支鏈氨基酸在非酒精性脂肪性肝病中的作用機(jī)制研究進(jìn)展*

非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)即肝臟中過量脂肪的異位蓄積，臨床包括非酒精性脂肪肝(NAFL)，非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、纖維化、肝硬化、甚至肝細(xì)胞癌等

。NASH患者發(fā)展為肝硬化和肝細(xì)胞癌的風(fēng)險(xiǎn)更高，并且與肝臟相關(guān)的發(fā)病率和死亡率的風(fēng)險(xiǎn)也更高。在工業(yè)化國(guó)家，NAFLD的發(fā)病率迅速增加。據(jù)統(tǒng)計(jì)，NAFLD的全球患病率為25.24%，而中國(guó)的患病率高達(dá)29.2%

。NAFLD目前已經(jīng)超越乙型病毒性肝炎成為世界第一慢性肝病

。而肥胖、胰島素抵抗、Ⅱ型糖尿病(T2DM)、血脂異常和NAFLD等代謝疾病通過分子生化和復(fù)雜的免疫機(jī)制相互聯(lián)系。對(duì)于NAFLD治療，臨床上往往是飲食和運(yùn)動(dòng)干預(yù)，而對(duì)于NAFLD的相關(guān)代謝物機(jī)制研究有望成為治療NAFLD的潛在靶點(diǎn)，研究表明，支鏈氨基酸(BCAA)不僅作為NAFLD的潛在標(biāo)志物，還通過相關(guān)通路影響NAFLD的進(jìn)程。因此，本綜述闡述了BCAA通過脂肪從頭合成、mTOR途徑、胰島素抵抗加劇NAFLD的進(jìn)程。

出現(xiàn)高溫災(zāi)害4年，極端高溫達(dá)到37.2℃，影響冬小麥灌漿和干物質(zhì)積累，千粒重下降，造成逼熟空秕子多，因而減產(chǎn)。

1 BCAA在機(jī)體內(nèi)的氧化分解

BCAA是一種人體必需氨基酸。哺乳動(dòng)物不能從頭合成BCAA，只能從飲食中攝取，它們?cè)谑澄镏邢鄬?duì)豐富，約占蛋白質(zhì)總攝入量的15%～25%

。BCAA對(duì)很多運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練者來說都是有效的營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑。攝入BCAA可以促進(jìn)胰島素和生長(zhǎng)激素釋放有助于預(yù)防蛋白質(zhì)分解和肌肉丟失，從而促進(jìn)肌肉增長(zhǎng)。未重新?lián)饺氲鞍踪|(zhì)庫(kù)的BCAA則被氧化分解以維持體內(nèi)平衡。因?yàn)樵诘鞍踪|(zhì)維持穩(wěn)定狀態(tài)下，BCAA的攝入量和氧化量相平衡。BCAA在組織中的完全分解代謝需要許多酶促步驟，其中大多數(shù)發(fā)生在線粒體中。BCAA分解代謝受支鏈氨基酸轉(zhuǎn)氨酶(BCAT)和支鏈α-酮酸脫氫酶復(fù)合物(BCKDH)的調(diào)節(jié)。亮氨酸、異亮氨酸和纈氨酸脫氨基后分別形成支鏈α-酮酸(BCKA)、α-酮異己酸(KIC)、α-酮-β-甲基戊酸(KMV)和α-酮異戊酸(KIV)

。這些BCKA可以逆轉(zhuǎn)為BCAA。BCAA脫氨基后，BCKA則不可逆地被BCKDH氧化，而BCKDH是BCAA分解代謝的限速酶。BCKDH的活性受BCKD激酶(BCKDK)和蛋白磷酸酶2Cm(PP2Cm)的調(diào)節(jié)。BCKDK可以使Ser293上BCKDH的E1-α亞基磷酸化，從而抑制BCKDH活性。相反，PP2Cm是用于激活BCKDH的BCKDH Ser293脫磷酸作用的特異性磷酸酶

。最終，源于BCAA的分解代謝的碳以乙酰輔酶A或琥珀酰輔酶A的形式進(jìn)入三羧酸(TCA)循環(huán)，在那里它們可以被完全氧化。

2 BCAA分解代謝與代謝綜合征密切相關(guān)

在小鼠研究中，用同位素標(biāo)記的方法研究表明，在所有檢查的組織中都會(huì)發(fā)生BCAA氧化，如在肌肉、肝臟、腎臟、心臟等組織中氧化分解，而剩下的則進(jìn)入循環(huán)中

。BCAA在機(jī)體內(nèi)的氧化分解受很多因素影響，進(jìn)食后的BCAT增加激活BCAA的氧化，所以進(jìn)食后氧化增加

。相反，短暫限制食物攝入會(huì)降低BCAA氧化，從而導(dǎo)致血漿BCAA水平升高。但是，如果繼續(xù)禁食，BCAA的氧化會(huì)再次增加，這很可能在很大程度上為肝臟提供了糖異生的前體

。當(dāng)維持氨基酸濃度時(shí)，胰島素會(huì)增加全身BCAA氧化

。運(yùn)動(dòng)也會(huì)影響B(tài)CAA氧化，活動(dòng)鍛煉可以促進(jìn)骨骼肌中BCAA氧化增加，這可能是通過轉(zhuǎn)錄激活因子PGC-1α的誘導(dǎo)

。據(jù)報(bào)道，腸道中普氏桿菌富集具有豐富的BCAA合成潛力，給小鼠移植普氏桿菌引起胰島素抵抗和外周BCAA含量升高

。有研究表明，循環(huán)中BCAA升高與青少年肥胖具有顯著相關(guān)性，并且能獨(dú)立預(yù)測(cè)T2DM風(fēng)險(xiǎn)

。隨著代謝組學(xué)技術(shù)的出現(xiàn)，BCAA和相關(guān)代謝產(chǎn)物(谷氨酸/谷氨酰胺，苯丙氨酸，酪氨酸，C3和C5酰基肉堿)與肥胖相關(guān)代謝疾病的關(guān)聯(lián)是所有生物標(biāo)志物中報(bào)道中最強(qiáng)的

。在肥胖和/或胰島素抵抗的動(dòng)物模型和人類中，白色脂肪組織(WAT)中BCAA分解代謝酶的表達(dá)水平降低了

，而通過減肥手術(shù)干預(yù)能降低循環(huán)中的BCAA濃度

。

3 BCAA加劇NAFLD進(jìn)程

對(duì)于BCAA作為代謝綜合征發(fā)展的生物標(biāo)志物已經(jīng)被研究證實(shí)

。而現(xiàn)在研究表明攝入較多BCAA或者外周較高的BCAA濃度會(huì)加劇NAFLD的進(jìn)程。值得注意的是，在經(jīng)肝活檢為NAFLD/NASH的患者中，血清BCAA濃度與肝活檢脂質(zhì)變性面積具有獨(dú)立相關(guān)性，高濃度BCAA和油酸體外培養(yǎng)增加了肝細(xì)胞中脂肪變性，并伴隨著p70 S6K磷酸化和固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白1(SREBP1)蛋白的表達(dá)從而增加肝細(xì)胞中脂滴的面積

。還有研究探討了亮氨酸補(bǔ)充劑對(duì)人HepG2肝細(xì)胞的影響，該實(shí)驗(yàn)證明了亮氨酸對(duì)胰島素具有拮抗作用，通過促進(jìn)細(xì)胞中葡萄糖的攝取，導(dǎo)致肝細(xì)胞中甘油三酯的積累

。在正常小鼠中，急性BCAA攻擊后，在小鼠肝臟中線粒體代謝途徑的活動(dòng)，如生酮、糖異生、丙酮酸循環(huán)升高而通過檸檬酸合酶的絕對(duì)三羧酸循環(huán)通量較低，而在NAFLD小鼠中，BCAA升高與脂毒性環(huán)境結(jié)合可能導(dǎo)致了肝臟中線粒體功能障礙，從而導(dǎo)致線粒體三羧酸循環(huán)能量受損

，而脂毒性是BCAA導(dǎo)致線粒體功能障礙的先決條件，而這也可能是NAFLD患者胰島素抵抗惡化的原因之一。肥胖患者循環(huán)的BCAA增加還可能是由于攝入大量含糖食品或飲料導(dǎo)致的，長(zhǎng)期以來，食用含糖食品或飲料是代謝疾病的危險(xiǎn)因素，果糖和碳水化合物可以導(dǎo)致碳水化合物反應(yīng)元件結(jié)合蛋白(ChREBP)轉(zhuǎn)錄因子激活，會(huì)增加BCKDK/PP2Cm比，從而抑制BCKDH活性來抑制BCAA分解代謝并增加循環(huán)中BCAA含量。同樣，在肥胖的嚙齒動(dòng)物模型肝臟中，抑制BCKDH活性的激酶BCKDK表達(dá)增加，而激活BCKDH活性的磷酸酶PP2Cm的表達(dá)減少。BCKDK和PP2Cm促進(jìn)脂肪生成酶ATP-檸檬酸裂合酶(ACL)的表達(dá)，同時(shí)還促進(jìn)脂肪從頭合成(DNL)和肝脂肪蓄積,從而造成NAFLD

。

3.2 BCAA導(dǎo)致胰島素抵抗 胰島素抵抗被認(rèn)為是NAFLD的發(fā)病機(jī)制之一，有研究表明，血清中BCAA含量還與胰島素抵抗密切相關(guān)，即BCAA升高可能是胰島素抵抗的標(biāo)志物。對(duì)胰島素敏感性正常的受試者血漿進(jìn)行的無偏態(tài)代謝組學(xué)研究將血漿BCAA升高確定為在隨后的10年或更長(zhǎng)時(shí)間中糖尿病的最強(qiáng)預(yù)測(cè)因子，表明BCAA代謝的變化先于可檢測(cè)的胰島素抵抗

；孟德爾遺傳學(xué)研究表明，影響B(tài)CAA水平的PPM2基因附近的多態(tài)性(編碼BCKDH磷酸酶)也增加了胰島素抵抗的風(fēng)險(xiǎn)。研究也證明了BCAA升高會(huì)導(dǎo)致胰島素抵抗。一項(xiàng)大型人類遺傳研究中的孟德爾隨機(jī)研究表明，支鏈氨基酸水平升高會(huì)導(dǎo)致胰島素抵抗和T2DM

。在高脂飲食中添加BCAA會(huì)加劇嚙齒動(dòng)物對(duì)葡萄糖不耐癥的發(fā)展

，而限制BCAA則會(huì)提高對(duì)葡萄糖的耐性和胰島素敏感性

。而在健康成年人體內(nèi)靜脈輸注的BCAA會(huì)損害胰島素介導(dǎo)的葡萄糖處理率，這可能是通過引起血漿中3-羥基異丁酸酯(3-HIB)、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子21(FGF21)增加介導(dǎo)的

。3-HIB是一種由肌肉分泌的BCAA的中間代謝物，在肥胖時(shí)會(huì)升高，刺激血管腔向血管外肌纖維的跨內(nèi)皮脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)，增加骨骼肌中脂肪酸的攝取，促進(jìn)肌肉中的脂質(zhì)積累和胰島素抵抗

。還有研究證明，BCAA導(dǎo)致胰島素抵抗可能是通過激活mTORC1后磷酸化多個(gè)靶標(biāo)(包括S6K，4E-BP1，Ulk1和TFEB /3)來促進(jìn)蛋白質(zhì)合成并抑制自噬和蛋白水解并損害胰島素敏感性。mTORC1底物p70 S6K激酶在人體中注入氨基酸激活后會(huì)誘導(dǎo)肌肉中的胰島素抵抗。高濃度的BCAA通過胰島素/Akt2/Foxo1信號(hào)傳導(dǎo)增加了肝糖原的生成，并加劇了肥胖相關(guān)的高血糖癥

?？傊@些數(shù)據(jù)支持了BCAA可能通過依賴于過量脂質(zhì)利用的機(jī)制導(dǎo)致胰島素抵抗的觀點(diǎn)。相反，胰島素抵抗本身很可能會(huì)導(dǎo)致BCAA升高，從而形成前饋回路

。

3.1 BCAA通過激活雷帕霉素復(fù)合物1(mTORC1)導(dǎo)致NAFLD BCAA及其代謝產(chǎn)物具有重要的變構(gòu)調(diào)節(jié)和信號(hào)傳導(dǎo)作用。其中研究最多的是亮氨酸對(duì)激活mTORC1途徑的機(jī)械靶標(biāo)的調(diào)節(jié)。mTORC1復(fù)合物控制著許多細(xì)胞過程，包括最顯著的蛋白質(zhì)合成和細(xì)胞生長(zhǎng)，亮氨酸是mTORC1活性的有效激活劑。亮氨酸作為生長(zhǎng)調(diào)節(jié)信號(hào)的作用是在早期實(shí)驗(yàn)中確立的，證明了亮氨酸在體外和體內(nèi)刺激骨骼肌中蛋白合成

。亮氨酸通過直接抑制sestrin2(mTORC1活性負(fù)調(diào)節(jié)劑)，從而促進(jìn)mTORC1活化。在缺乏亮氨酸的情況下，sestrin2結(jié)合并抑制GATOR2(mTORC1活性正調(diào)節(jié)劑)。當(dāng)亮氨酸以生理濃度存在時(shí)，sestrin2釋放GATOR2，從而促進(jìn)mTORC1的完全活化

。而激活mTORC1的哺乳動(dòng)物靶標(biāo)以誘導(dǎo)SREBP1c促進(jìn)肝臟脂肪形成

。因此，可以預(yù)期通過大量攝入BCAA激活mTORC1會(huì)惡化代謝并增加肝甘油三酸酯含量。

土壤質(zhì)地為均一細(xì)砂土，表面相對(duì)平坦，地下結(jié)構(gòu)較為簡(jiǎn)單，少有反射層，且鹽堿含量較高，對(duì)信號(hào)的衰減也比較明顯，難以獲取自然反射層信號(hào)，僅可提取地面直達(dá)波信號(hào)，因此，在這里僅使用地面直達(dá)波模型獲取近地表平均土壤水分。

3.3 BCAAA促進(jìn)脂肪組織脂質(zhì)合成 肥胖是NAFLD主要的致病因素之一，而為了避免肥胖導(dǎo)致的全身性脂毒性，脂肪細(xì)胞通過細(xì)胞肥大及增生進(jìn)行代償過程中會(huì)產(chǎn)生大量細(xì)胞因子和激素導(dǎo)致炎癥反應(yīng)和胰島素抵抗同時(shí)釋放脂肪酸，這些脂肪酸代謝產(chǎn)生的甘油三酯衍生物在肝臟等組織積聚從而造成NAFLD

。而在機(jī)體中，BCAA還可能為脂肪合成

和脂肪組織中的甘油三酸酯提供碳

。同位素示蹤劑表明，BCAA分解代謝通路提供了多達(dá)30%的脂肪原性乙酰輔酶A庫(kù)，而抑制支鏈氨基酸的分解代謝影響脂肪的生成

。因此補(bǔ)充BCAA會(huì)促進(jìn)肥胖和胰島素抵抗?fàn)顟B(tài)下的脂肪增長(zhǎng)。而降低循環(huán)中BCAA水平可以逆轉(zhuǎn)其作用。給小鼠亮氨酸剝奪飲食7天會(huì)使小鼠耗氧量增加，能量消耗增加，棕色脂肪組織中解偶聯(lián)蛋白(Ucp-1)表達(dá)增加，白色脂肪中產(chǎn)熱基因如編碼轉(zhuǎn)錄因子過氧化物酶體增殖物激活受體的mRNA的表達(dá)水平(PPAR)及其靶基因肉堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶1(Cpt1)和脂肪?；o酶A氧化酶(Aco)表達(dá)顯著增加，而白色脂肪中脂肪生成基因乙?；鵆oA羧化酶1(ACC1)，脂肪酸合成酶(FAS)、硬脂酰CoA去飽和酶(SCD-1)和肝臟中FAS基因表達(dá)降低

。因此，維持亮氨酸缺乏飲食能減少小鼠腹部脂肪量。

凍融對(duì)黃土的影響也反映在含水率方面，研究含水率的影響機(jī)理發(fā)現(xiàn)，含水率的高低對(duì)水分遷移率的影響以正比例形式展現(xiàn)，遷移率隨其升高而加大。這一發(fā)現(xiàn)充分證明，含水率的高低決定了凍融作用影響程度。

4 總結(jié)與展望

BCAA的循環(huán)水平升高與NAFLD、胰島素抵抗、T2DM等肥胖相關(guān)的代謝綜合征發(fā)生以及并發(fā)癥有關(guān)

，作為相關(guān)代謝綜合征的潛在標(biāo)志物已經(jīng)廣泛受到人們的關(guān)注。這與人們認(rèn)知的BCAA作為運(yùn)動(dòng)鍛煉后的補(bǔ)充劑是相矛盾的，在劇烈運(yùn)動(dòng)后會(huì)促進(jìn)BCAA的分解代謝，而適當(dāng)補(bǔ)充BCAA有促進(jìn)肌肉中蛋白質(zhì)合成、減少肌肉的分解和補(bǔ)充機(jī)體運(yùn)動(dòng)后氨基酸消耗的作用，這對(duì)于機(jī)體能量代謝是有益的。BCAA還被用于失代償期肝硬化患者的口服補(bǔ)充治療，它們降低了肝硬化并發(fā)癥的發(fā)生率

。而肥胖患者外周血清中BCAA升高可能是飲食習(xí)慣導(dǎo)致的，攝入過多的BCAA，或者攝入過多的碳水化化合物，或者是代謝疾病抑制肝臟、肌肉和脂肪組織中BCAA的分解代謝酶的活性導(dǎo)致的。而過度的補(bǔ)充BCAA導(dǎo)致外周BCAA含量升高，或者肥胖相關(guān)代謝疾病導(dǎo)致外周BCAA含量升高會(huì)加劇肝臟中脂肪從頭合成，這可能是通過激活mTORC1靶標(biāo)導(dǎo)致肝臟中脂質(zhì)合成因子增加，損害胰島素敏感性，導(dǎo)致線粒體生理功能障礙，從而加劇NAFLD患者中肝臟脂質(zhì)沉積。隨著代謝組學(xué)的研究，機(jī)體外周BCAA有望成為NAFLD潛在診斷標(biāo)志物，作為預(yù)測(cè)T2DM發(fā)生率的預(yù)測(cè)因子，但是，其相關(guān)性需要進(jìn)行大量臨床實(shí)驗(yàn)進(jìn)行論證。而隨著BCAA升高對(duì)NAFLD進(jìn)展機(jī)制的深入研究，可能會(huì)發(fā)現(xiàn)NAFLD干預(yù)措施的新靶點(diǎn)，在今后防治脂肪肝的中藥藥理研究中值得關(guān)注。

[1] Chalasani N, Younossi Z, Lavine JE,

. The diagnosis and management of nonalcoholic fatty liver disease: Practice guidance from the American Association for the Study of Liver Diseases[J]. Hepatology, 2018, 67(1): 328-357.

[2] Zhou J, Zhou F, Wang W,

. Epidemiological features of NAFLD from 1999 to 2018 in China[J]. Hepatology, 2020, 71(5):1851-1864.

[3] Younossi ZM, Koenig AB, Abdelatif D,

. Global epidemiology of nonalcoholic fatty liver disease-Meta-analytic assessment of prevalence, incidence, and outcomes[J]. Hepatology,2016,64(1):73-84.

[4] Machado MV, Cortez-pinto H. Diet, microbiota, obesity, and NAFLD: a dangerous quartet[J]. Int J Mol Sci,2016,17(4):481.

[5] Layman DK. The role of leucine in weight loss diets and glucose homeostasis[J]. J Nutr, 2003, 133(1): 261S-267S.

[6] Nennast MD, Jang C, Hui S,

. Quantitative analysis of the whole-body metabolic fate of branched-chain amino acids[J]. Cell Metab, 2019, 29(2):417-429.

[7] Lu G, Sun H, She P,

. Protein phosphatase 2Cm is a critical regulator of branched-chain amino acid catabolism in mice and cultured cells[J]. J Clin Invest, 2009,119(6):1678-1687.

[8] Boirie Y, Dangin M, Gachon P,

. Slow and fast dietary proteins differently modulate postprandial protein accretion[J]. Proc Natl Acad Sci U S A, 1997, 94(26): 14930-14935.

[9] Castellino P,Luzi L,Simonson DC,

. Effect of insulin and plasma amino acid concentrations on leucine metabolism in man. Role of substrate availability on estimates of whole body protein synthe-sis[J]. J Clin Invest, 1987, 80(6): 1784-1793.

[10] Overmyer KA,Evans CR,Qi NR,

. Maximal oxidative capacity during exercise is associated with skeletal muscle fuel selection and dynamic changes in mitochondrial protein acetylation[J]. Cell Metab, 2015, 21(3): 468-478.

[11] Pedersen HK,Gudmundsdottir V,Nielsen HB,

. Human gut microbes impact host serum metabolome and insulin sensitivity[J]. Nature, 2016, 535(7612): 376-381.

[12] McCormack SE,Shaham O,McCarthy MA,

. Circulating branched-chain amino acid concentrations are associated with obesity and future insulin resistance in children and adolescents[J]. Pediatr Obes, 2013, 8(1): 52-61.

[13] Neinast M,Murashige D,Arany Z. Branched chain amino acids[J]. Annu Rev Physiol, 2019, 81: 139-164.

[14] Lackey DE,Lynch CJ,Olson KC,

. Regulation of adipose branched-chain amino acid catabolism enzyme expression and cross-adipose amino acid flux in human obesity[J]. Am J Physiol Endocrinol Metab, 2013, 304(11): E1175-E1187.

[15] She P, Van Horn C,Reid T,

. Obesity-related elevations in plasma leucine are associated with alterations in enzymes involved in branched-chain amino acid metabolism[J]. Am J Physiol Endocrinol Metab, 2007, 293(6): E1552-E1563.

[16] Würtz P,Soininen P,Kangas AJ,

. Branched-chain and aromatic amino acids are predictors of insulin resistance in young adults[J]. Diabetes care, 2013, 36(3): 648-655.

[17] Kakazu E,Sano A,Morosawa T,

. Branched chain amino acids are associated with the heterogeneity of the area of lipid droplets in hepatocytes of patients with non-alcoholic fatty liver disease[J]. Hepatol Res, 2019, 49(8): 860-871.

[18] Zarfeshani A,Ngo S,Sheppard AM. Leucine alters hepatic glucose/lipid homeostasis via the myostatin-AMP-activated protein kinase pathway-potential implications for nonalcoholic fatty liver disea-se[J].Clin Epigenetics, 2014, 6(1): 27.

[19] Sunny NE,Kalavalapalli S,Bril F,

. Cross-talk between bran-ched-chain amino acids and hepatic mitochondria is compromised in nonalcoholic fatty liver disease[J]. Am J Physiol Endocrinol Metab, 2015, 309(4): E311-E319.

[20] White PJ, Mcgarrah RW, Grimsrud PA,

. The BCKDH kinase and phosphatase integrate BCAA and lipid metabolism via regulation of ATP-citrate lyase[J]. Cell Metab, 2018, 27(6): 1281-1293 e7.

[21] Buse MG,Reid SS. Leucine. A possible regulator of protein turnover in muscle[J]. J Clin Invest, 1975, 56(5): 1250-1261.

[22] Saxton RA,Knockenhauer KE,Wolfson RL,

. Structural basis for leucine sensing by the Sestrin2-mTORC1 pathway[J]. Science,2016, 351(6268): 53-58.

[23] Wan M,Leavens KF,Saleh D,

. Postprandial hepatic lipid metabolism requires signaling through Akt2 independent of the transcription factors FoxA2, FoxO1, and SREBP1c[J]. Cell metab, 2011, 14(4): 516-527.

[24] Wang TJ, Larson MG, Vasan RS,

. Metabolite profiles and the risk of developing diabetes[J]. Nat Med, 2011, 17(4): 448-453.

[25] Lotta LA, Scott RA, Sharp SJ,

. Genetic predisposition to an impaired metabolism of the branched-chain amino acids and risk of type 2 diabetes: A mendelian randomisation analysis[J]. PLoS medicine, 2016, 13(11): e1002179.

[26] Newgard CB, An J, Bain JR,

. A branched-chain amino acid-related metabolic signature that differentiates obese and lean humans and contributes to insulin resistance[J]. Cell Metab, 2009, 9(4): 311-326.

[27] Cummings NE,Williams EM,Kasza I,

. Restoration of metabolic health by decreased consumption of branched-chain amino acids[J]. J Physiol, 2018, 596(4): 623-645.

[28] Harris LLS,Smith GI,Patterson BW,

.Alterations in 3-hydroxyisobutyrate and FGF21 metabolism are associated with protein ingestion-induced insulin resistance[J].Diabetes,2017,66(7):1871-1878.

[29] Cheng Y, Meng Q, Wang C,

. Leucine deprivation decreases fat mass by stimulation of lipolysis in white adipose tissue and upregulation of uncoupling protein 1 (UCP1) in brown adipose tiss-ue[J]. Diabetes, 2009, 59(1): 17-25.

[30] Dong TS,Katzka W,Lagishetty V,

. A microbial signature identifies advanced fibrosis in patients with chronic fiver disease mainly due to NAFLD[J]. Sci Rep, 2020, 10(1): 2771.

[31] Appari M, Channon KM, Mcneill E. Metabolic regulation of adipose tissue macrophage function in obesity and diabetes[J]. Antioxid Redox Signal, 2018, 29(3): 297-312.

[32] Rosenthal J,Angel A,Farkas J. Metabolic fate of leucine: a significant sterol precursor in adipose tissue and muscle[J]. Am J Physiol, 1974, 226(2): 411-418.

[33] Felig P,Marliss E,Cahill GF. Plasma amino acid levels and insulin secretion in obesity[J]. N Engl J Med, 1969, 281(15): 811-816.

[34] Green CR,Wallace M,Divakaruni AS,

. Branched-chain amino acid catabolism fuels adipocyte differentiation and lipogenesis[J].2016,12(1): 15-21.

[35] Cheng S, Wiklund P, Autio R,

. Adipose tissue dysfunction and altered systemic amino acid metabolism are associated with non-alcoholic fatty liver disease[J].PloS one,2015,10(10):e0138889.

[36] Iwasa M,Ishihara T,Mifuji-Moroka R,

. Elevation of branched-chain amino acid levels in diabetes and NAFL and changes with antidiabetic drug treatment[J]. Obes Res Clin Pract, 2015, 9(3): 293-297.

[37] Marchesini G, Bianchi G, Merli M,

. Nutritional supplementation with branched-chain amino acids in advanced cirrhosis: a double-blind, randomized trial[J]. Gastroenterology, 2003,124(7):1792-1801.