發(fā)育的場所（石天虹等，2020）。胸腺屬于中樞免疫器官，可以誘導(dǎo)骨髓的多功能干細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)門淋巴細(xì)胞（張雪等，2021）。目前為止，關(guān)于發(fā)酵飼料對家禽免疫器官指數(shù)的報道很少。李念珍等（2020）研究發(fā)現(xiàn)，與地面平養(yǎng)組相比，使用油樟葉渣發(fā)酵床能顯著提高肉雞脾臟指數(shù)，極顯著提高胸腺指數(shù)。徐輝等（2021）研究發(fā)現(xiàn)，添加生物發(fā)酵飼料對育肥鵝的胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)和法氏囊指數(shù)均無顯著影響。本試驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與對照組相比，發(fā)酵飼料組肝臟指數(shù)極顯著提高，脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)雖然有提高的趨勢，但差異不顯著。雖然雛雞的免疫系統(tǒng)還處在發(fā)育階段，但發(fā)酵飼料能夠提高雛雞的免疫性能趨勢已定。

免疫機(jī)制主要包括體液免疫和細(xì)胞免疫，免疫力是動物抵抗外來病原微生物、細(xì)菌、病毒的能力，主要通過免疫指標(biāo)來體現(xiàn)（Koo等，2018），提高免疫力有助于動物健康生長，對生產(chǎn)能力、經(jīng)濟(jì)效益具有重要意義。血清中IgA、IgG、IgM由免疫器官分泌（Chun等，2021）。抗炎因子IL-4、IL-10是免疫細(xì)胞間相互作用的淋巴因子，具有激活并提高免疫細(xì)胞的功能（吳雅鋆等，2021）。TNF-α是由單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的因子，參與分泌調(diào)節(jié)具有免疫活性，促炎因子IL-1β、IL-6和TNF-α等含量降低，說明動物機(jī)體的免疫力增強(qiáng)（范秋麗等，2021）。免疫球蛋白、促炎因子和抗炎因子與動物機(jī)體的免疫水平密不可分（翟嘉怡等，2021），李薛強(qiáng)等（2019）研究發(fā)現(xiàn)，在臨產(chǎn)母豬日糧中添加復(fù)合菌發(fā)酵物，與對照組相比，試驗組母豬分娩時血清中IgG、IgM含量均顯著升高。王娟娟等（2011）研究發(fā)現(xiàn)，日糧添加發(fā)酵飼料可提高動物血液白細(xì)胞數(shù)量和IgA的含量，本試驗結(jié)果與其一致。本試驗數(shù)據(jù)分析得出，與對照組相比，添加發(fā)酵飼料組血清的IgA、IgM含量極顯著提高，IgG含量顯著提高（P<0.05）。魏越波（2020）研究發(fā)現(xiàn)，益生菌發(fā)酵配合飼料能使蛋雞IL-2、IL-6、TNF-α降低。海藍(lán)恩等（2020）研究發(fā)現(xiàn)，用10%復(fù)合益生菌發(fā)酵飼料替代基礎(chǔ)日糧作為試驗組，與對照組相比，仔豬血清中IgG、IgA、補(bǔ)體4（C4）、IL-2、IL-4含量顯著提高。本試驗結(jié)果分析發(fā)現(xiàn)，與對照組相比，添加發(fā)酵飼料組雛雞血清中IgA、IgG、IgM顯著提高；抗炎因子IL-4和IL-10極顯著提高；血清中促炎因子IL-1β、IL-6、TNFα的含量極顯著下降。本試驗結(jié)果說明育雛期添加發(fā)酵飼料能顯著提高雛雞血清免疫水平。

3.3 發(fā)酵飼料對雛雞抗氧化性能的影響 動物機(jī)體內(nèi)的活性氧自由基是健康殺手，在自由基的作用下，蛋白細(xì)胞容易纖維化，脂肪細(xì)胞易發(fā)生過氧化反應(yīng)，導(dǎo)致動物氧化應(yīng)激產(chǎn)生負(fù)面影響，有時候自由基還能殺死健康的細(xì)胞至動物于死地（王時雨等，2017），動物機(jī)體內(nèi)有能清除活性氧自由基的抗氧化系統(tǒng)，能夠維持動物抗氧化水平，如SOD是一種抗氧化金屬酶，T-AOC是衡量各種抗氧化物質(zhì)和抗氧化酶的綜合指標(biāo)（丁鵬等，2019），CAT存在于過氧化物體內(nèi)，是催化過氧化氫分解成氧和水的酶。研究發(fā)現(xiàn)，復(fù)合乳酸菌發(fā)酵飼料可顯著提高超氧化物歧化酶和谷胱甘肽過氧化物酶活性（劉輝等，2021；李濤等，2014）。本試驗結(jié)果表明，添加發(fā)酵飼料組與對照組相比，血清中SOD、T-AOC和CAT的含量極顯著提高（P<0.01），表明發(fā)酵飼料能提高雛雞的抗氧化應(yīng)激能力，提高健康水平。

3.4 發(fā)酵飼料對雛雞肝功能的影響 肝臟作為動物機(jī)體的重要器官，既屬于消化系統(tǒng)，又屬于血液系統(tǒng)，還屬于免疫系統(tǒng)，所以肝功能對動物機(jī)體的生長發(fā)育有重要意義。本研究發(fā)現(xiàn)，發(fā)酵飼料能極顯著提高肝臟器官指數(shù)，所以繼續(xù)探究發(fā)酵飼料對肝功能的影響。ALP主要來源于肝臟和膽囊（汪晶晶等，2018），當(dāng)肝臟和膽囊等組織發(fā)生病變和損傷時ALP含量升高，所以ALP越低動物越健康（蘭海恩等，2020；李薛強(qiáng)等，2019），與對照組相比，添加發(fā)酵飼料組血清中ALP含量顯著降低。血清中TP在一定程度上反映了動物肝臟的合成和儲備功能（朱孟玲等，2010），TP的含量是ALB和GLB（球蛋白）含量的和，ALB能夠轉(zhuǎn)運(yùn)代謝物和營養(yǎng)物質(zhì)，ALB含量表示肝臟合成蛋白質(zhì)能力強(qiáng)弱，其含量的降低，表明肝臟中蛋白質(zhì)的代謝水平降低（馮建等，2016）。與對照組相比，添加發(fā)酵飼料組TP、ALB含量顯著降低，說明雛雞對發(fā)酵飼料中蛋白質(zhì)的利用率較高，還表明發(fā)酵飼料里的營養(yǎng)成分含量較高，能夠通過直接轉(zhuǎn)運(yùn)吸收，可以滿足雛雞生長的營養(yǎng)需要。

3.5 發(fā)酵飼料對雛雞血清其他指標(biāo)的影響 血液具有運(yùn)輸營養(yǎng)代謝產(chǎn)物、緩沖和維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)、防御和保護(hù)等功能，因此血液中血清指標(biāo)可以反映營養(yǎng)物質(zhì)消化吸收與健康狀況（Chemistry，2019）。脂類以TC、TG、NEFA、HDL、LDL等的形式在機(jī)體內(nèi)進(jìn)行一系列的消化分解、代謝吸收的生理過程（胡毅等，2018），血清中脂類含量的高低與脂肪分解能力、脂肪沉積速率和體脂轉(zhuǎn)化有關(guān)，含量越高，分解能力越弱（Robert等，2004）。TC含量下降表明，發(fā)酵飼料對動物機(jī)體的脂類代謝調(diào)節(jié)具有重要作用。TG存在于脂肪中，可反映脂肪合成強(qiáng)度，當(dāng)機(jī)體內(nèi)氨基酸含量過高無法合成蛋白質(zhì)時，氨基酸就會轉(zhuǎn)化成TG（辛小召，2014），TG含量下降說明機(jī)體氨基酸轉(zhuǎn)化成蛋白質(zhì)的水平較高。NEFA濃度與脂類、糖類代謝和內(nèi)分泌有關(guān)，NEFA升高容易引發(fā)高脂血癥，影響胰島功能誘發(fā)糖尿病。HDL和LDL主要運(yùn)輸血液中的膽固醇，HDL把機(jī)體各個部位產(chǎn)生的膽固醇運(yùn)到肝臟進(jìn)行代謝，LDL把肝臟中的膽固醇運(yùn)送到全身各個部位，當(dāng)LDL含量升高時，攜帶的膽固醇容易堆積在動脈引起動脈硬化，本文LDL又被稱為“壞的脂類”。本試驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與對照組相比，添加發(fā)酵飼料組雛雞血清中TC、TG、NEFA、HDL、LDL等脂類含量都有下降趨勢，其中TC顯著性下降，HDL極顯著下降，這說明發(fā)酵飼料對雛雞的脂類代謝具有促進(jìn)作用，能夠保護(hù)肝臟，有利于雛雞的生長發(fā)育。

血清中AN、UREA、UA等含量降低表明動物機(jī)體的健康水平升高（安亞南等，2018）。本試驗中，對照組相比，添加發(fā)酵飼料組血清中AN含量極顯著下降，UREA含量顯著下降，UA含量下降，差異不顯著，說明發(fā)酵飼料中含有豐富的氨基酸、多肽、消化酶等利于氨基酸吸收的營養(yǎng)物質(zhì)，提高了氮的吸收和蛋白質(zhì)的沉積率，有利于提高生長性能，促進(jìn)蛋白質(zhì)合成與沉積（胡新旭等，2013）。

4 結(jié)論

本試驗條件下，雛雞日糧中添加發(fā)酵飼料能夠提高免疫性能，增強(qiáng)抗氧化能力，促進(jìn)營養(yǎng)物質(zhì)消化吸收，改善健康水平。