超高效合相色譜法測定魚肉中氟苯尼考對映體及其代謝產(chǎn)物殘留量

張文華，吳 媛，施雅梅，汪 鵬，葉芮辰，徐 可，謝 文，徐敦明，伊雄海

（1.杭州海關(guān)技術(shù)中心，浙江 杭州 310016；2.浙江省檢驗(yàn)檢疫科學(xué)技術(shù)研究院，浙江 杭州 310016；3.廈門海關(guān)技術(shù)中心，福建 廈門 361026；4.上海海關(guān)動植物與食品檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心，上海 200135）

氟苯尼考（florfenicol，F(xiàn)F）又稱氟甲砜霉素，為甲砜霉素的單氟衍生物，是新一代氯霉素類動物專用廣譜抗生素，其主要代謝產(chǎn)物為氟苯尼考胺（florfenicol amine，F(xiàn)FA），廣泛用于防治水產(chǎn)養(yǎng)殖過程中的細(xì)菌性疾病。FF的殘留包含原形藥物及其主要代謝產(chǎn)物FFA。FF的化學(xué)結(jié)構(gòu)中有2 個(gè)手性碳原子，即存在4 個(gè)對映體結(jié)構(gòu)，而在實(shí)際生產(chǎn)中只能合成兩個(gè)對映體（圖1）。其中FF（1、2）左旋體構(gòu)型具有抗菌活性，而FF（1、2）右旋體構(gòu)型無活性甚至對FF的活性有一定的抑制作用。然而，GB 31650—2019《食品中獸藥最大殘留限量》僅規(guī)定了魚肉中FF外消旋體的最高殘留限量≤1.0 mg/kg，并未對具有抗菌活性的左旋FF和無活性的右旋FF的殘留限量進(jìn)行精確規(guī)定。如果能進(jìn)一步精準(zhǔn)測定FF對映體及其代謝物FFA在魚肉中的殘留量，將能為FF藥物殘留分析提供精確的判定。

圖1 (-)-FF（A）、(+)-FF（B）和FFA（C）的結(jié)構(gòu)式Fig.1 Chemical structures of (-)-FF(A),(+)-FF(B) and FFA (C)

目前國內(nèi)外測定獸藥的方法主要有高效液相色譜法、高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法等方法；而檢測FF對映體的方法主要為高效液相色譜法，該方法分離度好，但存在分析時(shí)間長，有機(jī)試劑消耗量大等問題。近年來新推出的超高效合相色譜技術(shù)（ultraperformance convergence chromatography，UPC）引起大家的廣泛關(guān)注，該技術(shù)的主要流動相為超臨界二氧化碳（CO），能精確調(diào)控分析物的分離度和保留時(shí)間，主要用于拆分和定量結(jié)構(gòu)類似物、異構(gòu)體等，尤其在分離手性化合物方面具有分離效率高、有機(jī)試劑消耗量少的獨(dú)特優(yōu)勢，彌補(bǔ)了傳統(tǒng)液相色譜系統(tǒng)在對映體分析功能上的不足。目前，尚未見到將UPC技術(shù)應(yīng)用于FF對映體的拆分及殘留測定的報(bào)道。

為解決傳統(tǒng)液相色譜法拆分對映體存在的問題，本實(shí)驗(yàn)建立一種UPC的方法，用于拆分和測定FF對映體及其代謝物；對FF對映體及其代謝物FFA的儀器色譜分離條件和魚肉中FF對映體的凈化條件進(jìn)行優(yōu)化；在最優(yōu)條件下，將建立的UPC方法應(yīng)用于實(shí)際魚肉樣品和FF外消旋體標(biāo)準(zhǔn)品并進(jìn)行分析。該方法具有分析速度快、分離效果好、有機(jī)溶劑消耗少等特點(diǎn)，以期為指導(dǎo)FF獸藥的生產(chǎn)過程、質(zhì)量控制和藥效評價(jià)以及魚類產(chǎn)品的質(zhì)量安全監(jiān)管提供一定技術(shù)支持。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

魚肉購于當(dāng)?shù)爻泻娃r(nóng)貿(mào)市場，粉碎后于-18 ℃條件下保存。Anpel FF外消旋體標(biāo)準(zhǔn)品（質(zhì)量濃度100 mg/L）上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司；BePure FF外消旋體標(biāo)準(zhǔn)品（純度99.8%）、FFA標(biāo)準(zhǔn)品（純度≥99.7%） 北京曼哈格生物科技有限公司；FF外消旋體標(biāo)準(zhǔn)品（純度99.0%） 德國Dr.Ehrenstorfer公司；(-)-FF標(biāo)準(zhǔn)品、(+)-FF標(biāo)準(zhǔn)品（純度≥99.0%） 中國牧工商（集團(tuán)）總公司研究院。

乙腈、甲醇、甲酸、乙醇、異丙醇、正庚烷、乙酸乙酯（均為色譜純） 西班牙薩勞有限公司；氨水浙江杭州高晶精細(xì)化工有限公司；磷酸氫二鉀、磷酸二氫鉀 廣東汕頭西隴科學(xué)股份有限公司；CO（純度99.999%） 上海寶鋼普萊克斯實(shí)用氣體有限公司；除特殊說明外，所有試劑均為分析純。

配制磷酸鹽緩沖液：稱取8 g KHPQ和2 g KHPO溶解混合，用超純水定容至1 000 mL。

1.2 儀器與設(shè)備

Acquity UPC儀（帶有PDA二極管陣列檢測器）、Oasis MCX混合型陽離子交換固相萃取小柱（3 mL，60 mg） 美國Waters公司；CHIRALPAK AD-3手性色譜柱（150 mm×3.0 mm，3 μm） 大賽璐藥物手性技術(shù)（上海）有限公司；AE260電子天平 梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司；R215旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 瑞士Büchi公司；ELGA CLXXXUVM2超純水凈化系統(tǒng) 英國ELGA LabWater公司；MS2渦旋混勻器 上海醫(yī)大儀器廠；N-EVAP111氮吹儀 日本東京理化器械株式會社；Oasis HLB聚合物固相萃取小柱（3 mL，60 mg） 杭州金譜科學(xué)儀器有限公司；Supleco C固相萃取小柱（3 mL，300 mg） 上海安譜科學(xué)儀器有限公司。

1.3 方法

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

分別準(zhǔn)確稱取0.01 g（精確至0.1 mg）3 份市售FF外消旋體標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇溶解并定容至10 mL，配制成1.0 g/L FF外消旋體標(biāo)準(zhǔn)儲備液。分別準(zhǔn)確吸取一定體積的標(biāo)準(zhǔn)儲備液，用正庚烷-異丙醇（8∶2，/）溶液將其稀釋成10.0 mg/L FF外消旋體標(biāo)準(zhǔn)中間溶液。

分別準(zhǔn)確稱取0.01 g（精確至0.1 mg）(-)-FF、(+)-FF和FFA標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇溶解并定容至10 mL，配制成質(zhì)量濃度為1.0 g/L的(-)-FF、(+)-FF和FFA標(biāo)準(zhǔn)儲備液。分別量取一定體積的標(biāo)準(zhǔn)儲備液，用異丙醇稀釋并定容至10 mL，配制成100.0 mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。1.0、2.0、4.0、10.0、20.0、40.0 mg/L標(biāo)準(zhǔn)工作溶液用正庚烷-異丙醇（8∶2，/）溶液逐級稀釋混合標(biāo)準(zhǔn)溶液獲得。

1.3.2 樣品的制備

從全部魚肉中取出有代表性的樣品約500 g，用粉碎機(jī)粉碎，分別裝入潔凈容器，密封標(biāo)記。將魚肉樣品于-18 ℃冷凍保存。

1.3.3 樣品前處理

1.3.3.1 樣品提取

稱取10.0 g（精確至0.01 g）魚肉樣品置于50 mL具塞離心管中，加入25 mL 2%氨水-乙酸乙酯溶液（/），渦旋混勻1 min，以8 000 r/min離心5 min，吸取上清液至濃縮瓶中，以25 mL乙酸乙酯重復(fù)提取，合并兩次提取液。在40 ℃以下水浴減壓濃縮提取液至近干，加10 mL 1%甲酸-水溶液（/）分次溶解殘?jiān)?，轉(zhuǎn)移至50 mL具塞離心管中，加入15 mL正己烷，渦旋混勻。以8 000 r/min離心5 min，棄掉上層正己烷，重復(fù)向離心管中加入15 mL正己烷脫脂，棄掉上層正己烷，下層水相待凈化。

1.3.3.2 樣品凈化

HLB、C固相萃取小柱使用前依次用3 mL甲醇和3 mL水活化；MCX固相萃取小柱使用前依次用3 mL甲醇和5 mL 1%甲酸-水溶液（/）活化。

移取1.3.3.1節(jié)待凈化的下層水相于活化好的MCX固相萃取小柱中，用5.0 mL甲醇-水溶液（1∶1，/）淋洗，抽干后用6 mL 5%氨水-甲醇洗脫，收集洗脫液。將洗脫液于40 ℃以下水浴中氮?dú)獯抵两?，向離心管中加入1 mL正庚烷-異丙醇溶液（8∶2，/），渦旋溶解充分，過0.22 μm濾膜后裝入進(jìn)樣小瓶中，待測。

1.3.4 UPC條件

CHIRALPAK AD-3手性色譜柱（150 mm×3.0 mm，3 μm）；檢測波長：224 nm；系統(tǒng)背壓：13.8 MPa；柱溫：40 ℃；流動相：A 為超臨界CO，B 為氨水-甲醇溶液（0.5∶99.5，/）；梯度洗脫程序：0～1.5 min，90% A、10% B；1.5～2.5 min，90%～77% A、10%～23% B；2.5～5.5 min，77% A、23% B；5.5～5.8 min，77%～90% A、23%～10%B；5.8～8.0 min，90% A、10% B；流速：1.0 mL/min；進(jìn)樣量：5.0 μL。

1.3.5 標(biāo)準(zhǔn)溶液穩(wěn)定性測定

對新配制FF對映體及其代謝物FFA標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行考察：與分別貯存不同時(shí)間后的FF對映體和FFA的含量比較，觀察FF對映體和FFA標(biāo)準(zhǔn)溶液的穩(wěn)定性。分別準(zhǔn)確移取1.0 mL 10.0 mg/L FF對映體和FFA的混合工作溶液于7 個(gè)帶劃痕的1.5 mL UPC專用進(jìn)樣小瓶中，上機(jī)進(jìn)行含量測定，檢測后再轉(zhuǎn)移至7 個(gè)帶鋁蓋密封的進(jìn)樣小瓶中，并用封口膜封好后置于-18 ℃保存。按照優(yōu)化后的色譜條件測定新配制的與分別貯存1、3、5、7、14、30、60 d的FF對映體和FFA標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.3.6 加標(biāo)回收率及精密度測定

分別向不含有FF和FFA的魚肉空白樣品中添加標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行添加回收率和精密度測定。(-)-FF和(+)-FF的添加量分別為0.1、0.2、1.0 mg/kg，F(xiàn)FA的添加量分別為0.2、0.4、1.0 mg/kg，平行測定6 次，計(jì)算加標(biāo)回收率及相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（relative standard deviation，RSD）。

1.4 數(shù)據(jù)處理

采用SPSS 12.0軟件處理數(shù)據(jù)，用檢驗(yàn)評價(jià)新配制與貯存不同時(shí)間的FF對映體和FFA標(biāo)準(zhǔn)溶液含量的差異顯著性。

2 結(jié)果與分析

2.1 UPC2條件的優(yōu)化

2.1.1 流動相中助溶劑的優(yōu)化

UPC分析中，通常使用超臨界CO為主要流動相，使用少量有機(jī)溶劑作為助溶劑，以調(diào)節(jié)對目標(biāo)產(chǎn)物的選擇性和洗脫能力。在最佳條件下，考察氨水-甲醇溶液（0.5∶99.5，/）、甲酸-甲醇溶液（0.5∶99.5，/）、甲醇3 種助溶劑對10 mg/L標(biāo)準(zhǔn)溶液中兩種FF對映體和FFA分離的影響。由圖2可知，當(dāng)使用甲酸-甲醇溶液時(shí)，基線升高；當(dāng)使用甲醇時(shí)，兩種FF對映體實(shí)現(xiàn)了基線分離，但FFA未能出峰；當(dāng)選擇氨水-甲醇溶液作為助溶劑時(shí)，兩種FF對映體和FFA在5.0 min內(nèi)實(shí)現(xiàn)完全分離。這是因?yàn)镕FA含有氨基，屬于極性較強(qiáng)的化合物，而氨水的加入能夠延長出峰，明顯改善FFA的響應(yīng)和峰形。因此，本實(shí)驗(yàn)選擇氨水-甲醇溶液（0.5∶99.5，/）作為助溶劑。

圖2 不同助溶劑對(+)-FF、(-)-FF和FFA分離效果的影響Fig.2 Effect of different cosolvents on the separation of (+)-FF,(-)-FF and FFA

2.1.2 系統(tǒng)背壓的優(yōu)化

通過柱溫和系統(tǒng)背壓的調(diào)節(jié)可以改變UPC系統(tǒng)中超臨界CO的密度，從而改變流動相對物質(zhì)的洗脫能力、溶解能力和選擇性。CO的溫度超過31 ℃且壓力超過7.38 MPa時(shí)，CO才會進(jìn)入超臨界狀態(tài)。因此，在最佳條件下，考察系統(tǒng)背壓在10.3～24.1 MPa范圍內(nèi)對10 mg/L標(biāo)準(zhǔn)溶液FF對映體和FFA分離的影響。如圖3所示，隨著系統(tǒng)背壓的降低，3 個(gè)目標(biāo)物的保留時(shí)間延長；3 個(gè)目標(biāo)化合物在背壓13.8 MPa時(shí)的色譜峰形和分離度均達(dá)到最佳。綜合考慮保留時(shí)間、系統(tǒng)壓力及峰形，本實(shí)驗(yàn)選擇系統(tǒng)背壓為13.8 MPa。

圖3 不同系統(tǒng)背壓對(+)-FF、(-)-FF和FFA對映體分離效果的影響Fig.3 Effect of the system’s back pressure on the separation of(+)-FF,(-)-FF and FFA

2.1.3 色譜柱溫度的優(yōu)化

一般通過調(diào)節(jié)UPC系統(tǒng)中色譜柱溫度改變流動相密度，從而影響對目標(biāo)物的分離效果。隨著色譜柱溫度降低，超臨界CO流體的密度增大、黏度增高，對目標(biāo)物的洗脫能力也隨之增大，保留時(shí)間縮短?？紤]到CHIRALPAK AD-3手性色譜柱的最高推薦運(yùn)行溫度（40 ℃）和超臨界CO的條件（壓力＞7.38 MPa，溫度＞31 ℃），在最佳條件下，考察色譜柱溫度在31～40 ℃范圍內(nèi)對10 mg/L標(biāo)準(zhǔn)溶液中兩種FF對映體和FFA分離的影響。結(jié)果表明，隨著柱溫降低，目標(biāo)物的保留時(shí)間逐漸縮短；當(dāng)柱溫為31 ℃和35 ℃時(shí)，(+)-FF和FFA的分離度不佳，部分色譜峰出現(xiàn)重疊，分離度分別為0.81和0.83；繼續(xù)升高柱溫至40 ℃時(shí)，(+)-FF和FFA的分離度為1.8，3 個(gè)目標(biāo)化合物在5.0 min內(nèi)實(shí)現(xiàn)良好的基線分離。因此，本實(shí)驗(yàn)選擇40 ℃作為色譜柱溫度。

2.2 魚肉樣品前處理的優(yōu)化

2.2.1 提取試劑的優(yōu)化

通常采用氨化乙酸乙酯、乙酸乙酯、水-丙酮溶液（2∶8，/）、乙腈、甲醇對樣品中FF進(jìn)行提取。參照1.3.3節(jié)的前處理方法，使用這4 種試劑提取魚肉樣品中的FF及FFA，經(jīng)MCX固相萃取小柱凈化后，上機(jī)檢測，考察其提取效果。結(jié)果表明，采用水-丙酮溶液（2∶8，/）、乙腈和甲醇提取時(shí)，F(xiàn)FA均未出峰，干擾峰較多；采用乙酸乙酯提取時(shí)，F(xiàn)FA的回收率較低，存在干擾峰；在乙酸乙酯中加入氨水能夠明顯提高FFA的回收率，且干擾峰較少，與文獻(xiàn)[34]相符，這是因?yàn)镕FA含有氨基且極性較強(qiáng)。因此，本實(shí)驗(yàn)采用氨化乙酸乙酯作為提取試劑。

2.2.2 凈化條件的優(yōu)化

經(jīng)最優(yōu)試劑提取后，使用C、HLB、MCX3 種常用固相萃取小柱分別對待凈化的魚肉樣品的下層水相進(jìn)行凈化（C、HLB柱采用1.1節(jié)中磷酸鹽緩沖溶液溶解上柱，水淋洗，甲醇洗脫），上機(jī)檢測，考察其凈化效果。結(jié)果表明，MCX固相萃取小柱的凈化效果最好，且(-)-FF、(+)-FF和FFA回收率依次為90.0%、98.2%和94.1%；HLB固相萃取小柱的回收率略優(yōu)于MCX固相萃取小柱，但是經(jīng)MCX固相萃取小柱凈化得到的色譜圖中干擾峰較少，與文獻(xiàn)[28,41]相符。綜合考慮，本實(shí)驗(yàn)采用MCX固相萃取小柱對魚肉樣品中FF對映體和FFA進(jìn)行凈化。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液的穩(wěn)定性分析

為保證分析結(jié)果的準(zhǔn)確度，對新配制與不同貯存時(shí)間后的FF對映體及其代謝物FFA標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行考察。結(jié)果表明：貯存7 d內(nèi)(-)-FF、(+)-FF和FFA含量的RSD分別為3.3%、1.5%和4.2%；貯存14 d內(nèi)(-)-FF、(+)-FF和FFA含量的RSD分別為3.5%、1.9%和10.2%；貯存30 d內(nèi)(-)-FF、(+)-FF和FFA含量的RSD分別為10.8%、10.4%和15.2%。采用檢驗(yàn)評價(jià)新配制與貯存不同時(shí)間的FF對映體和FFA含量的差異顯著性。結(jié)果表明，與新配制的FF對映體標(biāo)準(zhǔn)溶液相比，在-18 ℃下貯存14 d的標(biāo)準(zhǔn)溶液中兩種FF對映體含量差異不顯著（＞0.05），具有良好的穩(wěn)定性；貯存30 d的標(biāo)準(zhǔn)溶液中兩種FF對映體含量差異顯著（＜0.05），表現(xiàn)出較差的穩(wěn)定性。與新配制的FFA標(biāo)準(zhǔn)溶液相比，在-18 ℃下貯存7 d的標(biāo)準(zhǔn)溶液中FFA含量差異不顯著（＞0.05），具有良好的穩(wěn)定性；貯存14 d的標(biāo)準(zhǔn)溶液中FA含量差異顯著（＜0.05），表現(xiàn)出較差的穩(wěn)定性。因此，兩種FF對映體標(biāo)準(zhǔn)溶液在-18 ℃條件下可貯存14 d，F(xiàn)FA標(biāo)準(zhǔn)溶液在-18 ℃條件下可貯存7 d。

2.4 方法學(xué)驗(yàn)證

2.4.1 方法的線性范圍和定量限（limit of quantitation，LOQ）

對(-)-FF、(+)-FF和FFA的系列混合標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行測定。以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（），對應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)品的峰面積為縱坐標(biāo)（），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，求得回歸方程和相關(guān)系數(shù)（）。由表1可知，兩種FF對映體在1.0～20.0 mg/L質(zhì)量濃度范圍內(nèi)和FFA在2.0～40.0 mg/L質(zhì)量濃度范圍內(nèi)均呈良好的線性關(guān)系，均大于0.999 3。通過在不含F(xiàn)F和FFA的魚肉空白樣品中添加標(biāo)準(zhǔn)品并進(jìn)行測定，得到LOQ（信噪比10）。由表1可知，(-)-FF和(+)-FF的LOQ均為0.1 mg/kg，F(xiàn)FA的LOQ為0.2 mg/kg。

表1 各目標(biāo)化合物的線性范圍、線性方程、R2和LOQTable 1 Linear range,linear equation,R2 and LOQ of each target compound

2.4.2 加標(biāo)回收率以及精密度分析

不加空白樣品基質(zhì)，在2%氨水-乙酸乙酯溶液中加入(-)-FF、(+)-FF和FFA 3 種標(biāo)準(zhǔn)品，經(jīng)過1.3.3節(jié)的前處理后上機(jī)檢測。結(jié)果顯示，(-)-FF、(+)-FF和FFA的回收率依次為96.7%、98.1%、94.0%，RSD依次為5.2%、6.3%、6.8%，說明該方法具備良好的穩(wěn)定性。

對添加回收魚肉樣品進(jìn)行測定，計(jì)算加標(biāo)回收率及RSD。由表2可知，3 種目標(biāo)化合物的回收率范圍為81.5%～108.0%，RSD范圍為5.3%～9.3%。該回收率和精密度符合GB/T 27404—2008《食品理化檢測》的要求，能夠滿足魚肉樣品的分析要求，可用于日常檢測。

表2 魚肉樣品中FF對映體和FFA的加標(biāo)回收率和RSD（n＝6）Table 2 Spiked recoveries and RSDs of florfenicol enantiomers and florfenicol amine in fish meat (n=6)

2.5 建立的UPC2方法的應(yīng)用

2.5.1 實(shí)際樣品分析

為了考察方法的實(shí)用性和有效性，在最優(yōu)條件下，應(yīng)用所建立的方法對隨機(jī)抽取的30 份市售魚肉樣品中FF對映體和FFA進(jìn)行檢測。結(jié)果表明：30 份魚肉樣品中均未檢出(+)-FF；其中1 份鳊魚樣品中檢出170 μg/kg (-)-FF；1 份黑魚（烏鱧）樣品中檢出537 μg/kg FFA。

2.5.2 市售標(biāo)準(zhǔn)品的純度分析

在最優(yōu)條件下，應(yīng)用所建立的方法對3 份市售常見FF外消旋標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行拆分及測定，結(jié)果如圖4所示。3 份FF外消旋標(biāo)準(zhǔn)品中均未檢出(+)-FF，Anpel、Bepure和Dr.Ehrenstorfer FF外消旋標(biāo)準(zhǔn)品中(-)-FF質(zhì)量濃度分別為10.0、9.2、9.4 mg/L。市售Bepure和Dr.Ehrenstorfer兩種外消旋固體標(biāo)準(zhǔn)品的純度和實(shí)際測量值存在偏差，偏差值分別為8.0%和6.0%。

圖4 FF對映體、FFA及外消旋體標(biāo)準(zhǔn)品的色譜圖Fig.4 Chromatograms of florfenicol enantiomers,florfenicol amine and racemic florfenicol standard

市售常用FF外消旋體標(biāo)準(zhǔn)品和魚肉樣品的檢測結(jié)果顯示，均未檢出(+)-FF，只檢出(-)-FF和FFA，檢測結(jié)果與文獻(xiàn)[6,18,20]相符，故陽性魚肉中代謝物質(zhì)FFA是由(-)-FF對映體代謝產(chǎn)生。

3 結(jié)論

建立一種基于UPC的檢測方法用于分離魚肉樣品中兩種FF對映體和FFA。經(jīng)分析得到此方法的最優(yōu)條件：使用氨化乙酸乙酯對樣品進(jìn)行提取，通過MCX固相萃取小柱對樣品進(jìn)行凈化后，采用CHIRALPAK AD-3手性色譜柱分離，以超臨界CO（流動相A）和氨水-甲醇溶液（0.5∶99.5，/）（流動相B）為流動相進(jìn)行梯度洗脫，系統(tǒng)背壓13.8 MPa，柱溫40 ℃。將最優(yōu)條件用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。在0.1～1.0 mg/kg范圍內(nèi)進(jìn)行加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，兩種FF對映體和FFA的加標(biāo)回收率為81.5%～108.0%，RSD為5.3%～9.3%。使用建立的方法對實(shí)際魚肉樣品和市售標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行了分析測定。結(jié)果表明，本方法具有分析速度快、準(zhǔn)確度好、分離效果好等特點(diǎn)，能夠滿足魚肉中左旋FF的純度分析及快速定量需要。