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    許氏平鲉(Sebastes schlegelii)DAZ基因家族的鑒定及表達(dá)分析

    2022-11-04 10:58:40孫敏敏宋偉豪劉心田
    海洋湖沼通報(bào) 2022年5期
    關(guān)鍵詞:許氏配子生殖細(xì)胞

    孫敏敏,宋偉豪,吳 鵬,劉心田,齊 潔*

    (1.中國海洋大學(xué)海洋生物遺傳學(xué)與育種教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,山東 青島266003;2.中國海洋大學(xué)三亞海洋研究院海南省熱帶水產(chǎn)種質(zhì)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,海南 三亞 572000;3.威海市漁業(yè)推廣站,山東 威海 264400)

    引 言

    兩性配子發(fā)生包括生殖干細(xì)胞有絲分裂、增殖和減數(shù)分裂以及減數(shù)分裂后精子發(fā)生等多個(gè)過程[1-2]。DAZ基因家族為這些過程在分子水平上的進(jìn)化保守性提供了為數(shù)不多的證據(jù),在脊椎動(dòng)物和無脊椎動(dòng)物的雄性和雌性配子的產(chǎn)生中起著重要的作用[3-4]。DAZ家族由基因Daz、Dazl和Boule組成,它們都編碼RNA結(jié)合蛋白,其中包含一個(gè)保守的RNA識(shí)別基序(RRM)和一個(gè)或多個(gè)重復(fù)的DAZ基序[5]。Boule作為這個(gè)家族最古老的成員從原始的基底后生動(dòng)物到脊椎動(dòng)物都一直存在[3,6],而Dazl從Boule進(jìn)化而來,它從硬骨魚到人都一直存在[7]。Daz只存在于高等靈長(zhǎng)類動(dòng)物中,位于Y染色體上,其序列包含七個(gè)DAZ結(jié)構(gòu)域重復(fù)[8-9]。Dazl和Boule位于常染色體上[4,10],它們與Daz基因共同編碼RNA結(jié)合蛋白,在生殖細(xì)胞中特異表達(dá),參與調(diào)控生殖細(xì)胞的發(fā)育和分化[5,11]。

    DAZ基因家族通過調(diào)控 mRNA的翻譯過程影響生殖細(xì)胞的發(fā)育分化并且這些蛋白質(zhì)功能的喪失會(huì)導(dǎo)致雄性和雌性不育。Dazl和Boule是配子發(fā)生過程中不可缺少的調(diào)節(jié)因子[12-13]。小鼠中Dazl基因的缺失造成生殖細(xì)胞和配子的缺失,證實(shí)Dazl對(duì)于生殖細(xì)胞的分化是至關(guān)重要的[14]。在秀麗線蟲中Boule突變體導(dǎo)致卵子發(fā)生障礙[15]。研究發(fā)現(xiàn)小鼠通過Dazl結(jié)合Vasa同源基因(Mvh)的3 '-UTR刺激翻譯,Mvh是一種對(duì)雄性配子形成至關(guān)重要的基因,并發(fā)現(xiàn)Dazl缺失小鼠的生殖細(xì)胞中Mvh蛋白水平降低,說明Dazl介導(dǎo)的Mvh翻譯調(diào)控對(duì)哺乳動(dòng)物精子形成至關(guān)重要[16]。果蠅突變體缺失Boule使得Twine(一種cdc25型磷酸酶)失活,阻止其進(jìn)入減數(shù)分裂[17]。研究表明Dazl和Boule基因不僅能直接調(diào)控生殖細(xì)胞發(fā)育分化,而且能影響其它生殖細(xì)胞相關(guān)基因的表達(dá)。在原始生殖細(xì)胞(PGCs)的起源、遷移、分化及配子發(fā)生研究中,DAZ基因家族作為標(biāo)記基因參與生殖質(zhì)mRNA的翻譯。

    非洲爪蟾中母體DazlmRNA的特異性缺失,導(dǎo)致PGCs嚴(yán)重缺乏且PGC遷移出現(xiàn)障礙,不能從腹側(cè)遷移到背側(cè)內(nèi)胚層,也不能到達(dá)背側(cè)腸系膜。Dazl能夠作為一種RNA結(jié)合蛋白,調(diào)節(jié)介導(dǎo)PGCs遷移的因子的翻譯或表達(dá)[11]。

    研究人員已經(jīng)在斑馬魚[18]、銀鯽[19]、青鳉、羅非魚[20]、虹鱒[21-22]、尖吻鱸[23]和牙鲆[24]等魚類中對(duì)DAZ家族基因進(jìn)行了克隆并分析了其表達(dá)模式,大多數(shù)硬骨魚類Dazl和Boule均僅存在于性腺中,兩者在配子發(fā)生時(shí)表現(xiàn)出階段特異性的表達(dá)。青鳉[25-26]中關(guān)于Boule和Dazl的RNA表達(dá)模式的研究表明Boule和Dazl在有絲分裂和減數(shù)分裂生殖細(xì)胞中均有雙性表達(dá)的現(xiàn)象。虹鱒[21-22]中,Dazl不僅表現(xiàn)在雌、雄配子發(fā)生的有絲分裂和減數(shù)分裂階段中發(fā)揮作用,還能階段特異性亞細(xì)胞定位到巴爾比亞尼體,而Boule沒有定位到巴爾比亞尼體。Boule和Dazl是尖吻鱸成體中的生殖細(xì)胞標(biāo)記物[23],其在時(shí)空表達(dá)和亞細(xì)胞分布方面存在明顯差異。Boule和Dazl的兩性生殖細(xì)胞特異性表達(dá)在魚類中一直比較保守。DAZ家族基因的表達(dá)與其在生殖系發(fā)育不同階段的具體作用密切相關(guān),故對(duì)DAZ家族基因在低等和高等脊椎動(dòng)物中的表達(dá)比較進(jìn)行分析,將為研究配子發(fā)生和生殖細(xì)胞分化的分子機(jī)制提供材料。

    許氏平鲉(Sebastesschlegelii)為卵胎生的巖礁性魚類,是一種重要的海產(chǎn)經(jīng)濟(jì)魚類和增養(yǎng)殖優(yōu)良品種。由于其卵胎生繁殖方式,人工繁殖尚未實(shí)現(xiàn)。因此,對(duì)重要的生殖細(xì)胞標(biāo)記基因Dazl和Boule進(jìn)行研究,對(duì)了解許氏平鲉的性別分化和發(fā)育機(jī)制具有重要意義。在本研究中,我們通過對(duì)Daz基因家族進(jìn)行了結(jié)構(gòu)分析、進(jìn)化分析及表達(dá)分析,為進(jìn)一步研究Dazl和Boule在許氏平鲉生殖發(fā)育機(jī)制和兩性配子發(fā)生過程中的調(diào)控作用提供參考。

    1 材料與方法

    1.1 動(dòng)物來源與取樣

    本研究中所用的1齡半許氏平鲉成魚來源于威海銀澤生物科技股份有限公司。對(duì)許氏平鲉進(jìn)行麻醉后斷椎處理,取6條健康許氏平鲉成魚(3條雄魚和3條雌魚)的10個(gè)組織(心、肝、脾、腎、腦、腸、鰓、肌肉、精巢、卵巢),立即冷凍于液氮中,-80 ℃保存,用于RNA提取。并各取一塊肌肉組織保存于95%乙醇中,用作DNA提取。我們收集了不同發(fā)育階段(交尾前、交尾后和受精前)的雌性卵巢和不同發(fā)育階段(1細(xì)胞期、32細(xì)胞期、囊胚期、原腸胚期、體節(jié)期和孵化期)的胚胎,液氮速凍并保存在-80 ℃,用于RNA提取。

    1.2 總RNA提取、cDNA合成及基因組DNA的提取

    許氏平鲉各組織及胚胎總RNA由TRIzol法(Invitrogen)提取,使用DNase I和RNA clean試劑盒去除RNA中的DNA和蛋白質(zhì),通過分光光度計(jì)和瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)RNA的質(zhì)量。cDNA由逆轉(zhuǎn)錄酶M-MLV試劑盒(TaKaRa)合成,使用許氏平鲉β-actin作為引物進(jìn)行PCR檢測(cè)反轉(zhuǎn)錄效果,并置于-80 ℃保存。

    采用酚-氯仿的方法提取許氏平鲉基因組DNA,用分光光度計(jì)檢測(cè)DNA的濃度,使用電泳檢DNA的質(zhì)量。

    1.3 Boule和Dazl氨基酸多重序列比對(duì)和系統(tǒng)進(jìn)化分析

    從NCBI和Ensembl網(wǎng)站下載其它物種的Boule和Dazl氨基酸序列,同許氏平鲉的Boule和Dazl氨基酸序列用Genedoc軟件進(jìn)行氨基酸多序列比對(duì)。利用 MEGA7.0 的鄰接法(Neighbor-Joining,NJ)進(jìn)行聚類分析構(gòu)建進(jìn)化樹,各物種Boule和Dazl氨基酸序列的 Gene Bank 數(shù)據(jù)庫注冊(cè)序列號(hào)如下:

    斑點(diǎn)雀鱔Lepisosteus_oculatus_Boule:XP_015213794.1;虹鱒Oncorhynchus_mykiss_Boule:ADW41783.1;雞Gallus_gallus_Boule:XP_015144979.1;尖吻鱸Lates_calcarifer_Boule:KC992312.1;密西西比鱷Alligator_mississippiensis_Boule:XP_014449905.1;青鳉Oryzias_latipes_Boule:KC992312.1;人Homo_sapiens_Boule:NP_932074.1;鼠Mus_musculus_Boule:AAK69026.2;海龜Chelonia_mydas_Boule:XP_007072013.1;斑馬魚Danio_rerio_Dazl:NP_571599.1;半滑舌鰨Cynoglossus_semilaevis_Dazl:AGG69476.1;人Homo_sapiens_Dazl:NP_001177740.1;斑點(diǎn)雀鱔Lepisosteus_oculatus_Dazl:XP_015212852.1;大黃魚Larimichthys_crocea_Dazl:KAE8282148.1;非洲爪蟾Xenopus_laevis_Dazl:NP_001081772.1;海龜Chelonia_mydas_Dazl:XP_007053304.1;虹鱒Oncorhynchus_mykiss_Dazl:NP_001233268.1;雞Gallus_gallus_Dazl:NP_989549.1;尖吻鱸Lates_calcarifer_Dazl:ABB76649.1;孔雀魚Poecilia_reticulata_Dazl:XP_008419892.1;青鳉Oryzias_latipes_Dazl:NP_001098269.1;鼠Mus_musculus_Dazl-8:NP_001264792.1;鼠Mus_musculus_Dazl-FL:NP_034151.3;牙鲆Paralichthys_olivaceus_DazlⅠ:AKE14490.1;牙鲆Paralichthys_olivaceus_DazlⅡ:AKE14491.1;人Homo_sapiens_Daz:AAB02393.1。

    1.4 Boule和Dazl基因表達(dá)分析

    將許氏平鲉不同組織、不同發(fā)育階段卵子、以及胚胎發(fā)育時(shí)期的轉(zhuǎn)錄組TPM數(shù)據(jù)歸一化后用pheatmap程序進(jìn)行熱圖繪制,紅色越深表示表達(dá)量越高,藍(lán)色越深表示表達(dá)量越低。

    2 結(jié)果

    2.1 許氏平鲉Dazl和Boule基因結(jié)構(gòu)分析

    根據(jù)許氏平鲉基因組和轉(zhuǎn)錄組序列,tBlastx獲得Dazl和Boule的cDNA序列且Dazl和Boule含有分別有兩種mRNA存在于許氏平鲉性腺轉(zhuǎn)錄本,BouleⅠ,BouleⅡ以及DazlⅠ,DazlⅡ。兩種轉(zhuǎn)錄本可能來自同一個(gè)拷貝基因,在轉(zhuǎn)錄和mRNA成熟過程中,BouleⅠ保留了10個(gè)外顯子,而BouleⅡ由于在第一個(gè)外顯子處缺失一部分序列,產(chǎn)生11個(gè)外顯子。DazlⅠ保留了8個(gè)外顯子,而DazlⅡ缺失外顯子7,它們是可變剪接的產(chǎn)物。BouleⅠ,BouleⅡ以及DazlⅠ,DazlⅡ在序列的其它部分并沒有差異,也沒有轉(zhuǎn)錄時(shí)遺留的內(nèi)含子序列,表明BouleⅠ,BouleⅡ以及DazlⅠ,DazlⅡ可能都有各自的蛋白產(chǎn)物且具有一定的生理功能。

    圖1 Dazl和Boule基因之間的比對(duì)。Dazl和Boule各存在兩種剪接型。外顯子由黃色方框表示,內(nèi)含子由實(shí)線表示。

    2.2 許氏平鲉Dazl和Boule氨基酸的多重序列比對(duì)

    許氏平鲉BouleⅠ,BouleⅡ的cDNA長(zhǎng)度分別為1 032 bp和1 008 bp,分別編碼了343和335個(gè)氨基酸,DazlⅠ,DazlⅡcDNA序列開放閱讀框分別為654 bp和603 bp,分別編碼217和200個(gè)氨基酸。且Dazl和Boule都包含一個(gè) RNA 識(shí)別域(RRM)和一個(gè) DAZ 結(jié)構(gòu)域(圖2)。通過多物種Dazl和Boule的氨基酸序列比對(duì)(圖2),各物種在RRM序列區(qū)域有較高的保守性,其它區(qū)域保守性較低。在Dazl中RRM區(qū)域中非硬骨魚和硬骨魚存在差異的氨基酸,將硬骨魚和其它物種分開(圖2A)。Boule和Dazl基因?qū)儆谕换蚣易?,然而它們編碼的蛋白序列卻相差很大。許氏平鲉中Boule 與Dazl之間的同源性是較低的,在 RNA 識(shí)別結(jié)構(gòu)域和 DAZ 重復(fù)區(qū)其同源性稍高,分別為 50%和30%。

    圖2 許氏平鲉Dazl和Boule與其它物種氨基酸的序列比對(duì)

    2.3 許氏平鲉Dazl和Boule系統(tǒng)進(jìn)化分析

    利用來自不同物種的Dazl和Boule的氨基酸序列,通過MEGA 7.0程序構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹。系統(tǒng)發(fā)育樹顯示,進(jìn)化樹主要分為兩個(gè)簇,分別為Dazl和Boule(圖3)。許氏平鲉的Dazl首先與其它硬骨魚的Dazl聚合在一起,然后與四足動(dòng)物,鳥類或哺乳動(dòng)物的Dazl聚集成一支。多重序列比對(duì)顯示許氏平鲉Dazl先與尖吻鱸、大黃魚、孔雀魚聚集,后與斑馬魚等聚集,最后與青鳉聚為一支。氨基酸序列比對(duì)顯示其與尖吻鱸序列最為相近,相似性達(dá)89.4%,與青鳉較遠(yuǎn),相似度達(dá)73.3%。而許氏平鲉Boule先與尖吻鱸、青鳉聚集,后與斑點(diǎn)雀鱔、虹鱒及哺乳動(dòng)物聚為一支。氨基酸序列比對(duì)顯示其與尖吻鱸序列最為相近,相似性達(dá)73.6%,與斑點(diǎn)雀鱔較遠(yuǎn),僅有30.2%。而Boule作為Daz基因家族最古老的基因,進(jìn)化較為特殊,斑點(diǎn)雀鱔及虹鱒魚先和哺乳動(dòng)物聚為一支再與許氏平鲉等其它硬骨魚聚為一支。結(jié)果表明,許氏平鲉Dazl和Boule較為保守,與哺乳動(dòng)物親緣關(guān)系較遠(yuǎn),與其它硬骨魚親緣關(guān)系較近。

    圖3 許氏平鲉和其它脊椎動(dòng)物DAZ基因家族的系統(tǒng)發(fā)育分析

    2.4 許氏平鲉Dazl和Boule基因在成魚各組織、胚胎發(fā)育不同時(shí)期表達(dá)量分析

    根據(jù)轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)分析,許氏平鲉Dazl和Boule在成魚各組織中的表達(dá)水平呈現(xiàn)相同的表達(dá)模式。Dazl和Boule均只在性腺中特異性表達(dá),其它組織中沒有表達(dá)(圖4A)。此外許氏平鲉Dazl和Boule在性腺表現(xiàn)為雌雄兩態(tài)表達(dá)模式,許氏平鲉Dazl在卵巢表達(dá)水平較精巢高,Boule與Dazl不同,精巢中的表達(dá)量明顯高于卵巢。根據(jù)轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)分析可知Boule與Dazl在配子發(fā)生表達(dá)模式相似,均在交配前、交配后和受精前階段較高,而在胚胎發(fā)育的時(shí)期幾乎沒有表達(dá)(圖4B),表明Boule與Dazl可能對(duì)于早期生殖細(xì)胞發(fā)育有重要作用,是配子生成的重要調(diào)控因子。

    圖4 通過轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)分析許氏平鲉Dazl和Boule基因的表達(dá)模式

    3 討論

    本研究鑒定了DAZ基因家族,該家族包括三個(gè)基因:Daz[27],Dazl[28-29]及Boule基因[30-31]。Daz基因缺失可出現(xiàn)少精子癥或無精子癥,從而導(dǎo)致雄性不育,是原始生殖細(xì)胞發(fā)育和生殖細(xì)胞分化成熟所必需的[32-33]。Dazl基因的無義突變可引起雌、雄雙性不育,導(dǎo)致原始生殖細(xì)胞的缺失從而影響生殖細(xì)胞的發(fā)育[11,20]。Boule基因作為DAZ 家族重要的一員,是精子發(fā)生過程中調(diào)控減數(shù)分裂的關(guān)鍵因子[26]。Boule在減數(shù)分裂前后表達(dá),功能較為有限。DAZ蛋白在體內(nèi)外均與RNA結(jié)合,可能參與了mRNA表達(dá)的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控。由于Daz基因僅存在于舊大陸猴和類人猿的 Y 染色體中[34-35],故許氏平鲉中該家族僅包括Dazl和Boule。許氏平鲉Dazl和Boule具有DAZ 家族蛋白保守的 RNA 識(shí)別域和 DAZ 結(jié)構(gòu)域[36];DAZ結(jié)構(gòu)域可能與蛋白質(zhì)交互作用有關(guān)[37],缺失RRM對(duì)其與DAZAPs(deleted in Azoospermia(Daz)-Associated Protein1)的結(jié)合影響不大,而DAZ結(jié)構(gòu)域的缺失則大大減少了其結(jié)合[38]。研究表明,Daz和Dazl主要通過DAZ結(jié)構(gòu)域與DAZAP1/DAZAP2結(jié)合[39]。DAZAP1 是與Daz相互作用的反式作用因子,對(duì)mRNA的降解和沉默起關(guān)鍵作用,DAZAP1的磷酸化能破壞其與生殖細(xì)胞特異性蛋白Daz的相互作用[40]。

    之前研究確定了小鼠中Dazl有兩個(gè)剪接型(Dazl_Δ8和Dazl_FL),在成年小鼠精卵巢和多能細(xì)胞中表達(dá)。我們發(fā)現(xiàn),Dazl8號(hào)外顯子的選擇性剪接導(dǎo)致缺失17個(gè)氨基酸,而其余蛋白結(jié)構(gòu)相對(duì)于Dazl_FL是完整的[41]。亞細(xì)胞定位研究顯示Dazl_Δ8類似于Dazl_FL蛋白質(zhì)的定位模式。與生殖細(xì)胞的翻譯刺激功能相比,Dazl亞型(Dazl_FL和Dazl_Δ8)功能分析證實(shí)了Dazl亞型均可在胚胎干細(xì)胞中具有翻譯抑制作用。Dazl同源基因里類似的mRNA的可變剪接只發(fā)現(xiàn)于牙鲆[42],缺失的8號(hào)外顯子并不位于重要的RRM結(jié)構(gòu)域,對(duì)Dazl功能影響不大,基本的RNA識(shí)別功能仍然保留,DazlⅠ和DazlⅡ表達(dá)模式相似,且從Dazl靶mRNA預(yù)測(cè)兩種蛋白的功能發(fā)現(xiàn)沒有僅受一種Dazl蛋白調(diào)控的mRNA,表明這兩種蛋白沒有明顯的功能差異。而Boule還未發(fā)現(xiàn)有可變剪接的存在。在本研究中許氏平鲉Dazl和Boule均存在兩種可變剪接,從氨基酸序列完整性看BouleⅠ,BouleⅡ以及DazlⅠ,DazlⅡ很可能都有其對(duì)應(yīng)的蛋白產(chǎn)物。此外,可變剪接均存在于重要的結(jié)構(gòu)域之外,對(duì)Dazl和Boule基本功能可能影響不大。但是可變剪接存在的意義可能在于出現(xiàn)新的功能。由于其基因序列不同,空間結(jié)構(gòu)發(fā)生變化相應(yīng)功能也會(huì)有所改變,新剪接型的蛋白產(chǎn)物或許即可保留原基因應(yīng)行使的大部分功能,又發(fā)展出不同于基因完整型的新功能,需要進(jìn)一步研究證實(shí)[43-44]。

    多重氨基酸序列比對(duì)和系統(tǒng)進(jìn)化樹顯示,硬骨魚Dazl和Boule與其它脊椎動(dòng)物有較大區(qū)別。RRM中數(shù)個(gè)氨基酸的改變及Dazl后端氨基酸序列數(shù)目可將硬骨魚和其它高等脊椎動(dòng)物區(qū)分開。許氏平鲉的Dazl和Boule分別與其它硬骨魚同源基因聚類為一支,說明了許氏平鲉的Dazl和Boule在進(jìn)化上相對(duì)保守,也反映了不同物種Dazl和Boule在的兩性配子發(fā)生過程中及生殖發(fā)育調(diào)控機(jī)制具有重要的作用[45-46]。

    Dazl和Boule基因的表達(dá)模式存在明顯差異。在大多數(shù)已報(bào)道的哺乳動(dòng)物中,Dazl基因只在兩性生殖細(xì)胞中特異表達(dá)[47]。青鳉中Dazl在胚胎發(fā)生過程中始終存在,而在成魚組織中,DazlmRNA及其蛋白的表達(dá)僅位于精巢和卵巢的生殖細(xì)胞中[25]。在精巢中,DazlmRNA在減數(shù)分裂前期較低,在減數(shù)分裂期較豐富,但在減數(shù)分裂后期缺失,在卵巢中,DazlmRNA在整個(gè)卵子發(fā)生過程中持續(xù)存在。大西洋鮭魚Dazl在性腺中被檢測(cè)到,在卵母細(xì)胞和隨后的胚胎發(fā)育也檢測(cè)到[48]。牙鲆Dazl同樣特異性的表達(dá)于精卵巢,且在胚胎發(fā)育的各時(shí)期也有檢測(cè)到其表達(dá)[18],此外斑馬魚[32]、羅非魚[20]、虹鱒[21]等硬骨魚類Dazl均在兩性生殖細(xì)胞中特異表達(dá)。在迄今為止所研究的各種生物中,Boule表現(xiàn)出明顯的變異表達(dá)模式。哺乳動(dòng)物[46]及果蠅[49]的Boule僅在雄性生殖細(xì)胞中表達(dá),而秀麗線蟲[44]僅在雌性中表達(dá)。對(duì)于硬骨魚類中的研究顯示,羅非魚Boule基因表現(xiàn)出雙性生殖系特異性表達(dá),并且在兩性配子發(fā)生時(shí)表現(xiàn)出階段特異性的表達(dá)。虹鱒的Boule在雌雄性腺中均有表達(dá)且在精巢中表達(dá)量高,卵巢中表達(dá)量低[36],在配子發(fā)生過程中Boule在雄性配子形成中出現(xiàn)在有絲分裂和減數(shù)分裂,而在雌性中表現(xiàn)出減數(shù)分裂特異性[21]。青鳉中Boule在兩性生殖細(xì)胞中都有表達(dá),而精子形成的表達(dá)模式與Dazl不同,在精子形成的減數(shù)分裂前期和減數(shù)分裂期均有表達(dá),在卵子發(fā)生過程中與Dazl表達(dá)模式相似。本研究通過轉(zhuǎn)錄組分析得到許氏平鲉成魚各組織及不同胚胎時(shí)期生殖基因Boule和Dazl的mRNA表達(dá)模式。我們發(fā)現(xiàn),許氏平鲉的這兩個(gè)基因都在兩性性腺中特異性表達(dá),其中Boule在精巢表達(dá)水平明顯高于卵巢而Dazl在卵巢表達(dá)明顯高于精巢。兩者只在不同發(fā)育階段卵子表達(dá),而在胚胎發(fā)育時(shí)期表達(dá)量幾乎檢測(cè)不到。通過對(duì)不同生物的研究,證實(shí)了DAZ家族基因在性腺發(fā)育不同階段的表達(dá)模式與其保守的特異性作用,而這種表達(dá)模式依賴于性腺和配子發(fā)生的階段。本研究結(jié)果為許氏平鲉生殖和發(fā)育研究提供了重要的參考依據(jù)。

    4 結(jié)論

    在本研究中,我們主要進(jìn)行了許氏平鲉DAZ基因家族的成員鑒定及轉(zhuǎn)錄組表達(dá)分析。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)許氏平鲉DAZ基因家族包含兩個(gè)成員:Dazl和Boule,分別有兩個(gè)轉(zhuǎn)錄本。通過多重序列比對(duì)和系統(tǒng)發(fā)育分析,得到Dazl和Boule含有兩個(gè)與其他硬骨魚高度保守的功能結(jié)構(gòu)域——DAZ結(jié)構(gòu)域和RRM結(jié)構(gòu)域。通過轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)分析,Dazl和Boule在許氏平鲉各組織中的表達(dá)模式相似,只在性腺中表達(dá)且存在性別二態(tài)現(xiàn)象。不同卵子發(fā)育階段和胚胎期的表達(dá)分析表明,Dazl和Boule主要在配子發(fā)生期起作用。推測(cè)許氏平鲉Dazl和Boule影響生殖細(xì)胞的發(fā)育分化,是配子發(fā)生不可缺少的調(diào)控因子,為進(jìn)一步研究Dazl和Boule在許氏平鲉性別分化和性腺發(fā)育中的作用提供參考。

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